楊曉樨 趙營(yíng)營(yíng) 馬吉芳 于政

1遼陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧遼陽(yáng) 111000；2陸軍第79集團(tuán)軍醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧盤(pán)錦 111000

近年來(lái)，隨著“三孩”政策的實(shí)施，高齡孕婦數(shù)量不斷增加，加上環(huán)境污染、飲食、生活習(xí)慣等因素的影響，新生兒出生缺陷的種類(lèi)逐漸增多，且發(fā)生率不斷上升，給家庭及社會(huì)帶來(lái)了巨大的負(fù)擔(dān)[1-2]。因此，對(duì)具有高危因素的胎兒進(jìn)行產(chǎn)前篩查，及時(shí)發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重致殘、致死性疾病，適時(shí)終止妊娠對(duì)確保孕婦及胎兒安全，降低新生兒出生缺陷發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，減輕家庭及社會(huì)負(fù)擔(dān)具有重要意義。傳統(tǒng)有創(chuàng)產(chǎn)前診斷可通過(guò)羊水、臍帶血穿刺、絨毛活檢等侵入性方法獲取胎兒遺傳物質(zhì)進(jìn)行遺傳分析，雖有較高的準(zhǔn)確度，但這些手段均會(huì)對(duì)孕婦與胎兒產(chǎn)生一定損傷，增加感染、胎兒流產(chǎn)、早產(chǎn)等不良事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[3-5]。在此背景下，無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷逐漸成為國(guó)內(nèi)外各研究團(tuán)隊(duì)的研究熱點(diǎn)。胎兒有核紅細(xì)胞（fetal nucleated red blood cells，F(xiàn)NRBC）被認(rèn)為是用于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)的最佳胎源性細(xì)胞，含有胎兒全部的基因組，可自孕婦孕早期至分娩前持續(xù)穩(wěn)定地存在于母體外周血中，且生命周期較短，不易受既往妊娠的影響，能較好地診斷出胎兒患病及缺陷情況，且不會(huì)對(duì)母體及胎兒產(chǎn)生創(chuàng)傷，具有較高安全性[6-7]。另外，與目前廣泛應(yīng)用的胎兒游離DNA檢測(cè)相比，F(xiàn)NRBC適用于所有循環(huán)DNA可診斷的疾病、基因組序列突變導(dǎo)致的遺傳疾病及線(xiàn)粒體相關(guān)的遺傳性疾病，且不易受母體遺傳背景的干擾及限制性胎盤(pán)嵌合體的影響，可診斷的疾病范圍更廣，且可提高產(chǎn)前診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，具有廣闊的應(yīng)用前景。但母體外周血中的FNRBC數(shù)量極少，必須對(duì)其進(jìn)行良好的分離富集，獲得足夠數(shù)量的FNRBC才能用于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷[8]。目前，F(xiàn)NRBC富集方法較多，包括硅芯片納米微流體技術(shù)、磁激活細(xì)胞分選法等，但臨床對(duì)于FNRBC的最佳富集手段尚無(wú)確切定論。因此，本研究分析硅芯片納米微流體技術(shù)與磁激活細(xì)胞分選法對(duì)FNRBC的富集效果，為臨床優(yōu)化FNRBC富集方案提供參考。

材料與方法

1 研究對(duì)象

選取2020年1月—2022年12月擬于醫(yī)院進(jìn)行產(chǎn)前篩查的112例孕婦為研究對(duì)象，年齡20～45歲，平均（35.29±4.12）歲；孕周12～22周，平均（16.52±2.29）周；孕次1～6次，平均（3.13±1.48）次；產(chǎn)次0～2次，平均（1.19±0.73）次。納入標(biāo)準(zhǔn)：①單胎妊娠，均于本院建檔；②具有高齡或超聲軟指標(biāo)2個(gè)及以上異常、既往存在不良孕產(chǎn)史等胎兒染色體異常危險(xiǎn)因素或妊娠期高血壓、胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)受限等可能引起胎盤(pán)源性疾病危險(xiǎn)因素；③孕周＜23周，且胎母輸血量＜0.5 mL；④孕婦及家屬均知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有惡性腫瘤；②近3個(gè)月內(nèi)存在輸血史或免疫治療史；③入組前已進(jìn)行過(guò)無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢查或羊水穿刺；④伴有白血病、嚴(yán)重缺鐵性貧血等血液系統(tǒng)疾病。本研究符合《赫爾辛基醫(yī)學(xué)研究宣言》中相關(guān)內(nèi)容，并通過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（倫審批號(hào)：2019041）。

2 實(shí)驗(yàn)材料及儀器

納米硅芯片（蘇州汶顥微流控技術(shù)股份有限公司）、一次性采血針（山東朱氏藥業(yè)集團(tuán)有限公司）、抗凝管（烏魯木齊福新醫(yī)療器械有限公司）、恒溫箱（山東博科科學(xué)儀器有限公司）、培養(yǎng)基（杭州創(chuàng)新生物檢控技術(shù)有限公司）、離心機(jī)（西安銘朗醫(yī)療設(shè)備有限公司）、磁激活細(xì)胞分選器（德國(guó)美天旎生物技術(shù)有限公司）、CD71陽(yáng)性免疫磁珠（德國(guó)美天旎生物技術(shù)有限公司）。

3 樣本采集

所有孕婦采血前脈搏、體溫等均在正常范圍內(nèi)。孕婦取坐位，選擇上肢合適靜脈位置作為穿刺點(diǎn)，對(duì)穿刺點(diǎn)進(jìn)行常規(guī)皮膚消毒后，通過(guò)一次性采血針進(jìn)行穿刺，分別采集外周肘靜脈血10 mL于抗凝管中；采血完畢后輕輕上下顛倒采血管5～10次，確保血液與抗凝劑充分混勻后置于4 ℃冰箱保存，并在4 h內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，分別通過(guò)硅芯片納米微流體技術(shù)與磁激活細(xì)胞分選法對(duì)FNRBC進(jìn)行富集。采血過(guò)程中相關(guān)人員均全程進(jìn)行無(wú)菌操作。

4 FNRBC富集

4.1 硅芯片納米微流體技術(shù)

取備用抗凝血3 mL放置于離心管中，將與CD71抗體偶聯(lián)的多功能磁性上轉(zhuǎn)換納米材料懸浮液（200 μg/mL）置于其中，放置于37℃的恒溫箱中進(jìn)行血液中FNRBC的第一階段的捕獲，捕獲時(shí)間1 h，此時(shí)納米材料會(huì)捕獲到FNRBC及殘存的非FNRBC，離心（離心時(shí)間5 min，離心速率800 r/min）去除未結(jié)合的納米復(fù)合材料，并將所得細(xì)胞沉淀重新分散于2 mL磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）中，將此細(xì)胞懸液裝載于注射泵中，以恒定流速（1 mL/h）通過(guò)納米硅芯片，并同時(shí)在芯片底部加上恒定磁場(chǎng)（3 800高斯），使FNRBC被牢牢捕獲于腔室底部。再將捕獲到的FNRBC通過(guò)洗脫的方法自納米硅芯片上脫離下來(lái)，置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)，而后將培養(yǎng)基（dulbecco's modified eagle medium，DMEM）細(xì)胞懸液移入FNRBC培養(yǎng)皿中，并將培養(yǎng)皿放置于含有5%二氧化碳的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行免疫黏附2 h，取出培養(yǎng)皿上下緩慢搖勻，室溫下進(jìn)行離心（離心時(shí)間5 min，離心速率800 r/min），去除上清液后收集細(xì)胞沉淀，并加入1 mL的DMEM細(xì)胞液重新懸浮細(xì)胞沉淀，輕輕吹打混勻后備用。

4.2 磁激活細(xì)胞分選法

①密度梯度離心：取孕婦備用抗凝血3 mL，用1×PBS進(jìn)行1∶1稀釋?zhuān)p輕吹打混勻后待用；準(zhǔn)備1個(gè)新的15 mL離心管，取密度梯度離心液，用巴氏滴管在新的離心管中加入3 mL密度梯度離心液，將稀釋后的6 mL血液標(biāo)本緩慢置于密度梯度離心液上方（注意操作過(guò)程中血液標(biāo)本與離心液應(yīng)有明顯界限，盡可能避免血液標(biāo)本與密度梯度離心液混勻重疊），將離心管置于離心機(jī)內(nèi)，于22℃溫度下進(jìn)行離心（離心時(shí)間30 min，離心速率1 500 r/min）操作。離心結(jié)束后，離心液與血液自上而下分別為紅細(xì)胞與粒細(xì)胞混合層，密度梯度離心液、單個(gè)核細(xì)胞層及血漿層等，用巴氏滴管小心吸出單個(gè)核細(xì)胞層及其上下各約10 mm高度離心液置于新的15 mL離心管中；于離心管中加入PBS/0.1%牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）溶液至離心管口，旋緊離心管蓋，輕輕顛倒混勻后進(jìn)行2次洗滌離心（離心時(shí)間5 min，離心速率1 500 r/min），收集離心后的細(xì)胞沉淀置于新的離心管中；于細(xì)胞沉淀中加入PBS/0.1% BSA溶液共5 mL重新懸浮細(xì)胞，輕輕吹打混勻備用。②磁激活細(xì)胞分選：于備用的懸浮細(xì)胞中加入40 μL CD71陽(yáng)性免疫磁珠，混勻后于4 ℃溫度下避光孵育15～30 min。組裝mini-磁激活細(xì)胞分選系統(tǒng)，以500 μL的PBS/0.1% BSA溶液潤(rùn)洗磁激活細(xì)胞分選系統(tǒng)篩選柱，待留空后，將篩選的細(xì)胞上柱，并在篩選柱中加入1 μL的PBS/0.1% BSA溶液，拿離磁場(chǎng)，沖洗入試管內(nèi)，標(biāo)記為陽(yáng)性細(xì)胞。PBS/0.1% BSA溶液對(duì)細(xì)胞沉淀洗滌離心（離心時(shí)間5 min，離心速率1 500 r/min）2次后收集細(xì)胞沉淀（即為富集的FNRBC），并加入1 mL PBS/0.1% BSA溶液重新懸浮細(xì)胞沉淀，輕輕吹打混勻備用。

5 質(zhì)量控制

所有研究人員均經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)化培訓(xùn)，熟練掌握硅芯片納米微流體技術(shù)、磁激活細(xì)胞分選法的原理、具體操作方法等內(nèi)容，并在考核合格后參與到研究工作中。且FNRBC的分離與富集均符合《全血與成分血質(zhì)量要求》[9]的要求，制備過(guò)程均在實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作間實(shí)施，并嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作規(guī)范（如操作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿戴無(wú)菌服、鞋套、帽子、口罩、手套，并進(jìn)行全身消毒，不隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室、避免操作臺(tái)上放置與試驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品、FNRBC富集操作開(kāi)始前使用紫外線(xiàn)燈照射無(wú)菌操作臺(tái)30～60 min滅菌等）。以上處理的血樣均2 000 r/min離心20 min，分別小心吸取白膜狀的單個(gè)核細(xì)胞層以及下層，共16個(gè)樣本，收集入不同離心管內(nèi)，分別加入氯化銨溶血溶液至10 mL，與細(xì)胞懸液混合，使紅細(xì)胞溶解，用吸管將混合細(xì)胞溶液吹打2 min，然后靜置10 min，1 000 r/min離心l0 min。傾去上清液，用PBS液重復(fù)洗滌1次，800 r/min離心8 min。溶紅細(xì)胞后的細(xì)胞沉淀均用l mL PBS液混懸，移入離心管中，計(jì)數(shù)收集細(xì)胞量(流式分析需106個(gè)細(xì)胞)后800 r/min離心5 min，獲得所需的細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀用200 mL PBS液混懸，加入FITC標(biāo)記的抗CD7l抗體3 mL和用PE標(biāo)記的抗GPA抗體3 mL，避光37℃孵育30 min，1 mL PBS液洗滌細(xì)胞兩次。采用FAc.Sort型流式細(xì)胞儀(BD公司)檢測(cè)，每份標(biāo)本分析檢測(cè)5 000～l0 000個(gè)細(xì)胞。先以未加抗體的裸細(xì)胞調(diào)零，設(shè)定電壓，再行待測(cè)標(biāo)本測(cè)試。

6 評(píng)價(jià)指標(biāo)

6.1 形態(tài)學(xué)觀(guān)察

觀(guān)察兩種方法所獲得的富集FNRBC染色情況。分別將富集前的備用血液樣本及兩種方法富集所獲得的細(xì)胞懸液各100 μL滴于載玻片上，自然干燥1 h后用80%乙醇固定、水洗、室溫晾干，然后放置于37℃的酸性緩沖液中保溫10 min，再次水洗、室溫晾干；使用蘇木素染液中染白細(xì)胞，45 s后用流水沖洗2 min，再用伊紅染液中染1 min，流水沖洗3 min，晾干后置于顯微鏡下觀(guān)察富集前及不同方法富集后FNRBC形態(tài)。

6.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)

比較兩種FNRBC富集方法所獲得的總細(xì)胞量、FNRBC量及FNRBC比例。具體操作方法為：將兩種方法富集所獲得的晾干后的細(xì)胞懸液載玻片放置于顯微鏡下觀(guān)察，計(jì)數(shù)總細(xì)胞量及FNRBC量。FNRBC比例為染色后計(jì)數(shù)2 000個(gè)總的細(xì)胞中所含的陽(yáng)性FNRBC細(xì)胞數(shù)。

6.3 FNRBC富集時(shí)間

記錄兩組FNRBC富集所需時(shí)間。

6.4 無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果

取兩種方法所獲得的細(xì)胞懸液各10 μL，采用全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)儀進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，記錄兩組細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性發(fā)生情況。

7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS25.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布以表示，組間比較用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用n和%表示，采用χ2檢驗(yàn)，若期望值＜5，行Fisher確切概率法檢驗(yàn)；雙側(cè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

結(jié) 果

1 形態(tài)學(xué)

富集前，顯微鏡下可見(jiàn)FNRBC呈圓形或橢圓形，核圓形深染，胞質(zhì)紅色深染，并可見(jiàn)大量散在的混雜細(xì)胞；磁激活細(xì)胞分選法富集后可見(jiàn)混雜細(xì)胞有所減少，但仍有一定混雜細(xì)胞總量，F(xiàn)NRBC散在其中；硅芯片納米微流體技術(shù)富集后可見(jiàn)視野中未見(jiàn)明顯的混雜細(xì)胞殘留，能明顯見(jiàn)到FNRBC，且FNRBC比例有所上升。見(jiàn)圖1。

圖1 外周血FNRBC富集前、后蘇木素-伊紅染色結(jié)果（×400）

2 細(xì)胞計(jì)數(shù)

硅芯片納米微流體技術(shù)進(jìn)行FNRBC富集時(shí)所得的總細(xì)胞量較磁激活細(xì)胞分選法少，F(xiàn)NRBC量較磁激活細(xì)胞分選法多，F(xiàn)NRBC比例較磁激活細(xì)胞分選法高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩種方案的細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果對(duì)比（）

表1 兩種方案的細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果對(duì)比（）

方案例數(shù)總細(xì)胞量（×107個(gè)/mL）FNRBC量（個(gè)/mL）FNRBC比例(×10-4)硅芯片納米微流體技術(shù)1120.99±0.2937.52±4.040.20±0.05磁激活細(xì)胞分選法1121.99±0.2118.23±2.180.10±0.05 t 29.92845.65013.565 P＜0.001＜0.001＜0.001

3 FNRBC富集時(shí)間及無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果

硅芯片納米微流體技術(shù)對(duì)FNRBC的富集時(shí)間長(zhǎng)于磁激活細(xì)胞分選法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩種方案的無(wú)菌試驗(yàn)陽(yáng)性發(fā)生率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩種方案FNRBC富集時(shí)間及無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比

討 論

近年來(lái)，伴隨著人口結(jié)構(gòu)及疾病模式的轉(zhuǎn)變，新生兒出生缺陷問(wèn)題日益突出，已成為中國(guó)新生兒病死、兒童與成人殘疾的主要原因之一[9-10]。產(chǎn)前診斷能夠在孕婦妊娠期間對(duì)胚胎或胎兒先天畸形或遺傳病等出生缺陷情況做出準(zhǔn)確診斷，以便臨床制定針對(duì)性預(yù)防措施，是降低新生兒出生缺陷的重要手段，也是優(yōu)生優(yōu)育的重要保障，其中無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷因其操作簡(jiǎn)單、安全可靠、篩查時(shí)間更早等優(yōu)勢(shì)應(yīng)用較多[11-13]。目前，較多臨床研究已經(jīng)證實(shí)FNRBC不易受母體遺傳背景的干擾及限制性胎盤(pán)嵌合體的影響，能準(zhǔn)確反映胎兒各類(lèi)遺傳性疾病及生長(zhǎng)缺陷情況，是用于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷的最理想的靶細(xì)胞[14-16]。但有研究指出，通過(guò)FNRBC進(jìn)行無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷時(shí)確保診斷結(jié)果準(zhǔn)確的重要前提條件是足夠數(shù)量的FNRBC[17]。因此，對(duì)孕婦外周血中FNRBC進(jìn)行有效的分離、富集與純化顯得尤為必要。

硅芯片納米微流體技術(shù)是在納米電子微流硅芯片及微流體的作用下，將細(xì)胞依次濾過(guò)微通道，根據(jù)不同分選原理選擇性捕獲目標(biāo)細(xì)胞的手段[18]。磁激活細(xì)胞分選法是將磁珠與單克隆抗體相結(jié)合后對(duì)細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的相對(duì)特異性抗原進(jìn)行識(shí)別，并在外界磁場(chǎng)作用下將血液中帶磁與不帶磁的細(xì)胞分開(kāi)，從而捕獲目標(biāo)細(xì)胞的手段[19]。上述兩種方法在血液細(xì)胞捕獲中均有較多應(yīng)用，且具有較好的捕獲效果。但目前較少有關(guān)于二者對(duì)孕婦外周血中FNRBC富集效果比較的相關(guān)研究報(bào)道。

本研究將硅芯片納米微流體技術(shù)與磁激活細(xì)胞分選法分別用于FNRBC的富集中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與磁激活細(xì)胞分選法相比，硅芯片納米微流體技術(shù)去除混雜細(xì)胞的能力更強(qiáng)，且獲得的FNRBC數(shù)量更多，對(duì)FNRBC的富集效果更好。分析原因在于，磁激活細(xì)胞分選法中首先通過(guò)密度梯度離心法對(duì)血液樣本中的各成分細(xì)胞進(jìn)行初步分離，通過(guò)分層液將FNRBC分開(kāi)并收集，然后使用結(jié)合磁性顆粒的單克隆抗體CD71標(biāo)記細(xì)胞，在外加磁場(chǎng)作用下將FNRBC進(jìn)一步分離純化，從而對(duì)FNRBC進(jìn)行富集[20]。但文獻(xiàn)報(bào)道，磁珠的大小對(duì)FNRBC的富集會(huì)產(chǎn)生一定影響。常規(guī)情況下所使用的磁珠粒徑較大，比表面積較小，偶聯(lián)容量較低，在富集FNRBC時(shí)對(duì)其的吸附能力較差，且多次離心操作存在引起細(xì)胞丟失或被破壞的風(fēng)險(xiǎn)，因此對(duì)FNRBC的富集數(shù)量較少[21]。且CHEN Y等[22]報(bào)道，磁激活細(xì)胞分選法難以徹底分離混雜細(xì)胞，所獲得的總細(xì)胞量較多，但獲得的FNRBC數(shù)量及純度與其他方法相比均較低，本研究結(jié)果也與之相似。而硅芯片納米微流體技術(shù)使用納米硅芯片對(duì)FNRBC進(jìn)行富集，結(jié)合特異性抗體修飾的納米芯片直徑較小，比表面積較大，對(duì)FNRBC的吸附能力與捕獲效率相對(duì)較高，因此得到的FNRBC數(shù)量較多，對(duì)FNRBC的富集效果較好[23]。其次，納米硅芯片上微流體通道的幾何形狀與目標(biāo)FNRBC的大小與形狀高度匹配，能夠精準(zhǔn)控制細(xì)胞流體，去除其他混雜細(xì)胞，減少捕獲的總細(xì)胞量，提高獲得的FNRBC比例[24]。周俊等[25]研究也指出，硅芯片納米微流體技術(shù)兩次捕獲的FNRBC數(shù)量分別為（20.6±6.1）、（20.4±5.8）個(gè)/mL，明顯高于既往其他方法所捕獲的FNRBC數(shù)量，且相較于其他方法，硅芯片納米微流體技術(shù)對(duì)FNRBC的富集效果更好，本研究結(jié)果也與上述研究結(jié)果相似。另外，謝建生等[26]發(fā)現(xiàn)，只要能夠富集20個(gè)/mL及以上的FNRBC，通過(guò)巢式變異的聚合酶鏈反應(yīng)基本能夠得到擴(kuò)增產(chǎn)物，滿(mǎn)足后續(xù)產(chǎn)前診斷要求。而本研究中硅芯片納米微流體技術(shù)兩次捕獲的FNRBC總量（37.52±4.04）個(gè)/mL雖略低于周俊等研究中兩次捕獲的FNRBC總量，但與HUANG等[27]研究中37.7個(gè)/mL的FNRBC數(shù)量相似，滿(mǎn)足產(chǎn)前診斷所需FNRBC數(shù)量，而磁激活細(xì)胞分選法所富集的FNRBC總量（18.23±2.18）個(gè)/mL略低于20個(gè)/mL，可能會(huì)影響產(chǎn)前診斷準(zhǔn)確性。由此可以看出，本研究中采用的硅芯片納米微流體技術(shù)所富集的FNRBC數(shù)量對(duì)臨床準(zhǔn)確進(jìn)行產(chǎn)前診斷更有價(jià)值。

本研究還發(fā)現(xiàn)，硅芯片納米微流體技術(shù)對(duì)FNRBC的富集時(shí)間長(zhǎng)于磁激活細(xì)胞分選法，兩種方案的無(wú)菌試驗(yàn)陽(yáng)性發(fā)生率無(wú)明顯差異，提示兩種方法富集FNRBC時(shí)均有較高的安全性，但與磁激活細(xì)胞分選法相比，硅芯片納米微流體技術(shù)富集FNRBC的耗時(shí)較長(zhǎng)。分析原因可能為，兩種方法均全程在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行操作，且對(duì)操作人員的要求較高，因此獲得的FNRBC受污染的風(fēng)險(xiǎn)較小。在FNRBC富集過(guò)程中，硅芯片納米微流體技術(shù)需對(duì)FNRBC進(jìn)行兩次捕獲，且捕獲后的FNRBC還需在培養(yǎng)基中通過(guò)免疫黏附法進(jìn)行進(jìn)一步純化，因此耗時(shí)較長(zhǎng)。而磁激活細(xì)胞分選法對(duì)血液樣本的離心時(shí)間及使用免疫磁珠吸附的時(shí)間均較短，收集的FNRBC沉淀僅需再次短時(shí)間離心進(jìn)行純化，因此總體耗時(shí)相對(duì)較短。

磁激活細(xì)胞分選法、硅芯片納米微流體技術(shù)均是目前主要研究的FNRBC富集技術(shù)，前者在分選過(guò)程中存在的非特異性吸附會(huì)直接導(dǎo)致FNRBC的損失，且難以同時(shí)分選多個(gè)抗原標(biāo)記的多種細(xì)胞群，應(yīng)用相對(duì)局限。本研究結(jié)果證實(shí)，相較于磁激活細(xì)胞分選法，硅芯片納米微流體技術(shù)或許更具研究?jī)r(jià)值，但值得注意的是，硅芯片納米微流體技術(shù)儀器設(shè)備昂貴、技術(shù)復(fù)雜，對(duì)技術(shù)人員操作的要求較高，且檢查費(fèi)用較高，應(yīng)用也有局限。但對(duì)于胎母輸血量較小的孕婦來(lái)說(shuō)，常規(guī)分離與富集技術(shù)無(wú)法富集足量FNRBC，而硅芯片納米微流體技術(shù)可富集更多的FNRBC以滿(mǎn)足后續(xù)產(chǎn)前診斷要求，增加產(chǎn)前診斷準(zhǔn)確性。

綜上所述，硅芯片納米微流體技術(shù)與磁激活細(xì)胞分選法進(jìn)行FNRBC富集所得樣本受污染風(fēng)險(xiǎn)均較低，與磁激活細(xì)胞分選法相比，硅芯片納米微流體技術(shù)去除混雜細(xì)胞的能力較強(qiáng)，且獲得的FNRBC數(shù)量較多，對(duì)FNRBC的富集效果較好，但所需時(shí)間較長(zhǎng)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突