楊麗英 朱杰

【摘要】 目的 探討免疫組化檢測(cè)磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（human glypican-3，GPC-3）、細(xì)胞角蛋白-19（cytokeratin-19，CK-19）在肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取2010年1月—2022年6月云南省滇南中心醫(yī)院收治的103例疑似肝細(xì)胞癌患者為研究對(duì)象，所有患者均進(jìn)行免疫組化檢測(cè)GPC-3與CK-19，并以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算免疫組化檢測(cè)GPC-3、CK-19對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷效能。比較不同病灶直徑、分化程度的腫瘤組織中GPC-3、CK-19的表達(dá)情況。結(jié)果 GPC-3檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為86.1%（62/72）、80.6%（25/31）、84.5%（87/103），CK-19檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為81.9%（59/72）、74.2%（23/31）、79.6%（82/103），二者比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。Kappa檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，GPC-3、CK-19檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌與病理檢查結(jié)果的一致性中等（Kappa值=0.644、0.537，P<0.05）。病灶直徑≥5 cm腫瘤組織中的GPC-3、CK-19的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于病灶直徑<5 cm的腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.808、-2.761，P<0.05）。中低分化腫瘤組織中GPC-3、CK-19的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于高分化腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-4.883、-2.353，P<0.05）。結(jié)論 免疫組化檢測(cè)GPC-3、CK-19對(duì)肝細(xì)胞癌具有一定的診斷價(jià)值，二者在病灶組織中的表達(dá)可能與病灶大小、分化程度有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 免疫組化；GPC-3；CK-19；肝細(xì)胞癌

Analysis of the application value of immunohistochemical detection of GPC-3 and CK-19 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma

Yang Liying， Zhu Jie. Southern Central Hospital of Yunnan Province （Honghe First People's Hospital），Honghe， Yunnan? 661199

【Abstract】 Objective To explore the application value of immunohistochemical detection of GPC-3 and CK-19 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma. Methods 103 patients with suspected hepatocellular carcinoma admitted to Southern Central Hospital of Yunnan Province from January 2010 to June 2022 were selected as study subjects. All patients were detected by immunohistochemistry for GPC-3 and CK-19， and the diagnostic efficacy of immunohistochemistry for hepatocellular carcinoma was calculated based on the pathological results as the gold standard. The expression of GPC-3 and CK-19 in tumor tissues with different lesion diameters and differentiation degrees were compared. Results The sensitivity， specificity and accuracy of GPC-3 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma were 86.1% （62/72）， 80.6% （25/31） and 84.5% （87/103）， the sensitivity， specificity and accuracy of CK-19 in the diagnosis of hepatocellular carcinoma were 81.9% （59/72）， 74.2% （23/31） and 79.6% （82/103）， there was no significant difference between the two indexes（P>0.05）. Kappa test analysis results showed that GPC-3 and CK-19 were moderately consistent with pathological Results in the diagnosis of hepatocellular carcinoma （Kappa values=0.644， 0.537，P<0.05）. The positive expression rate of GPC-3 and CK-19 in tumor tissues with lesion diameter ≥ 5cm was significantly higher than that in tumor tissues with lesion diameter<5cm（Z=-2.808，-2.761，P<0.05）. The positive expression rates of GPC-3 and CK-19 in medium and low differentiated tumor tissues were significantly higher than those in high differentiated tumor tissues（P<0.05）. Conclusion Immunohistochemical detection of GPC-3 and CK-19 has certain diagnostic value for hepatocellular carcinoma. The expression of GPC-3 and CK-19 may be related to the size and differentiation of the lesion.

【Key Words】 Immunohistochemistry； GPC-3； CK-19； Hepatocellular carcinoma

中圖分類號(hào)：R446.6? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1672-1721（2023）34-0113-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.34.037

隨著我國(guó)人口老齡化進(jìn)程的加快和人們飲食結(jié)構(gòu)的改變，肝癌的臨床發(fā)病率和致死率呈逐漸升高趨勢(shì)，給患者身心健康、生活質(zhì)量和生命安全帶來(lái)了極大的影響[1-2]。但是，在實(shí)際臨床中，由于肝癌發(fā)病早期并無(wú)明顯的特異性癥狀表現(xiàn)，多數(shù)患者在確診時(shí)已經(jīng)處于中晚期階段，錯(cuò)失了最佳手術(shù)治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致預(yù)后不佳。因此，加強(qiáng)肝癌的早期篩查具有重要的臨床意義。GPC-3屬于一種癌胚蛋白，與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、分化密切相關(guān)；CK-19是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤標(biāo)志物，尤其在非小細(xì)胞肺癌、食管癌等疾病的診斷中具有一定的參考價(jià)值。有研究指出[3-5]，檢測(cè)肝癌病灶組織中GPC-3和CK-19的表達(dá)可以反映腫瘤細(xì)胞的分化程度和浸潤(rùn)性，用于鑒別、診斷肝癌的靈敏度和準(zhǔn)確度較高?；诖?，本研究選取2010年1月—2022年6月云南省滇南中心醫(yī)院收治的103例疑似肝細(xì)胞癌患者為研究對(duì)象，分析了免疫組化檢測(cè)GPC-3與CK-19對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷價(jià)值，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月—2022年6月云南省滇南中心醫(yī)院收治的103例疑似肝細(xì)胞癌患者為研究對(duì)象，其中男性63例，女性40例；年齡45～72歲，平均年齡（59.18±6.33）歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，且患者及其家屬對(duì)免疫組化驗(yàn)查、病理檢查以及相關(guān)注意事項(xiàng)均知情同意。

納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)和影像學(xué)檢查后診斷為高度可疑肝細(xì)胞癌的患者；生命體征平穩(wěn)；具備正常的溝通能力和理解能力；依從性良好。

排除標(biāo)準(zhǔn)：存在其他已確診的惡性腫瘤患者；存在穿刺或手術(shù)禁忌證者；伴有嚴(yán)重的肝功能、腎功能不全者；凝血功能障礙或存在嚴(yán)重的出血傾向者；上消化道出血患者；自愿退出者。

1.2 方法 對(duì)所有入組患者進(jìn)行病灶組織取樣，取樣后進(jìn)行固定、脫水、透明、包埋、切片等前期處理，獲取切片樣本后進(jìn)行GPC-3、CK-19檢測(cè)。

GPC-3檢測(cè)，采用EnVision兩步法檢測(cè)，將獲取的切片樣本經(jīng)烤片、脫蠟、逐級(jí)乙醇處理后置入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的過(guò)氧化氫溶液中浸泡5 min，隨后取出用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）沖洗3次，每次沖洗5 min。沖洗結(jié)束后，將樣本放入檸檬酸緩沖液（pH值=6.0）中使用高壓鍋進(jìn)行高溫高壓修復(fù)，持續(xù)加熱直到高壓鍋出氣，2 min后調(diào)為中火繼續(xù)加熱，關(guān)火后繼續(xù)燜10 min，再取出置于溫水中冷卻至37 ℃。冷卻后，使用PBS沖洗3次，每次5 min，再加入GPC-3一抗，放入4 ℃的低溫冰箱中保存一夜。次日再使用PBS沖洗3次，每次5 min，使用二氨基聯(lián)苯胺顯色，隨后經(jīng)PBS終止染色后以乙醇由低到高濃度逐級(jí)脫水處理后加入二苯甲，常規(guī)封片。

CK-19檢測(cè)，前期處理與GPC-3檢測(cè)的步驟一致，經(jīng)檸檬酸緩沖液高溫高壓修復(fù)后進(jìn)行冷卻，并在冷卻至37 ℃后進(jìn)行胃酶消化，隨后使用PBS沖洗3次，每次5 min，再加入CK-19一抗，放入4 ℃的低溫冰箱中保存一夜。后續(xù)處理與GPC-3檢測(cè)的步驟一致。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) GPC-3陽(yáng)性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)為，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜染色呈黃色或棕黃色，若陽(yáng)性細(xì)胞占比<10%為陰性（-），10%～30%為弱陽(yáng)性（+），31%～60%為陽(yáng)性（++），>60%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

CK-19陽(yáng)性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)為，上皮細(xì)胞質(zhì)染色呈黃色或棕黃色，若陽(yáng)性細(xì)胞占比<10%為陰性（-），10%～30%為弱陽(yáng)性（+），31%～60%為陽(yáng)性（++），>60%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.4 觀察指標(biāo) 以病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算免疫組化檢測(cè)GPC-3、CK-19診斷肝細(xì)胞癌的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度，評(píng)估二者對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷效能。根據(jù)病理檢查結(jié)果，比較不同病灶直徑、分化程度的腫瘤組織中GPC-3、CK-19的表達(dá)情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)；采用Kappa檢驗(yàn)分析GPC-3、CK-19檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌與病理檢查結(jié)果的一致性；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化檢測(cè)GPC-3、CK-19對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷效能比較 GPC-3檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌的靈敏度為86.1%（62/72）、特異度為80.6%（25/31）、準(zhǔn)確度為84.5%（87/103），CK-19檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌的靈敏度為81.9%（59/72）、特異度為74.2%（23/31）、準(zhǔn)確度為79.6%（82/103），二者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1—表3。Kappa檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，GPC-3、CK-19檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌與病理檢查結(jié)果的一致性中等（Kappa值=0.644、0.537，P<0.05）。

2.2 不同病灶直徑腫瘤組織中GPC-3、CK-19的表達(dá)情況比較 病灶直徑≥5 cm腫瘤組織中的GPC-3、CK-19的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于病灶直徑<5 cm的腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表4。

2.3 不同分化程度腫瘤組織中GPC-3、CK-19的表達(dá)情況比較 中低分化腫瘤組織中GPC-3、CK-19的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于高分化腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表5。

3 討論

肝癌是指發(fā)生在肝臟的原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤，從形態(tài)學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)角度來(lái)看，肝癌可分為肝細(xì)胞癌、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌以及肝細(xì)胞癌合并肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌3種，其中以肝細(xì)胞癌最為常見(jiàn)[6]。相比較而言，肝細(xì)胞癌惡性程度較高，患者病情進(jìn)展快，預(yù)后更差，而且大多數(shù)患者在發(fā)病早期以腹痛腹脹、高熱、肝區(qū)疼痛等非特異性癥狀為主，容易被誤診為肝硬化。近年來(lái)，GPC-3、CK-19作為肝癌標(biāo)志物在臨床研究中被廣泛報(bào)道，它們被認(rèn)為可作為早期診斷肝癌和預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)[7-8]。有研究指出[9]，GPC-3、CK-19在單純肝細(xì)胞癌與良性肝臟病變組織中的陽(yáng)性表達(dá)率存在顯著性差異，尤其在正常的肝組織中，GPC-3的陽(yáng)性表達(dá)率基本為0%。莫小滔[10]選取了40例肝細(xì)胞癌患者為研究對(duì)象，采集病灶組織和癌周組織后采用免疫組化檢測(cè)2種組織中GPC-3和CP-19的表達(dá)，結(jié)果顯示，病灶組織中的GPC-3陽(yáng)性表達(dá)率（85.00% vs 22.50%）和CK-19陽(yáng)性表達(dá)率（20.00% vs 0%）均顯著高于癌周組織（P<0.05）。

GPC-3是磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族成員之一，目前已被證實(shí)在肝細(xì)胞癌組織和血清中均呈高表達(dá)，它可通過(guò)糖基磷脂酰肌醇與靶細(xì)胞結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Wnt/β-catenin信號(hào)促進(jìn)胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅱ分泌，造成肝細(xì)胞異常生長(zhǎng)增殖，導(dǎo)致肝細(xì)胞癌變[11]。CK-19是一種表達(dá)于膽管上皮細(xì)胞的細(xì)胞角蛋白，該物質(zhì)可通過(guò)介導(dǎo)核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路影響P53、IKKβ等基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞癌上皮細(xì)胞-間充質(zhì)的轉(zhuǎn)化，增加癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)能力[12]。也有研究指出[13]，CK-19可以促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞纖維骨架連接，提高肝癌腫瘤細(xì)胞的遷移能力。本研究結(jié)果顯示，GPC-3檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為86.1%、80.6%、84.5%，CK-19檢測(cè)診斷肝細(xì)胞癌的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度分別為81.9%、74.2%、79.6%，二者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且Kappa檢驗(yàn)顯示二者診斷肝細(xì)胞癌與病理檢查結(jié)果的一致性中等（P<0.05）。由此可見(jiàn)，免疫組化檢測(cè)GPC-3、CK-19對(duì)肝細(xì)胞癌具有一定的診斷價(jià)值，可作為臨床輔助診斷肝細(xì)胞癌的有效指標(biāo)，與王澤英[14]的研究結(jié)果相符。

在國(guó)內(nèi)的一項(xiàng)研究中，王娟等[15]選取了98例肝癌患者為研究對(duì)象，采集病灶組織后進(jìn)行免疫組化檢測(cè)GPC-3、CK-19發(fā)現(xiàn)，低分化、中分化肝細(xì)胞癌組織中GPC-3（92.31% vs 88.37% vs 53.33%）、CK-19（30.00% vs 30.51% vs 8.52%）的陽(yáng)性率顯著高于高分化肝細(xì)胞癌組織（P<0.05），認(rèn)為GPC03、CK-19的表達(dá)情況可以反映肝細(xì)胞癌的分化程度，這在本研究中也得以體現(xiàn)。本研究結(jié)果顯示，病灶直徑≥5 cm腫瘤組織和中低分化腫瘤組織的GPC-3、CK-19的陽(yáng)性表達(dá)率均顯著高于病灶直徑<5 cm的腫瘤組織和高分化腫瘤組織（P<0.05）。這表明，GPC-3、CK-19的陽(yáng)性表達(dá)與肝細(xì)胞癌患者病情進(jìn)展有關(guān)。宋微珩等[16]研究也指出，GPC-3在中低分化組織中的陽(yáng)性檢出率為100.00%，明顯高于高分化組織陽(yáng)性檢出率69.23%（P<0.05）。從這些研究結(jié)果中可以看出，GPC-3、CK-19的表達(dá)可能對(duì)評(píng)估患者病情和預(yù)后具有指導(dǎo)意義。

綜上所述，免疫組化檢測(cè)GPC-3、CK-19對(duì)肝細(xì)胞癌具有一定的診斷價(jià)值，二者在病灶組織中的表達(dá)可能與病灶大小、分化程度有關(guān)，可作為臨床早期診斷肝細(xì)胞癌和病情評(píng)估的免疫組化指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

[1] 孟喚男，趙麗，劉柳，等.中西醫(yī)結(jié)合防治原發(fā)性肝癌研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2021，49（2）：115-119.

[2] 姚敏，楊婕，姚登福.環(huán)狀RNA在肝癌進(jìn)展中的作用及其潛在價(jià)值[J].南通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2020，40（3）：197- 202.

[3] BRYCHTOVA V，ZAMPACHOVA V，HRSTKA R，et al.Differential expression of anterior gradient protein 3 in intrahepatic cholangiocarcinoma and hepatocellular carcinoma[J].Exp Mol Pathol，2014，96（3）：375-381.

[4] 梁婷，李榮，王冬梅，等.免疫組化多種抗體聯(lián)合檢測(cè)在肝細(xì)胞癌與相關(guān)良性結(jié)節(jié)鑒別診斷中的應(yīng)用[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2021，27（27）：99-101.

[5] 馬小華，吳坤瑾，黃啟超，等.外周血GPC3在肝細(xì)胞癌臨床診斷中的價(jià)值[J].中國(guó)癌癥防治雜志，2022，14（1）：38-44.

[6] 王曦，李紅.磁共振成像鑒別肝細(xì)胞癌和肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的研究進(jìn)展[J].磁共振成像，2021，12（10）：109-111.

[7] ZHANG R G Y，AI J Y，WANG J K，et al.NCAPG promotes the proliferation of hepatocellular carcinoma through the CKⅡ-dependent regulation of PTEN[J].J Transl Med，2022，20（1）：1-16.

[8] 韓帥，孟帆，張宏凱，等.Ki67、Ck19與肝細(xì)胞癌臨床病理特征和磁共振成像表觀擴(kuò)散系數(shù)的相關(guān)性分析[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2021，101（11）：798-802.

[9] 劉冰，楊帥，費(fèi)錫斌，等.GPC-3聯(lián)合CK-19免疫組化檢測(cè)在肝細(xì)胞癌診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)信息，2019， 32（23）：169-170.

[10] 莫小滔.GPC-3與CK-19免疫組化在肝細(xì)胞癌診斷中的價(jià)值[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2019，29（17）：11-12.

[11] 姚敏，沈水杰，陳潔，等.下調(diào)GPC-3轉(zhuǎn)錄經(jīng)Wnt/β-catenin通路對(duì)肝細(xì)胞癌生長(zhǎng)的抑制作用[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2019，28（9）：972-977.

[12] 鄭秀，袁春旺，崔雄偉，等.細(xì)胞角蛋白19/磷脂酰肌醇蛋白聚糖3表達(dá)模式與肝細(xì)胞癌患者介入治療后復(fù)發(fā)的相關(guān)性[J].中華肝臟病雜志，2020，28（11）：936-941.

[13] 楊曉珍，龍江，趙鵬，等.肝癌分化程度與肝臟CT強(qiáng)化特點(diǎn)及CD34、p53、GPC3、CK19、Ki-67表達(dá)的關(guān)系[J].癌癥進(jìn)展，2018，16（15）：1892-1895.

[14] 王澤英.免疫組化測(cè)定GPC-3、CK-19對(duì)肝細(xì)胞癌的診斷價(jià)值[J].中國(guó)衛(wèi)生工程學(xué)，2022，21（2）：276-278.

[15] 王娟，張曙光，孫穎，等.免疫組化檢測(cè)GPC-3與CK-19在肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，16（14）：1398-1401.

[16] 宋微珩，蓋趙輝，董鑫，等.CK-19與GPC-3聯(lián)合檢測(cè)在肝細(xì)胞癌和膽管細(xì)胞癌診斷中的價(jià)值[J].肝臟，2015，20（3）：232-234.

（收稿日期：2023-10-09）