冉艷洪，顏欣欣，宋 慧，周珊珊，王俐梅，楊 威

（ 廣州灣區(qū)生物醫(yī)藥研究院 廣東萊恩醫(yī)藥研究院有限公司廣東省藥物非臨床評(píng)價(jià)研究企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心中藥非臨床評(píng)價(jià)分中心 廣東省創(chuàng)新藥物評(píng)價(jià)與研究工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510990 ）

在動(dòng)物試驗(yàn)中，良好且穩(wěn)定的麻醉既要求能夠保證操作順利進(jìn)行、人員安全和動(dòng)物福利，又要盡可能避免對(duì)采集的試驗(yàn)數(shù)據(jù)的干擾。小型豬作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有很強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)[1-2]，在生物醫(yī)學(xué)研究中常需使用藥物對(duì)其進(jìn)行鎮(zhèn)靜或麻醉，其中氯胺酮和舒泰是小型豬最常用的注射類麻醉藥。然而，氯胺酮的購買、管理和使用均受到管控，限制了其在臨床實(shí)踐中的日常使用。舒泰作為新型的分離麻醉劑，屬非管制類藥品，易獲得，已廣泛應(yīng)用于多種屬動(dòng)物，但肌松效果差。而賽拉嗪作為α腎上腺素受體激動(dòng)劑，具有良好的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和肌松效果，二者聯(lián)合使用能夠取長(zhǎng)補(bǔ)短，具有廣闊的應(yīng)用前景[3]。值得注意的是，運(yùn)用任何麻醉藥物均可能導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)生潛在的生理并發(fā)癥，如呼吸抑制、血流動(dòng)力學(xué)改變和高脂血癥等，但目前有關(guān)小型豬聯(lián)合使用舒泰和賽拉嗪進(jìn)行麻醉的用量尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)麻醉的穩(wěn)定性及安全性也知之甚少。因此，本文旨在探索舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬的麻醉效果，并系統(tǒng)闡述麻醉劑量對(duì)動(dòng)物生理指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)巴馬小型豬6 只，2 雌4 雄，7～8 月齡，體重（14.25±1.32） kg，均購自湖北奧菲生物科技有限公司，飼養(yǎng)于廣東萊恩醫(yī)藥研究院有限公司（已獲得國際AAALAC認(rèn)可）普通環(huán)境動(dòng)物房。

1.1.2 主要儀器

MC-347 型電子體溫計(jì)【歐姆龍健康醫(yī)療（中國）有限公司】；SP2006 心電圖采集與解析系統(tǒng)、BP-2010E 智能無創(chuàng)血壓計(jì)（北京軟隆生物技術(shù)有限公司）；XN-1000[B3]全自動(dòng)血液分析儀【希森美康醫(yī)用電子（上海）有限公司】；7180全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）；IW2-150電子臺(tái)秤【賽多利斯工業(yè)稱重設(shè)備（北京）有限公司】。

1.1.3 主要試劑

舒泰50（替來他明125 mg+唑拉西泮125 mg），由VIRBAC公司生產(chǎn)；鹽酸賽拉嗪注射液（2 mL∶0.1 g），由吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司生產(chǎn)；血常規(guī)檢測(cè)試劑，由Sysmex 公司生產(chǎn)；血液生化學(xué)檢測(cè)試劑，由浙江伊利康生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)置3 個(gè)劑量組，6 只巴馬小型豬間隔使用舒泰0.75 mg/kg+賽拉嗪6 mg/kg（A 組）、舒泰0.75 mg/kg+賽拉嗪12 mg/kg（B組）、舒泰1.00 mg/kg+賽拉嗪8 mg/kg（C組）經(jīng)肌肉注射進(jìn)行麻醉，注射部位為耳后三角區(qū)，不同組麻醉時(shí)間間隔5 d 以上，麻醉前禁食不禁水約12～14 h，麻醉過程中采用毛巾覆蓋全身進(jìn)行保溫處理。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 麻醉效果評(píng)估

觀察動(dòng)物麻醉過程中的體動(dòng)情況和鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛效果，并記錄麻醉誘導(dǎo)時(shí)間、維持時(shí)間和恢復(fù)時(shí)間。誘導(dǎo)時(shí)間指從注射麻醉藥物到動(dòng)物趴臥安靜、翻正反射和眼瞼反射消失的時(shí)間間隔；維持時(shí)間指無外界刺激下，自動(dòng)物趴臥安靜、翻正反射和眼瞼反射消失至動(dòng)物眼瞼反射恢復(fù)、肢體恢復(fù)自主活動(dòng)的時(shí)間間隔；恢復(fù)時(shí)間指在無外界刺激下，自動(dòng)物眼瞼反射恢復(fù)、肢體恢復(fù)自主活動(dòng)至動(dòng)物可以自主站立的時(shí)間間隔。

1.3.2 生理指標(biāo)監(jiān)測(cè)

在麻醉前后對(duì)巴馬小型豬進(jìn)行肛溫、呼吸頻率、收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、平均動(dòng)脈壓（MBP）、心電圖（ECG）以及血常規(guī)和血液生化的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在安靜狀態(tài)下使用智能無創(chuàng)血壓計(jì)測(cè)量巴馬小型豬前肢的SBP、DBP、MBP，使用Ⅱ?qū)?lián)監(jiān)測(cè)心電圖；使用全自動(dòng)血液體液分析儀、全自動(dòng)生化分析儀及相應(yīng)的檢測(cè)試劑檢測(cè)血常規(guī)、血清生化檢查指標(biāo)。上述檢測(cè)項(xiàng)目均按照試劑盒或儀器說明書進(jìn)行操作。

由于實(shí)驗(yàn)室工作人員的待遇跟授課教師的待遇差別很大，沒有得到同教學(xué)科研人員同等的待遇，導(dǎo)致很多實(shí)驗(yàn)室管理人員數(shù)量不足，并且存在散漫管理的現(xiàn)象，所以，民辦高校要通過多種渠道提高實(shí)驗(yàn)室管理人員的工作熱情。

血常規(guī)指標(biāo)包括：白細(xì)胞數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、血細(xì)胞比容（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均血紅蛋白含量（MCH）、平均血紅蛋白濃度（MCHC）、血小板數(shù)（PLT）、嗜中性粒細(xì)胞數(shù)（NEUT）、淋巴細(xì)胞數(shù)（LYMPH）、單核細(xì)胞數(shù)（MONO）、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)（EO）、嗜堿性細(xì)胞數(shù)（BASO）。

血清生化檢查指標(biāo)包括：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）、尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 21.0 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬麻醉效果的影響（見表1）

表1 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬麻醉時(shí)間的影響Tab.1 Effect of zoletil combined with xylazine on anesthesia time in Bama miniature pigs 單位：min

A 組、B 組和C 組巴馬小型豬在注射麻醉藥物后均穩(wěn)定進(jìn)入麻醉狀態(tài)，麻醉成功率100%，且維持麻醉期間內(nèi)肌肉松弛良好、眼瞼反射和角膜反射均消失，針刺四肢內(nèi)側(cè)皮膚無痛覺，亦未見動(dòng)物死亡。

由表1 可知，各組誘導(dǎo)時(shí)間差異不顯著（P＞0.05）；B 組、C 組維持時(shí)間顯著高于A 組（P＜0.05），B 組與C 組維持時(shí)間差異不顯著（P＞0.05）；C組恢復(fù)時(shí)間顯著高于A組、B組（P＜0.05），A組、B組間差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬生理指標(biāo)的影響

表2 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬肛溫的影響Tab.2 Effect of zoletil combined with xylazine on the rectal temperature of the Bama miniature pigs 單位：℃

表3 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬呼吸頻率的影響Tab.3 Effect of zoletil combined with xylazine on the respiratory rate of the Bama miniature pigs 單位：次/min

由表2、表3可知，A組、B組和C組的肛溫和呼吸頻率在麻醉后整體上呈現(xiàn)出降低趨勢(shì)，在蘇醒后約1 h 時(shí)已恢復(fù)至正常范圍。組內(nèi)分析結(jié)果顯示，麻醉中（30±5） min時(shí)A 組豬的肛溫顯著低于麻醉前（P＜0.05）；麻醉中（50±5） min 時(shí)B 組豬的肛溫顯著低于麻醉前（P＜0.05）；麻醉中（30±5）、（50±5） min 時(shí)C 組豬的肛溫顯著低于麻醉前（P＜0.05）。麻醉前后A 組、B 組豬的呼吸頻率差異均不顯著（P＞0.05）；麻醉中C組豬的肛溫呼吸頻率均顯著低于麻醉前（P＜0.05）。組間比較，麻醉前后各組豬的肛溫和呼吸頻率差異均不顯著（P＞0.05）。

2.2.2 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)麻醉中巴馬小型豬無創(chuàng)血壓的影響（見表4）

表4 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)麻醉中巴馬小型豬無創(chuàng)血壓的影響Tab.4 Effect of zoletil combined with xylazine on the non-invasive blood pressure of the Bama miniature pigs under anesthesia 單位：mmHg

由表4可知，隨著麻醉時(shí)間延長(zhǎng)，各組豬的SBP、DBP、MBP 均呈下降趨勢(shì)，并且隨著舒泰使用劑量增高，其對(duì)SBP、DBP、MBP 的影響更明顯。麻醉中、后期B 組和C 組豬的SBP、DBP、MBP均顯著低于麻醉初期（P＜0.05）。

2.2.3 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬心電圖各間期的影響（見表5）

表5 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬心電圖各間期的影響Tab.5 Effect of zoletil combined with xylazine on the electrocardiogram intervals of the Bama miniature pigs 單位：ms

由表5 可知，巴馬小型豬使用舒泰聯(lián)合賽拉嗪麻醉首先會(huì)造成Q-T 間期延長(zhǎng)，之后QRS 波群和P-R 間期也逐漸受到影響。

A 組豬整個(gè)麻醉期內(nèi)的QRS 波群與麻醉前和蘇醒后1 h 相比差異不顯著（P＞0.05），麻醉中（30±5） min 的P-R間期和麻醉中（10±5）、（30±5） min的Q-T間期顯著高于麻醉前（P＜0.05）。B 組與C 組麻醉過程中（30±5）、（50±5） min的QRS波群、P-R間期和整個(gè)麻醉期內(nèi)的Q-T間期均顯著高于麻醉前（P＜0.05），其中Q-T 間期在蘇醒1 h 后仍未恢復(fù)至正常范圍（P＞0.05）。

此外，B 組和C 組豬麻醉過程中（30±5） min 的QRS波群和Q-T間期時(shí)長(zhǎng)均低于A組（P＜0.05），而P-R間期時(shí)長(zhǎng)高于A 組（P＜0.05）；蘇醒后1 h 各組豬QRS 波群和P-R間期未見明顯差異（P＞0.05）。

2.3 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬血常規(guī)指標(biāo)的影響（見表6）

表6 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬血常規(guī)指標(biāo)的影響Tab.6 Effect of zoletil combined with xylazine on the blood routine indicators of the Bama miniature pigs

由表6 可知，麻醉后A 組豬WBC 顯著高于麻醉前（P＜0.05）；各組豬其他血常規(guī)指標(biāo)麻醉前后差異均不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，巴馬小型豬使用舒泰聯(lián)合賽拉嗪麻醉后約24 h，血常規(guī)指標(biāo)不會(huì)發(fā)生明顯改變。

2.4 舒泰聯(lián)合賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬血清生化指標(biāo)的影響（見表7）

表7 不同劑量舒泰和賽拉嗪對(duì)巴馬小型豬對(duì)血清生化指標(biāo)的影響Tab.7 Effect of zoletil combined with xylazine on the serum biochemistry indicators of the Bama miniature pigs

由表7可知，麻醉后A組豬血清BUN含量以及B組與C 組豬血清AST 活性和BUN 含量均顯著高于麻醉前（P＜0.05），表明巴馬小型豬使用舒泰聯(lián)合賽拉嗪麻醉后約24 h能夠影響肝腎功能相關(guān)指標(biāo)。

3 討論

在麻醉效果方面，本試驗(yàn)使用0.75～1.00 mg/kg舒泰聯(lián)合6～12 mg/kg賽拉嗪進(jìn)行麻醉，巴馬小型豬均能夠快速且穩(wěn)定地進(jìn)入良好的麻醉狀態(tài)，維持麻醉期間鎮(zhèn)痛、肌松效果良好，維持時(shí)間甚至可達(dá)到90 min以上，優(yōu)于申晨等[4]使用氯胺酮復(fù)合賽拉嗪麻醉巴馬小型豬的麻醉時(shí)長(zhǎng)；麻醉維持時(shí)間與舒泰或賽拉嗪的使用劑量表現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，這與薛來恩等[5]、Hernande-Godine 等[6]的研究結(jié)果一致，即麻醉維持時(shí)間隨著麻醉藥物使用劑量的增大而延長(zhǎng)，同時(shí)二者誘導(dǎo)時(shí)間無較大差異，而麻醉恢復(fù)時(shí)間差異較大則主要與評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)不一致有關(guān)。

在體溫、呼吸頻率影響方面，麻醉后各組巴馬小型豬的肛溫、呼吸頻率整體上均呈降低趨勢(shì)，之后在維持麻醉期內(nèi)保持穩(wěn)定，但麻醉期內(nèi)的體溫與麻醉前相比最大降幅度可達(dá)2.4 ℃，這與麻醉藥物具有抑制體溫調(diào)節(jié)中樞、擴(kuò)張外周血管作用，造成機(jī)體體溫自主調(diào)節(jié)能力喪失和產(chǎn)熱散熱失衡有關(guān)[5,7-10]。低體溫可導(dǎo)致動(dòng)物蘇醒時(shí)間延長(zhǎng)、凝血功能障礙、心血管不良事件和心肌缺血風(fēng)險(xiǎn)等，因此，在長(zhǎng)時(shí)間麻醉中對(duì)動(dòng)物在術(shù)前、術(shù)中和術(shù)后的體溫進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)并提供有效的加溫措施非常必要。體溫保護(hù)措施可分為被動(dòng)保溫和主動(dòng)保溫，被動(dòng)保溫僅能減少30%的熱量散失，術(shù)后仍需根據(jù)動(dòng)物狀態(tài)確定是否實(shí)施主動(dòng)保溫措施以預(yù)防體溫繼續(xù)降低[11]。

在心臟功能抑制方面，本試驗(yàn)中，各組巴馬小型豬在麻醉期內(nèi)均出現(xiàn)QRS波群、P-R間期和Q-T間期延長(zhǎng)以及SBP、DBP、MBP 降低的情況，證實(shí)了賽拉嗪作為強(qiáng)效α 腎上腺素受體激動(dòng)劑可以通過抑制交感神經(jīng)并興奮迷走神經(jīng)，抑制心臟傳導(dǎo)，降低心率和心搏出量從而導(dǎo)致低血壓的情況[3]。使用舒泰或氯胺酮聯(lián)合賽拉嗪麻醉小型豬后發(fā)現(xiàn)，小型豬血壓未見明顯變化，這可能主要與使用劑量有關(guān)。此外，血壓測(cè)量方法、測(cè)量部位也會(huì)造成一定差異[5,12-14]。值得注意的是，使血壓維持在基礎(chǔ)值±20%的范圍內(nèi)可有效避免心肌缺氧梗死，因此，當(dāng)麻醉動(dòng)物處于低血壓狀態(tài)時(shí)，應(yīng)適時(shí)給予麻醉拮抗劑、α腎上腺素受體激動(dòng)劑或腎上腺素、阿托品和多巴胺等升壓藥物進(jìn)行解救[15-16]。

在肝臟、腎臟功能方面，本試驗(yàn)中各組巴馬小型豬的血常規(guī)指標(biāo)在麻醉后24 h 未見明顯改變，而A 組豬血清BUN 含量以及B組、C組豬血清AST 活性、BUN 含量顯著升高。申晨等[4]、李雯雯等[13]、秦超等[17]和賀紹君等[18]研究結(jié)果顯示，單獨(dú)或聯(lián)合使用不超過2.2 mg/kg 賽拉嗪麻醉小型豬等動(dòng)物后，血液生化指標(biāo)未見明顯改變，這主要與麻醉后的血液樣本采集時(shí)間有關(guān)，種屬差異也會(huì)產(chǎn)生一定影響，說明巴馬小型豬使用賽拉嗪的麻醉劑量超過6 mg/kg時(shí)會(huì)影響肝腎代謝功能。但由于本試驗(yàn)未對(duì)上述血常規(guī)、血清生化指標(biāo)的變化情況進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)，因此，舒泰聯(lián)合賽拉嗪麻醉對(duì)巴馬小型豬肝腎功能影響的持續(xù)時(shí)間以及是否可逆仍有待進(jìn)一步確認(rèn)。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，巴馬小型豬使用0.75～1.00 mg/kg舒泰聯(lián)合賽拉嗪麻醉時(shí)，機(jī)體耐受性良好，并且可通過調(diào)整麻醉劑用量實(shí)現(xiàn)對(duì)麻醉時(shí)長(zhǎng)和生理指標(biāo)影響程度的控制，是一種安全、穩(wěn)定的麻醉方法。