胡 幸,匡鑫玉,曾令高△
(1.重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院·國家藥品監(jiān)督管理局麻醉精神藥品質(zhì)量監(jiān)測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶 401121;2.重慶大學(xué)生物工程學(xué)院,重慶 400044)
艾司唑侖片為第二類精神藥品,具有催眠鎮(zhèn)靜[1-3]、抗焦慮[4]、抗驚厥[5]等作用。國內(nèi)目前共有42家企業(yè)生產(chǎn)艾司唑侖片,有1 mg 和2 mg 2 個(gè)規(guī)格,其中4家企業(yè)(規(guī)格為1 mg)生產(chǎn)的艾司唑侖片已通過一致性評(píng)價(jià)。生產(chǎn)過程中,元素雜質(zhì)可能通過原料藥、輔料、包裝材料、注射用水、生產(chǎn)設(shè)備等多途徑引入[6-9]。若長期服用藥品,存在元素雜質(zhì)超過允許限度的風(fēng)險(xiǎn),故需測定制劑中的元素雜質(zhì)。目前,常用元素雜質(zhì)測定方法有原子熒光光譜(AFS)法、原子吸收(AAS)法、電感耦合等離子體發(fā)射光譜(ICP)法和電感耦合等離子體-質(zhì)譜(ICP-MS)法。其中,AFS 法測定元素的種類較局限;AAS 法每次只能測定1 個(gè)元素,多元素測定操作煩瑣;ICP 法的靈敏度不及ICP-MS 法,操作過程中會(huì)使用更大量的樣品及更高濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì);ICP-MS 法靈敏度高、線性范圍寬,同時(shí)測定多種元素使用樣品更少,可達(dá)到檢測效果,是目前檢測痕量有害金屬離子的首選方法[10-12]。為保障用藥安全,本研究中建立了測定艾司唑侖片中1 類元素砷(As)、鎘(Cd)、汞(Hg)、鉛(Pb)及2A 類元素鈷(Co)、鎳(Ni)、釩(V)雜質(zhì)含量的ICP-MS法,為其質(zhì)量控制提供參考?,F(xiàn)報(bào)道如下。
NexION 2000 型ICP-MS 儀(美國PerBinElmer 公司);Milli-Q 型超純水儀(美國Millipore 公司);XPE205DR 型電子天平(瑞士Mettler Toledo 公司,精度為0.01 mg)。
As標(biāo)準(zhǔn)溶液(中國計(jì)量科學(xué)研究院,批號(hào)為20041,質(zhì)量濃度為1 000 μg/ mL);Cd 標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號(hào)為235037-4),Hg標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號(hào)為235008-4),Pb標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號(hào)為235025-6),Co標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號(hào)為235041-2),金(Au)標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號(hào)為21B022-2),V 標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號(hào)為233061-3),Ni 標(biāo)準(zhǔn)溶液(批號(hào)為234023-6),質(zhì)量濃度均為1 000μg/mL,均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心;多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液[含鉍(Bi)、鍺(Ge)、銦(In)、鋰(Li)、鈷(Sc)、鋱(Tb)、釔(Y)元素,美國PerBinElmer 公司,批號(hào)為CL1-46MKBY1,質(zhì)量濃度為10μg/mL];68%硝酸溶液(UPS 級(jí),晶瑞電子材料股份有限公司,批號(hào)為230215049);艾司唑侖片(A 廠家,批號(hào)分別為20221018,20221112,20221115,20221116,20 221206;B廠家,批號(hào)分別為221001,221008,221012,221018,221106;C 廠家,批號(hào)分別為65230201,65230101,65221203,65221004,65 221003;D 廠家,批號(hào)分別為20220805,20220414,20220413,20221106,20220901)。
等離子體射頻功率:1 500 W;霧化氣流速:0.92 L/min;碰撞氣:氦氣;碰撞氣流速:3.8 mL/ min;蠕動(dòng)泵速:25 r/min;碰撞模式:動(dòng)能歧視(KED)模式;重復(fù)次數(shù):3 次。以銦(115In)和鉍(209Bi)作為內(nèi)標(biāo)元素。
標(biāo)準(zhǔn)空白溶劑(稀釋劑):取硝酸50 mL,加Au元素標(biāo)準(zhǔn)溶液200μL,用超純水稀釋至1 000 mL。
混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液:分別精密量取As,Pb,Cd,Hg,Co,V,Ni單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液各適量,用稀釋劑稀釋成每1 mL含As 75 ng、Pb 25 ng、Cd 25 ng、Hg 150 ng、Co 250 ng、V 500 ng、Ni 1 000 ng的溶液,即得。
系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液:分別精密量取上述混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.1,0.5,1.0,1.5,3.0 mL,分別置50 mL容量瓶中,用稀釋劑定容,混勻,即得。
限度濃度溶液:分別精密量取上述混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0 mL,置50 mL容量瓶中,用稀釋劑定容,混勻,即得。
混合內(nèi)標(biāo)溶液(209Bi,115In):精密量取多元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度為10μg/mL)0.1 mL,置200 mL容量瓶中,用5%硝酸溶液稀釋成質(zhì)量濃度為5 ng/ mL 的溶液,即得。
供試品溶液:取樣品細(xì)粉50 mg,精密稱定,加硝酸5.0 mL、Au 元素標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL,置同一聚四氟乙烯消解罐內(nèi),130 ℃條件下用石墨消解儀消解1 h,趕酸0.5 h,用超純水將消解罐內(nèi)的溶液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中,并用超純水定容,搖勻,即得。
空白溶液:不加樣品,按供試品溶液制備方法制備,即得。
專屬性試驗(yàn):選擇待測元素間互不干擾,同時(shí)與內(nèi)標(biāo)元素也互不干擾的質(zhì)量數(shù)作為檢測對(duì)象,待測元素各有特定的質(zhì)量數(shù),對(duì)測定互不干擾。標(biāo)準(zhǔn)空白溶液(稀釋劑)與限度濃度溶液的響應(yīng)值比值小于10%,即空白基質(zhì)液對(duì)檢測無明顯干擾。詳見表1。
表1 專屬性試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of the specificity test
線性關(guān)系考察:取2.2 項(xiàng)下系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液,按2.1項(xiàng)下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定,在線加入混合內(nèi)標(biāo)溶液,以待測元素的質(zhì)量濃度(X,ng/mL)為橫坐標(biāo)、待測元素與內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值的比值(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表2。
表2 線性關(guān)系考察、檢測限與定量限確定結(jié)果(n=5)Tab.2 Results of the linear relation test and determination of limit of detection and limit of quantitation(n=5)
檢測限和定量限確定:精密吸取2.2項(xiàng)下空白溶液11 份適量,按2.1 項(xiàng)下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定,以各元素與內(nèi)標(biāo)元素響應(yīng)值比值的標(biāo)準(zhǔn)偏差的3 倍所對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度為檢測限,以標(biāo)準(zhǔn)偏差的10 倍所對(duì)應(yīng)質(zhì)量濃度為定量限。結(jié)果見表2。
重復(fù)性試驗(yàn):取空白輔料0.05 g,精密稱定,按2.2項(xiàng)下方法平行制備溶液6份,精密加入標(biāo)準(zhǔn)貯備液1.0 mL,用超純水稀釋并定容,搖勻,按2.1 項(xiàng)下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算各元素的含量。結(jié)果各元素含量的RSD均小于4%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。詳見表3。
表3 精密度、重復(fù)性與加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(%)Tab.3 Results of the precision,repeatability,and recovery tests(%)
中間精密度試驗(yàn):由不同分析員在不同時(shí)間,取空白輔料6 份,按重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下方法操作,計(jì)算各元素的含量。結(jié)果各元素含量的RSD均小于3%(n=6),表明方法中間精密度良好。詳見表3。
加樣回收試驗(yàn):分別精密量取各單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用稀釋劑稀釋成每1 mL 含As 375 ng、Pb 125 ng、Cd 125 ng、Hg 750 ng、Co 1 250 ng、V 2 500 ng、Ni 5 000 ng的加標(biāo)貯備液;取空白輔料0.05 g,精密稱定,共9 份,分別加入上述加標(biāo)貯備液0.1,0.2,0.3 mL,各3 份,按供試品溶液制備方法進(jìn)行消解,分別作為50%,100%,150%濃度水平加標(biāo)回收溶液。按2.1 項(xiàng)下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定,計(jì)算加樣回收率。結(jié)果各元素的回收率均在85%~110%范圍內(nèi),符合方法學(xué)驗(yàn)證的要求,表明方法準(zhǔn)確度良好。詳見表3。
艾司唑侖片每日最大攝入量遠(yuǎn)低于10 g,參照人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)Q3D 指南,按劑量不超過10 g/d 的最大量計(jì)算。允許濃度(μg/g)=允許日暴露量(PDE)/每日劑量。ICP-MS 法測定多數(shù)元素的線性動(dòng)態(tài)范圍為0.01~100 ng/mL,故本研究中調(diào)整稀釋因子為1∶1 000,使溶液中各目標(biāo)元素均在儀器合適的線性動(dòng)態(tài)范圍內(nèi),各元素雜質(zhì)限度見表4。
表4 艾司唑侖片中元素雜質(zhì)的允許日暴露量與限度Tab.4 Permissible daily exposure and concentrations of elemental impurities in Eszopiclone Tablets
取20 批樣品,按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按2.1項(xiàng)下ICP-MS 工作條件進(jìn)樣測定,按內(nèi)標(biāo)校正的標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果見表5??梢?,1類元素As和Cd元素均未檢出,但企業(yè)B 和企業(yè)D 的Hg 元素檢出批次較多;2A 類元素Co,V,Ni元素均有檢出,但含量均低于控制閾值的30%,表明原輔料、純化水、生產(chǎn)設(shè)備等可能引入的元素雜質(zhì)均能被有效控制,不影響藥物的安全性。
表5 樣品中元素雜質(zhì)含量測定結(jié)果(×10-6)Tab.5 Results of the content determination of elemental impurities in samples(× 10 -6)
在ICP-MS 分析中,光譜干擾(如同位素、多原子離子和雙電荷離子)和非光譜干擾(如基質(zhì)效應(yīng)、記憶效應(yīng))是常見問題[13-14]。為校正信號(hào)干擾,通常依據(jù)內(nèi)標(biāo)元素質(zhì)量數(shù)與元素質(zhì)量數(shù)是否相似、與元素電離勢能是否匹配選擇內(nèi)標(biāo)元素[15]。本研究中選擇209Bi 作為202Hg 和208Pb 的內(nèi)標(biāo)元素,選擇115In 作為75As,111Cd,59Co,60Ni,51V 的內(nèi)標(biāo)元素。此外,結(jié)合元素豐度及響應(yīng)值、儀器合理范圍等因素,確定以質(zhì)量濃度為5 ng/mL的209Bi 和115In作為混合內(nèi)標(biāo)溶液。
由于艾司唑侖片規(guī)格為1 mg,主藥只占平均片重的1%,對(duì)測定結(jié)果幾乎無影響。且被測樣品均已通過一致性評(píng)價(jià),樣品輔料組成一致,故選擇空白輔料進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證,既有代表性,又可減少艾司唑侖片的使用。
本研究中建立的方法操作簡單、分析快速、靈敏度高、檢測結(jié)果準(zhǔn)確、樣品用量少,可用于艾司唑片中1類和2A類元素雜質(zhì)的質(zhì)量控制及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。