張劍萍

艾滋病(acquired immune deficiency syndrome, AIDS)也被稱為獲得性免疫缺陷綜合征, 是指因機體在被人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)感染后而導(dǎo)致的一種全身性疾?。?］。AIDS 的傳播途徑包括母嬰傳播、血液傳播、性傳播, 此類患者的傷口滲出液、陰道分泌物、血液、乳汁、精液等存在較多的HIV, 同時傳染性非常強［2］。AIDS 存在非常強的隱匿性, 在發(fā)病前并沒有任何癥狀, 存在長達10 年的潛伏期, 同時由于病毒會慢慢的破壞人體免疫系統(tǒng), 發(fā)病后疾病會快速發(fā)展, 可累及其他器官系統(tǒng), 使患者生命受到威脅［3］。發(fā)病后患者以肝脾腫大、持續(xù)性發(fā)熱、皮膚感染、呼吸困難、黏膜感染等為常見癥狀。所以,此病早期檢驗并及時治療可有效控制病情發(fā)展。截至目前, 醫(yī)學(xué)領(lǐng)域并沒有找到一種有效治愈AIDS 的藥物和方法, 全球并沒有預(yù)防HIV 的疫苗, 所以, 醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)IDS 檢驗作為重點內(nèi)容, 并利用檢驗結(jié)果積極控制疾病的傳染、進展［4］。AIDS 檢驗的方法有很多, 如病毒培養(yǎng)、病毒抗體檢測、血液分析儀等, 檢驗方法不同,其回收率、速度、精準度等存在一定差異［5］。有研究指出［6］, 酶標儀在AIDS 患者血液檢驗中價值較高, 其存在檢測精準、簡便、快速的特點, 同時患者認可度較高。所以, 本研究分析AIDS 患者利用酶標儀在艾滋病血液檢驗中的價值, 報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取疾病預(yù)防控制中心2020 年1 月～2022 年1 月確診為AIDS 的60 例患者納入研究, 其中男35 例, 女25 例；年齡21～56 歲, 平均年齡(29.66±8.78)歲。本研究經(jīng)過倫理委員會審核并批準。

1.2 納入及排除標準 納入標準：符合AIDS 診斷標準, 病毒抗體陽性, 同時合并卡氏肺囊蟲肺炎或近期持續(xù)發(fā)熱體溫≥38℃；患者和家屬對本次研究內(nèi)容知情,同時簽署同意書。排除標準：患者依從性差；精神疾病者；伴有嚴重的心血管疾病者；妊娠期、哺乳期患者。

1.3 方法

1.3.1 血液分析儀檢驗 將檢測試紙裝入塑料卡座內(nèi), 利用雙抗原夾心法檢測, 小圓孔(s 區(qū))是加樣孔,需要將受檢者的血液滴入此孔中后再實施檢測, 結(jié)果可以在窄長凹形凹陷區(qū)查看, 其中, T 為檢測線的位置,C 為對照線的位置。采血時所用物品為采血針、酒精、棉球, 均按照無菌要求操作, 在指尖或耳垂處采血, 酒精棉球?qū)Σ裳幭? 直接將血液滴在加樣孔中, 或者利用無菌吸管吸取血液, 再滴入加樣孔中實施檢驗。10～15 min 后, 觀察試紙結(jié)果, 試紙上只出現(xiàn)一條紅線(對照線C)為陰性結(jié)果；試紙上出現(xiàn)兩條紅線(對照線C 和檢測線T)為陽性結(jié)果；試紙上未出現(xiàn)紅線, 表示測試實驗失敗, 請另取卡重新檢測。

1.3.2 酶標儀檢驗 ①配液：使用去離子水或蒸餾水按照1∶20 比例稀釋濃縮洗滌液；②編號：樣品對應(yīng)微孔板按照順序編號, 并設(shè)陰性對照組3 孔, 空白對照1 孔, 1 型、2 型、抗原陽性對照各1 孔；③加生物素試劑：將20 μl 生物素試劑置入孔中, 空白孔不加入；④加樣：將待檢測樣本加入相應(yīng)的孔中, 震蕩搖勻；⑤溫育：使用封板膜進行封板, 溫育溫度設(shè)置36～38℃, 時間29～31 min；⑥洗板：封板膜完全揭掉后, 用洗板機清洗5 遍, 扣干；⑦加酶：將100 μl 酶標試劑置入孔中, 空白孔不加入, 后再進行一次溫育、洗板步驟；⑧顯色：將50 μl 顯色劑A、500 μl 顯色劑B 加入孔中,震蕩搖勻后, 在溫度36～38℃溫度中避光顯色, 時間為29～31 min；⑨測定：將50 μl 終止液加入, 震蕩搖勻后,10 min 內(nèi)測定結(jié)果。酶標儀波長設(shè)定為450 nm, 在空白孔調(diào)零后對A 值進行測定。

1.4 觀察指標 對比兩種檢驗方法精密度, 分析線性范圍；對比兩種檢驗方法標本回收率, 分析穩(wěn)定性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢驗方法精密度對比 對3 份血清進行批間、批內(nèi)20 次的重復(fù)檢測, 酶標儀檢驗的批內(nèi)精密度、批間精密度均明顯高于血液分析儀, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩種檢驗方法精密度對比(%)

2.2 線性范圍 AIDS 血清的線性范圍臨界值是160 kU, 在AIDS 活性達到上述標準后, 可利用等滲鹽水對其進行稀釋, 同時將檢測工作完成。

2.3 兩種檢驗方法標本回收率對比 酶標儀檢驗的標本平均回收率是98.2%, 高于血液分析儀的94.4%, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩種檢驗方法標本回收率對比(%)

2.4 穩(wěn)定性 在一份AIDS 血液標本添加NaOH, 濃度為0.4 mmol/L, 在顯色后的不同時間實施比色, 結(jié)果指出, 10～90 min 顯色比較穩(wěn)定, 顯色10 min 后比色情況良好。

3 討論

HIV 感染患者從感染開始直到10 年左右, 其可以沒有任何臨床癥狀, 只能經(jīng)過檢驗血液才可以確診, 進而了解到患者是否出現(xiàn)HIV 抗體或病毒［7］。機體在被疾病威脅時會產(chǎn)生一種蛋白質(zhì), 即為抗體, 患者機體在被HIV 病毒感染后, 就會產(chǎn)生一種對此種病毒對抗的抗體［8］。調(diào)查指出［9］, 酶標儀是一種普遍應(yīng)用在HIV病毒檢驗中的方法。

酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀, 利用酶聯(lián)免疫吸附試驗對血液檢驗的一種儀器, 此種儀器以比色計為核心工作原理, 可通過比色法對抗體或者抗原的含量分析［10］。酶聯(lián)免疫吸附法指的是一種標記技術(shù), 其基礎(chǔ)原理則是同位素免疫技術(shù)、熒光抗體技術(shù), 進而實現(xiàn)高敏感性和高特異性檢測方法, 快速達到自動化的檢驗方式［11］。此種檢驗方法的原理是讓抗體結(jié)合酶膠聯(lián)劑, 變?yōu)槊笜丝贵w, 此酶標抗體會同固定載體上的抗體出現(xiàn)特異反應(yīng), 經(jīng)過結(jié)合后會變成免疫復(fù)合物, 但是一直存在不同程度的活性, 將底物加入后, 酶會對其產(chǎn)生催化作用, 進而進行反應(yīng), 出現(xiàn)不同的顏色, 抗體的含量隨著顏色的加深而增加。此種檢驗法以高效的酶催化劑、抗原-抗體反應(yīng)為基礎(chǔ), 所以存在的靈敏性比較特殊, 該種方式屬于免疫學(xué)試驗技術(shù)中存在較強生命力的一種［12］。酶標儀檢驗工作原理：主要結(jié)構(gòu)同光電比色相同, 經(jīng)濾光片處理光源燈所發(fā)出的光波后會變成一束單色光, 隨后進入微孔極中, 可對標本進行進一步的檢測［13-16］。部分標本會將單色光吸收, 剩余的部分單色光會穿透標本照射到光電檢測器上, 后轉(zhuǎn)換待檢測標本光信號為對應(yīng)的電信號, 通過信號處理, 如模數(shù)轉(zhuǎn)換等輸送到微處理其中, 處理并將結(jié)果計算出來, 后實施打印。此外, 利于電路控制微處理器, 機械式驅(qū)動, 按照X 軸方向、Y 軸方向移動微孔板, 實施自動進樣本檢測。

本研究根據(jù)酶標儀相應(yīng)的儀器軟件以及嚴密的比色系統(tǒng), 簡單配置了對應(yīng)的附件, 同時根據(jù)全國臨床檢驗的有關(guān)檢驗項目程序、操作標準, 完成采血、檢測、結(jié)果打印、超微量化學(xué)檢驗。在本研究中, 為了進行更加針對性的血液檢測儀器測定, 試驗中的病例為AIDS, 對3 份血清實施了批內(nèi)和批間的20 次重復(fù)檢測, 酶標儀檢驗的批內(nèi)精密度、批間精密度均明顯高于血液分析儀, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。并且本研究中的其他研究結(jié)果也證實酶標儀效果良好。

總之, 通過酶標儀測定AIDS 患者的血液存在快速、簡便等優(yōu)勢, 效果理想, 成本低, 時間短, 值得推廣。