李海琴，張帆帆，林 翠，王思怡,，譚美芳，吳誠(chéng)誠(chéng)，唐維國(guó)，熊立根，段凱文，康昭風(fēng)*

（1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/畜禽綠色健康養(yǎng)殖江西省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西南昌 330200；2.江西生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西南昌 330200）

禽白血病（Avian leukosis，AL) 是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV) 引起的以造血細(xì)胞惡性增生為主的多種腫瘤性傳染病的總稱(chēng)，以在成年雞中產(chǎn)生淋巴樣腫瘤和產(chǎn)蛋量下降為主要特征，在全球各地均有發(fā)生[1]。禽白血病不僅可以通過(guò)水平傳播，而且可以通過(guò)垂直傳播，感染雞群長(zhǎng)期處于帶毒狀態(tài)。種雞群一旦感染禽白血病，不僅危害同群種雞，還可以通過(guò)種蛋垂直傳播給下一代雞，從而造成疾病的跨世代傳播。到目前為止，還沒(méi)有有效藥物和疫苗用于禽白血病的防治，控制禽白血病主要采用檢測(cè)加淘汰的凈化方法。國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的禽白血病病毒檢測(cè)方法主要有：病毒的分離鑒定、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA) 和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR)、熒光HRM-PCR 等。

江西省是我國(guó)地方雞品種最豐富的省份之一，利用江西地方雞品種資源，許多優(yōu)良的配套系品種已經(jīng)培育成功，創(chuàng)造了較大的經(jīng)濟(jì)效益。種源安全至關(guān)重要，做好種雞場(chǎng)疫病凈化對(duì)地方品種雞資源保護(hù)意義重大。江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所高度重視禽白血病對(duì)江西地方雞的危害，率先對(duì)8 個(gè)不同地方品種雞進(jìn)行了ALV分子流行病學(xué)調(diào)查，流行病學(xué)調(diào)查顯示江西地方品種雞群普遍感染過(guò)外源性ALV[2-4]，不同亞群的ALV 存在混合感染現(xiàn)象，ALV 混合感染將對(duì)禽白血病凈化帶來(lái)挑戰(zhàn)，開(kāi)展江西地方雞禽白血病凈化勢(shì)在必行。本研究對(duì)3 個(gè)地方雞保種核心群開(kāi)展3～5 個(gè)世代的ALV 凈化，以期為該病的綜合防控以及其他疫病凈化提供參考依據(jù)。

1 禽白血病病毒流行現(xiàn)狀

根據(jù)病毒與宿主細(xì)胞特異性相關(guān)的囊膜蛋白的抗原性，ALV 可分為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K 等11 個(gè)亞群，但自然感染雞群的只有A、B、C、D、E、J、K 等7 個(gè)亞群。其中E 亞群屬于內(nèi)源性ALV、非致病性亞群，A、B、J、K 亞群屬于外源性ALV，在我國(guó)流行范圍最廣。K 亞群ALV（ALV-K) 是一個(gè)新的亞群，相較于其他亞群，其復(fù)制能力和致病力較弱，2012 年ALV-K 從我國(guó)地方雞分離出來(lái)，在隨后至今的多年間，在我國(guó)地方品種雞群中不斷被報(bào)道。J 亞群ALV（ALV-J) 于1999 年在我國(guó)首次被發(fā)現(xiàn)，隨后迅速蔓延至全國(guó)各地。與其他亞群相比，ALV-J 致病性和傳染性最強(qiáng)，可引起骨髓細(xì)胞瘤、血管瘤和其他多種惡性腫瘤，是危害我國(guó)家禽業(yè)的主要疫病，并在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)對(duì)雞蛋和雞肉產(chǎn)品的供應(yīng)構(gòu)成巨大威脅[5]。為了扭轉(zhuǎn)這一局面，自2008 年起我國(guó)在全國(guó)范圍內(nèi)啟動(dòng)了控制ALV 感染的凈化計(jì)劃，凈化效果明顯，尤其是商品肉雞和蛋雞中ALV 的發(fā)病率明顯降低，其中ALV-J 尤為明顯。自2013 年后，我國(guó)較少出現(xiàn)髓細(xì)胞組織增生癥或ALV-J 的報(bào)道。2018 年以來(lái)，我國(guó)多個(gè)省份的白羽肉雞中出現(xiàn)了基因組變異、致病性增強(qiáng)的ALV-J 毒株。更為嚴(yán)重的是ALV-J 又進(jìn)一步傳入我國(guó)固有的一些純地方品種雞群中，且存在不同亞群共感染現(xiàn)象[6-8]。感染不僅能造成病毒之間的重組，還可能會(huì)導(dǎo)致新型ALV 變異株的出現(xiàn)，ALV 病毒的重組可能會(huì)顯著增強(qiáng)病毒的致病性，嚴(yán)重威脅養(yǎng)禽業(yè)雞群健康發(fā)展。因此，密切監(jiān)測(cè)雞群ALV 感染與流行情況，對(duì)ALV 凈化防控有重要意義。

2 江西地方雞禽白血病流行現(xiàn)狀

2.1 2016—2018 年江西地方雞禽白血病流行情況

為了解江西地方雞禽白血病流行情況，2016—2018 年對(duì)江西省8 個(gè)地方雞群（A-H) 等進(jìn)行了系統(tǒng)的分子流行病學(xué)調(diào)查，樣品來(lái)源信息如表1 所示，調(diào)查的8 個(gè)品種雞的養(yǎng)殖規(guī)模從5000 到10000 只不等，疑似AL 的平均發(fā)病日齡約為135 日齡，癥狀持續(xù)30 至37 周，高峰期約為32 周齡。這些雞場(chǎng)的日死亡率為0.07%～0.44%，累計(jì)死亡率為7.90%～13.10%。值得注意的是，產(chǎn)蛋率明顯下降，比正常水平低20%以上。此外，種蛋孵化率受影響較小，仍在80%左右。從560 份樣品中分離出71 株病毒，并成功對(duì)其env 序列進(jìn)行了測(cè)序，結(jié)果顯示這些分離株全部屬于J 亞群，但其分子特征完全不同，與在白羽肉雞中出現(xiàn)的毒株有很大差異，部分毒株與之前從商品肉雞、蛋雞和其他雞群中分離的毒株高度一致，甚至與從美國(guó)和俄羅斯分離的毒株高度一致[3]。更嚴(yán)重的是，系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，還出現(xiàn)了許多新的毒株，并處于一個(gè)獨(dú)立的進(jìn)化分支中（圖1)。分離到的ALV-J 株系可進(jìn)一步分為10 個(gè)群組，而不同雞群中都有不同的群組，揭示了ALV 可能在這些雞群中發(fā)生準(zhǔn)種演變。以上分析說(shuō)明了ALV-J 在江西地方雞的復(fù)雜背景和未來(lái)演變趨勢(shì)。

圖1 71 株ALV 遺傳進(jìn)化樹(shù) [3]

表1 江西地方雞養(yǎng)殖場(chǎng)的ALV 陽(yáng)性率

2.2 2021—2023 年江西地方雞禽白血病流行情況

2021—2023 年對(duì)江西4 個(gè)地方雞（E-H) 的73664 份抗凝血樣本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，ALV-J 仍是感染雞中最主要的ALV 亞群，ALV-J陽(yáng)性率為1.47%～8.49%（表2)。ALV-A 和ALV-B 的檢出率較低（<0.06%)。從各亞群在ALV 陽(yáng)性樣本中所占百分比的統(tǒng)計(jì)來(lái)看，ALV-J亞群的陽(yáng)性率逐年下降，而值得注意的是，ALV-K 亞群在分離株中的占比逐年上升。F 雞種的ALV 檢出率最高，ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K 陽(yáng)性率分別為0.07%、0.3%、6.71%和4.86%；H 雞種的ALV 檢出率最低，ALV-J 和ALV-K 陽(yáng)性率分別為0.35%和0.51%，無(wú)ALV-A和ALV-B 感染。從樣本的性別來(lái)看，母雞群（8.32%) 的ALV 陽(yáng)性率明顯高于公雞群（3.16%)。這些數(shù)據(jù)表明，ALV-J 和ALV-K 仍是雞群中最主要的ALV 亞群，但在進(jìn)行ALV 凈化的雞場(chǎng)中，致病性強(qiáng)的ALV-J 陽(yáng)性率及其在分離株中占比明顯下降，禽白血病凈化對(duì)控制ALV的流行有重要意義。

表2 2021—2023 年禽白血病病毒檢測(cè)結(jié)果

對(duì)江西地方雞ALV 混合感染情況分析，結(jié)果顯示，在73664 份抗凝血樣本中，ALV-A、ALV-B、ALV-J 和ALV-K 的單感染率分別為0.01%（9/73664)、0.01%（9/73664)、3.75%（2762/73664) 和2.68%（1977/73664)（表3)。由1 種以上ALV 亞群引起的合并感染率在0.00%～0.59%，其中ALV-J 和ALV-K 合并感染率最高，為0.59%。此外，還發(fā)現(xiàn)了6 例三重感染病例，其中3 例同時(shí)感染ALV-A、ALV-J 和ALV-K，3 例同時(shí)感染 ALV-B、ALV-J 和ALV-K。ALV 重組將對(duì)禽白血病凈化帶來(lái)挑戰(zhàn)，開(kāi)展江西地方雞禽白血病凈化勢(shì)在必行。

表3 2021—2023 年不同禽白血病病毒株單獨(dú)感染和混合感染情況

3 江西地方雞禽白血病凈化

3.1 凈化方案

在江西地方雞ALV P27 抗原的排毒規(guī)律的基礎(chǔ)上，實(shí)施過(guò)程中不斷對(duì)凈化程序進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，最終確定如下凈化方案：

①出殼雛雞胎糞檢測(cè)（1 日齡)：孵化時(shí)需獨(dú)立的孵化車(chē)間，便于消毒，種雞帶上翅號(hào)單籠飼養(yǎng)，并編籠號(hào)，種蛋記錄編號(hào)，出雛時(shí)，全群母雞的種蛋配備獨(dú)立的出雛盒，出殼后立即采集胎糞，加入專(zhuān)用稀釋液，用液氮凍融后，利用ALV P27 抗原檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性者連同母雞及該母雞所有雛雞全部淘汰；陰性者小區(qū)間隔離飼養(yǎng)。

②育成期（8～10 周齡)：全群雞單獨(dú)采集血漿，用細(xì)胞培養(yǎng)的方法（血漿分別接種DF1 細(xì)胞，5%CO237℃培養(yǎng)7d 后，培養(yǎng)液反復(fù)凍融3次，取上清液進(jìn)行ALV P27 抗原檢測(cè))，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，淘汰陽(yáng)性雞。

③開(kāi)產(chǎn)初期（18～20 周齡)：開(kāi)產(chǎn)前，上單籠飼養(yǎng)，待開(kāi)產(chǎn)時(shí)，全群母雞開(kāi)產(chǎn)后的前3 枚蛋編上號(hào)，分別取稀蛋清，反復(fù)凍融3 次后，用ALV P27 抗原試劑盒檢測(cè)，淘汰陽(yáng)性雞群。

④繼代前（40～50 周齡)：采集全群母雞血漿，細(xì)胞培養(yǎng)病毒7d 后進(jìn)行ELISA 檢測(cè)ALV P27 抗原，淘汰陽(yáng)性雞群；采集公雞血漿，病毒分離后檢測(cè)ALV P27 抗原，淘汰陽(yáng)性雞。每個(gè)世代重復(fù)上述步驟，直至達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 A 雞種禽白血病凈化

A 雞種保種群凈化方案按照3.1 進(jìn)行，其禽白血病凈化檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4，共檢測(cè)樣品數(shù)37949 份。其中零世代共檢測(cè)6344 份樣品，陽(yáng)性雞樣品數(shù)為941 份，平均陽(yáng)性率為14.83%；第一世代共檢測(cè)樣品6763 份，平均陽(yáng)性率為8.19%；第二世代共檢測(cè)樣品7754 份，陽(yáng)性率為3.89%，第三世代檢測(cè)樣品數(shù)量為8258 份，平均陽(yáng)性率為1.38%；第四世代檢測(cè)陽(yáng)性樣品數(shù)8830 份，平均陽(yáng)性率為0.48%。經(jīng)過(guò)5 個(gè)世代的凈化，各日齡ALV 陽(yáng)性率呈逐級(jí)遞減的趨勢(shì)，凈化效果顯著。該種雞場(chǎng)于2022 年7 月被評(píng)為“省級(jí)禽白血病凈化場(chǎng)”。

表4 A 雞種禽白血病凈化結(jié)果

3.3 B 雞種禽白血病凈化

B 雞種禽白血病凈化程序參照3.1 方案進(jìn)行實(shí)施，其禽白血病凈化檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5，共進(jìn)行了五個(gè)代次的禽白血病凈化，檢測(cè)樣品52679份，淘汰陽(yáng)性雞1963 只。其中零世代共檢測(cè)樣品2788 份，淘汰陽(yáng)性雞580 只；第一世代檢測(cè)樣品9303 份，淘汰ALV 陽(yáng)性雞553 只；第二世代檢測(cè)樣品11771 份，淘汰陽(yáng)性雞354 只；第三世代檢測(cè)樣品數(shù)為14782 份，淘汰陽(yáng)性雞321只；第四世代檢測(cè)樣品數(shù)14035 份，淘汰陽(yáng)性雞155 只。凈化結(jié)果顯示B 雞種從零世代至第四世代各日齡陽(yáng)性率亦是逐級(jí)遞減的趨勢(shì)，凈化效果顯著。

表5 B 雞種禽白血病凈化結(jié)果

3.4 C 雞種禽白血病凈化

C 雞種禽白血病凈化程序參照3.1 凈化方案進(jìn)行實(shí)施，其禽白血病凈化檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表6，共進(jìn)行了四個(gè)代次的禽白血病凈化，檢測(cè)樣品41999 份，淘汰陽(yáng)性雞1678 只。從零世代至第三世代，各日齡ALV 陽(yáng)性率亦是逐級(jí)遞減的趨勢(shì)，第三世代1 日齡胎糞P27 抗原陽(yáng)性率與45 周齡病毒分離P27 抗原陽(yáng)性率分別為0.92%、0.96%，凈化效果明顯。將繼續(xù)按3.1 凈化方案開(kāi)展第四世代的ALV 凈化。

表6 C 雞種禽白血病凈化結(jié)果

3.5 禽白血病凈化對(duì)雞群生產(chǎn)性能的影響

B 雞種禽白血病凈化組與非凈化組種雞群產(chǎn)蛋性能及孵化性能比較結(jié)果顯示[9]，凈化組母雞50 周齡末存活率高5.43%，產(chǎn)蛋總數(shù)高17285個(gè)；平均入舍母雞產(chǎn)蛋數(shù)高9.74（個(gè)/只)，種蛋受精率高0.7%。禽白血病凈化組與非凈化組后代商品雞群成活率結(jié)果顯示，與非凈化組相比，凈化組100 日齡商品雞成活率高2.06%，后代母雞平均體重高4.33%，后代公雞平均體重高1.95%。

4 制定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范與主推技術(shù)

2021 年由江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所起草制定，并由江西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布了《種雞禽白血病凈化技術(shù)規(guī)范》（DB36/T1453—2021)；江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所主持的《禽白血病凈化技術(shù)》 作為2023 年江西省農(nóng)業(yè)主推技術(shù)，并由江西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳頒布實(shí)施（贛農(nóng)廳辦函〔2023〕 3 號(hào))。

5 小結(jié)

近年來(lái)，國(guó)家越來(lái)越重視禽白血病的防控工作，相繼出臺(tái)了“國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)范（2012—2020 年)”“全國(guó)肉雞遺傳改良計(jì)劃（2021—2035)”以及 “全國(guó)蛋雞遺傳改良計(jì)劃（2021—2035)”等計(jì)劃，均對(duì)禽白血病提出了凈化要求。我國(guó)地方固有品種雞群的禽白血病凈化工作已呈分化趨勢(shì)，江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所高度重視禽白血病的流行，率先對(duì)江西地方雞進(jìn)行禽白血病分子流行病學(xué)調(diào)查及凈化技術(shù)研究。2016—2023 年共采集臨床樣本74224 份，其中2016—2018 年江西地方雞禽白血病分子流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，江西省的8 個(gè)地方雞群中出現(xiàn)了復(fù)雜的ALV-J 感染現(xiàn)象，導(dǎo)致了嚴(yán)重的禽白血病癥狀和死亡率的增加，不同分離株的來(lái)源處于ALV 不同進(jìn)化分支；2021—2023 年江西地方雞ALV 分子流行病學(xué)結(jié)果顯示，ALV-J 陽(yáng)性率及其在分離株的占比逐年下降，致病性較弱的K 亞群毒株在分離株中占比逐年遞增，尤其是在進(jìn)行ALV 凈化的雞場(chǎng)中，ALV-J 陽(yáng)性率明顯下降，表明禽白血病凈化對(duì)控制ALV 的流行有重要意義。ALV 不同亞群混合感染現(xiàn)象普遍，不同亞群ALV 產(chǎn)生的重組病毒等問(wèn)題將阻礙著ALV 凈化的進(jìn)程，迫切需要對(duì)江西地方雞禽白血病凈化。江西3 個(gè)地方品種雞凈化結(jié)果表明，禽白血病凈化效果顯著，無(wú)論是胎糞、蛋清還是血漿蛋白分離，ALV 陽(yáng)性率均出現(xiàn)不同程度的下降。凈化效果分析顯示禽白血病凈化組種雞群產(chǎn)蛋性能、孵化性能及商品雞群成活率均高于非凈化組，禽白血病凈化對(duì)雞場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益提升有重要作用。

6 對(duì)策與建議

禽白血病凈化工作是一項(xiàng)復(fù)雜而漫長(zhǎng)的過(guò)程，國(guó)家提出剔除計(jì)劃后，自2013 年后，我國(guó)較少出現(xiàn)髓細(xì)胞組織增生癥或ALV-J 的報(bào)道。但在2018 年2 月，我國(guó)的六個(gè)省幾乎同時(shí)暴發(fā)了該病[10]。禽白血病存在間歇排毒現(xiàn)象，一般需經(jīng)過(guò)3～5 個(gè)世代才能達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明ALV的凈化不易。

為有效防控禽白血病，應(yīng)根據(jù)ALV 流行特點(diǎn)進(jìn)行科學(xué)防控。ALV 的傳播方式以垂直傳播為主，垂直傳播性疾病在不同代次間有連鎖放大的效應(yīng)，切斷ALV 的垂直傳播是迅速控制該病傳播的主要措施。商品蛋雞場(chǎng)應(yīng)從ALV 陰性種雞場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)雞苗，對(duì)祖代和父母代雞群實(shí)施嚴(yán)格的ALV 凈化措施。

種雞群的凈化過(guò)程中首先應(yīng)掌握實(shí)施凈化雞群的ALV 感染狀態(tài)和排毒規(guī)律，根據(jù)ALV 排毒規(guī)律制定科學(xué)可行的凈化淘汰程序。對(duì)于已經(jīng)實(shí)現(xiàn)核心群凈化的禽白血病凈化示范場(chǎng)，除了對(duì)若干個(gè)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)進(jìn)行適當(dāng)比抽檢外，還要做好疫苗外源病毒檢測(cè)、種源引進(jìn)、以及父母代、商品代雞苗跟蹤監(jiān)測(cè)等，以確保核心雞群ALV 陰性狀態(tài)。

外源性ALV 還經(jīng)多種途徑發(fā)生水平傳播，生物安全防控至關(guān)重要，強(qiáng)化生物安全屏障，抓好日常消毒管理，內(nèi)部建立生物安全體系，嚴(yán)格流程，防止病毒水平傳播。另外，禽白血病的定期監(jiān)測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查工作對(duì)ALV 凈化亦至關(guān)重要，掌握禽白血病在群間、空間和時(shí)間上的分布狀況，研究禽白血病的發(fā)展趨勢(shì)，分析禽白血病傳播的風(fēng)險(xiǎn)因素，為種雞場(chǎng)開(kāi)展ALV 的防控和凈化提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支持。