摘要：目的" 分析酶聯(lián)免疫吸附法與RT-PCR法對血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒檢驗的價值。方法" 選取2020年3月-2023年3月我院診治的63例疑似乙型肝炎患者為研究對象，均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、熒光定量PCR法（RT-PCR）檢測，觀察兩種檢驗方法窗口期、診斷效能（靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值）、PCR法檢測（大三陽、小三陽、急性或慢性感染期）HBV-DNA結(jié)果、HBV-DNA與血清標(biāo)志物（HBsAg、HBeAg）陽性率。結(jié)果" RT-PCR法窗口期為（21.12±4.54）d，短于ELISA法的（36.20±5.84）d（Plt;0.05）;RT-PCR法靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均高于ELISA法（Plt;0.05）;大三陽患者HBV-DNA陽性率、HBV-DNA定量均高于小三陽、急性或慢性感染期患者，且小三陽患者高于急性或慢性感染期患者（Plt;0.05）;BV-DNA陽性患者多為HBsAg攜帶者，但HBsAg、HBeAg檢出符合率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)論" ELISA法與RT-PCR法對血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒檢驗均具有一定的價值，RT-PCR法窗口期短，可提高診斷效能，且可對HBV-M進行定量檢測。但ELISA法則能夠?qū)BV-M進行定性檢測，二者具有互為作用，臨床可聯(lián)合應(yīng)用，以為乙型肝炎的治療提高可靠的參考。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫吸附法;RT-PCR法;血液標(biāo)本;乙肝病毒

中圖分類號：R446.11" " " " " " " " " " " " " " " 文獻標(biāo)識碼：A" " " " " " " " " " " " " nbsp; " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.19.032

文章編號：1006-1959（2024）19-0152-04

Value of Enzyme-linked Immunosorbent Assay and RT-PCR in the Detection

of Hepatitis B Virus in Blood Samples

WU Xiaoling

（Laboratory Department of Yugan County Maternal and Child Health Hospital，Yugan 335100，Jiangxi，China）

Abstract：Objective" To analyze the value of enzyme-linked immunosorbent assay and RT-PCR in the detection of hepatitis B virus in blood samples.Methods" A total of 63 patients with suspected hepatitis B diagnosed and treated in our hospital from March 2020 to March 2023 were selected as the research objects. All patients were detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and fluorescence quantitative PCR （RT-PCR）. The window period， diagnostic efficacy （sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value）， HBV-DNA results detected by PCR （large three positive， small three positive， acute or chronic infection period）， HBV-DNA and serum markers （ HBsAg， HBeAg ） positive rate were observed.Results" The window period of RT-PCR was （21.12±4.54）d， which was shorter than （36.20±5.84）d of ELISA （Plt;0.05）. The sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value and negative predictive value of RT-PCR were higher than those of ELISA （Plt;0.05）. The positive rate of HBV-DNA and HBV-DNA quantification in patients with large three positive were higher than those in patients with small three positive， acute or chronic infection， and patients with small three positive were higher than those in patients with acute or chronic infection （Plt;0.05）. BV-DNA positive patients were mostly HBsAg carriers， but there was no significant difference in the coincidence rate of HBsAg and HBeAg detection （Pgt;0.05）.Conclusion" ELISA method and RT-PCR method have certain value in the detection of hepatitis B virus in blood samples. RT-PCR method has a small window period， which can improve the diagnostic efficiency and quantitatively detect HBV-M. However， the ELISA method can be used to qualitatively detect HBV-M. The two have mutual effects and can be combined in clinical practice to improve the reliable reference for the treatment of hepatitis B.

Key words：Enzyme-linked immunosorbent assay method;RT-PCR method;Blood samples;Hepatitis B virus

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）是慢性乙肝、肝硬化、肝癌發(fā)生的主要原因，感染HBV后具有較高的致死率，且約有3%的感染者會發(fā)展為肝硬化[1]。HBV感染后，部分患者可能是終身攜帶者，而部分患者會發(fā)生乙肝、乙肝肝硬化乃至肝癌等疾病，嚴(yán)重威脅人類健康安全[2，3]。雖然隨著疫苗的廣泛應(yīng)用，HBV感染率有大幅下降，但仍然存在較高的發(fā)病率[4]。有報道指出[5]，人體免疫系統(tǒng)會對乙肝病毒產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。而目前對HBV-DNA、HBV血清指標(biāo)的檢測是臨床診斷和評估預(yù)后的主要方法。但臨床檢驗方法較多，不同檢驗方法診斷效能更是存在差異[5]。ELISA是臨床常規(guī)檢測HBV的方法，操作簡單、成本低，但是存在一定的漏診或誤診[6]。RT-PCR法克服了傳統(tǒng)PCR定量缺陷，對HBV-DNA的定量更準(zhǔn)確，可直接檢測其水平[7]?；诖?，本研究結(jié)合2020年3月-2023年3月我院診治的63例疑似乙型肝炎患者臨床資料，探究ELISA法與RT-PCR法對血液標(biāo)本內(nèi)乙肝病毒檢驗的價值，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料" 選取2020年3月-2023年3月余干縣婦幼保健院診治的63例疑似乙型肝炎患者為研究對象，其中男18例，女45例;年齡24～45歲，平均年齡（28.19±2.01）歲。所有納入患者均知情，且簽署知情同意書。

1.2納入和排除標(biāo)準(zhǔn)" 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合乙肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8];②近期未接受抗病毒治療[9];③依從性良好，可積極配合者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝部存在腫瘤或者囊腫;②精神失常;③急危重癥;④合并嚴(yán)重心血管疾患。

1.3方法

1.3.1 ELISA法" 所有患者均于清晨抽取靜脈血5 ml，置于4 ℃冰箱2 h，離心取得血清后待檢，采用FAME24/20 型全自動酶免分析儀（購自瑞士哈密頓公司）進行HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測，包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HbeAg），嚴(yán)格按照操作標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行[10]。

1.3.2 RT-PCR法" 取100 μl血清加入100 μl DNA濃縮液充分混勻后以12 000 rpm離心10 min棄上清液，在管底沉淀中加入20 μl HBV-DNA提取液，劇烈震蕩混勻，恒溫煮沸10 min，以1200 rpm離心8 min取上清液備用行HBV-DNA定量檢測。取PCR反應(yīng)管，相應(yīng)地加入處理后的樣品及標(biāo)準(zhǔn)品各2 μl，5000 rpm離心30 s，放入儀器樣品槽，設(shè)置反應(yīng)參數(shù)，在儀器上對熒光值進行讀取。

1.4觀察指標(biāo)" 觀察兩種檢驗方法窗口期、診斷效能（靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值）、PCR法檢測（大三陽、小三陽、急性或慢性感染期）HBV-DNA結(jié)果、HBV-DNA與血清標(biāo)志物（HBsAg、HBeAg）陽性率。準(zhǔn)確率=（真陽性+真陰性）/總例數(shù)×100%;靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%;特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%;陽性預(yù)測值=真陽性/（真陽性+假陽性） ×100%;陰性預(yù)測值=真陰性/（真陰性+假陰性）×100%[11，12];大三陽：HBsAg、HBeAg、抗HBc均為陽性;小三陽：HBsAg、抗HBe、抗HBc均為陽性;急性或慢性感染期：HBsAg陽性或HBcAb陽性[13]。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法" 采用統(tǒng)計軟件包SPSS 21.0版本對本研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，采用（x±s）表示符合正態(tài)分布的計量資料，組間比較采用t檢驗或方差分析;采用[n（%）]表示計數(shù)資料，組間比較采用χ2檢驗;使用Kappa值進行一致性分析，Plt;0.05說明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同檢測方法窗口期比較" RT-PCR法窗口期為（21.12±4.54）d，短于ELISA法的（36.20±5.84）d，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.983，P=0.017）。

2.2不同檢測方法診斷效能比較" RT-PCR法靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均高于ELISA法（Plt;0.05），見表1。

2.3 PCR法檢測HBV-DNA結(jié)果" 大三陽患者HBV-DNA陽性率、HBV-DNA定量均高于小三陽、急性或慢性感染期患者，且小三陽患者HBV-DNA陽性率、HBV-DNA定量高于急性或慢性感染期患者（Plt;0.05），見表2。

2.4 HBV-DNA與ELISA檢測血清標(biāo)志物陽性率比較" DNA陽性患者多為HBsAg攜帶者，陽性患者中HBsAg檢出率為92.86%（26/28）、HBsAg檢出率為67.86%（19/28）;HBsAg檢出符合率為73.02%（46/63），與HBeAg檢出符合率的71.43%（45/63）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.894，P=0.443），見表3。

3討論

臨床對乙肝提倡防治結(jié)合，預(yù)防為主的原則，而HBV是導(dǎo)致乙肝的主要原因，且可長時間潛伏在人體內(nèi)[14]。在乙肝發(fā)病初期一般無特異性表現(xiàn)，增加了臨床的診斷難度。因為乙肝存在發(fā)展成為肝硬化，甚至是肝癌的風(fēng)險，臨床應(yīng)及早識別、判斷，以及時開展相關(guān)干預(yù)治療[15]。ELISA法是傳統(tǒng)的檢驗方法，但是因為以抗原、抗體為檢測指標(biāo)，窗口期時間較長，且存在一定的假陽性和假陰性，對誤診患者造成一定的心理壓力[16]。RT-PCR法屬于病原學(xué)檢測，通過每毫升拷貝數(shù)定量發(fā)出檢測報告，可更真實、準(zhǔn)確、直接反映患者體內(nèi)HBV DNA狀況，便于臨床醫(yī)師判斷HBV復(fù)制及傳染狀態(tài)[17]。但具體的診斷價值還尚未完全明確，仍需臨床進一步探究證實。

本研究結(jié)果顯示，RT-PCR法窗口期為（21.12±4.54）d，短于ELISA法的（36.20±5.84）d（Plt;0.05），提示RT-PCR法可有效縮短檢測窗口期，進一步促進檢測準(zhǔn)確性。同時研究發(fā)現(xiàn)，RT-PCR法靈敏度、特異度、準(zhǔn)確率、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值均高于ELISA法（Plt;0.05），表明與ELISA法比較，RT-PCR法檢驗乙肝病毒具有高靈敏度、特異性，可一定程度減少漏診和誤診情況，促進乙肝病毒的診斷效能。因此，臨床可需按照RT-PCR法檢驗乙肝病毒，以期為臨床早期治療提供可靠參考依據(jù)，該結(jié)論與胡梅霞等[18]的研究相似。分析認(rèn)為，可能是因為PR-PCR屬于新型免疫檢測方法，可避免檢驗抗體受突變抗體的干擾，且標(biāo)記物來源豐富，可有效識別諸多病株，較大程度減小了人為因素干擾的影響，從而一定程度地提高了檢測準(zhǔn)確性[19]。大三陽患者HBV-DNA陽性率、HBV-DNA 定量均高于小三陽、急性或慢性感染期患者，且小三陽患者高于急性或慢性感染期患者（Plt;0.05），該結(jié)論提示HBeAg陽性的患者體內(nèi)HBV復(fù)制較為活躍且傳染性較強。因此，臨床可通過檢測HBV-DNA含量來判斷HBV的傳染性[20]。故，RT-PCR可通過定量檢測，及時發(fā)現(xiàn)HBV-DNA含量，進而判斷患者病情，從而給予針對性的干預(yù)治療，以避免病情進展。HBV-DNA陽性患者多為HBsAg攜帶者，但HBsAg、HBeAg陽性檢出符合率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05），表明HBV-DNA陽性患者多攜帶HBeAg，可能與HBV-DNA含量存在一定的關(guān)系。分析認(rèn)為，隨著乙肝病情的發(fā)展，患者體內(nèi)HBV會呈現(xiàn)增加的趨勢，從而可以進行定性的判斷，進一步利于HBsAg檢出。

綜上所述，RT-PCR法能夠定量評估患者HBV-DNA含量情況，并且可提高乙肝病毒診斷效能，縮短窗口期，有效反映患者機體內(nèi)對HBV感染及復(fù)制的狀態(tài)。而ELISA法可對HBV感染進行定性判斷，與RT-PCR法互為補充，臨床可將其聯(lián)合以提高診斷率。

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收稿日期：2023-09-20;修回日期：2023-10-08

編輯/杜帆

作者簡介：吳小玲（1977.11-），女，江西余干縣人，本科，主管技師，主要從事檢驗科檢驗工作