張 寧，張燕杰

（陽谷縣疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，山東聊城 252300）

生活飲用水微生物檢測(cè)是利用微生物學(xué)的理論與方法，檢驗(yàn)微生物的種類、數(shù)量、性質(zhì)，可根據(jù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)飲用水質(zhì)量是否合格進(jìn)行判定。但微生物檢測(cè)容易受到檢測(cè)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、樣品因素等外源因素的影響，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果與實(shí)際情況不符，進(jìn)行使檢驗(yàn)人員對(duì)生活飲用水的質(zhì)量做出誤判[1-2]。因此，在生活飲用水的微生物檢測(cè)過程中，需要對(duì)影響檢測(cè)結(jié)果的各個(gè)外源因素采取質(zhì)量控制措施，降低各因素的干擾程度，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性?；诖?，本文針對(duì)生活飲用水微生物檢測(cè)及質(zhì)量控制影響因素、質(zhì)量控制措施展開分析。

1 生活飲用水微生物檢測(cè)

生活飲用水微生物檢測(cè)項(xiàng)目主要有菌落總數(shù)、總大腸菌群、耐熱大腸菌群等。其中，菌落總數(shù)檢測(cè)是將待測(cè)水樣混勻，移取一定量到培養(yǎng)皿，使其均勻分布于平皿中的培養(yǎng)基內(nèi)。按照規(guī)定的培養(yǎng)方法，將其放在37 ℃環(huán)境中培養(yǎng)2 d。培養(yǎng)結(jié)束后取出培養(yǎng)皿，再進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，得到水樣的菌落總數(shù)?？偞竽c菌群檢測(cè)一般使用多管發(fā)酵法，先進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，即在乳糖蛋白培養(yǎng)液中添加適量的水樣，混勻后進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否有產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，若無，則說明水樣中總大腸菌群含量很低，指標(biāo)符合要求；若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，則應(yīng)使用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基檢測(cè)并判斷菌落特征，對(duì)菌落種類進(jìn)行初步判斷，之后借助革蘭氏染色、顯微鏡觀察等方法進(jìn)一步明確具體的大腸菌群類型[3]。耐熱大腸菌群的檢測(cè)也可以采用多管發(fā)酵法，在發(fā)酵后進(jìn)行耐熱培養(yǎng)，即在44 ～45 ℃環(huán)境中培養(yǎng)1 d，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣特征并進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)步驟；耐熱大腸菌群還可以使用平板培養(yǎng)法，即在耐熱培養(yǎng)后，將出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌種接種在平板上，于37 ℃繼續(xù)培養(yǎng)1 d，再進(jìn)行確認(rèn)及出具檢測(cè)報(bào)告。

2 生活飲用水微生物檢測(cè)的影響因素

2.1 檢測(cè)環(huán)境

檢測(cè)環(huán)境與飲用水微生物檢測(cè)結(jié)果密切相關(guān)，如室內(nèi)溫度、濕度、室內(nèi)空氣消毒質(zhì)量等均會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。室內(nèi)溫度過高可能會(huì)導(dǎo)致水樣中的微生物大量死亡，進(jìn)而影響檢驗(yàn)結(jié)果?？諝庀举|(zhì)量不合格容易導(dǎo)致空氣中的微生物超標(biāo)，若空氣中的微生物進(jìn)入水樣中，則可能會(huì)導(dǎo)致水樣污染，進(jìn)而使檢測(cè)結(jié)果與實(shí)際不相符，即出現(xiàn)假陽性情況[4]。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)濕度為細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)提供了條件，濕度過高會(huì)導(dǎo)致微生物快速蔓延，增加了實(shí)驗(yàn)過程中水樣受到污染的風(fēng)險(xiǎn)。因此，在進(jìn)行生活飲用水微生物檢驗(yàn)前，應(yīng)保證檢測(cè)環(huán)境符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

生活飲用水微生物檢測(cè)過程中，通常需要借助各種設(shè)備儀器，如恒溫箱、菌落計(jì)數(shù)器、厭氧培養(yǎng)箱、微生物勻質(zhì)器及生化培養(yǎng)箱等。如果存在儀器設(shè)備滅菌不合格、設(shè)備老化、設(shè)備缺乏維護(hù)及設(shè)備無法能正常運(yùn)行等情況，容易影響檢驗(yàn)結(jié)果。

2.3 檢測(cè)人員

飲用水中微生物檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性也會(huì)受到檢測(cè)人員的影響，主要表現(xiàn)在檢測(cè)人員操作的規(guī)范性方面。檢測(cè)人員在檢測(cè)過程中，若出現(xiàn)未按照相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行、違規(guī)操作設(shè)備、未按要求持證上崗、缺乏責(zé)任心以及操作技能掌握不熟練等情況，容易導(dǎo)致微生物檢測(cè)結(jié)果與實(shí)際存在較大誤差[5]。

2.4 樣品因素

生活飲用水的樣品采樣、樣品存儲(chǔ)條件、樣品存儲(chǔ)時(shí)間會(huì)影響微生物檢測(cè)結(jié)果。例如，采樣容器不適宜、采樣后樣品未按要求密封、樣品長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)惹闆r都可能導(dǎo)致樣品中的微生物含量發(fā)生改變，進(jìn)而影響檢測(cè)結(jié)果。對(duì)于需要長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)乃畼?，若采集水樣時(shí)使用密封性不好的容器，則容易導(dǎo)致水樣溢出瓶外，造成水樣污染。樣品存儲(chǔ)時(shí)間越長(zhǎng)，菌落總數(shù)檢測(cè)結(jié)果越高，但不影響總大腸菌群的定性結(jié)果。

2.5 實(shí)驗(yàn)試劑

實(shí)驗(yàn)試劑的選擇與使用過程都會(huì)影響水中微生物的檢測(cè)結(jié)果。例如，若實(shí)驗(yàn)中使用的培養(yǎng)基質(zhì)量不合格，容易出現(xiàn)微生物污染情況，將其用于水樣的接種和培養(yǎng)，易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確；或者培養(yǎng)基各含量配比不當(dāng)，含有的成分不能滿足待測(cè)菌種的生長(zhǎng)條件，在接種后容易導(dǎo)致待測(cè)菌種無法正常生長(zhǎng)，此種情況也將會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.6 檢測(cè)過程

微生物檢測(cè)過程中，取樣體積、檢測(cè)方法、操作流程、消毒細(xì)節(jié)、標(biāo)準(zhǔn)限值、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)以及培養(yǎng)條件等因素均可對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。例如，檢測(cè)過程中，受檢驗(yàn)方法的限制，生活飲用水中的細(xì)菌無法被全部檢測(cè)出來。在培養(yǎng)環(huán)節(jié)，培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)容易導(dǎo)致細(xì)菌數(shù)量過多、平板中菌種密度過大，影響觀察和分析結(jié)果；若培養(yǎng)時(shí)間不足，容易導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)過少，使細(xì)菌無法檢出。

3 生活飲用水微生物檢測(cè)的質(zhì)量控制

3.1 檢測(cè)環(huán)境質(zhì)量控制

為保證檢測(cè)環(huán)境符合生活飲用水微生物檢測(cè)要求，需要對(duì)檢測(cè)環(huán)境進(jìn)行檢查，并采取相應(yīng)的措施。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)具備良好的通風(fēng)、排氣、排水系統(tǒng)，確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部空氣質(zhì)量、污染物排放量符合標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)要求對(duì)實(shí)驗(yàn)室的空氣進(jìn)行紫外線消毒，紫外線強(qiáng)度應(yīng)達(dá)到70 μW·cm-2，若紫外線強(qiáng)度太低，應(yīng)該及時(shí)更換燈管[6]。進(jìn)行空氣消毒后，應(yīng)及時(shí)檢測(cè)空氣中浮菌數(shù)，確保消毒質(zhì)量合格。此外，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)限制人員進(jìn)出，盡可能保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境干凈整潔，降低污染的風(fēng)險(xiǎn)。

3.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)設(shè)備質(zhì)量控制需要從實(shí)驗(yàn)設(shè)備的日常維護(hù)入手，主要包括制定作業(yè)指導(dǎo)書和檢定校準(zhǔn)計(jì)劃。在制定作業(yè)指導(dǎo)書方面，對(duì)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的所有設(shè)備制定儀器/設(shè)備清單，安排專人管理，儀器上面標(biāo)有設(shè)備編號(hào)、名稱、型號(hào)、廠家等基本信息以及檢定狀態(tài)，其中檢定狀態(tài)包括送檢、送校、自檢、自校。對(duì)于檢定校準(zhǔn)合格的設(shè)備，要貼合格證、編號(hào)、校驗(yàn)日期、下次校驗(yàn)日期，而不合格的設(shè)備要停止使用。實(shí)驗(yàn)室設(shè)備在使用時(shí)要按規(guī)范操作，例如，使用高壓滅菌鍋時(shí)，需要按照作業(yè)指導(dǎo)書規(guī)范操作，并標(biāo)記好材料、開始時(shí)間、壓力/溫度、取出時(shí)間等信息。天平要放在水平臺(tái)面上，并且確保無振動(dòng)、無氣流影響，每次檢查后要做好檢查記錄。pH 計(jì)在使用前需要用標(biāo)準(zhǔn)液校準(zhǔn)，并定期維護(hù)、定期清洗電極外表。

3.3 檢測(cè)人員質(zhì)量控制

檢測(cè)人員質(zhì)量控制主要從人員配置、人員資質(zhì)、人員培訓(xùn)3 方面入手。在人員配置方面，應(yīng)確保檢驗(yàn)人員人手充足，注重檢測(cè)人員的技能水平，確保其能夠完成現(xiàn)有的檢驗(yàn)工作，維持實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行日常。人員資質(zhì)方面，檢測(cè)人員應(yīng)有微生物學(xué)或者相近專業(yè)知識(shí)的教育背景，確保其知識(shí)儲(chǔ)備能夠滿足檢測(cè)要求。同時(shí)，采用內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)等方法對(duì)檢測(cè)人員的能力進(jìn)行評(píng)估，確保檢測(cè)人員具有基本的操作能力。在人員培訓(xùn)方面，應(yīng)注重對(duì)檢測(cè)人員的培訓(xùn)，培訓(xùn)內(nèi)容包括檢測(cè)設(shè)備操作、檢測(cè)技術(shù)等，如無菌操作、消毒滅菌、菌落計(jì)數(shù)、菌種的轉(zhuǎn)種等，培訓(xùn)結(jié)束后還應(yīng)針對(duì)培訓(xùn)內(nèi)容進(jìn)行考核，并將考核覆蓋到日常工作中。

3.4 樣品的質(zhì)量控制

生活飲用水水樣采集時(shí)，應(yīng)確保采集水樣的代表性，使用的容器要根據(jù)水樣需求選擇，包括材質(zhì)、開口、體積等。容器的內(nèi)壁不能對(duì)水樣中待測(cè)組分有吸收或吸附作用，容器應(yīng)有一定的密封性、抗震能力[7]。在采集自來水水樣時(shí)，采集出廠水的地點(diǎn)應(yīng)在飲用水處理后運(yùn)送至各用水區(qū)域之間的節(jié)點(diǎn)。末梢水的采樣中，應(yīng)在用戶經(jīng)常使用并且距離用戶水表最近的出水處采集水樣[8]。水源水的采樣中，采集地點(diǎn)應(yīng)在汲水處，同時(shí)要根據(jù)水源特點(diǎn)采集，如河流、湖泊等表層水可以直接采集；水庫(kù)水可以用直立式采水器采集；不自噴的泉水則先用新水代替抽水管中的水后，再進(jìn)行采集。每天核對(duì)酶標(biāo)儀的濾光片波長(zhǎng)，每周清洗儀器表面，確保光學(xué)零件不沾灰塵。需要長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)乃畼硬蓸訒r(shí)不宜使用500 mL 磨口試劑瓶，可以改用有密封圈的耐高溫螺紋瓶，防止在運(yùn)輸過程中出現(xiàn)污染或滲漏。

3.5 實(shí)驗(yàn)試劑質(zhì)量控制

配制完試劑后，要標(biāo)注試劑名稱、配制日期、有效期、配制者，并做好記錄；商品試劑要標(biāo)注購(gòu)買日期、有效期。此外，還要定期對(duì)試劑進(jìn)行性能測(cè)試，不合格的試劑應(yīng)進(jìn)行無害化處理。例如，配制的氧化酶試劑在使用前應(yīng)進(jìn)行測(cè)試（每天），靛基質(zhì)試劑每周測(cè)試1 次。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)根據(jù)試劑特點(diǎn)選擇適宜的保存方法，如氧化酶試劑要裝入棕色瓶，置于4 ℃環(huán)境中儲(chǔ)存。

3.6 檢測(cè)過程質(zhì)量控制

在檢測(cè)過程中，每批樣品檢測(cè)需抽取10%以上或樣品數(shù)≥2 個(gè)進(jìn)行平行樣檢測(cè)，同時(shí)設(shè)置培養(yǎng)基空白、空氣質(zhì)控平板、全程空白對(duì)照，空白對(duì)照應(yīng)為“未檢出”狀態(tài)。檢測(cè)過程中還應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株、滅菌純水作為陰、陽對(duì)照。當(dāng)樣品數(shù)量較少時(shí)，應(yīng)適當(dāng)增加平行雙樣測(cè)定，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。對(duì)培養(yǎng)基、無菌純水、采樣容器進(jìn)行消毒時(shí)應(yīng)遵循標(biāo)準(zhǔn)流程，并使用化學(xué)指示劑檢測(cè)卡和生物指示劑監(jiān)測(cè)殺菌效果。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行分析，當(dāng)平板菌落數(shù)在30 ～300 CFU·mL-1時(shí)，實(shí)驗(yàn)室與菌落總數(shù)平行雙樣偏差應(yīng)控制在20%以內(nèi)。

4 結(jié)語

對(duì)生活飲用水中微生物進(jìn)行檢測(cè)有助于相關(guān)人員對(duì)水質(zhì)量、水污染問題進(jìn)行準(zhǔn)確研判，是保障居民生活飲用水安全的重要措施。但生活飲用水的微生物檢測(cè)結(jié)果容易受到檢測(cè)環(huán)境、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、檢測(cè)人員、樣品等因素影響，通過采取檢測(cè)環(huán)境質(zhì)量控制、實(shí)驗(yàn)設(shè)備質(zhì)量控制、檢測(cè)人員質(zhì)量控制及實(shí)驗(yàn)試劑質(zhì)量控制等多種措施，可以有效消除生活飲用水微生物檢測(cè)的干擾因素，確保微生物檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。