李宏瑞，魏娟鵬，張 楠，李懷銀，高 明

（蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司，甘肅 蘭州 730046）

青紫藍兔譯稱智利兔、青智利兔、琴其拉兔、山羊青兔、青林子兔，因其被毛顏色酷似南美洲產(chǎn)的珍貴毛皮動物青紫藍色毛絲鼠而得名。它是世界育成較早的皮肉兼用型品種，也是制備單克隆抗體、熱原檢測、眼科研究、皮膚反應(yīng)試驗等最常用的實驗動物之一。腹瀉病是以腹瀉為主要癥狀的一類疾病的統(tǒng)稱，是普通級青紫藍兔養(yǎng)殖過程中的常見疾病，一年四季均可發(fā)生，幼兔發(fā)病最多，死亡率較高?；疾⊥门R床癥狀表現(xiàn)為食欲減退、消化不良，腹瀉和便秘交替發(fā)生，更有繼發(fā)細菌感染、病毒感染、寄生蟲感染的風(fēng)險。腹瀉病的誘因包括但不限于病毒、細菌、寄生蟲感染以及飼養(yǎng)管理、用藥不當(dāng)或應(yīng)激等因素[1]，其中細菌主要包括大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌、銅綠假單胞菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、金黃色葡萄球菌等[2]，病毒主要包括輪狀病毒、細小病毒、腺病毒、冠狀病毒、星狀病毒等，以輪狀病毒最為常見[3]。本試驗解剖的病兔臨死前精神狀態(tài)不佳，喜歡蜷縮臥地，嚴(yán)重腹脹和腹瀉，耳朵和四肢冰涼，部分病兔的糞便呈膠凍樣并有特殊腥臭味，發(fā)病5 d后死亡。通過解剖觀察病兔胃、腸以及部分實質(zhì)器官的組織病理學(xué)特征，旨在為該病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

普通級青紫藍兔，2月齡，由蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司提供。

1.2 主要試劑

甲醛溶液、二甲苯溶液、無水乙醇、切片石蠟，均購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；蘇木素-伊紅染色液，購自南京森貝伽生物科技有限公司；中性樹膠，購自北京索萊寶科技有限公司。

1.3 主要儀器

組織脫水機、組織包埋機、組織切片機，均購自德國美康Microm公司；生物組織攤烤片機，購自孝感市亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 肉眼觀察 解剖病死兔，肉眼觀察其器官病變情況。

1.4.2 組織病理學(xué)觀察 采集病兔胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、膽囊等組織，經(jīng)10%福爾馬林溶液固定后制作石蠟切片，并進行蘇木素-伊紅染色（HE染色）。經(jīng)HE染色后的切片利用德國樹膠進行封片，置于顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果與分析

2.1 肉眼觀察

病兔腹部嚴(yán)重鼓脹，盲腸近端阻塞大量紅棗大小的深黑色干硬糞便（圖1），腸壁極薄并充滿氣體，結(jié)腸內(nèi)有膠凍樣液體（圖2），實質(zhì)器官未見明顯異常。

圖1 腹部眼觀結(jié)果

圖2 結(jié)腸眼觀結(jié)果

2.2 組織病理學(xué)觀察

病兔胃黏膜淺表性糜爛，大量黏膜上皮細胞壞死和脫落，病變周圍有少量嗜中性粒細胞和淋巴細胞浸潤（圖3）。十二指腸黏膜上皮細胞大量壞死和脫落，病變周圍有大量嗜中性粒細胞和淋巴細胞，杯狀上皮細胞分泌亢進（圖4）。空腸黏膜上皮細胞大量壞死和脫落，隱窩細胞變性壞死，病變周圍有少量嗜中性粒細胞和淋巴細胞，空腸黏膜杯狀上皮細胞分泌亢進（圖5）?；啬c黏膜杯狀上皮細胞減少，腸絨毛頂部上皮細胞壞死和脫落，回腸腺泡管腔內(nèi)有膿細胞，腸隱窩細胞變性壞死，黏膜固有層細胞增生，病變周圍及黏膜下大量淋巴細胞浸潤（圖6）。盲腸絨毛頂部上皮細胞壞死和脫落，腸腺管腔擴張，黏膜固有層和黏膜下層水腫，病變周圍少量淋巴細胞浸潤（圖7）。結(jié)腸絨毛上皮細胞結(jié)構(gòu)完整，未見細胞壞死和脫落，黏膜固有層見少量淋巴細胞浸潤（圖8）。直腸絨毛上皮細胞壞死和脫落，腸腺管腔擴張，管腔內(nèi)有一些壞死細胞集聚，黏膜固有層細胞增生，少量淋巴細胞浸潤，黏膜下層顯著水腫（圖9）。心肌組織結(jié)構(gòu)正常，未見異常變化（圖10）。肝小葉結(jié)構(gòu)正常，未見肝細胞變性和壞死，門管區(qū)未見炎癥反應(yīng)，毛細膽管內(nèi)膽汁淤積，小膽管未見異常（圖11）。

圖3 胃的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖4 十二指腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖5 空腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，100×）

圖6 回腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖7 盲腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖8 結(jié)腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖9 直腸的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖10 心臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖11 肝臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

膽囊絨毛呈分支狀，膽囊黏膜水腫，大量黏膜上皮細胞壞死和脫落，大面積黏膜固有層裸露，膽囊黏膜的部分絨毛斷裂明顯，病變周圍有極少量的嗜中性粒細胞和淋巴細胞（圖12）。

圖12 膽囊的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

脾臟白髓組織減少，脾小結(jié)淋巴細胞減少，脾呈現(xiàn)淋巴細胞耗空景象（圖13）。肺臟輕度肺泡性肺炎。肺支氣管黏膜上皮大量壞死和脫落，阻塞氣道。肺泡隔明顯增厚，肺泡腔內(nèi)有大量嗜中性粒細胞和巨噬細胞（圖14）。腎臟輕度間質(zhì)性腎炎。嗜中性粒細胞廣泛浸潤，腎小管管腔擴張，部分腎小管上皮細胞變性和壞死，腎集合管內(nèi)出現(xiàn)細胞管型（圖15）。

圖13 脾臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖14 肺臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

圖15 腎臟的組織病理學(xué)結(jié)果（HE，200×）

3 討論與結(jié)論

青紫藍兔致死性腹瀉病主要發(fā)生在斷奶期，直觀原因可能是對病原體具有保護作用的母乳變成了固定飼料，這種飲食上的強烈改變使幼兔免疫力降低，易受到消化系統(tǒng)疾病和外部刺激的影響，其他諸如病原體、極端溫濕度、母體抗體水平低和遺傳背景等因素也會提高其易感性，這些因素往往共同發(fā)力，給該病的防治帶來挑戰(zhàn)。本試驗病理學(xué)結(jié)果證實了這種復(fù)雜性：病兔大部分器官有不同程度的炎癥，結(jié)合其生長環(huán)境，可能的生物性致炎因子有細菌、病毒等，甚至存在混合感染。病理結(jié)果雖未觀察到不同發(fā)育階段的寄生蟲，但并不排除有寄生蟲的因素，尤其是球蟲。球蟲和大腸桿菌對斷奶幼兔消化道疾病的影響存在相關(guān)性，球蟲除了具有致病性，還能改變腸道的pH值，從而使大腸桿菌過度生長[4]。

復(fù)雜的病因使疫苗研制只能針對具體某一誘因進行相關(guān)研究，Zhao等[5]成功分離出一株名為Z317的兔星狀病毒株，分析了Z317衣殼（Cap）蛋白的基本特性，篩選出了10個線性B細胞表位，為后續(xù)研究兔星狀病毒對家兔的影響進行了前期探索；Pu等[6]證明了艾美爾球蟲的表面抗原rEmSAG10可以誘導(dǎo)體液免疫和細胞免疫，是兔大型艾美爾球蟲重組亞單位疫苗的候選抗原。除了接種疫苗外，加強飼養(yǎng)管理也是預(yù)防青紫藍兔致死性腹瀉病的方法[7]，如訪問管理，嚴(yán)格規(guī)范訪客的移動區(qū)域；健康管理，實時監(jiān)測和治療疾病、制定檢疫規(guī)程；運營管理，包括尸體和廢棄物的處置、設(shè)施管理、飲水安全、害蟲控制措施等；飼喂方面，適量的飼喂限制可以降低腹瀉率和死亡率，并提高消化酶活性和抗氧化能力[8]。此外，避免冷應(yīng)激也非常重要，冷應(yīng)激會破壞青紫藍兔腸道菌群的平衡性。冬季飼喂溫水可提高幼兔的生長性能并優(yōu)化其腸道菌群[9]。

使用抗生素治療家兔腹瀉病也是常用方法，但抗生素耐藥性和藥物殘留問題一直備受關(guān)注。Wang等[10]的研究表明，在斷奶兔腹瀉病發(fā)病機制中，腸道微生物群的改變與無抗生素飼料引起的腹瀉有關(guān)。益生菌、益生元、合生元、酶、細菌素、有機酸、草藥及其提取物等天然物質(zhì)作為抗生素的替代物，在控制微生物群、避免胃腸道功能紊亂、改善腸道健康和提高機體免疫力方面表現(xiàn)優(yōu)異[11]。Liu等[12]探尋了在不使用抗生素的情況下預(yù)防家兔腹瀉病的方法，發(fā)現(xiàn)泛醌和其他萜類化合物可以增加腺苷5'-單磷酸（AMP）激活蛋白激酶的活性，促進細胞代謝和自噬，有預(yù)防炎癥和緩解腸道疾病癥狀的可能。韓昱等[13]發(fā)現(xiàn)中草藥復(fù)方中使用黨參和黃芪對仔兔氣血進行滋補，可以提高仔兔機體抗病力和免疫力，從而顯著降低斷奶仔兔腹瀉率和死亡率。Liu等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在兔飼料中添加艾草可以降低兔腹瀉發(fā)生率并調(diào)節(jié)其腸道免疫功能，而不會影響生長性能。Wang等[15]研究表明，芽孢桿菌菌株混合物可以減輕產(chǎn)腸毒素大腸桿菌引起的損傷，并通過改善斷奶獺兔的特定腸道微生物群成員和免疫力來增強抗病能力。因此，患致死性腹瀉病的普通級青紫藍兔大部分器官患有不同程度的炎癥，可能的生物性致炎因子有細菌、病毒等，甚至存在混合感染。在防治該病時，建議加強飼養(yǎng)管理，同時進行藥物干預(yù)，從而提高機體抗病能力。