劉璐佳 楊陽 景偉超 王有鵬

全球哮喘倡議報(bào)告將支氣管哮喘(簡稱“哮喘”)描述為一種通常以慢性氣道炎癥為特征的異質(zhì)性疾病[1]。本病臨床以反復(fù)發(fā)作的呼吸困難、喘息、胸悶和咳嗽等呼吸道癥狀為主癥[2]。據(jù)估計(jì),全世界高達(dá)14%的兒童和8.6%的成年人患病[3]。目前,哮喘管理的長期目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)癥狀控制、保護(hù)肺功能、降低惡化和死亡的風(fēng)險(xiǎn),以及盡量減少與藥物相關(guān)的副作用[4],尤其在新型冠狀病毒大流行的背景下,哮喘患者必須在良好控制臨床癥狀的情況下繼續(xù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)闹委焄5]。因此,對于闡明哮喘發(fā)病機(jī)制,探尋有效防治藥物是當(dāng)前研究的重點(diǎn)。

人體腸道菌群是一個(gè)復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng),涉及宿主的新陳代謝、免疫和健康。值得注意的是,新的證據(jù)支持肺部疾病通常伴有腸道菌群失調(diào)和免疫炎癥反應(yīng),腸道菌群及其代謝產(chǎn)物直接或間接參與肺病宿主的免疫調(diào)節(jié),形成“肺—腸”軸[6]。已有研究表明,腸道菌群失調(diào)是導(dǎo)致哮喘和其他呼吸系統(tǒng)疾病的重要因素之一[7-8]。這和中醫(yī)學(xué)上的“肺與大腸相表里”“肺腸相關(guān)”理論不謀而合。基于此,筆者所在研究團(tuán)隊(duì)首次將分消走泄法引入哮喘的治療當(dāng)中,創(chuàng)立了臨床有效方劑白果溫膽湯治療哮喘,并于2022年被授予國家發(fā)明專利(專利號:ZL202111491708.8)。白果溫膽湯以調(diào)和為主,分消上下之勢,達(dá)通利三焦、理氣化痰、止咳平喘之效。然目前尚缺乏白果溫膽湯干預(yù)哮喘作用機(jī)制的文獻(xiàn)報(bào)道,為此本文通過對哮喘模型大鼠肺組織病理形態(tài)、糞便腸道菌群進(jìn)行檢測,探討白果溫膽湯的作用機(jī)制,為后續(xù)進(jìn)一步研究白果溫膽湯提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

72只SPF級雄性SD大鼠體質(zhì)量(180±20)g,由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供,動(dòng)物許可證號:SCXK(遼)2020-0001。飼養(yǎng)環(huán)境安靜,光/暗循環(huán)12小時(shí),室內(nèi)溫度(25±1)℃,室內(nèi)濕度45%～55%,自由獲取食物和水。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

白果溫膽湯:陳皮18 g、清半夏12 g、茯苓18 g、炒枳實(shí)12 g、竹茹12 g、白果12 g、炒葶藶子12 g、射干18 g、浙貝母18 g、炒紫蘇子18 g、蜜枇杷葉18 g、浮萍24 g、生甘草12 g,煎煮過濾后,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮成藥物濃度5 g/mL,置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

地塞米松片:天津天藥藥業(yè)股份有限公司,國藥準(zhǔn)字:H12020686。

1.3 實(shí)驗(yàn)主要試劑和儀器

OVA(貨號:#A8040,北京索萊寶科技有限公司)、氫氧化鋁凝膠(貨號:S30353,上海源葉生物科技有限公司)、蘇木精染料(貨號:#G3720,北京索萊寶科技有限公司)、伊紅(貨號:15086-94-9,山東西亞化工科技有限公司)、4%多聚甲醛(貨號:BL539A,廣州碩譜生物科技有限公司)、磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline,PBS)(貨號:BL302A,廣州碩譜生物科技有限公司)、RNA 6000 Nano kit(貨號:5067-1511,Agilent)、Agilent High Sensitivity DNA Kit(貨號:5067-4626,Agilent)、Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit(貨號:P7589,Invitrogen)、Q5?High-Fidelity DNA Polymerase(貨號:M0491L,NEB)、AxyPrep DNAGel Extraction Kit(貨號:AP-GX-250,Axygen)。

超聲霧化器(型號:402AI,上海魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司)、紫外分光光度計(jì)(型號:NANO 2000,Thermo)、TBS380 熒光計(jì)(型號:E6090,Promega)、電泳儀(型號:DYY-7C,北京六一生物科技有限公司)、PCR擴(kuò)增儀(型號:2720,ABI)、2100生物分析儀(型號:2100Bioanalyzer,Agilent)、自制霧化箱。

1.4 分組與造模

將72只雄性SD大鼠隨機(jī)分為六組:空白組、模型組、地塞米松組及白果溫膽湯高、中、低劑量組,每組12只,適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后開始實(shí)驗(yàn)。根據(jù)參考文獻(xiàn)制備動(dòng)物模型,包括致敏和激發(fā)兩個(gè)階段[9-10]。致敏階段:模型組和各給藥組大鼠第1天和第8天分別腹腔內(nèi)注射1 mL抗原混懸液(10%卵清蛋白和10%氫氧化鋁混合液),空白組給予等量生理鹽水替代。激發(fā)階段:第15天起,將模型組和各給藥組大鼠逐一置于自制霧化箱內(nèi),給予2%卵清蛋白霧化進(jìn)行激發(fā),空白組給予生理鹽水霧化吸入,每天一次,共14天。

1.5 藥物干預(yù)

從實(shí)驗(yàn)的第15天起,各組于霧化前半小時(shí)進(jìn)行藥物灌胃?？瞻捉M與模型組分別給予生理鹽水代替藥物灌胃,日1次,持續(xù)14天。地塞米松組給予0.5 mg/kg地塞米松灌胃,日1次,持續(xù)14天。白果溫膽湯高、中、低劑量組(臨床用量按動(dòng)物體表面積比值換算成等效劑量為18 g/kg,高劑量按人體等效劑量2倍,組間劑量比為2∶1),每次分別按36 g/kg、18 g/kg、9 g/kg的劑量給予灌胃給藥,給藥體積設(shè)為1 mL/100 g,日1次,持續(xù)14天。各組在灌胃半小時(shí)后開始并完成激發(fā)階段(具體方法參照制備動(dòng)物模型處)。

1.6 取材方法

取材前禁食12小時(shí),末次霧化結(jié)束24小時(shí)后,用10%水合氯醛3 mL/kg對大鼠進(jìn)行麻醉,將麻醉成功的大鼠仰臥位固定于操作臺(tái),剪毛,用手術(shù)剪沿腹中線向上逐層剪開腹腔、胸腔,取右肺中葉將其放入4%多聚甲醛固定液中,于室溫固定,備做蘇木精—伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE);在盲腸末端剪一個(gè)小口,把盲腸內(nèi)容物擠入滅菌的EP管中,立即用液氮速凍。

1.7 指標(biāo)檢測

1.7.1 行為學(xué)觀察 實(shí)驗(yàn)過程中觀察記錄各組大鼠的精神狀態(tài)、食量、飲水量、呼吸及毛發(fā)光澤等情況的變化。

1.7.2 肺組織病理學(xué)檢測 HE染色檢測各組大鼠肺組織病理改變:將多聚甲醛固定好的右肺中葉組織,依次完成包埋切片—切片脫蠟至水—蘇木精染色—鹽酸酒精分化—自來水返藍(lán)—伊紅染色—脫水、透明、封片后,利用光學(xué)顯微鏡鏡檢,采集并分析所得圖像。觀察各組大鼠肺組織HE染色病理改變結(jié)果。

1.7.3 16S核糖體DNA(16S ribo-somal DNA,16S rDNA) Miseq高通量測序觀察腸道菌群情況,觀察治療后各組大鼠腸道菌群的多樣性和各菌群的豐度。即從每組隨機(jī)選出5個(gè)樣本進(jìn)行糞便DNA的抽取,使用Agilent High Sensitivity DNA Kit遵循制造商的說明。使用紫外分光光度計(jì)和瓊脂糖凝膠電泳分別測量提取DNA的數(shù)量和質(zhì)量。使用正向引物338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′)和反向引物806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)對細(xì)菌16S rRNA基因V3～V4區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增子使用Vazyme V AHTSTM DNA Clean Beads進(jìn)行純化,并使用Quant-iT PicoGreen dsDNA檢測試劑盒進(jìn)行定量。將擴(kuò)增子等量合并,使用Illlumina MiSeq平臺(tái)和MiSeq Reagent Kit v3進(jìn)行雙端測序。

微生物組生物信息學(xué)使用QIIME2進(jìn)行,使用demux插件對原始序列數(shù)據(jù)進(jìn)行多路分解,使用cutadapt插件進(jìn)行引物切割。再使用DADA2插件對序列進(jìn)行質(zhì)量過濾、降噪、合并和去除嵌合體,獲得非單子擴(kuò)增子序列變體(amplicon sequence variant,ASV)。Classify-skleaen算法對ASV進(jìn)行物種注釋,再進(jìn)行Alpha多樣性分析和Beta多樣性分析。Alpha多樣性分析包括觀察各組大鼠腸道菌群豐度Chao1指數(shù)、Observed_species指數(shù)、基于進(jìn)化的多樣性Faith’s PD指數(shù)、均勻度Pielou_e指數(shù)、菌群多樣性Shannon指數(shù)等。Beta多樣性分析包括對各組大鼠腸道菌群進(jìn)行Anosim分析等。最后,利用平臺(tái)得到各組大鼠在科水平上的腸道菌群豐度,比較各組差異。

1.8 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)觀察結(jié)果

空白組:實(shí)驗(yàn)過程中大鼠均精神狀態(tài)良好,活動(dòng)自如,毛發(fā)光亮順滑,可正常進(jìn)食及飲水,呼吸如常。生理鹽水霧化吸入時(shí),觀察到有個(gè)別大鼠出現(xiàn)一過性呼吸急促,但很快緩解,后無其它異常反應(yīng)。

模型組:致敏后大鼠出現(xiàn)煩躁多動(dòng),呼吸加深加快,四肢及腹部偶見抽搐動(dòng)作。進(jìn)入激發(fā)階段,霧化時(shí)大鼠出現(xiàn)明顯的嗆咳、呼吸頻率加快、搔鼻抓臉、煩躁等表現(xiàn),隨著時(shí)間的延長,大鼠精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、咳嗽、搔鼻等表現(xiàn)漸重。

地塞米松組:致敏后及激發(fā)階段初期與模型組大鼠表現(xiàn)相似,但伴隨地塞米松發(fā)揮干預(yù)作用,大鼠咳嗽、搔鼻抓臉、煩躁等癥狀均有不同程度的改善,明顯輕于模型組。

白果溫膽湯高、中、低劑量組:致敏后及激發(fā)階段初期白果溫膽湯各組與模型組大鼠表現(xiàn)相似,但伴隨白果溫膽湯的干預(yù)作用,各組大鼠咳嗽、搔鼻抓臉、煩躁等癥狀均有不同程度的改善。低劑量組大鼠一般狀況優(yōu)于模型組;中劑量組大鼠一般狀況優(yōu)于白果溫膽湯低劑量組,與地塞米松組相似;高劑量組大鼠癥狀改善情況與中劑量組相似,且與地塞米松組相比,大鼠神態(tài)安靜,毛發(fā)更加滑順光亮。

2.2 肺組織HE染色結(jié)果

空白組:肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)較正常,肺間隔輕度增厚,可見少量炎性細(xì)胞。模型組:肺氣管上皮破損,肺間隔增厚,炎性細(xì)胞增多。各治療組與模型組比較,均有一定改善,表現(xiàn)為肺組織結(jié)構(gòu)清晰,肺間隔厚度降低,炎性細(xì)胞減少。結(jié)果見圖1。

圖1 肺組織HE染色鏡下觀察結(jié)果(×200)

2.3 菌群豐度情況

本實(shí)驗(yàn)共30個(gè)樣本,得到1990364條序列,各樣本平均讀長數(shù)目66345個(gè),序列長度分布范圍為50～433 bp。結(jié)果見圖2。獲得六組大鼠糞便樣本在不同分類水平的ASVs的數(shù)目,樣本中測得所有ASVs均可被識別,并在各分類等級均有體現(xiàn),分布也較為廣泛,采用韋恩圖分析各組間菌群運(yùn)算的分類單元數(shù)量及其種類交叉情況。結(jié)果見圖3。

圖2 序列長度分布

圖3 各組大鼠腸道菌群ASVs分布韋恩圖

2.4 Alpha多樣性分析

2.4.1 物種累計(jì)曲線 隨著樣本量的增加,曲線逐漸趨于平緩,表明測序深度已經(jīng)基本覆蓋到樣品中所有的物種,測序數(shù)據(jù)量合理,測序深度足夠大。結(jié)果見圖4。

圖4 物種累積曲線

2.4.2 菌群Alpha多樣性分析 各組大鼠腸道菌群的稀釋曲線均急劇上升后呈平緩趨勢,結(jié)果見圖5,表明測序深度可以覆蓋本樣本中的物種組成情況。

圖5 物種的稀疏曲線

與空白組比較,模型組大鼠腸道菌群豐度Chao1指數(shù)及Observed_species指數(shù)、基于進(jìn)化的多樣性Faith’s PD指數(shù)、均勻度Pielou_e指數(shù)、菌群多樣性Shannon指數(shù)均有下降趨勢,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);地塞米松組大鼠腸道菌群Chao1指數(shù)、Observed_species指數(shù)、Faith’s PD指數(shù)、Pielou_e指數(shù)、Shannon指數(shù)均有明顯下降,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠腸道微生物菌群豐富度和多樣性比較鼠只=5)

與模型組比較,地塞米松組大鼠腸道菌群Chao1指數(shù)、Pielou_e指數(shù)、Shannon指數(shù)均有明顯下降,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);白果溫膽湯低劑量組Faith’s PD指數(shù)有明顯下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),白果溫膽湯各劑量組其余指數(shù)隨濃度升高逐漸增高,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

與地塞米松組比較,白果溫膽湯低、中劑量組Pielou_e指數(shù)、Shannon指數(shù)均有明顯上升,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),白果溫膽湯高劑量組Chao1指數(shù)、Observed_species指數(shù)、Faith’s PD指數(shù)、Shannon指數(shù)均有明顯上升,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

與白果溫膽湯低劑量比較,白果溫膽湯高劑量組Faith’s PD指數(shù)有明顯上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.5 菌群Beta多樣性分析

對六組大鼠腸道菌群進(jìn)行Anosim分析,獲得圖6和表2,其中統(tǒng)計(jì)量R大于0時(shí)表示組間差異大于組內(nèi)差異?？梢钥闯龀坠麥啬憸袆┝拷M與白果溫膽湯高劑量組兩組組間差異小于組內(nèi)差異,其余各組兩兩比較均組間差異大于組內(nèi)差異;其中空白組與模型組、空白組與地塞米松組、模型組與各治療組、地塞米松組與白果溫膽湯各劑量組、白果溫膽湯低劑量組與白果溫膽湯中、高劑量組之間均具有差異性(P<0.05)。

表2 大鼠糞便樣本的組間差異中的R值(Anosim分析)

注:A空白組;B模型組;C地塞米松組;D白果溫膽湯低劑量組;E白果溫膽湯中劑量組;F白果溫膽湯高劑量組。

2.6 物種組成分析結(jié)果

在科水平如圖7所示:與空白組比較,模型組乳桿菌科(Lactobacillaceae)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)、副萼苔科(Paraprevotellaceae)、梭菌科(Clostridiaceae)比例升高,瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)、消化鏈球菌科(Peptostreptococcaceae)、擬桿菌門S24-7菌科(S24-7)、脫硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)比例降低。與模型組比較,各治療組中乳桿菌科(Lactobacillaceae)、梭菌科(Clostridiaceae)比例均降低,脫硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)比例均升高;地塞米松組、白果溫膽湯低劑量組及白果溫膽湯中劑量組中瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)比例降低,白果溫膽湯高劑量組比例升高;地塞米松組Peptostreptococcaceae比例降低,白果溫膽湯各治療組比例升高;地塞米松組和白果溫膽湯中劑量組中Lachnospiraceae比例降低,在白果溫膽湯低劑量和高劑量組比例升高;在地塞米松組和白果溫膽湯低劑量組中S24-7比例降低,在白果溫膽湯中劑量組和高劑量組比例升高;在地塞米松組和白果溫膽湯低劑量組中Paraprevotellaceae比例降低,在白果溫膽湯中劑量組和高劑量組中比例升高。并使用Krona軟件進(jìn)行科水平群落分類學(xué)組成的交互展示,以模型組科水平為例,獲得圖8,可以更清晰看出在科水平,各菌群所占有的比例。

圖7 各組大鼠腸道菌群科水平分類學(xué)組成分析

圖8 模型組科水平Krona物種組成圖

3 討論

哮喘是一種影響各年齡段的復(fù)雜性疾病,是由易感個(gè)體對常見“非傳染性”環(huán)境抗原(過敏原)的異常免疫反應(yīng)引起,其病因、臨床表現(xiàn)和嚴(yán)重程度在個(gè)體之間可能存在很大差異[11-12]。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,某些腸道微生物菌株已被證明能抑制或減弱與慢性炎癥相關(guān)的免疫反應(yīng),從人類受試者身上研究者發(fā)現(xiàn),改變或不太多樣化的腸道微生物群組成與哮喘等疾病相關(guān)[13],如急性發(fā)作支氣管哮喘患兒腸道優(yōu)勢菌數(shù)量減少,腸道機(jī)會(huì)致病菌數(shù)量增加[14]。而益生菌可以對未得到最佳控制的哮喘患者產(chǎn)生影響,減少局部和全身炎癥狀態(tài),控制哮喘,改善患者生活質(zhì)量[4]。使用雙歧桿菌輔助治療哮喘,能夠改善腸道微生態(tài)和肺功能,調(diào)節(jié)免疫功能,減少炎癥反應(yīng),提高療效[15]。由此可見,在早期維持正常的腸道微生物群或糾正其紊亂可能是預(yù)防和治療哮喘的一種有效方法[16]。

本實(shí)驗(yàn)觀察白果溫膽湯高、中、低劑量組大鼠致敏后及激發(fā)階段初期,大鼠行為學(xué)等一般狀況表現(xiàn)與模型組相似,但伴隨白果溫膽湯高、中、低不同劑量的干預(yù)逐漸延長,各劑量組大鼠咳嗽、搔鼻抓臉、煩躁等癥狀均較模型組有不同程度的改善。這說明白果溫膽湯在改善哮喘大鼠行為學(xué)等一般狀況表現(xiàn)方面具有一定作用。此外,本實(shí)驗(yàn)大鼠肺組織HE染色結(jié)果顯示,與空白組比較,模型組出現(xiàn)一系列病理改變,復(fù)制哮喘模型成功,與模型組比較,地塞米松組與白果溫膽湯高、中、低劑量組均可改善哮喘大鼠的肺組織結(jié)構(gòu),降低肺部炎癥反應(yīng),且隨白果溫膽湯劑量升高藥效越佳。

正常腸道微生物群的失調(diào)是考慮哮喘發(fā)生發(fā)展的重要因素之一[17]。針對腸道菌群多樣性進(jìn)行分析,包括組內(nèi)菌群的菌群豐度、多樣性、均勻度和組間菌群的差異性。Alpha多樣性分析顯示,與空白組比較,模型組大鼠腸道菌群多樣性有下降趨勢,可見哮喘會(huì)導(dǎo)致大鼠的腸道菌群多樣性等發(fā)生變化,一定程度破壞大鼠腸道微生態(tài)穩(wěn)態(tài),這與Liu C等[18]研究結(jié)果具有一致性,其發(fā)現(xiàn)哮喘會(huì)破壞腸道菌群的穩(wěn)定性,降低腸道菌群多樣性及豐富度。與模型組比較,地塞米松組大鼠腸道菌群豐度、均勻度、菌群多樣性等均有明顯下降趨勢,白果溫膽湯各劑量組隨藥物濃度增加,腸道菌群的多樣性及豐富度等均明顯上升,逐漸趨近空白組大鼠的多樣性及豐度;可見白果溫膽湯在改善哮喘大鼠腸道菌群方面遠(yuǎn)優(yōu)于地塞米松,并且隨藥物濃度升高效果增加,地塞米松會(huì)降低腸道菌群多樣性與其在機(jī)體內(nèi)一定程度延遲腸道菌群恢復(fù)有關(guān)[19]。Beta多樣性分析結(jié)果提示空白組與模型組組間差異較大,說明哮喘大鼠腸道菌群改變較大,分別經(jīng)過地塞米松和不同劑量的白果溫膽湯治療后,地塞米松組的差異更大,白果溫膽湯各劑量組具有不同程度的改善,通過與空白組比較,可見經(jīng)過白果溫膽湯干預(yù)后,會(huì)使哮喘大鼠腸道菌群改善趨向健康大鼠。有研究表明嬰兒早期腸道微生物群的減少和代謝活動(dòng)的改變與哮喘的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[20],且Jia W Q等[21]已證明哮喘患者腸道菌群多樣性的變化與哮喘的發(fā)病率有關(guān),可見更好的維持腸道菌群多樣性對疾病的治療有較好的效果。

針對科水平,哮喘大鼠乳桿菌科(Lactobacillaceae)比例升高,各治療組降低,可能其比例改變與哮喘的發(fā)生發(fā)展有關(guān),Zawistowska-Rojek等[22]研究發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌科菌株的粘附能力、競爭性粘附、自聚集和共聚集等特性可能會(huì)影響胃腸道病原菌的定植和清除,在疾病的發(fā)生發(fā)展中起到一定的作用。哮喘模型組大鼠梭菌科(Clostridiaceae)比例較空白組升高,各治療組與模型組比較明顯降低,哮喘可能會(huì)導(dǎo)致Clostridiaceae比例的升高,從而改變腸道菌群的穩(wěn)定性,但Huang F等[23]研究認(rèn)為低水平的梭菌科是哮喘發(fā)病的危險(xiǎn)因素,這與菌群具有雙向調(diào)節(jié)也可能有關(guān)。哮喘大鼠腸道菌群脫硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)比例降低,各治療組比例升高,脫硫弧菌科細(xì)菌與腸道炎性疾病和慢性疾病有關(guān)[24]。

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)消化鏈球菌科(Peptostreptococcaceae)模型組比例降低,白果溫膽湯干預(yù)后比例升高,瘤胃球菌科(Ruminococcaceae)模型組比例降低,白果溫膽湯高劑量干預(yù)后比例升高,S24-7(擬桿菌門S24-7菌科)模型組比例降低,白果溫膽湯中高劑量組治療后比例升高?？梢姲坠麥啬憸梢愿玫木S持腸道菌群穩(wěn)定性,尤其是在改善Peptostreptococcaceae、Ruminococcaceae、S24-7比例方面。

綜上所述,本研究針對目前哮喘高發(fā)的現(xiàn)狀,創(chuàng)新性地將中醫(yī)肺腸相關(guān)理論和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的腸道微生態(tài)相結(jié)合,甄選臨床應(yīng)用多年的基于分消走泄法首創(chuàng)的白果溫膽湯為研究藥物開展實(shí)驗(yàn)研究,藥物市場靶向明確。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了“肺—腸軸”理論在哮喘中起著重要作用,在一定程度上揭示了哮喘肺腸同病的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)內(nèi)涵,并闡明了白果溫膽湯可能通過調(diào)節(jié)腸道菌群的多樣性、豐富度及調(diào)節(jié)菌群結(jié)構(gòu)改善哮喘。在今后的研究中,筆者將以此為基礎(chǔ),望進(jìn)一步為中醫(yī)藥調(diào)控哮喘提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ),探索藥物調(diào)控機(jī)制的新方向,為哮喘的臨床治療和預(yù)防提供參考。