張?chǎng)舞?陳雪蓮,趙衛(wèi)秀

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)科,上海 200127

近年來(lái),隨著人們生活條件及方式的改變,妊娠期糖尿病(GDM)發(fā)生率呈逐年升高趨勢(shì)[1]。GDM不僅可增加孕婦及其后代發(fā)生2型糖尿病(T2DM)的風(fēng)險(xiǎn),也可引發(fā)胎膜早破、巨大兒等并發(fā)癥[2-3]。尋找與GDM發(fā)病相關(guān)的因素,對(duì)及時(shí)干預(yù)并改善GDM妊娠結(jié)局甚是重要。既往研究表明,GDM與微小RNA(miRNA)異常表達(dá)、炎癥水平、長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)表達(dá)失調(diào)、糖代謝紊亂、胰島素抵抗(IR)等有關(guān)[4-5]。lncRNA、miRNA是兩種非編碼RNA分子,且二者均可輔助診斷GDM[4,6]。lncRNA尿路上皮癌胚抗原1(lncRNA-UCA1)作為lncRNA的一員,在T2DM中呈低表達(dá),lncRNA-UCA1可能是診治T2DM的新靶點(diǎn)[7];而微小RNA-145-5p(miR-145-5p)作為miRNA的一員,在GDM中往往表達(dá)上調(diào),miR-145-5p可作為診治GDM的分子靶標(biāo)[8]。ZENG等[9]研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-UCA1可調(diào)控miR-145-5p表達(dá)水平?；谏鲜鲅芯?本文通過(guò)測(cè)定lncRNA-UCA1、miR-145-5p在GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血中的表達(dá)水平,旨在探討二者與GDM及新生兒結(jié)局的關(guān)系,初步了解二者在GDM發(fā)病過(guò)程中的作用,也為妊娠期糖尿病的診治提供新的靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年3月至2021年7月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院收治的經(jīng)口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)確定為GDM的86例孕婦作為GDM組,年齡21～37歲、平均(29.63±5.16)歲;分娩孕周37～40周、平均(38.33±0.91)周。入組患者均通過(guò)合理飲食,控制血糖水平,選擇低糖、低脂、高纖維食物,避免高糖食物,避免暴飲暴食,并且每天進(jìn)行適度有氧運(yùn)動(dòng),如散步。另納入同期經(jīng)OGTT確定為正常糖耐量(NGT)的86例孕婦作為對(duì)照組,年齡22～37歲、平均(29.85±5.23)歲;分娩孕周37～40周、平均(38.45±0.95)周。對(duì)照組孕婦每天也進(jìn)行適度運(yùn)動(dòng),并避免高糖飲食。GDM組、對(duì)照組年齡、分娩孕周比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究符合《赫爾辛基宣言》要求,獲得上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(審批號(hào):2019-0013605)。所有受試者對(duì)本研究知情同意。

GDM組孕婦納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合文獻(xiàn)[10]中GDM的判定標(biāo)準(zhǔn);(2)單胎妊娠;(3)臨床資料完善。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)孕前患有糖尿病、高血壓者;(2)合并心功能不全、多囊卵巢綜合征、急慢性炎癥者;(3)合并垂體腎上腺、甲狀腺疾病或其他內(nèi)分泌疾病者;(4)合并艾滋病、肝腎功能障礙、惡性腫瘤者;(5)存在飲酒、吸煙等不良嗜好者;(6)服用激素類(lèi)藥物或因其他因素造成血糖升高者。

1.2方法

1.2.1資料收集 收集GDM組、對(duì)照組新生兒體重及孕婦年齡、分娩孕周、收縮壓、舒張壓、空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)的水平等資料。對(duì)照組與GDM組的年齡、BMI、孕周、收縮壓和舒張壓比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),GDM組TG水平高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),見(jiàn)表1。另外,收集孕婦分娩前空腹外周血4～5 mL,分離血清,分別使用全自動(dòng)生化分析儀(AU5800,Beckman公司)、電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(Cobas e 601,羅氏公司)檢測(cè)FBG、FINS水平,并依據(jù)穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=FINS×FBG/22.5公式計(jì)算HOMA-IR,評(píng)估孕婦的IR程度。

表1 兩組臨床資料對(duì)比

1.2.2標(biāo)本收集 胎盤(pán)組織收集:于孕婦娩出胎盤(pán)15 min內(nèi),在胎盤(pán)中央位置剪取1.5 cm×1.5 cm×1.5 cm的胎盤(pán)組織,用生理鹽水洗3次,即刻置于液氮,凍存一夜,移至-80 ℃冰箱。臍血收集:剪斷臍帶,收集新生兒臍血2～3 mL,靜置30 min,4 500 r/min離心7 min,離心半徑8 cm,分離上清液,置于-80 ℃冰箱。

1.2.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)法檢測(cè)血清lncRNA-UCA1、miR-145-5p表達(dá)水平 取胎盤(pán)組織、臍血標(biāo)本,使用TRIzol試劑(15596-026,Invitrogen公司)提取胎盤(pán)組織及臍血中的總RNA;之后,以M-MLV first strand cDNA Synthesis Kit(TQ2501-01,OMEGA公司)制備cDNA;最后,利用Real-time PCR Master Mix(KGA1339-1,江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司)、qPCR儀(MyGo Pro,IT-IS公司)擴(kuò)增cDNA,檢測(cè)lncRNA-UCA1、miR-145-5p的相對(duì)表達(dá)水平(以2-ΔΔCt法計(jì)算)。

2 結(jié) 果

2.1對(duì)照組和GDM組胎盤(pán)組織、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1、miR-145-5p表達(dá)水平比較 與對(duì)照組相比,GDM組孕婦胎盤(pán)組織、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1表達(dá)水平均降低(P<0.05),miR-145-5p表達(dá)水平均升高(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 對(duì)照組和GDM組胎盤(pán)組織、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1、miR-145-5p表達(dá)水平比較

2.2對(duì)照組和GDM組孕婦IR相關(guān)指標(biāo)及新生兒體重比較 與對(duì)照組相比,GDM組孕婦FINS、FBG、HOMA-IR、HbA1c水平及新生兒體重均顯著升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 對(duì)照組和GDM組孕婦FINS、FBG及HOMA-IR、新生兒體重比較

2.3GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血lncRNA-UCA1、miR-145-5p表達(dá)水平與HOMA-IR、新生兒體重的相關(guān)性 Pearson法分析顯示,GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血lncRNA-UCA1表達(dá)水平與HOMA-IR、新生兒體重呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),miR-145-5p表達(dá)水平與HOMA-IR、新生兒體重呈正相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血lncRNA-UCA1、miR- 145-5p表達(dá)水平與HOMA-IR、新生兒體重的相關(guān)性

2.4GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血lncRNA-UCA1表達(dá)水平與miR-145-5p的相關(guān)性 Pearson法分析顯示,GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血lncRNA-UCA1表達(dá)水平與miR-145-5p均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.576、-0.570,均P<0.05)。

3 討 論

lncRNA是一種可穩(wěn)定存在于臍血、胎盤(pán)組織中的長(zhǎng)鏈非編碼RNA分子,其可介導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng),影響滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、凋亡,調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程,lncRNA可能參與并影響GDM發(fā)生發(fā)展[11-12]。有研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-UCA1在糖尿病腎病中表達(dá)下調(diào),其可能通過(guò)影響炎癥反應(yīng)進(jìn)而影響糖尿病腎病進(jìn)程[13];另外,lncRNA-UCA1可通過(guò)靶向調(diào)控miR-528-5p修復(fù)高糖造成的血管平滑肌細(xì)胞損傷,從而緩解糖尿病血管病變[7]。本研究中,GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1表達(dá)水平均較低,與其在T2DM中的趨勢(shì)一致[7],提示lncRNA-UCA1表達(dá)水平下調(diào)可能與GDM病理發(fā)展相關(guān),由此推測(cè),lncRNA-UCA1可能通過(guò)與有關(guān)靶基因結(jié)合,進(jìn)而影響滋養(yǎng)細(xì)胞遷移、凋亡,調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),從而在GDM中起調(diào)控作用。另外,本研究結(jié)果顯示,GDM孕婦FBG、FINS、HOMA-IR水平較高,與郭碧蓮等[14]研究趨勢(shì)相符,且GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血lncRNA-UCA1表達(dá)水平與HOMA-IR均呈負(fù)相關(guān),提示lncRNA-UCA1表達(dá)水平可能與GDM孕婦糖代謝紊亂、IR密切相關(guān),其有作為GDM診治靶點(diǎn)的潛力。有研究顯示,新生兒體重異常增加、巨大兒是GDM的常見(jiàn)并發(fā)癥。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),GDM組新生兒體重顯著高于對(duì)照組,且GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血lncRNA-UCA1表達(dá)水平與新生兒體重也呈負(fù)相關(guān),提示lncRNA-UCA1表達(dá)水平降低可能增加GDM孕婦分娩巨大兒的風(fēng)險(xiǎn),臨床及時(shí)監(jiān)控lncRNA-UCA1表達(dá)水平可能有益于降低巨大兒出生率。

miRNA是一種短鏈非編碼RNA,在臍血、胎盤(pán)組織中可穩(wěn)定存在,其可調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲,介導(dǎo)自噬,調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),參與炎癥反應(yīng),在GDM中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[15-16]。有關(guān)報(bào)道顯示,miR-145-5p在糖尿病視網(wǎng)膜病變中呈高表達(dá),下調(diào)miR-145-5p可延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的病情進(jìn)展[17];另外,SHAHROKHI等[18]研究發(fā)現(xiàn),miR-145-5p在T2DM中表達(dá)失調(diào),miR-145-5p可能是診斷T2DM的潛在標(biāo)志物。本研究中,GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血中miR-145-5p表達(dá)水平較高,與ZAMANIAN等[8]研究結(jié)果相符,提示miR-145-5p可能參與GDM發(fā)病過(guò)程。分析原因,miR-145-5p可能通過(guò)影響炎癥反應(yīng),調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲、凋亡,從而影響GDM疾病進(jìn)展。本研究結(jié)果還顯示,GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血miR-145-5p表達(dá)水平與HOMA-IR、新生兒體重呈正相關(guān),提示miR-145-5p的表達(dá)水平可能與IR、新生兒體重密切相關(guān),miR-145-5p可能是預(yù)防GDM孕婦發(fā)生IR及新生兒體重異常的潛在標(biāo)志物,推測(cè)miR-145-5p表達(dá)水平升高會(huì)通過(guò)影響炎癥反應(yīng)抑制胰島細(xì)胞活性,進(jìn)而導(dǎo)致孕婦胰島素抵抗,升高血糖并通過(guò)影響炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲、凋亡參與GDM疾病發(fā)展,引發(fā)孕婦不良妊娠結(jié)局。此外,本研究經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),GDM孕婦胎盤(pán)組織、臍血lncRNA-UCA1表達(dá)水平與miR-145-5p均呈負(fù)相關(guān),提示lncRNA-UCA1可能與miR-145-5p協(xié)同影響GDM疾病進(jìn)展。

綜上所述,GDM孕婦胎盤(pán)、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1表達(dá)水平較低,miR-145-5p表達(dá)水平較高,二者均與IR、新生兒體重顯著相關(guān),可能為臨床防治GDM、預(yù)防巨大兒出生提供新思路。本文結(jié)合既往研究,從基因表達(dá)失調(diào)方面初步探討了與GDM發(fā)病相關(guān)的機(jī)制,為臨床防治GDM、預(yù)防巨大兒出生提供了一定的參考,但后期仍需擴(kuò)大樣本量,并需結(jié)合患者指標(biāo)動(dòng)態(tài)水平變化及基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn),探究lncRNA-UCA1與miR-145-5p在GDM中的作用機(jī)制,為靶向診治GDM孕婦并改善妊娠結(jié)局提供依據(jù)。