朝 梁，宋亞偉，阿爾山，阿拉騰蘇布達(dá)，包文林，包文強(qiáng)，王青虎

（內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028043）

隨著人們對(duì)美容需求的不斷增長(zhǎng),美白祛痘產(chǎn)品作為其中一類重要的產(chǎn)品,擁有廣闊的市場(chǎng)需求和潛力，但現(xiàn)上市的美白祛痘產(chǎn)品［1］在給我們帶來美的同時(shí)，也有可能帶來許多安全隱患。因此，具安全有效性的天然化妝品逐漸被消費(fèi)者接受，同時(shí)成為世界化妝品行業(yè)的研究熱點(diǎn)及發(fā)展方向［2］。

蒙醫(yī)藥在現(xiàn)代醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)中發(fā)揮著獨(dú)有的特色和優(yōu)點(diǎn)，在化妝品行業(yè)中具有強(qiáng)大的發(fā)展?jié)摿?。蒙古蒿（Artemisia mongolica Fisch. ex Bess. Nakai.）為菊科蒿屬多年生草本植物蒙古蒿的干燥全草，在內(nèi)蒙古分布較廣，資源豐富［3］。本品具有溫經(jīng)、止血、散寒、祛濕等功效，主治皮膚濕瘡、疥癬、風(fēng)寒外襲、表氣郁閉、濕瘡瘙癢［4］。揮發(fā)油［5-11］是蒙古蒿的主要次生代謝產(chǎn)物之一，其化學(xué)組成有單萜、倍半萜及其衍生物，具有殺蟲、抗炎、抗菌等作用。本團(tuán)隊(duì)在前期預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)蒙古蒿揮發(fā)油對(duì)痤瘡丙酸桿菌和金黃色葡萄球菌有較好的抑制作用，并具有良好的抗氧化能力。由此可見，蒙古蒿揮發(fā)油是具有潛在開發(fā)利用價(jià)值的天然祛痘美白添加劑。本團(tuán)隊(duì)以蒙古蒿揮發(fā)油為主要原料，選擇適當(dāng)?shù)妮o料，研制出水包油型乳液——蒙蒿藍(lán)油面膜乳液。為了確保蒙蒿藍(lán)油面膜乳液的安全性和穩(wěn)定性，課題組按照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB-T 13531.1-2008化妝品通用檢驗(yàn)要求，對(duì)該乳液進(jìn)行了一般檢查及TLC和GC分析。

1 實(shí)驗(yàn)材料

PHS-3TC酸度計(jì)（上海天達(dá)儀器有限公司）；AUW220D 型電子天平（島津公司）；Agilent Technologies 7820A 氣相色譜儀（美國安捷倫），檢測(cè)器為FID，色譜柱為HP-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）。蒙蒿藍(lán)油面膜乳液（批號(hào)：20200625、20210420和20210812）由課題組按蒙蒿藍(lán)油面膜乳液制備工藝自制。蘑菇醇、Mongolin A、庫貝醇和蘭香油奧對(duì)照品由課題組自制，其純度均大于98.6%；桉油精（產(chǎn)品編號(hào)：C0934，純度≥99.5%）、馬鞭草烯醇（產(chǎn)品編號(hào)：v68280，純度≥99.0%）、萜烯-4-醇（產(chǎn)品編號(hào)：R028788，含量≥98.0%）、α-松油醇（產(chǎn)品編號(hào)：10482-56，含量≥99.5%）和α-石竹烯（產(chǎn)品編號(hào)：PR3882，含量≥99.0%）等對(duì)照品由中國食品藥品檢定研究院提供。硅膠G（上海海洋化工廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 乳液制備

吸取揮發(fā)油2.5 mL，置于燒杯（2000 mL）中，加2 g巴斯夫CO40，攪拌均勻。溶液上加丁二醇10 mL和甘油10 mL，攪拌溶解，然后依次緩慢加入底基溶液500 mL、0.2%羥乙基纖維素溶液100 mL 和0.004 mol/L EDTA二鈉溶液50 mL，混合均勻，加水至1000 mL?；旌弦悍旁陔妱?dòng)攪拌器上，攪拌形成穩(wěn)定的乳液。

2.2 鑒別［12］

2.2.1 乳液類型

2.2.1.1 稀釋法吸取蒙蒿藍(lán)油面膜乳液1.0 mL，放入納氏比色管，加5倍量的水，攪拌1 min，觀察混合情況。蒙蒿藍(lán)油面膜乳液能與水混合均勻，說明該乳液為O/W型。

2.2.1.2 染色鏡檢法

取蒙蒿藍(lán)油面膜乳液少許，滴于載玻片上，經(jīng)蘇丹-Ⅲ和亞甲基藍(lán)染色后，在熒光顯微鏡下觀察，結(jié)果見圖1。圖1顯示，該乳液內(nèi)相顯紅色，而外相為藍(lán)色，說明該乳液為O/W型。

2.2.2 乳液中Mongolin A的TLC鑒別

2.2.2.1 供試液制備

吸取3批蒙蒿藍(lán)油面膜乳液1.0 mL，用環(huán)己烷10.0 mL萃取，取出上層萃取液為供試液。

2.2.2.2 對(duì)照品溶液制備

稱取Mongolin A對(duì)照品適量，用環(huán)己烷配成濃度為10.0 μg/mL對(duì)照品溶液。

2.2.2.3 薄層色譜條件與分析

以環(huán)己烷-乙酸乙酯（7∶1）為展開劑，用毛細(xì)管吸取供試液和對(duì)照液10 μL點(diǎn)于同一硅膠G板上，展開，以10%硫酸乙醇溶液顯色。圖2顯示，供試液與Mongolin A對(duì)照液在Rf值相同位置上有相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2.3 乳液中蘭香油奧的TLC鑒別

2.2.3.1 供試液制備

分別精密吸取不同批號(hào)蒙蒿藍(lán)油面膜乳液6.0 mL，精密加入二氯甲烷與丙酮（1∶1）混合液6.0 mL，振搖均勻，完全分層后，取出下清液為供試液。

2.2.3.2 對(duì)照品溶液制備

稱取蘭香油奧對(duì)照品適量，用環(huán)己烷配成濃度為10.0 μg/mL對(duì)照品溶液。

2.2.3.3 薄層色譜條件與分析

以石油醚-乙酸乙酯（80∶1）為展開劑，用毛細(xì)管吸取供試液和對(duì)照液各5 μL點(diǎn)于同一硅膠G板上，展開，以10%硫酸乙醇溶液顯色。圖3顯示，供試液與蘭香油奧對(duì)照液在Rf值相同位置上有相同顏色的斑點(diǎn)。

圖3 供試液（1-3）和對(duì)照液（4）TLC圖譜Fig. 3 TLC diagrams of sample（1-3）and control（4）solutions

2.3 檢查

2.3.1 pH檢查

按GB-T 13531.1-2008 中通用檢驗(yàn)方法要求，采用酸度計(jì)測(cè)定蒙蒿藍(lán)油面膜乳液的pH 值，其平均pH為5.85。蒙蒿藍(lán)油面膜乳液的pH與皮膚pH接近。

2.3.2 微生物限度檢查

取蒙蒿藍(lán)油面膜乳液3批，按GB-T 13531.1-2008中通用檢驗(yàn)方法要求，采用顯微鏡檢查蒙蒿藍(lán)油面膜乳液微生物，結(jié)果符合國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，見表1。

表1 蒙蒿藍(lán)油面膜乳液微生物檢查結(jié)果Tab. 1 Microbiological examination results of Menghaolanyou mask emulsion

2.4 GC分析

2.4.1 供試液制備

2.4.1.1 對(duì)照儲(chǔ)備液制備

準(zhǔn)確稱取蘑菇醇、桉油精、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和蘭香油奧對(duì)照品適量，分別加環(huán)己烷與丙酮（1∶1）混合液溶解，配成桉油精和Mongolin A的濃度為2.0 mg/mL，馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇和蘭香油奧的濃度為1.0 mg/mL，而蘑菇醇、α-石竹烯和庫貝醇的濃度為0.5 mg/mL，置于4 ℃冰箱中儲(chǔ)存，備用。

2.4.1.2 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液

以茴香醛為內(nèi)標(biāo)物，用環(huán)己烷配成濃度為0.5 mg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。

2.4.1.3 供試品溶液的制備取蒙蒿藍(lán)油面膜乳液2.0 mL，精密稱定后用環(huán)己烷與丙酮（1∶1）混合液5.0 mL萃取。準(zhǔn)確吸取萃取液3.0 mL，加2.0 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，混勻，即得供試品溶液。

2.4.2 色譜條件

以HP-530 型彈性石英毛細(xì)管柱（30 m× 0.25 mm×0.25 μm）為色譜柱；柱溫設(shè)定程序?yàn)殚_始柱溫50 ℃，以5 ℃/min 速率提升到140 ℃，再以8 ℃/min 速率提升到200 ℃，然后再以10 ℃/min 速率提升到260 ℃。進(jìn)樣口溫度和檢測(cè)器溫度分別為120 ℃和280 ℃，進(jìn)樣量為1.0 μL及分流比為10∶1。在實(shí)驗(yàn)所用GC色譜條件下，蘑菇醇、桉油精、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、庫貝醇、α-石竹烯、α-松油醇和蘭香油奧達(dá)到較好的分離效果（R＞1.5），理論塔板數(shù)均大于10000，其結(jié)果見圖4。

圖4 樣品溶液（A）和混合對(duì)照品溶液（B）的GC圖Fig. 4 GC diagrams of sample solution（A）and mixed control solution（B）

2.4.3 校正因子的測(cè)定

精密吸取桉油精、蘑菇醇、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和蘭香油奧對(duì)照儲(chǔ)備液各0.2 mL，置于量瓶（5 mL）中，加入內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液2.0 mL，再加環(huán)己烷與丙酮（1∶1）混合液至刻度，搖勻。在上述色譜條件下，進(jìn)樣，平行測(cè)定6 次，計(jì)算桉油精、蘑菇醇、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和蘭香油奧的校正因子，分別為0.662（RSD 0.63%）、0.688（RSD 0.57%）、0.692（RSD 0.68%）、0.651（RSD 0.71%）、0.700（RSD 0.79%）、0.712（RSD 0.79%）、0.706（RSD 0.79%）、0.697（RSD 0.79%）和0.678（RSD 0.86%）。

2.4.4 線性關(guān)系考察

精密吸取桉油精、蘑菇醇、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和蘭香油奧對(duì)照儲(chǔ)備液適量，加入內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液2.0 mL，再加環(huán)己烷與丙酮（1∶1）混合液稀釋成不同濃度系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。桉油精和Mongolin A的濃度為0.100、0.150、0.200、0.250、0.300和0.350 mg/mL，馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇和蘭香油奧的濃度為0.050、0.075、0.100、0.125、0.150和0.175 mg/mL，而蘑菇醇、α-石竹烯和庫貝醇的濃度為0.025、0.050、0.075、0.100、0.125、0.150 mg/mL。在實(shí)驗(yàn)所用色譜條件下，進(jìn)樣、測(cè)定、計(jì)算其回歸方程式，結(jié)果見表2。

表2 回歸方程及線性范圍Tab. 2 Regression equation and linear range

2.4.5 精密度試驗(yàn)

在實(shí)驗(yàn)操作條件下，批號(hào)20200625的供試品溶液進(jìn)樣6次、測(cè)定并計(jì)算桉油精、蘑菇醇、Mongolin A、馬鞭草烯醇、蘭香油奧、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和萜烯-4-醇與內(nèi)標(biāo)物茴香醛峰面積比的RSD，分別為0.64%、0.55%、0.57%、0.71%、0.61%、0.58%、0.72%、0.58%和0.66%。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在0、2、4、6、8和12 h等不同時(shí)間點(diǎn)，批號(hào)20200625的供試品溶液分別進(jìn)樣、測(cè)定并計(jì)算蘑菇醇、桉油精、Mongolin A、馬鞭草烯醇、蘭香油奧、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和萜烯-4-醇與茴香醛峰面積比的RSD，分別為0.86%、0.71%、0.69%、0.92%、0.80%、0.67%、0.97%、0.63%和0.78%。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn)

吸取樣品（20200625）6份，按“2.4.1”項(xiàng)下處理，進(jìn)樣、測(cè)定并計(jì)算桉油精、蘑菇醇、Mongolin A、馬鞭草烯醇、蘭香油奧、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和萜烯-4-醇與茴香醛峰面積比的RSD，分別為1.10%、0.95%、0.89%、1.20%、0.93%、1.00%、1.40%、0.87%和1.30%。

2.4.8 回收率試驗(yàn)

吸取樣品（20200625）1.0 mL，共9份，精密稱定，按中國藥典（2020版）高、中、低量加入法，分別加入桉油精、蘑菇醇、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和蘭香油奧適量，再加內(nèi)標(biāo)物適量，按“2.4.1”項(xiàng)下制備樣品溶液，進(jìn)樣、測(cè)定、計(jì)算其加樣回收率，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Tab. 3 Results of sample recovery test

2.4.9 樣品測(cè)定

吸取3批樣品各2.0 mL，精密稱定，按“2.4.1”項(xiàng)下制備樣品溶液，進(jìn)樣、測(cè)定并按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算樣品中蘑菇醇、桉油精、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和蘭香油奧的含量，結(jié)果見表4。

表4 不同樣品中含量測(cè)定結(jié)果Tab. 4 Content determination results in different samples mg/g

3 討論

為了確保蒙蒿藍(lán)油面膜乳液的穩(wěn)定性和安全性，本實(shí)驗(yàn)建立了其一般檢查、定性及定量分析方法。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［13-14］，蘑菇醇、桉油精、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和蘭香油奧是蒙古蒿揮發(fā)油的主要化學(xué)組成。這些萜類化合物具有多種生物活性，如桉油精［15-16］具有抗菌、抗炎、殺蟲和消腫止痛等功效，而蘭香油奧［17］具有抗?jié)儭⒖寡趸?、抗炎和抗過敏作用等，故本研究就以這些萜類化合物為指標(biāo)，展開了該乳液的定性和定量分析研究。

課題組在Mongolin A和蘭香油奧的TLC鑒別中考察了不同展開系統(tǒng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Mongolin A和蘭香油奧分別以環(huán)己烷-乙酸乙酯（7∶1）和石油醚-乙酸乙酯（80∶1）為展開劑時(shí)，分離效果及重復(fù)性較好，并其Rf值符合要求。按照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB-T 13531.1-2008化妝品通用檢驗(yàn)要求，對(duì)乳液進(jìn)行了pH和微生物檢查，其結(jié)果均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。GC色譜條件選擇結(jié)果表明，當(dāng)柱溫設(shè)定程序?yàn)殚_始柱溫50 ℃，以5 ℃/min 速率提升到140 ℃，再以8 ℃/min 速率提升到200 ℃，然后再以10 ℃/min 速率提升到260 ℃時(shí)，9個(gè)被檢測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)物的分離效果及重復(fù)性均較好。

在實(shí)驗(yàn)所用GC 色譜條件下，蘑菇醇、桉油精、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-石竹烯、α-松油醇、蘭香油奧和庫貝醇的線性關(guān)系較好（r＞0.9993）。精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示，其RSD均小于2.0%。蘑菇醇、桉油精、Mongolin A、馬鞭草烯醇、萜烯-4-醇、α-松油醇、α-石竹烯、庫貝醇和蘭香油奧平均回收率的RSD分別為1.5%、1.2%、1.5%、1.7%、1.6%、1.4%、1.3%、1.2%和1.4%。

總之，該研究建立了蒙蒿藍(lán)油面膜乳液的一般檢查、TLC鑒別和GC分析方法，為該乳液的安全性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)提供了理論依據(jù)。