摘 要：本文采用高效液相色譜法測定萊蕪雞腿蔥蔥莖及蔥葉中的維生素C（L-抗壞血酸）含量，并進行了方法優(yōu)化研究。樣品采用1.0%的草酸溶液作為提取液超聲提取2次，經(jīng)Kromasil C18柱分離后，用紫外檢測器在254 nm波長處檢測，以保留時間定性，外標法定量。結果顯示，維生素C質量濃度在2.0～100.0 mg·L-1時的線性關系較好（R=0.999 5），精密度試驗的相對標準偏差為1.33%（n=6），加標回收率為94.9%～96.1%，方法檢出限為2.0×10-3 g·kg-1。該測試方法簡便快速，能準確測定萊蕪雞腿蔥蔥莖及蔥葉中維生素C含量。

關鍵詞：高效液相色譜法；萊蕪雞腿蔥；蔥莖；蔥葉；維生素C

Optimization of High Performance Liquid Chromatography Method for Determining Vitamin C Content in Different Edible Parts of Laiwu Jitui Onion

CAO Feng1， GAO Feng1， WANG Yanhong2， GENG Dongqing1

（1. Jinan Food and Drug Inspection and Testing Center， Jinan 250102， China;

2. Laiwu District Comprehensive Inspection and Testing Center， Jinan 271100， China）

Abstract： In this paper， high performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine the vitamin C （L-ascorbic acid） content in the onion stems and leaves of Laiwu Jitui onions， and the method was optimized. The samples were extracted twice with 1.0% oxalic acid solution as the extracting solution by ultrasonic extraction， separated on a Kromasil C18 column， and detected by an ultraviolet detector at 254 nm. The samples were qualitatively analyzed by the retention time， and quantitatively analyzed by the external standard method. The results showed that there was a good linear relationship （R=0.999 5） when the mass concentration of vitamin C was between 2.0 mg·L-1"and 100.0 mg·L-1. The relative standard deviation of the precision test was 1.33% （n=6）， the recovery rate was 94.9%～96.1%， and the detection limit of the method was 2.0×10-3 g·kg-1. This testing method is simple and fast， and can accurately determine the vitamin C content in the stems and leaves of Laiwu Jitui onion.

Keywords： high performance liquid chromatography; Laiwu Jitui onion; onion stem; onion leave; vitamin C

萊蕪雞腿蔥是著名的“萊蕪三辣”之一，已有2 000多年的栽培歷史，是品質優(yōu)良的山東地方特色蔬菜，2013年獲得了原農業(yè)部“農產(chǎn)品地理標志”原產(chǎn)地認證。萊蕪雞腿蔥蔥白質地細脆，辛辣味濃，適宜熟食，其營養(yǎng)比較豐富，含有氨基酸、無機鹽、蛋白質等多種營養(yǎng)物質，富含殺菌能力極強的大蒜素和維生素A、維生素C等活性成分[1-2]。維生素C又叫L-抗壞血酸，是一種水溶性維生素，有較強的抗氧化作用，是人體維持正常代謝不可缺少的一類營養(yǎng)物質，具有提高人體免疫力，預防動脈硬化等功效，嚴重缺乏維生素C會引起壞血病[3-4]。

蔥葉中維生素C含量要高于蔥莖[5]，但蔥葉卻常作為廢棄物丟棄，從資源利用及環(huán)境角度來說容易造成浪費和污染，因此準確測定蔥莖及蔥葉中的維生素C含量對于其充分利用具有重要意義。維生素C的常用檢測方法有2，6–二氯靛酚鈉鹽滴定法、高效液相色譜法、紫外分光光度法等[6-7]，其中高效液相色譜法是目前最常用的檢測方法，具有操作簡單、快速靈敏、重現(xiàn)性好等特點[8-9]。

為充分提取萊蕪雞腿蔥不同食用部位中的維生素C，并防止其在測試過程中氧化分解，本文參照相關研究[6，10-11]并加以優(yōu)化，以1.0%的草酸溶液替代國家標準GB 5009.86—2016[12]中使用的有劇毒的偏磷酸溶液作為提取液，超聲提取兩次，以提高維生素C的提取率，在此基礎上對高效液相色譜儀相關參數(shù)進行優(yōu)化，旨在為合理利用萊蕪雞腿蔥提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

萊蕪雞腿蔥購于濟南市萊蕪區(qū)牛泉鎮(zhèn)雞腿蔥種植專業(yè)合作社。維生素C標準品（L-抗壞血酸），默克股份兩合公司；甲醇（色譜純），天津市康科德科技有限公司；草酸（優(yōu)級純），天津市科密歐化學試劑有限公司；檢驗用水為自制純凈水。

LC-20A高效液相色譜儀（紫外檢測器），日本島津公司；UV-8000A雙光束紫外可見分光光度計，上海精密儀器儀表有限公司；JM-38D-45超聲波清洗機，深圳市潔盟清洗設備有限公司；2-16KL高速冷凍離心機，德國SIGMA公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流動相：甲醇-0.1%草酸溶液（5∶95，V∶V）；流速：1 mL·min-1；進樣量：20 μL；色譜柱柱溫：25 ℃；檢測波長：254 nm。以保留時間定性，外標法定量[11]。

1.2.2 樣品處理

稱取切碎的蔥莖及蔥葉樣品各10 g（精確至0.001 g）置于研缽中，加入1.0%的草酸溶液10 mL，迅速研磨成漿，轉移至容量為50 mL的離心管中，再用少量1.0%的草酸溶液沖洗研缽2次，渦旋混勻，放入超聲波振蕩器中低溫超聲提?。üβ蕿?00 W，水溫4 ℃左右）20 min，在高速冷凍離心機中離心10 min（4 ℃，6 000 r·min-1），將全部上清液轉移到25 mL棕色容量瓶中，冰箱中冷藏。研缽中再加入10 mL 1.0%的草酸溶液，渦旋混勻后重復上述步驟，將兩次提取液合并后用1.0%的草酸溶液定容并混勻，用孔徑為0.45 μm的水相濾膜過濾后冷藏。

1.2.3 標準溶液的配制

稱取維生素C標準品10.0 mg（精確至0.1 mg），用純水定容至10 mL，配制成1 000 mg·L-1的中間液；再用純水將標準中間液逐級稀釋成濃度為2.0 mg·L-1、20.0 mg·L-1、40.0 mg·L-1、60.0 mg·L-1、80.0 mg·L-1及100.0 mg·L-1的維生素C標準工作液，4 ℃避光保存。

2 結果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 檢測器波長的確定

利用紫外分光光度計對濃度為40 mg·L-1的維生素C標準物質溶液進行全波長掃描，結果顯示維生素C在波長254 nm處有最大吸收，為減少測試時雜質干擾，提高儀器的穩(wěn)定性，測試波長確定為254 nm。

2.1.2 流動相組分的選擇

維生素C有較強的還原性[13]，通常條件下較容易氧化，但是在弱酸性條件下能夠保持穩(wěn)定[14]。為保證維生素C在測試過程中的穩(wěn)定性，需要選擇酸性流動相，考慮到較強酸性的流動相可能會對液相系統(tǒng)產(chǎn)生較大的腐蝕性[15]，而國家標準中流動相使用的離子對試劑會對色譜柱產(chǎn)生不可逆的損害，參考相關文獻資料[7-9，16]，本研究選用甲醇-0.1%草酸溶液作為流動相。

參照相關研究[8，11，13，16]，研究甲醇與0.1%草酸溶液的體積比為5∶95、10∶90及20∶80時對檢測結果的影響。結果發(fā)現(xiàn)，流動相的體積比為5∶95時目標物保留時間為2 min左右，且目標峰與干擾峰有較好的分離；當流動相體積比為10∶90及20∶80時，維生素C的保留時間變短，其色譜峰與干擾峰無法完全分離?？紤]到定量精度，本文選擇甲醇與0.1%草酸溶液體積比為5∶95。

2.1.3 柱溫的確定

色譜柱溫度升高，柱內壓力變小，維生素C的保留時間變短，會影響色譜柱的分離效果[16]。由于維生素C在高溫下不穩(wěn)定，本研究選擇柱溫為25 ℃。

根據(jù)上述確定的測試條件，維生素C標準物質的色譜圖如圖1所示，萊蕪雞腿蔥蔥莖及蔥葉色譜圖見圖2、圖3。

2.2 維生素C的線性和檢出限

按1.2.3項方法配制標準系列溶液，以維生素C質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。由圖4可知，標準曲線回歸方程為Y=49 331X+10 072，在2.0～100.0 mg·L-1維生素C濃度及峰面積線性關系良好，相關系數(shù)R=0.999 5。按照3倍信噪比確定方法檢出限為2.0×10-3 g·kg-1。

2.3 精密度實驗

準確稱取雞腿蔥蔥葉樣品按照1.2.2項方法處理，在1.2.1項色譜條件下對樣品分別測定6次，測定結果見表1。可以看出，精密度實驗的RSD為1.33%，表明該測試方法的精密度較好。

2.4 加標回收實驗

以雞腿蔥蔥葉為實驗樣品，在校正曲線的線性范圍內，按照表2中的添加量進行加標回收實驗，結果見表2?？梢钥闯?，樣品加標回收率在94.9%～96.1%，RSD為0.67%，表明測定結果準確可靠。

2.5 樣品測定

按本文實驗方法對萊蕪雞腿蔥樣品的蔥莖和蔥葉進行了檢測，蔥莖中維生素C含量為5.6 mg/100 g，蔥葉中維生素C的含量為11.1 mg/100 g（表1），蔥葉中維生素C的含量遠高于蔥莖，是蔥莖含量的1.98倍。

3 結論

萊蕪雞腿蔥蔥莖、蔥葉中的維生素C采用1.0%的草酸溶液超聲提取后，以體積比為5∶95的甲醇-0.1%草酸溶液為流動相，利用紫外檢測器在波長為254 nm的條件下檢測，一次進樣，可以在3 min內完成對萊蕪雞腿蔥中維生素C的分析。在質量濃度為2.0～100.0 mg·L-1時，維生素C的校準曲線線性關系較好，R=0.999 5，精密度試驗的平均RSD為1.33%（n=6），方法的加標回收率為94.9%～96.1%，檢出限為2.0×10-3 g·kg-1。本方法分離效果好、簡單高效，可用于萊蕪雞腿蔥蔥莖與蔥葉中維生素C含量的測定。

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作者簡介：曹峰（1978—），男，山東新泰人，碩士，正高級工程師。研究方向：食品檢驗檢測。