汪 彬，李偉霞，，王曉艷，吳婭麗，張 輝，賈金浩，韓 冰，紀(jì)秋如，陳小菲，唐進(jìn)法，△

（1.河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，河南 鄭州 450046；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院·河南省中藥臨床應(yīng)用、評(píng)價(jià)與轉(zhuǎn)化工程研究中心·河南省中藥臨床藥學(xué)中醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·河南省中藥安全評(píng)價(jià)與風(fēng)險(xiǎn)防控工程研究中心，河南 鄭州 450046；3.河南中醫(yī)藥大學(xué)呼吸疾病中醫(yī)藥防治省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 鄭州 450046）

新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）已成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生事件［1-2］。我國(guó)發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第九版）》提出，COVID-19 屬中醫(yī)“疫病”范疇［3］。柴胡為傘形科植物柴胡Bupleurum chinenseDC.或狹葉柴胡Bupleurum scorzonerifoliumWilld.的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有和解表里、退熱截瘧功效，能有效治療COVID-19 初期發(fā)熱、干咳、乏力的癥狀，具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用［4-5］。《中醫(yī)方劑大辭典》是一部納入國(guó)家中醫(yī)藥管理局科研課題的方劑學(xué)大型工具書，具有全面、準(zhǔn)確、易檢、實(shí)用等特點(diǎn)［6］。本研究中以《中醫(yī)方劑大辭典》為數(shù)據(jù)來(lái)源，運(yùn)用關(guān)聯(lián)規(guī)則分析、聚類分析等數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)［7］，深度挖掘其相關(guān)藥物配伍規(guī)律，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)構(gòu)建成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)，預(yù)測(cè)柴胡-黃芩治療COVID-19 的潛在作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)挖掘

1.1.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：明確含柴胡治療與疫病相關(guān)的方劑（不計(jì)臨證加減藥物）；所載方藥有明確的藥物組成，劑量清楚，且療效明確。

排除標(biāo)準(zhǔn)：藥物組成相同而方名不同的方劑按重復(fù)方劑計(jì)，藥物組成不同而方名相同的方劑按不同方劑累計(jì)；主治病證不明確，《中醫(yī)方劑大辭典：第十一冊(cè)》病證索引中無(wú)法檢索。

1.1.2 數(shù)據(jù)規(guī)范化

錄入中藥以2015 年版《中國(guó)藥典（一部）》為標(biāo)準(zhǔn)，并參考全國(guó)高等中醫(yī)藥院?！笆濉币?guī)劃教材《中藥學(xué)》《中藥大辭典》《中華本草》進(jìn)行藥名規(guī)范。同種藥物不以地域、炮制方法、別稱區(qū)分，均記錄為同種藥物，如將北柴胡、銀柴胡規(guī)范為柴胡，炒白術(shù)規(guī)范為白術(shù)，官桂、桂心、桂皮規(guī)范為肉桂。

1.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS Modeler 18.0 軟件對(duì)符合納入標(biāo)準(zhǔn)的中藥進(jìn)行用藥頻率、性味歸經(jīng)等描述性分析，通過(guò)Apriori建模進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析［8］。采用SPSS Statistics 25.0 軟件，利用組間聯(lián)接的方法進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析［9-11］。

1.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

1.2.1 核心藥對(duì)柴胡-黃芩與COVID-19 靶點(diǎn)篩選

共篩選到含柴胡的方劑442 首。選用核心藥對(duì)柴胡-黃芩進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析。通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，https：// tcmsp-e.com/）收集柴胡、黃芩有關(guān)成分，采用Swiss TargetPrediction 在線靶點(diǎn)篩選平臺(tái)（http：// swisstargetprediction.ch/）篩選靶標(biāo)，整合數(shù)據(jù)并去重。在MalaCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.malacards.org/ ）、TTD 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：// db.idrblab.net/ttd/）、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.disgenet.org/）中，分別以“COVID-19”為關(guān)鍵詞搜索相關(guān)靶標(biāo)，去重后獲得共有靶標(biāo)。

1.2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

將共有靶標(biāo)輸入String數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org/），去除游離蛋白，獲得蛋白質(zhì)交互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖，導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0 軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析，并計(jì)算Hub 基因。將共有靶標(biāo)導(dǎo)入Omishare 平臺(tái)（https：//www.omicshare.com/ tools/）中的基因本體（GO）與京都基因與基因組百科全書（KEGG）富集高級(jí)分析工具模塊進(jìn)行可視化分析，采用Cytoscape 3.9.0 軟件對(duì)關(guān)鍵通路進(jìn)行成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建［12］。

2 結(jié)果

2.1 含柴胡防疫方劑高頻用藥的頻次

442 首含柴胡防疫方劑涉及334 味中藥，用藥頻次共4 877次。其中，高頻藥物（頻次≥60次）20味，累計(jì)用藥頻次2 658 次，詳見圖1。在20 味高頻藥物中，與柴胡配伍使用最多的為甘草，其次為黃芩和半夏。

圖1 含柴胡防疫方劑用藥頻次分布（頻次≥60）Fig.1 Distribution of medication frequency of anti-epidemic prescriptions containing Bupleuri Radix（frequency ≥60 times）

2.2 含柴胡防疫方劑高頻用藥的四氣五味

高頻用藥的藥性包括溫、平、寒3 種，占比最高的為溫性藥物，有白術(shù)、半夏、桂枝、人參等；其次為寒性藥物和平性藥物。高頻用藥藥味包括苦、甘、辛、酸、咸5 種，占比最高的為苦味藥物，有柴胡、白術(shù)、檳榔、黃芩等；其次為甘味藥物和辛味藥物。詳見表1和圖2。

表1 含柴胡防疫方劑高頻用藥（頻次≥60次）性味分布Tab.1 Distribution of medicinal natures and flavors of anti-epidemic prescriptions containing Bupleuri Radix with high frequency（frequency ≥60 times）

圖2 含柴胡防疫方劑高頻藥物（頻次≥60次）性味頻次分布雷達(dá)圖A.藥性 B.藥味Fig.2 Radar chart of frequency distribution of natures and flavours of anti-epidemic prescriptions containing Bupleuri Radix with high frequency（frequency ≥60 times）A.Medicinal natures B.Medicinal flavors

2.3 含柴胡防疫方劑高頻用藥功效頻次

補(bǔ)氣藥和理氣藥占比最高，其次為清熱瀉火藥、補(bǔ)血藥和發(fā)散風(fēng)寒藥。補(bǔ)氣藥包括甘草、人參等，理氣藥包括青皮、檳榔等，清熱瀉火藥包括黃芩、知母等；發(fā)散風(fēng)寒藥包括桂枝、柴胡等；補(bǔ)血藥包括當(dāng)歸、川芎等。詳見表2。

表2 含柴胡防疫方劑高頻用藥（頻次≥60次）功效分布（n=20）Tab.2 Distribution of efficacy of anti-epidemic prescriptions containing Bupleuri Radix with high frequency（frequency ≥60 times，n=20）

2.4 基于關(guān)聯(lián)規(guī)則Apriori 算法組方規(guī)律分析

采用IBM SPSS Modeler 18.0 軟件對(duì)高頻藥物采用Apriori 算法，設(shè)置最低支持度（C）為30%，最小規(guī)則置信度（S）為80%，最大前項(xiàng)數(shù)為3，提升度≥1.0，共得到135 條關(guān)聯(lián)規(guī)則。關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)中，藥物連線越粗，二者間的關(guān)聯(lián)度越大；反之，關(guān)聯(lián)度越小。柴胡與補(bǔ)益藥、清熱藥、燥濕化痰藥合用時(shí)，配伍使用頻率最高的有甘草、黃芩、半夏、人參、茯苓、陳皮。詳見表3和圖3。

表3 含柴胡防疫方劑高頻藥物（頻次≥60次）關(guān)聯(lián)規(guī)則表Tab.3 Association rules of anti-epidemic prescriptions containing Bupleuri Radix with high frequency（frequency ≥60 times）

圖3 含柴胡防疫方劑高頻藥物（頻次≥60次）關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)Fig.3 Association rule network of anti-epidemic prescriptions containing Bupleuri Radix with high frequency（frequency ≥60 times）

2.5 含柴胡防疫方劑高頻用藥聚類分析

采用IBM SPSS Statistics 25.0 軟件對(duì)前20 味高頻用藥進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，設(shè)置類型為水平譜系圖，聚類方法為瓦爾德法，區(qū)間選擇平方歐氏距離，共得到5 組多味藥物組合和2 組藥對(duì)。詳見圖4。其中，C1（藥對(duì)）：柴胡、甘草；C2（多味藥物組合）：黃芩、陳皮、半夏；C3（多味藥物組合）：茯苓、白術(shù)、人參；C4（藥對(duì)）：當(dāng)歸、白芍；C5（多味藥物組合）：鱉甲、桂枝、知母；C6（多味藥物組合）：川芎、地黃、枳殼；C7（多味藥物組合）：常山、檳榔、青皮、厚樸。C1-C3 為治療COVID-19 的“三藥三方”清肺排毒湯主要藥物；C4 為常用養(yǎng)血藥對(duì)，養(yǎng)血調(diào)肝、健脾利濕；C5為知母鱉甲湯主要藥物，養(yǎng)陰清熱，化痰截瘧；C6 為血府逐瘀丸組方藥物，疏肝理氣、活血散結(jié)；C7為達(dá)原飲主要組方藥物，可用于瘟疫初期和瘧疾的治療?？梢?，7組聚類總體為扶正祛邪組合。扶正以活血化瘀、調(diào)理氣血為主，祛邪以清肺排毒、清熱利濕、化痰截瘧為主，體現(xiàn)了中醫(yī)基于濕、熱、毒、瘀病機(jī)治療疫病。

圖4 含柴胡防疫方劑高頻藥物（頻次≥60次）聚類分析譜系圖Fig.4 Cluster analysis of anti-epidemic prescriptions containing Bupleuri Radix with high frequency（frequency ≥60 times）

2.6 篩選柴胡-黃芩核心藥對(duì)

柴胡-甘草關(guān)聯(lián)度最高，甘草多作為使藥，發(fā)揮調(diào)和諸藥、緩解藥物毒性等協(xié)同作用。黃芩多作為臣藥，苦能燥濕、泄熱下氣，寒能清熱解毒；入膽則清少陽(yáng)邪熱，入脾、大腸則燥腸胃濕熱，為清熱燥濕、瀉火解毒常用之品。柴胡-黃芩的關(guān)聯(lián)度僅次于柴胡-甘草，故選用柴胡-黃芩藥對(duì)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進(jìn)行深度分析。柴胡-黃芩是臨床常用方劑小柴胡湯的主要成分，也是仲景柴胡系列方劑中最具代表性的基本配伍。“三藥三方”中清肺排毒方的組成也是小柴胡湯［13-14］，但治療COVID-19的作用機(jī)制尚不明確。

2.7 柴胡-黃芩藥對(duì)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

COVID-19 疾病靶點(diǎn)篩選：通過(guò)GeneCards，Disgenet，TTD 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索COVID-19，并通過(guò)相關(guān)度大于中位數(shù)規(guī)則進(jìn)行篩選，共得到疾病靶點(diǎn)473 個(gè)。疾病靶點(diǎn)與成分靶點(diǎn)相交，得共有靶標(biāo)80個(gè)。詳見圖5。

圖5 柴胡-黃芩核心藥對(duì)成分與COVID-19共有靶標(biāo)維恩圖Fig.5 Venn diagram of the intersection targets of core components of Bupleuri Radix-Scutellariae Radix drug pair and the COVID-19

柴胡-黃芩藥對(duì)活性成分篩選：通過(guò)TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索柴胡-黃芩有效成分及基因靶點(diǎn)，通過(guò)Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行預(yù)測(cè)，最終篩選出主要活性成分柴胡12個(gè)，黃芩31個(gè)，柴胡-黃芩的共同有效成分為豆甾醇（stigmasterol），去除重復(fù)靶點(diǎn)，共得到553 個(gè)靶點(diǎn)。主要活性成分信息見表4。

表4 柴胡-黃芩的共同活性成分Tab.4 Common active ingredients of Bupleuri Radix-Scutellariae Radix

柴胡-黃芩藥對(duì)PPI 網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建：在完整的PPI 網(wǎng)絡(luò)中，度值（degree）越大的靶標(biāo)，可連接的節(jié)點(diǎn)越多，提示該靶在生物信號(hào)通路中可能為上游基因，在信號(hào)通路的傳導(dǎo)過(guò)程中起到關(guān)鍵樞紐作用，詳見圖6。采用Cytoscape 3.9.0 軟件內(nèi)CytoHubba 插件中度值算法篩選得到交互作用，提示評(píng)分在前10的基因可能是柴胡-黃芩在治療COVID-19 中發(fā)揮重要作用［15］。其中，較重要的靶標(biāo)主要有表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3（STAT3）、絲氨酸/ 蘇氨酸蛋白激酶1（AKT1）、白細(xì)胞介素2（IL-2）等。詳見圖7。

圖6 柴胡-黃芩治療COVID-19的PPI網(wǎng)絡(luò)Fig.6 PPI network of Bupleuri Radix-Scutellariae Radix in the treatment of COVID-19

圖7 柴胡-黃芩治療COVID-19的Hub基因Fig.7 Hub gene of Bupleuri Radix-Scutellariae Radix in the treatment of COVID-19

2.8 GO 分析與KEGG 富集分析

通過(guò)Omishare平臺(tái)（https：//www.omicshare.com/）中GO 及KEGG 富集工具進(jìn)行富集分析發(fā)現(xiàn)GO 分析3 736個(gè)相關(guān)條目。結(jié)果顯示，在生物調(diào)節(jié)、細(xì)胞代謝、免疫調(diào)節(jié)、生物附黏等生物功能，抗氧化活性、調(diào)節(jié)細(xì)胞活性、炎性反應(yīng)等分子功能有廣泛的調(diào)節(jié)作用，詳見圖8。KEGG 富集分析共獲得230 條信號(hào)通路，通過(guò)中國(guó)知網(wǎng)（https：// www.cnki.net/）、PubMed（https：// pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/）文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索剔出P值較小排名靠前的假陽(yáng)性通路，篩選出與COVID-19 疾病強(qiáng)相關(guān)的20 條核心通路，并繪制KEGG 富集分析氣泡圖，詳見圖9。結(jié)果顯示，主要涉及的信號(hào)通路有EGFR信號(hào)通路、缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）信號(hào)通路、輔助性T 細(xì)胞17（TH17）信號(hào)通路、Janus 蛋白酪氨酸激酶（Jak）-STAT 信號(hào)通路、腫瘤壞死因子（TNF）信號(hào)通路、磷脂酰肌醇3激酶-AKT（PI3K-AKT）信號(hào)通路、核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路等。

圖8 柴胡-黃芩治療COVID-19的GO分析條形圖Fig.8 GO analysis bar chart of Bupleuri Radix-Scutellariae Radix in the treatment of COVID-19

圖9 柴胡-黃芩治療COVID-19的KEGG富集分析氣泡圖Fig.9 KEGG enrichment analysis bubble chart of Bupleuri Radix-Scutellariae Radix in the treatment of COVID-19

2.9 成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將所得到的化合物、作用靶標(biāo)和KEGG通路信息導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0 軟件，構(gòu)建成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)，包括95 個(gè)節(jié)點(diǎn)、445 條邊，詳見圖10?；钚猿煞稚借头樱–H005）、黃芩素（HQ021）、小檗堿（HQ019）、漢黃芩素（HQ030）、刺槐素（HQ022）等度值靠前，可連接多個(gè)靶標(biāo)，提示在網(wǎng)絡(luò)中的貢獻(xiàn)度很高，可能在治療COVID-19疾病中起到了關(guān)鍵作用；主要共有靶標(biāo)有37 個(gè)，其中EGFR，STAT3，AKT1，IL-2 等度值靠前，可連接多個(gè)活性成分，提示該靶標(biāo)可被多個(gè)成分共同調(diào)節(jié)。

圖10 柴胡-黃芩治療COVID-19的成分-靶標(biāo)-通路網(wǎng)絡(luò)Fig.10 Component-target-pathway network of Bupleuri Radix-Scutellariae Radix in the treatment of COVID-19

3 討論

防疫方劑中用藥頻次最高的前20味中藥包括柴胡、甘草、黃芩、桂枝、半夏、茯苓、白術(shù)等，與防疫“三藥三方”中的清肺排毒方主要成分基本一致，適用于COVID-19初期輕癥患者［16］。配伍知母、鱉甲等滋陰清熱藥，人參、川芎、當(dāng)歸補(bǔ)氣血藥，甘草發(fā)揮調(diào)、補(bǔ)、緩作用，能有效緩解COVID-19患者的陰液耗竭、肺火上炎、氣血虧虛癥狀。從中藥性味分析，溫性藥與寒性藥分別占43.55%和38.73%，表明方劑多以溫陽(yáng)助陽(yáng)、寒以清熱、寒溫并用之法治療疫病，符合中醫(yī)藥“正氣存內(nèi)，邪不可干”的思想；苦、甘、辛分別占41.78%，26.36%，23.73%，苦能清熱燥濕、瀉火解毒，甘能緩急和中、調(diào)和諸藥，辛可發(fā)散解表、化痰散結(jié)。從中藥功效分類來(lái)看，柴胡與補(bǔ)氣藥、理氣藥、清熱瀉火藥、補(bǔ)血藥、發(fā)散風(fēng)寒藥等配伍，解表散邪外兼補(bǔ)氣，傷邪固正。

在關(guān)聯(lián)規(guī)則分析中，柴胡-甘草、柴胡-黃芩和柴胡-甘草-黃芩均具有較高的支持度。柴胡-黃芩是中醫(yī)臨床的常見藥對(duì)，具有消減郁熱、清熱燥濕、調(diào)和表里、和解少陽(yáng)的功效；柴胡-甘草可疏肝理氣，健脾和中。三者為柴胡黃芩甘草湯主要組成部分，是治療少陽(yáng)本證的經(jīng)典方劑。與核心藥對(duì)柴胡-黃芩、甘草組合的大棗、生姜、半夏也是小柴胡湯的主要成分。小柴胡湯是和解劑，具有和解少陽(yáng)的功效，臨床主要用于治療傷寒少陽(yáng)病證［17］。針對(duì)不同病證，柴胡有不同配伍，常配伍甘草、黃芩、人參、半夏，反映柴胡治療不同疾病時(shí)的用藥規(guī)律和配伍特點(diǎn)，符合中醫(yī)在診療中“異病同治”的基本思想及“扶正祛邪”的指導(dǎo)原則。

聚類分析共得到7類，其中C1-C3為治療COVID-19的“三藥三方”小柴胡湯加減，化濕理氣、調(diào)暢氣機(jī)，可改善肺氣壅滯、胸悶急促、氣機(jī)不暢、痰飲內(nèi)聚等癥［18］。少陽(yáng)乃是太陽(yáng)、陽(yáng)明升降的樞紐，可調(diào)節(jié)三陽(yáng)經(jīng)氣升降［18-19］。COVID-19 之寒濕疫毒郁于膜原，致少陽(yáng)樞機(jī)不利。小柴胡湯具有兩解少陽(yáng)、太陽(yáng)之邪的作用，配以白術(shù)、茯苓、陳皮，理氣健脾、燥濕化痰。C4 為常用養(yǎng)血藥對(duì)，養(yǎng)血調(diào)肝，健脾利濕，可明顯改善氣血虧虛、痰飲內(nèi)停之癥。C5-C7 為知母鱉甲湯、血府逐瘀丸、達(dá)原飲主要組方藥物，可養(yǎng)陰清熱、化痰截瘧、疏肝理氣，活血散結(jié)，對(duì)COVID-19、瘟疫初期和瘧疾具有良好效果［20］。

本研究中基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究《中醫(yī)方劑大辭典》含柴胡防疫方中核心藥對(duì)柴胡-黃芩治療COVID-19的作用機(jī)制，得到柴胡-黃芩治療COVID-19 的潛在活性成分為山柰酚、黃芩素、小檗堿、漢黃芩素、刺槐素、蘇薺苧黃酮、黃芩苷、5，7，4'-三羥基-8-甲氧基黃酮、紅花素、谷甾醇等。其中，山柰酚、黃芩素、小檗堿等均為黃酮類成分，具于抗炎、抗病毒、抗感染、免疫調(diào)節(jié)作用［21-22］。SUN 等［23］的研究發(fā)現(xiàn)，山柰酚減少了脂多糖（LPS）刺激的巨噬細(xì)胞對(duì)炎性因子的分泌，體外抑制MAPK/NF-κB 信號(hào)傳導(dǎo)，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化為M2型，抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的細(xì)胞因子風(fēng)暴，提高小鼠的存活率；嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）蛋白酶（3CLpro）在冠狀病毒中表現(xiàn)出高度保存性，是治療COVID-19的關(guān)鍵靶標(biāo)。研究表明，黃芩素對(duì)3CLpro具有較強(qiáng)的活性抑制作用［24］；漢黃芩素可通過(guò)增加免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的表型來(lái)增強(qiáng)免疫功能［25］，保護(hù)肺功能；小檗堿可抑制血清γ 干擾素（IFN-γ）及肺部IFN-γ，IL-10，CCL25 過(guò)度產(chǎn)生，對(duì)流感病毒感染導(dǎo)致的小鼠肺損傷起保護(hù)作用［26］。張英睿等［27］通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接技術(shù)發(fā)現(xiàn)，刺槐素等可通過(guò)作用于胱天蛋白酶3（CASP3）、胱天蛋白酶8（CASP8）、人細(xì)胞凋亡因子配體（FASLG）等靶點(diǎn)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡通路及TNF 通路，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)COVID-19 的潛在治療作用。

結(jié)合交集靶標(biāo)繪制的PPI網(wǎng)絡(luò)及評(píng)分，得到度值排前10 的Hub 基因，分別為EGFR，STAT1，STAT3，JAK1，JAK2，MAPK1，IL-2，AKT1 及熱休克蛋白90a 型1（HSP90AA1）、非受體型蛋白酷氨酸磷酸酶11（PTPN11）。其中，STAT1和STAT3參與冠狀病毒感染期間炎性反應(yīng)的誘導(dǎo)，通過(guò)影響Th17 和B 細(xì)胞介導(dǎo)的功能來(lái)抑制抗病毒干擾素反應(yīng)，并誘導(dǎo)不平衡的抗病毒適應(yīng)性免疫應(yīng)答［28］；JAK1 和JAK2 是參與免疫的細(xì)胞因子，抑制二者可減少COVID-19 相關(guān)的細(xì)胞因子風(fēng)暴；MAPK 和AKT1 主要參與細(xì)胞凋亡和葡萄糖代謝在內(nèi)的細(xì)胞過(guò)程［29］；HSP90AA1 和IL-2 可發(fā)揮抗炎作用，指導(dǎo)COVID-19患者的病情進(jìn)展、治療及預(yù)后的評(píng)估等過(guò)程［30］?；诰W(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和中醫(yī)理論分析柴胡-黃芩通過(guò)上述靶點(diǎn)調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)過(guò)程和人體免疫功能，可達(dá)到扶正祛邪的目的。

GO 分析表明，生物過(guò)程占比最大，主要為細(xì)胞代謝過(guò)程的調(diào)節(jié)、刺激反應(yīng)的正向調(diào)節(jié)、多細(xì)胞生物過(guò)程、生物黏附、細(xì)胞死亡等；分子功能主要為轉(zhuǎn)錄因子活性、蛋白質(zhì)結(jié)合、抗氧化活性。KEGG 富集分析主要包括EGFR 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路、NF-κB 信號(hào)通路等。COVID-19 通過(guò)促進(jìn)肺上皮細(xì)胞EGFR 表達(dá)的增加，觸發(fā)炎性反應(yīng)［31］。通過(guò)抑制EGFR，阻斷與IL-6 的聯(lián)系，降低炎性反應(yīng)即靜脈血栓形成，降低COVID-19重癥病死率［32］。TNF-α是急性和慢性全身炎性反應(yīng)的主要多效性介質(zhì)，可同時(shí)調(diào)節(jié)細(xì)胞的凋亡和增殖，促進(jìn)其他趨化因子和細(xì)胞因子的產(chǎn)生［33-34］。SARS-CoV-2感染期間，侵襲性炎性反應(yīng)和細(xì)胞因子風(fēng)暴會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的全身組織損傷和死亡，而TNF 信號(hào)通路在細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）中起至關(guān)重要的作用［35］。NF-κB信號(hào)通路在COVID-19的自然進(jìn)展和轉(zhuǎn)化為嚴(yán)重表型中發(fā)揮了重要作用，抑制NF-κB 信號(hào)通路可能是目前有效抗冠狀病毒藥物的作用機(jī)制［36］，激活NF-κB、抑制TNF-α 可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子風(fēng)暴的減少，緩解COVID-19的嚴(yán)重程度。

本研究中通過(guò)對(duì)《中醫(yī)方劑大辭典》中含柴胡防疫方劑進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則、聚類分析，深度挖掘柴胡治療疫病的用藥組方規(guī)律，明確了相關(guān)藥物的用藥頻率及配伍規(guī)律。運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法深度挖掘核心藥對(duì)柴胡-黃芩治療COVID-19 的潛在活性靶點(diǎn)及作用機(jī)制。柴胡-黃芩同一活性成分可調(diào)控不同靶點(diǎn)，而同一靶點(diǎn)可作用于不同的生物學(xué)過(guò)程及信號(hào)通路，體現(xiàn)多通路、多靶點(diǎn)聯(lián)合作用的特點(diǎn)，為發(fā)掘柴胡的潛在作用機(jī)制和臨床治療思路提供了新方向。但本研究未對(duì)柴胡相關(guān)數(shù)據(jù)挖掘的藥效成分、作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制進(jìn)行驗(yàn)證，有待后續(xù)深入研究。