馬世杰

腦膠質(zhì)瘤是一種常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)惡性腫瘤,有發(fā)病隱匿、惡性程度高及異質(zhì)性高的特點(diǎn)。目前腦膠質(zhì)瘤的治療方法主要是以手術(shù)為主,實(shí)施顯微鏡下腫瘤切除術(shù)可最大限度切除腫瘤,也大大提高了手術(shù)的安全性,但由于膠質(zhì)瘤的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)導(dǎo)致其與臨近正常組織邊界不清,手術(shù)中不能完全切除,導(dǎo)致術(shù)后易復(fù)發(fā)[1-2]。因此,尋找能有效預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的因子對(duì)于采取及時(shí)有效的預(yù)防措施是必要的。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在血管發(fā)生和血管生成中起著重要作用,其參與了血管形成的全過(guò)程[3]。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)具有促進(jìn)細(xì)胞增殖,刺激上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移及促進(jìn)血管生成的生物學(xué)活性[4]。血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor receptor,PDGF)是一種旁分泌生長(zhǎng)因子,可刺激間質(zhì)增生并促進(jìn)腫瘤血管生成,參與了腫瘤的轉(zhuǎn)移[5-6]。腦脊液是腫瘤診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物的來(lái)源之一,本研究檢測(cè)了膠質(zhì)瘤患者腦脊液中VEGF、HGF及PDGF水平,并分析了其與術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2021年10月在我院接受手術(shù)治療的70例腦膠質(zhì)瘤患者為研究對(duì)象,共有男性37例,女性33例;年齡38～82歲,平均年齡為(56.72±10.13)歲;WHO分期:Ⅰ級(jí)為10例、Ⅱ級(jí)為18例、Ⅲ級(jí)為22例、Ⅳ級(jí)為20例,其中Ⅰ～Ⅱ級(jí)為低級(jí)別膠質(zhì)瘤,Ⅲ～Ⅳ級(jí)為高級(jí)別膠質(zhì)瘤。術(shù)后隨訪6個(gè)月,根據(jù)復(fù)發(fā)情況分為復(fù)發(fā)組(n=13)及未復(fù)發(fā)組(n=57)。

膠質(zhì)瘤患者納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)組織病理學(xué)首次確診且為原發(fā)性腫瘤,手術(shù)前未接受其他治療。②患者或其家屬簽署過(guò)知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①患者存在其他腦部疾病,包括腦膜炎、腦梗死等。②患者患有其他惡性腫瘤。③患者合并嚴(yán)重心肝腎疾病或免疫疾病。④患者依從性差。⑤未能隨訪到復(fù)發(fā)情況者。

1.2 方法

患者術(shù)前2周行腰椎穿刺術(shù),留取腦脊液標(biāo)本,采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定患者腦脊液中的VEGF、HGF及PDGF水平,所用試劑盒為人VEGF 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,人HGF酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒及人PDGF酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒,測(cè)定過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。術(shù)后隨訪6個(gè)月,依據(jù)患者復(fù)發(fā)情況,將患者分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組,復(fù)發(fā)的定義為腫瘤生長(zhǎng)范圍較術(shù)前擴(kuò)大或出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件Graphpad Prism 8.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,患者腦脊液細(xì)胞因子水平的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)系數(shù)進(jìn)行分析,繪制受試者工作特征(ROC)曲線分析患者腦脊液細(xì)胞因子水平對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值。采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS進(jìn)行二元logistic回歸分析膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膠質(zhì)瘤患者腦脊液中VEGF、HGF及PDGF的水平

經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者腦脊液中的VEGF、HGF及PDGF水平顯著高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤患者(P<0.001)。見(jiàn)表1及圖1。

圖1 腦脊液中的VEGF、HGF及PDGF水平

表1 不同級(jí)別膠質(zhì)瘤患者腦脊液中的VEGF和HGF及PDGF水平

2.2 膠質(zhì)瘤患者腦脊液VEGF、HGF及PDGF表達(dá)的相關(guān)性

采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析了膠質(zhì)瘤患者腦脊液VEGF、HGF及PDGF表達(dá)的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)VEGF、HGF及PDGF水平兩兩之間均呈顯著正相關(guān)(P<0.001);其中VEGF水平與HGF水平的相關(guān)系數(shù)γ為0.575;VEGF水平與PDGF水平的相關(guān)系數(shù)γ為0.576;HGF水平與PDGF水平的相關(guān)系數(shù)γ為0.636。見(jiàn)圖2～4。

圖2 膠質(zhì)瘤患者腦脊液VEGF與HGF水平的相關(guān)性

圖3 膠質(zhì)瘤患者腦脊液VEGF與PDGF水平的相關(guān)性

圖4 膠質(zhì)瘤患者腦脊液HGF與PDGF水平的相關(guān)性

2.3 膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的二元logistic 回歸分析

膠質(zhì)瘤患者術(shù)后隨訪6個(gè)月,根據(jù)復(fù)發(fā)情況分為復(fù)發(fā)組(n=13)和未復(fù)發(fā)組(n=57)。為分析膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立影響因素,本研究以VEGF、HGF及PDGF水平為協(xié)變量,以患者術(shù)后復(fù)發(fā)情況為因變量(復(fù)發(fā)賦值為1,未復(fù)發(fā)賦值為0),進(jìn)行二元logistic 回歸分析,結(jié)果表明膠質(zhì)瘤患者腦脊液中VEGF及HGF水平為術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立影響因素。見(jiàn)表2。

表2 膠質(zhì)瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.4 膠質(zhì)瘤患者腦脊液VEGF、HGF及PDGF水平對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)效能

接下來(lái),我們以患者術(shù)后6個(gè)月的復(fù)發(fā)情況作為標(biāo)準(zhǔn)繪制ROC曲線,分析了膠質(zhì)瘤患者腦脊液VEGF及HGF水平對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)效能。經(jīng)分析可知,腦脊液VEGF水平預(yù)測(cè)患者術(shù)后復(fù)發(fā)的曲線下面積(AUC)為0.772,95%CI為0.660～0.884;腦脊液HGF水平預(yù)測(cè)患者術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC為0.729,95%CI為0.599～0.858;兩者聯(lián)合后預(yù)測(cè)患者術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC為0.856,95%CI為0.767～0.944,優(yōu)于任何一個(gè)單獨(dú)指標(biāo)的預(yù)測(cè)效能。見(jiàn)表3。

表3 各指標(biāo)預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的ROC曲線分析

3 討論

膠質(zhì)瘤是常見(jiàn)且具有強(qiáng)侵襲性的原發(fā)性腦腫瘤,目前對(duì)膠質(zhì)瘤的治療采取顯微鏡下手術(shù)切除、輔助放療及使用DNA烷基化劑替莫唑胺化療等,但膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)率仍然很高,其預(yù)后仍然令人沮喪[7-8]。微血管的形成在實(shí)體瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重大意義,因?yàn)榭焖偕L(zhǎng)的癌細(xì)胞需要血液運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)和資源,微血管的生成導(dǎo)致腫瘤指數(shù)型快速生長(zhǎng)并向遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移[9]。膠質(zhì)瘤是一種高度血管化的惡性腫瘤,其發(fā)生發(fā)展具有血管依賴性[10],目前靶向膠質(zhì)瘤血管生成相關(guān)細(xì)胞因子及受體的治療方式是研究熱點(diǎn)之一。

血管生成是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程,受多種因素的影響,其中一些是促血管生成劑,另一些是血管生成抑制劑。VEGF是一種強(qiáng)效的促血管生成因子,在生理和病理性血管生成中均發(fā)揮重要作用,在腫瘤血管生成過(guò)程中,VEGF促進(jìn)炎性細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、顆粒性細(xì)胞等)到達(dá)腫瘤部位,維持局部炎癥過(guò)程,誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞、炎性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞合成促血管生成因子,從而促進(jìn)血管形成,誘導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[11]。有研究報(bào)道長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19通過(guò)miR-138-HIF-1α-VEGF信號(hào)軸促進(jìn)了膠質(zhì)瘤的血管生成[12]。趙巖江等報(bào)道腦膠質(zhì)瘤患者的VEGF水平高于良性腫瘤組,且具有陽(yáng)性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和較晚的TNM分期的患者VEGF水平更高[13]。

HGF是一種參與旁分泌細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的分泌蛋白,當(dāng)與其受體MET結(jié)合后,引起受體二聚化,隨后激活細(xì)胞內(nèi)多條下游通路。當(dāng)HGF/MET信號(hào)失調(diào)時(shí),在包括膠質(zhì)瘤在內(nèi)的許多癌癥中促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和血管生成[4]。就血管生成的過(guò)程而言,首先包括細(xì)胞周圍和細(xì)胞外基質(zhì)的分解,從而為內(nèi)皮細(xì)胞創(chuàng)造一條通路。接著,這些內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)形成新的血管,其機(jī)制包括細(xì)胞外基質(zhì)的降解、血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、存活和小管的形成。這些機(jī)制均受腫瘤細(xì)胞分泌的HGF和腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的MET的調(diào)控[14]。時(shí)彩艷等報(bào)道腦膠質(zhì)瘤患者血清高水平的HGF是患者術(shù)后低分割放療預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因子[15]。

PDGF是一種旁分泌生長(zhǎng)因子,與其受體結(jié)合后激活多條通路,與腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲和血管生成相關(guān)。異常PDGF信號(hào)在腫瘤血管生成中的作用包括募集外膜細(xì)胞到血管,誘導(dǎo)促血管生成因子的分泌,促進(jìn)腫瘤中內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成等[5]。李連進(jìn)等報(bào)道腦膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)的PDGF及VEGF與腫瘤高惡性程度和患者預(yù)后不良有關(guān)[16]。

本研究發(fā)現(xiàn)低級(jí)別膠質(zhì)瘤患者腦脊液中VEGF、HGF及PDGF水平均顯著高于正常水平,且高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者腦脊液中這三個(gè)細(xì)胞因子的水平顯著高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤患者,說(shuō)明這三個(gè)細(xì)胞因子可能參與了膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展。接著通過(guò)Pearson相關(guān)性分析,我們發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤患者腦脊液中這三個(gè)細(xì)胞因子的水平兩兩之間呈現(xiàn)顯著正相關(guān),說(shuō)明這些細(xì)胞因子在膠質(zhì)瘤的進(jìn)展過(guò)程中可能存在相互影響、相互作用。通過(guò)二元logistic 回歸分析,我們發(fā)現(xiàn)腦脊液VEGF及HGF水平是術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立影響因素。多指標(biāo)的聯(lián)合有助于提高診斷的準(zhǔn)確率,我們通過(guò)ROC曲線分析了VEGF及HGF聯(lián)合對(duì)于膠質(zhì)瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值,結(jié)果顯示腦脊液VEGF及HGF表達(dá)聯(lián)合預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的AUC值為0.856,優(yōu)于VEGF或HGF單獨(dú)的預(yù)測(cè)效能。

綜上所述,VEGF、HGF及PDGF在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,腦脊液VEGF及HGF表達(dá)是患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立影響因素,且腦脊液VEGF及HGF的高水平對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)具有一定的預(yù)測(cè)意義。