摘要：目的：使用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)（超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用）聯(lián)合多元統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)分析川、浙麥冬的差異成分。方法：質(zhì)譜解析軟件（Markerview）對(duì)液質(zhì)采集數(shù)據(jù)進(jìn)行成分分析，應(yīng)用主成分分析（PCA）等對(duì)其進(jìn)行差異性聚類。結(jié)果：鑒定或推斷了川、浙麥冬22個(gè)差異化合物，其中11個(gè)黃酮類化合物、11個(gè)皂苷類化合物。結(jié)論：通過該研究建UPLC-Q-TOF-MS/MS結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析方法，明確了四川以及浙江產(chǎn)地麥冬的差異化學(xué)成分。

關(guān)鍵詞：UPLC-Q-TOF-MS/MS麥冬主成分分析差異成分

DifferentialComponentAnalysisofOphiopogonJaponicusinSichuanandZhejiangProvincesBasedonUPLC-Q-TOF-MS/MSTechnology

SHANGYaruRENXiaoleiSUNGuodongTONGziyingHUOJinhai*

HeilongjiangAcademyofTraditionalChineseMedicine，Harbin，HeilongjiangProvince，150036，China

Abstract：Objective：ToanalyzethedifferentialcomponentsofOphiopogonjaponicusinSichuanandZhejiangbyusingUPLC-Q-TOF-MS/bj1APaJvPVB0sHzFsYdMhg==MScombinedwithmultivariatestatisticalanalysis.Methods：Markerviewwasusedtoanalyzethecompositionofliquidmassacquisitiondata，andPrincipalComponentAnalysis（PCA）wasusedtoclusterthemdifferentially.Results：Atotalof22differentialcompoundswereidentifiedorinferred，including11flavonoidsand11saponins.Conclusion：Inthisstudy，UPLC-Q-TOF-MS/MScombinedwithmultivariatestatisticalanalysismethodwasestablishedtoclarifythedifferentiationcomponentsofOphiopogonvulgarisinSichuanandZhejiang.

KeyWords：UPLC-Q-TOF-MS/MS;Ophiopogonjaponicus;Principalcomponentanalysis;

Differentialcomponents

川、浙麥冬在《中國(guó)藥典》均劃分為百合科植物麥冬Ophiopogonjaponicus（L.f.）Ker-Gawl.的干燥塊根，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品[1]。其傳統(tǒng)主產(chǎn)地為四川、浙江兩地，分別稱為川麥冬和浙麥冬[2]?，F(xiàn)對(duì)于麥冬的研究主集中在本草考證[3]、顯微特征與性狀[4]、化學(xué)成分[5-7]、藥理作用[7-8]等方面，關(guān)于麥冬的不同產(chǎn)區(qū)研究，更多的在于單一/主要成分的藥理作用及含量變化。

1儀器與試劑

1.1儀器

ABSciexUPLC液相色譜儀；ABSciex5600+型質(zhì)譜儀；AnalystTF1.6工作站；PeakView?2.0軟件；KQ-800KDB型超聲波清洗儀等。

1.2試劑

甲醇，蒸餾水，甲酸。

2藥材

麥冬藥材采自四川省和浙江省，經(jīng)黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院霍金海研究員鑒定為百合科植物Ophiopogonjaponicus（L.f）Ker-Gawl的干燥塊根，粉碎前于50℃烘箱烘8h。

3方法

3.1供試品溶液制備

取本品粉末（過4號(hào)篩）約1.0g，置具塞錐形瓶中，加入50%甲醇25mL，稱重，超聲處理45min（800W，40kHz），放至室溫，50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.2色譜-質(zhì)譜條件

色譜柱：ACQUITYTMBEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm）；預(yù)柱：ACQUITYTMUPLCBEHC18保護(hù)柱（5mm×2.1mm，1.7μm）；柱溫：35℃；流動(dòng)相：A（0.1%甲酸水）B（0.1%甲酸甲醇）；洗脫方式：全梯度洗脫，梯度洗脫程序：0～23min，95%A；23～23.01min，0%～95%A；23.01～25min，95%A；流速：0.3mL/min；樣品倉(cāng)溫度：4℃；進(jìn)樣量：10μL。

ESI離子源在正、負(fù)離子模式下采集數(shù)據(jù)，正負(fù)離子源電壓分別為5500V/-4500V，離子源溫度為550℃，霧化氣體為N2，霧化氣（Gas1）為55psi，輔助氣（Gas2）為55psi，氣簾氣（Curtaingas）為35psi，裂解電壓（DP）分別為80V，碰撞能量（CE）分別為35eV，碰撞能量擴(kuò)展（CES）均為15eV。TOFMS掃描范圍為100～1500Da，IDA設(shè)置響應(yīng)值超過100cps的8個(gè)最高峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，ProductIon掃描范圍為50～1500Da，開啟動(dòng)態(tài)背景扣除。

4結(jié)果

4.1差異成分分析

4.1.1川、浙麥冬PCA散點(diǎn)得分圖

4.2.2偏最小二乘法-判別分析（OPLS-DA）

將8批川、浙麥冬樣品的所解析出的20個(gè)差異成分的峰面積導(dǎo)入SIMCA14.0軟件中進(jìn)行偏最小二乘判別分析。以不同樣品的20個(gè)峰面積為自變量，樣品類型為因變量建立OPLS-DA判別模型進(jìn)行分析。而R2Y（cum）=0.810，Q2（cum）=0.629，顯示模型擬合及預(yù)測(cè)效果良好。

4.2.2差異成分結(jié)構(gòu)鑒定

通過UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)分析與鑒定，推斷川、浙麥冬中20個(gè)化合物，結(jié)果如表1所示。

4.2化合物的質(zhì)譜裂解特征分析

4.2.1黃酮類化合物的分析鑒定

實(shí)驗(yàn)共分析鑒定了11種黃酮類化合物，以15號(hào)化合物為例，ESI+模式下準(zhǔn)分子離子的質(zhì)荷比分別為m/z329[M+H]+，經(jīng)碰撞產(chǎn)生碎片離子m/zm/z207[M+H-C8H10O]+，又經(jīng)碰撞產(chǎn)生碎片離子121M+H-C8H10O-CO]+，根據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)推斷化合物化合物15為甲基麥冬二氫高異黃酮B，該化合物的二級(jí)質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)鏡像圖如圖4，可能的裂解方式如圖5。

4.2.2皂苷類化合物的分析鑒定

實(shí)驗(yàn)共分析鑒定了8種皂苷類化合物，以9號(hào)化合物為例，ESI+模式下準(zhǔn)分子離子的質(zhì)荷比855[M+H]+，經(jīng)碰撞產(chǎn)生碎片離子711[M+H-C8H16O2]+，579[M+H-C8H16O2-C5H8O4]+，433[M+H-C8H16O2-C5H8O4-C6H10O4]+，413[M+H-C17H30O13]+，395[M+H-C17H30O13-H2O]+，377[M+H-C17H30O13-2H2O]+，287[M+H-C8H16O2-C5H8O4-2C6H10O4]+，269[M+H-C8H16O2-C5H8O4-2C6H10O4-H2O]+，251[M+H-C8H16O2-C5H8O4-2C6H10O4-2H2O]+，147[M+H-C35H48O15]+，129[M+H-C35H50H16]+，根據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)推斷化合物9為麥冬皂苷D'，化合物的二級(jí)質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)鏡像圖如圖6，可能的裂解方式如圖7。

5討論

本實(shí)驗(yàn)采用UPLC-Q-TOF/MS技術(shù)對(duì)川、浙麥冬中的差異化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)定性分析。結(jié)果表明，四川產(chǎn)地與浙江產(chǎn)地麥冬在化學(xué)成分上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為后續(xù)進(jìn)行目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)及相關(guān)藥理作用的研究探索提供依據(jù)，以便進(jìn)一步完善浙麥冬和川麥冬的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。

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