黃燦燦,毛海燕,吉秀家,連小龍,張作良,陳元?dú)g,岳斌,張小花,申劍,武權(quán)生

(1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)臨床學(xué)院,2.甘肅省人民醫(yī)院,甘肅 蘭州 730000;3.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)部,青海 西寧 810016)

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMT)是指具有生長功能的子宮內(nèi)膜組織(腺體和間質(zhì))出現(xiàn)在子宮體腔以外部位的一種疾病。EMT的核心病理機(jī)制是隨著卵巢功能周期性的變化,異位內(nèi)膜發(fā)生周期性剝脫及出血,規(guī)律且進(jìn)行性加重的痛經(jīng)及慢性盆腔疼痛是EMT最主要的臨床表現(xiàn)[1]。目前造成EMT痛經(jīng)的機(jī)制尚不清楚且臨床缺乏理想的根治手段[2],因此,探究EMT的致痛機(jī)制,尋求合理高效的治療方案一直是臨床防治EMT痛經(jīng)的重點(diǎn)。EMT被認(rèn)為是一種慢性炎癥性疾病,研究表明慢性炎癥反應(yīng)可能造成EMT痛經(jīng)最為直接的關(guān)鍵因素,異位內(nèi)膜的侵襲和種植、性激素異常(雌激素優(yōu)勢(shì)、孕激素抵抗等)、免疫功能紊亂等因素均可以加重局部的炎癥反應(yīng)并刺激大量致痛因子的釋放,進(jìn)而加重EMT的疼痛狀態(tài),同時(shí)內(nèi)異癥患者血清炎癥因子與盆腔粘連程度和痛經(jīng)程度呈正相關(guān)[3]。故探尋相關(guān)炎癥通路和靶向干預(yù)效應(yīng)蛋白一直是EMT防治的熱點(diǎn)。Toll樣受體2 (Toll-like receptor 2,TLR2) /髓樣分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88)/核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)作為一條重要的炎癥通路,其可介導(dǎo)心絞痛、骨關(guān)節(jié)痛、三叉神經(jīng)痛、盆腔炎性疼痛等多種疼痛的發(fā)生[4-5],因此,靶向TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路或可成為EMT痛經(jīng)防治的新方向。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,EMT痛經(jīng)屬于“經(jīng)行腹痛”“癥瘕”范疇,其基本病機(jī)可概括為兩個(gè)方面:一為氣血不通,胞脈瘀滯而作痛;二為陽虛不足,溫煦失司而為痛。針對(duì)這兩大病機(jī),課題組前期提出“溫腎暖宮以除冷積、化瘀通滯以消癥瘕”的治療原則,運(yùn)用加味少腹逐瘀湯治療,收效顯著[6]。然而加味少腹逐瘀湯是否通過調(diào)控TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮拮抗EMT痛經(jīng)的作用,目前尚未見相關(guān)報(bào)道。故本研究以加味少腹逐瘀湯對(duì)EMT小鼠模型進(jìn)行干預(yù),旨在探討該方是否通過對(duì)TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白及腹腔微環(huán)境的調(diào)控發(fā)揮拮抗EMT痛經(jīng)的干預(yù)效應(yīng),為加味少腹逐瘀湯防治EMT痛經(jīng)的推廣運(yùn)用提供分子生物學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物選用6～8周齡BALB/c雌性小鼠共74只,體質(zhì)量(18～20) g,購自斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司(SCXK(京)2019-0010),飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物房(許可證號(hào):SYXK(甘)2021-0004)。所有小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格遵照動(dòng)物倫理相關(guān)規(guī)定執(zhí)行并通過甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2022-056)。

1.2 藥物與試劑加味少腹逐瘀湯(川芎6 g,五靈脂6 g,赤芍6 g,小茴香1.5 g,官桂3 g,干姜3 g,延胡索3 g,沒藥6 g,當(dāng)歸9 g,生蒲黃9 g,三棱3 g,莪術(shù)9 g、土鱉蟲3 g、紫石英9 g)購自甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,以1 ∶10藥水比將藥物浸泡于蒸餾水中2 h,按常法煎煮2次,每次30 min,濾出藥液加熱濃縮至每1 mL藥液含生藥1 g,高溫滅菌冷卻后置4 ℃冰箱備用,使用時(shí)稀釋至所需濃度;孕三烯酮(上海麥克林生化科技有限公司,批號(hào):C10681333);預(yù)染Marker(YESEN,20351ES72);RIPA裂解液(R0010)、BCA蛋白定量試劑盒(PC0020),購自北京索萊寶公司;抗TLR2(Bioss公司,bs-1019R),山羊抗兔IgG(RS0002)、抗MyD88(YT2928)、抗NF-κB(YT3108)、抗p-NF-κB(YP0191)、抗GAPDH均購自Immunoway公司。白介素6(Interleukin 6,IL-6)試劑盒(JC00632)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)試劑盒(JC00325)、前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)試劑盒(JC00745)、雌二醇(Estradiol,E2)試劑盒(YJ001962)、孕激素(Progesterone,P)試劑盒(YJ057778)均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 儀器Western blot電泳儀(北京君意東方電泳設(shè)備有限公司,型號(hào):JY-SCZ2+),實(shí)時(shí)定量PCR儀(西安天隆科技有限公司,型號(hào):Gentier 96R),酶標(biāo)儀(美國Thermo公司,型號(hào):Multiskan Mk3)。

2 方法

2.1 模型構(gòu)建適應(yīng)性喂養(yǎng)后隨機(jī)選取8只作假手術(shù)組(Sham)。其余66只小鼠按照1 ∶2的比例隨機(jī)分為受體組44只,供體組22只,每只供體小鼠,構(gòu)建2只模型小鼠。采用異體種植腹腔注射法構(gòu)建EMT痛經(jīng)模型[7]:造模前,所有小鼠頸背部皮下注射苯甲酸雌二醇(150 μg·kg-1),每4 d 1次以統(tǒng)一動(dòng)情周期,共用兩次,頸椎脫臼處死供體小鼠,迅速取出小鼠子宮于4 ℃生理鹽水中清洗后沿中線等分為二,分別置于盛有0.5 mL 1×PBS培養(yǎng)皿中,將培養(yǎng)皿置于冰上將子宮縱向剖開并剪碎為體積約1 mm3的碎片,采用1 mL注射器配20 mL針頭將0.5 mL子宮碎片于尿道口正上方約0.5 cm處注入受體小鼠下腹部,注射后輕按針孔后涂抹紅霉素預(yù)防感染。假手術(shù)組亦于造模當(dāng)日腹腔注射等體積PBS;同時(shí)模型各組采用冷水浴法構(gòu)建寒濕瘀結(jié)證模型[8]:于造模第1天下午3點(diǎn)將小鼠置于冷水中水浴,水溫保持(5±1)℃,持續(xù)10 min,連續(xù)干預(yù)21 d。造模第21天,隨機(jī)選取4只小鼠,頸椎脫臼處死,開腹觀察異位病灶,確定造模成功與否。

2.2 分組及藥物干預(yù)建模成功后將模型小鼠分為5組,B組:模型組(Model)、C組:中藥低劑量組(JWSFZYT-L)、D組:中藥中劑量組(JWSFZYFT-M)、E組:中藥高劑量組(JWSFZYT-H)、F組:陽性藥物組(Gestrinone),每組8只。持續(xù)灌胃干預(yù)15 d。假手術(shù)組及模型組每日蒸餾水灌胃,給藥濃度按照人與小鼠體表面積等效計(jì)量換算得出,以等效劑量作為中劑量給藥濃度,兩倍計(jì)量為高劑量給藥濃度,二分之一劑量為低劑量給藥濃度,得出中藥高、中、低劑量組每天分別給予19.8、9.9、5.0 g·kg-1劑量的加味少腹逐瘀湯灌胃1次,共干預(yù)15 d。陽性對(duì)照組給予孕三烯酮組(0.325 mg·kg-1)灌胃,每3 d 1次,共15 d。第15日給藥后,給予縮宮素注射,觀察各組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。

2.3 標(biāo)本制備與采集給藥結(jié)束,禁食24 h后取材。經(jīng)0.3%戊巴比妥鈉10 mL·kg-1劑量行腹腔注射麻醉后,立刻打開腹腔,仔細(xì)檢查腹腔粘連程度及病灶?？瞻捉M取子宮,其余各組剝離全部?jī)?nèi)異灶組織用生理鹽水沖洗干凈并稱重(干重)。取一部分組織固定于10%多聚甲醛溶液中,一部分置于凍存管中,放入-80℃冰箱中凍存,用于指標(biāo)檢測(cè)。

2.4 觀察指標(biāo)

2.4.1自主活動(dòng)檢測(cè) 藥物干預(yù)第15天上午灌胃結(jié)束后30 min,檢測(cè)各組小鼠自主活動(dòng)能力,于自主活動(dòng)儀中適應(yīng)3 min后檢測(cè)5 min內(nèi)站立次數(shù)。

2.4.2糞便含水率檢測(cè) 于藥物干預(yù)第15天下午,將小鼠禁食水2 h后,收集4 h糞便,稱取濕重后置于(60 ℃)干燥恒溫箱內(nèi)干燥24 h,稱取干重。稱重后將糞便再次烘干1 h后二次稱重,兩次重量之差控制于3 mg之內(nèi),即可計(jì)算糞便含水量。糞便含水率=(糞便濕重-糞便干重)/糞便濕重×100%。

2.4.3熱板試驗(yàn) 藥物干預(yù)第15天上午自主活動(dòng)能力檢測(cè)后30 min,將各組小鼠置于熱板儀(溫度55 ℃)上記錄兩次舔足時(shí)間的平均值為熱痛潛伏期。

2.4.4組織病理學(xué)評(píng)價(jià) 于藥物干預(yù)后的第16天上午取材,當(dāng)天進(jìn)行腹腔粘連程度評(píng)價(jià);異位病灶取出后測(cè)量異位灶的體積和總重量;子宮及異位病灶用4%多聚甲醛溶液固定,石蠟包埋。切片后行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色。HE染色觀察異位病灶的細(xì)胞形態(tài),免疫組化染色檢測(cè)NF-κB表達(dá)情況,圖像分析使用ImageJ軟件。

2.4.5實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè) 取新鮮的內(nèi)異灶組織(假手術(shù)組取子宮組織)于離心管中,使用TRIzol法進(jìn)行組織總RNA的提取,超微光分光光度計(jì)檢測(cè)樣品濃度。按步驟進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增,擴(kuò)增后將得到的Ct值采用2-ΔΔCT法計(jì)算目的基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量。具體引物見Tab1。

Tab1 Information of primer sequences

2.4.6Western blot檢測(cè) 取異位病灶組織,剪碎后裂解,冰上研磨30 min,離心后取上清液,加緩沖液,加熱變性后采取BCA法測(cè)定蛋白濃度;配膠、上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜后封閉。一抗孵育過夜(4 ℃):TLR2、MyD88、NF-κB、p-NF-κB(均以1 ∶1 000稀釋)、GAPDH(1 ∶2 000);TBST洗膜后加山羊抗兔IgG二抗(1 ∶3 000);ECL法顯影,ImageJ測(cè)量灰度值及目標(biāo)蛋白表達(dá)量。

2.4.7ELISA檢測(cè) 戊巴比妥鈉麻醉后,采用眼球取血法取小鼠外周血1 mL,離心取上清,按照試劑盒說明書步驟操作,檢測(cè)小鼠外周血IL-6、TNF-α、PGE2、E2、P含量。

3 結(jié)果

3.1 加味少腹逐瘀湯可以改善模型小鼠證候表現(xiàn)

3.1.1自主活動(dòng)檢測(cè) 與假手術(shù)組相比,模型組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯減少(P<0.01);與模型組相比,加味少腹逐瘀湯高劑量組可以明顯增加模型小鼠自主活動(dòng)次數(shù)(P<0.01);其余各組與模型組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見Tab2。

Tab2 Comparison of autonomous activity,fecal water content,

3.1.2糞便含水率檢測(cè) 與假手術(shù)組相比,模型組小鼠糞便含水量明顯增加(P<0.01);與模型組相比,加味少腹逐瘀湯高劑量組可以顯著降低模型小鼠糞便含水量(P<0.01);其余各組與模型組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見Tab2。

3.1.3熱痛潛伏期比較 與假手術(shù)組相比,模型組小鼠熱痛潛伏期明顯縮短(P<0.01),與模型組相比,除中藥低劑量組外,干預(yù)各組小鼠熱痛潛伏期均較模型組有所延長(P<0.05,P<0.01),且以中藥高劑量組和陽性藥物組明顯(P<0.01)。見Tab2。

3.2 加味少腹逐瘀湯可以減小異位病灶及異位子宮的大小取材時(shí)模型小鼠腹腔內(nèi)可見形態(tài)不規(guī)則大小不等的異位灶,病灶多呈半透明的囊性包塊,包塊常與周圍組織粘連且囊壁充滿新生小血管;異位灶多位于大網(wǎng)膜,還可能侵犯腹壁、子宮、腸壁、卵巢等部位(Fig1)。病灶直徑范圍1～9 mm不等,其中模型組病灶直徑較大,中藥高劑量組及陽性對(duì)照組病灶直徑較小(Fig2)。測(cè)量各組小鼠子宮體積并對(duì)各組異位病灶進(jìn)行稱重比較異位病灶總重量,結(jié)果顯示:與模型組相比,藥物干預(yù)后各組小鼠子宮體積及異位灶均較模型組有所減小,且以陽性對(duì)照組和中藥高劑量組減小明顯(P<0.01)。見Fig2、Fig3。

Fig1 Location and morphology of ectopic lesions in mice

Fig2 Comparison of uterine volume of mice in each

Fig3 Comparison of volume and total weight of ectopic lesions in each

3.3 加味少腹逐瘀湯可以緩解模型小鼠病理損傷假手術(shù)組取子宮組織,其結(jié)構(gòu)層次正常,病理可見單層柱狀上皮,偶見點(diǎn)狀壞死,固有層子宮腺數(shù)量豐富,可見少量淋巴細(xì)胞散在浸潤;模型組小鼠異位組織可見與假手術(shù)組相似的單層柱狀上皮及間質(zhì),且結(jié)構(gòu)明顯異常,內(nèi)膜腺體周邊可見明顯炎癥細(xì)胞浸潤;腺體下可見核下空泡;治療后,除低劑量組外,其余各治療組異位灶病理顯示損傷有顯著好轉(zhuǎn),其中以中藥高劑量組和陽性藥物組改善最為明顯。見Fig4。

Fig4 Comparison of pathological features of ectopic lesions in each group of mice(×200)A:Sham;B:Model;C:JWSFZYT-L;D:JWSFZYT-M; E:JWSFZYT-H; F:Gestrinone.

3.4 加味少腹逐瘀湯可以降低模型小鼠異位病灶NF-κB的表達(dá)與假手術(shù)組相比,模型組小鼠異位灶組織、胞質(zhì)、胞核中NF-κB的表達(dá)明顯增高,與模型組相比,各給藥組異位灶組織、胞質(zhì)、胞核中NF-κB的表達(dá)有所降低,以陽性藥物組和中藥高劑量組表達(dá)降低最為明顯。見Fig5。

Fig5 Comparison of expression of NF-κB in heterotopic lesions of mice in each group A:Sham;B:Model;C:JWSFZYT-L;D:JWSFZYT-M; E:JWSFZYT-H; F:Gestrinone.

3.5 加味少腹逐瘀湯對(duì)TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路mRNA的影響與假手術(shù)組相比,模型組小鼠異位組織TLR2、MyD88、NF-κB mRNA表達(dá)量明顯增加(P<0.01),與模型組相比,除中藥低劑量組外,各給藥組TLR2、MyD88、NF-κB mRNA的表達(dá)量降低,以陽性藥物組和中藥高劑量組下降最為明顯(P<0.01)。見Fig6。

Fig6 Comparison of mRNA relative expression levels of TLR2,MyD88 and NF-κB in heterotopic lesions of mice in each

3.6 加味少腹逐瘀湯對(duì)TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路蛋白的影響與假手術(shù)組相比,模型組小鼠異位組織TLR2、MyD88、p-NF-κB 表達(dá)量明顯增加(P<0.01),與模型組相比,各給藥組TLR2、MyD88、p-NF-κB的表達(dá)量降低(P<0.05,P<0.01),以陽性藥物組和中藥組高劑量組下降最為明顯(P<0.01)。各組小鼠異位灶中NF-κB蛋白表達(dá)無明顯差異。見Fig7。

Fig7 Comparison of heterotopic lesions TLR2,MyD88,NF-κB,P-NF-κB in each

3.7 加味少腹逐瘀湯對(duì)血清炎癥因子的影響與假手術(shù)組相比,模型組小鼠血清IL-6、TNF-α、PGE2水平明顯增高(P<0.05),與模型組相比,各給藥組血清IL-6、TNF-α、PGE2水平均有所降低(P<0.05,P<0.01),以陽性藥物組和中藥高劑量組下降最為明顯(P<0.05)。見Fig8。

Fig8 Comparison of serum levels of IL-6,TNF-α and PGE2 in each

3.8 加味少腹逐瘀湯對(duì)血清E2、P的影響與假手術(shù)組相比,模型組小鼠血清E2水平升高(P<0.05)、P水平下降(P<0.05),與模型組相比,給藥后各組血清E2水平有所降低、P水平有所升高,但僅陽性藥物組和中藥高劑量組變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見Fig9。

Fig9 Comparison of serum E2 and P levels in each group of

4 討論

EMT作為一種婦科常見病,常伴隨著嚴(yán)重的慢性疼痛,該病疼痛以漸進(jìn)性加重的痛經(jīng)和慢性盆腔痛最為典型,目前EMT痛經(jīng)發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚,研究證實(shí),炎癥反應(yīng)在EMT病程進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用,慢性炎癥刺激亦是引起EMT局部免疫細(xì)胞聚集、致痛因子分泌、新血管生成、組織纖維化粘連的重要因素,而這些病理過程均可促進(jìn)慢性疼痛的發(fā)生[9]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于EMT痛經(jīng)的治療主要以口服藥物為主,常選擇非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥、性激素制劑,疼痛嚴(yán)重者可選擇手術(shù)治療;然而口服西藥僅能短暫緩解疼痛,手術(shù)治療存在復(fù)發(fā)率高的缺點(diǎn)[10],因此,尋求理想控制EMT痛經(jīng)的方案已成為臨床亟待解決的問題。研究表明中醫(yī)藥在防治EMT痛經(jīng)方面表現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。大量臨床證據(jù)顯示溫腎化瘀法可以有效緩解EMT患者的慢性疼痛[11],并改善中醫(yī)證候。課題組前期致力于中醫(yī)藥防治婦科血瘀證的研究,臨床運(yùn)用加味少腹逐瘀湯治療EMT痛經(jīng)療效顯著[12],本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦證實(shí),加味少腹逐瘀湯在改善自主活動(dòng)次數(shù)、大便含水量及熱痛潛伏期等證候表現(xiàn)方面有較好的作用,但該方作用機(jī)制有待進(jìn)一步探索。

IL-6是由多種細(xì)胞分泌的具有免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞因子,其具有調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞功能、刺激局部炎癥反應(yīng),促進(jìn)組織粘連和纖維化等作用[13],其還參與慢性炎癥的形成。研究表明TNF-α是一種多能性的細(xì)胞因子,其與神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛 、癌痛等多種疼痛有直接關(guān)系;在炎性疼痛形成過程中TNF-α可引起血管內(nèi)皮損傷和局部微血栓形成,而刺激局部組織的出血、壞死,同時(shí),TNF-α還可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞黏附和吞噬功能,加重局部炎癥狀態(tài),促進(jìn)炎性致痛因子分泌,進(jìn)而加劇炎性疼痛[14]。PGE2是一種常見的致痛炎癥因子,研究表明,PGE2與痛經(jīng)嚴(yán)重程度呈正相關(guān),這可能與PGE2誘發(fā)超敏反應(yīng)增加末梢神經(jīng)元的興奮性有關(guān),PGE2還可以通過激活TRPV1、CaV1.4及Nav1.8 等離子通道,增加神經(jīng)元的敏感性,介導(dǎo)慢性疼痛的發(fā)生[15]。本研究結(jié)果顯示,加味少腹逐瘀湯可以降低血清中致痛炎癥因子IL-6、TNF-α、PGE2水平,這可能是改善EMT痛經(jīng)的直接原因。

NF-κB信號(hào)通路是炎癥反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)通路之一,研究表明該信號(hào)通路在EMT病變中過度活躍,并參與介導(dǎo)了EMT的發(fā)作、進(jìn)展和復(fù)發(fā),EMT病灶的形成,會(huì)激活NF-κB相關(guān)通路誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫細(xì)胞監(jiān)視,長時(shí)間的作用下進(jìn)而形成慢性炎癥反應(yīng),促進(jìn)IL-6、TNF-α、PGE2等致痛因子的高表達(dá)[16]。此外,EMT作為一種雌激素依賴性疾病,疾病發(fā)生過程中還會(huì)出現(xiàn)雌激素受體-β和孕激素受體的畸變,這些受體改變亦會(huì)加重NF-κB介導(dǎo)的局部炎癥反應(yīng),進(jìn)而促進(jìn)炎性疼痛的加劇,本研究結(jié)果顯示,模型組小鼠外周血存在雌激素水平增高及孕激素水平下降的現(xiàn)象,加味少腹逐瘀湯可以降低血清中E2水平并恢復(fù)P水平;而NF-κB表達(dá)降低與外周血E2及P水平的恢復(fù)呈正相關(guān),因此,靶向NF-κB信號(hào)通路防治EMT痛經(jīng)已逐漸成為研究的熱點(diǎn)。Toll樣受體 (Toll-like receptors,TLRs)是最早被發(fā)現(xiàn)的天然免疫模式識(shí)別受體,其中TLR2可以在局部炎癥浸潤、超敏反應(yīng)、病原體侵襲等條件下被激活,從而發(fā)揮免疫監(jiān)視及清除病原體的作用[17]。銜接蛋白MyD88與TLR2相結(jié)合后可激活下游NF-κB信號(hào)通路從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生[18],因此,TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路或可稱為防治EMT痛經(jīng)的關(guān)鍵靶點(diǎn),本研究結(jié)果顯示加味少腹逐瘀湯可顯著TLR2/MyD88/NF-κB相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),從而發(fā)揮拮抗慢性炎癥反應(yīng)的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)陽性對(duì)照藥物孕三烯酮作為臨床指南推薦的治療EMT的非甾體類孕激素藥物,亦可以調(diào)控TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路,改善模型小鼠的炎癥反應(yīng)。其作用機(jī)制可能是通過結(jié)合異位灶孕激素受體,進(jìn)而降低外周血E2水平,同時(shí)抑制下丘腦-垂體-靶腺軸降低雌激素水平,抑制異位病灶的生長,從而降低局部炎癥反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述,加味少腹逐瘀湯可以通過抑制TLR2/MyD88/NF-κB信號(hào)通路,改善局部炎癥微環(huán)境,降低炎癥因子IL-6、TNF-α、PGE2的表達(dá),調(diào)節(jié)性激素水平,從而達(dá)到改善證候表現(xiàn)及痛經(jīng)狀態(tài)。