【摘要】目的：為探究我州何首烏產(chǎn)收年限與有效成分累積水平的關(guān)系，采用《中華人民共和國(guó)藥典》2020版一部中何首烏項(xiàng)下的二苯乙烯苷和蒽醌類含量測(cè)定方法，測(cè)定二苯乙烯苷和蒽醌類的含量，以確定何首烏的適宜采收年限。結(jié)果：二苯乙烯苷平均值為1.93%，最大值為3.34%，最小值為0.44%；結(jié)合蒽醌平均值為0.30%，最大值為0.70%，最小值為0.07%。結(jié)論：安龍3年生達(dá)最大值，分別為二苯乙烯苷3.3%和蒽醌類0.7%。安龍縣品質(zhì)最佳，普安次之，白碗窯較次。采收年限可選擇第一年采收，將3年生何首烏作為精品藥材生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】何首烏；采收年限；含量測(cè)定；二苯乙烯苷；結(jié)合蒽醌

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.04.007

【基金項(xiàng)目】黔西南州科技局-科技支撐計(jì)劃（2018-1-12號(hào)）：黔西南州主產(chǎn)區(qū)何首烏品質(zhì)檢測(cè)及最佳采收年限考察。

Quality Testing and Optimal Harvesting Period Investigation of Fleeceflower Root from Different Production Areas in Qianxinan Prefecture

JIN Zhao， WANG Dandan*， LIU Zhihai， PENG Qili

（Qiannan Prefecture Inspection and Testing Center， Xingyi 562400， China）

Abstract： Objective： To explore the relationship between the production and harvest years of fleeceflower root. in our province and the accumulation level of active ingredients， the content determination method of diphenylene glycoside and anthraquinone under the heading of fleeceflower root in Part 1 of the 2020 Edition of the Pharmacopoeia of the People’s Republic of China was used to determine the suitable harvesting period of fleeceflower root. Result： The average value of stilbene glycoside was 1.93%，the maximum value was 3.34%， and the minimum value was 0.44%. the average value of bound anthraquinone was 0.30%， the maximum was 0.70%， and the minimum value was 0.07%. Conclusion： Anlong’s 3-year lifespan reached its maximum value， with stilbene glycoside at 3.3% and anthraquinone at 0.7%， respectively. Anlong County has the best quality， followed by Pu’an and Baiwan Kiln. The harvesting period can be selected from the first year， and the three-year old fleeceflower root can be used as a high-quality medicinal material for production.

Keywords： fleeceflower root； harvest period； content determination； diphenylene glycoside； combining anthraquinone

何首烏又名多花蓼、紫烏藤、夜交藤等，是蓼科何首烏屬多年生纏繞藤本植物。其塊根入藥，性溫，味苦、甘、澀，入心、肝經(jīng)；生首烏可安神、養(yǎng)血、活絡(luò)、解毒（截瘧）、消癰、潤(rùn)腸通便；制首烏可益精血、補(bǔ)肝腎、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨、化濁降脂[1]。何首烏有延緩衰老之功效，在臨床治療高脂血癥已取得較好療效，其提取物能減輕動(dòng)脈粥樣硬化癥狀，同時(shí)能夠增加冠脈血流量，改善心肌缺血，增強(qiáng)免疫，改善神經(jīng)衰弱，抗骨質(zhì)疏松[2-3]。何首烏收錄于《中華人民共和國(guó)藥典》2020版一部（以下簡(jiǎn)稱《藥典》）?！端幍洹穼?duì)何首烏除了常規(guī)鑒別外，還要求藥材水分不得超過(guò)10.0%，其主要有效成分二苯乙烯苷以干燥品計(jì)不得少于1.0%，結(jié)合蒽醌以干燥品計(jì)不得少于0.05%。

何首烏主要活性成分為2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和蒽醌類等化合物，二苯乙烯苷、總蒽醌的含量受種植地區(qū)和采收年限的影響較大[4]。黔西南州生態(tài)環(huán)境類型多樣，氣候溫潤(rùn)，材質(zhì)良好、品質(zhì)高，具有道地性。目前，黔西南州的多縣市充分利用地理和氣候優(yōu)勢(shì)，結(jié)合扶貧推進(jìn)項(xiàng)目，發(fā)展以何首烏為主的中藥材種植產(chǎn)業(yè)。然而，對(duì)于黔西南州何首烏品質(zhì)的研究相對(duì)較少，尤其是不同生長(zhǎng)年限何首烏中二苯乙烯苷、蒽醌類含量的積累情況尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。為考察黔西南州所產(chǎn)何首烏的產(chǎn)收年限與有效成分累積水平的關(guān)系，本研究檢測(cè)何首烏的二苯乙烯苷和結(jié)合蒽醌的含量，以確定何首烏的適宜采收年限。

1材料、儀器與方法

1.1材料

普安、安龍、白碗窯何首烏藥材共9批次何首烏來(lái)源見(jiàn)表1。經(jīng)鑒定為何首烏的干燥根莖，是由黔西南州檢驗(yàn)檢測(cè)中心副主任藥師劉志海鑒定。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β- D-葡萄糖苷（批號(hào)：110844-201915，純度：90.7%，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院）；大黃素（批號(hào)：110756-201512，純度：98.7%，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院）、大黃素甲醚（批號(hào)：110758-201817，純度：99.2%，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇和乙腈（色譜純，德國(guó)默克公司）；水（娃哈哈蒸餾水），其余試劑均為分析純。

1.2儀器

Waters e2695高效液相色譜儀，日本SHIMADZU公司AUY220型萬(wàn)分之一電子分析天平，日本SHIMADZU公司AUW220D型十萬(wàn)分之一電子分析天平，DFF型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)；DK-98-M單列四孔電熱恒溫水浴鍋，HS10260D型超聲波清洗儀。

1.3方法

1.3.1對(duì)照物質(zhì)的制備

精密稱取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成0.219 mg/mL的溶液，即得；精密稱取大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品適量，加甲醇制成含大黃素122.1μg/mL、大黃素甲醚37.8μg/mL的混合對(duì)照品溶液[1]。

1.3.2樣品溶液的制備

二苯乙烯苷樣品溶液的制備：取何首烏藥材，粉碎，過(guò)四號(hào)篩，混勻，取粉末約0.2 g，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25 mL后稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，上清液濾過(guò)，取續(xù)濾液作為樣品溶液。

游離蒽醌樣品溶液的制備：取何首烏藥材，粉碎，過(guò)四號(hào)篩，混勻，取粉末約1 g，精密稱定，置于100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1 h，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液5 mL作為供試品溶液A（測(cè)游離蒽醌用）。另精密量取續(xù)濾液25 mL，置于具塞錐形瓶中，水浴蒸干，精密加入8%鹽酸溶液 20 mL，超聲處理5 min，加三氯甲烷20 mL，水浴中加熱回流1 h，取出，立即冷卻，倒入分液漏斗中，酸液用三氯甲烷振搖提取3次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液B（測(cè)總蒽醌用）。結(jié)合蒽醌=總蒽醌的含量-游離蒽醌的含量。

1.3.3色譜條件

色譜柱：Hypersil GPLD C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）、ACE EXCEL C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；二苯乙烯苷流動(dòng)相：乙腈-水（25∶75）；結(jié)合蒽醌流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20）；柱溫：30℃；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：二苯乙烯苷為320 nm，結(jié)合蒽醌為254 nm。

3結(jié)果與分析

3.1黔西南州不同地區(qū)何首烏中二苯乙烯苷含量隨生長(zhǎng)年限的變化

由表2可看出，二苯乙烯苷平均值為1.93%，二苯乙烯苷最大值為3.3%，二苯乙烯苷最小值為0.4%。對(duì)于二苯乙烯苷含量，安龍縣三年生最大值為3.3%，普安產(chǎn)兩年生最大值為2.4%，白碗窯三年生最大值為1.2%。從二苯乙烯苷含量來(lái)看，一年生和三年生中以安龍縣產(chǎn)何首烏質(zhì)量最佳，一年生二苯乙烯苷含量即達(dá)到3.2%，普安縣一年生二苯乙烯苷含量達(dá)到2.2%，亦顯示較好質(zhì)量水平，白碗窯一年生含量較低為0.4%。

3.2黔西南州不同地區(qū)何首烏中蒽醌含量隨生長(zhǎng)年限的變化

由表2可看出，總蒽醌含量與游離態(tài)、結(jié)合態(tài)2種形態(tài)蒽醌含量的變化趨勢(shì)一致，結(jié)合蒽醌含量高于游離蒽醌含量。結(jié)合蒽醌平均值為0.30%，結(jié)合蒽醌最大值為0.70%，結(jié)合蒽醌最小值為0.07%。安龍、普安、白碗窯所產(chǎn)何首烏的結(jié)合蒽醌含量隨年份增加均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。安龍、普安、白碗窯3年生的結(jié)合蒽醌含量最高分別為0.70%、0.39%、0.26%。從結(jié)合蒽醌含量來(lái)看，安龍縣產(chǎn)何首烏質(zhì)量最佳，普安縣較好，白碗窯次之。

4討論

何首烏對(duì)生長(zhǎng)條件要求不嚴(yán)苛，在我國(guó)多地區(qū)都有栽培種植，主要栽培地有陜西、甘肅、江蘇、浙江、安徽、福建、江西，河南、湖北、湖南、廣東、廣西、海南，以及貴州、重慶、四川東部、云南部分地區(qū)等。何首烏是貴州省道地藥材之一，在黔西南州種植歷史悠久。黔西南州屬于亞熱帶季風(fēng)濕潤(rùn)氣候區(qū)，氣候溫和，雨量充沛，冬無(wú)霜寒，夏無(wú)酷暑，具有低緯度高海拔的特點(diǎn)。何首烏的質(zhì)量主要以二苯乙烯苷和蒽醌類含量為依據(jù)，不同產(chǎn)地何首烏的二苯乙烯苷和結(jié)合蒽醌含量差異明顯。此次研究，我們廣泛收集了普安、安龍等地區(qū)的何首烏樣品，對(duì)《藥典》規(guī)定的指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果顯示，在黔西南州產(chǎn)何首烏9批次中，二苯乙烯苷含量測(cè)定達(dá)到《藥典》要求的有7批次，達(dá)標(biāo)率為77.8%；結(jié)合蒽醌含量測(cè)定達(dá)到《藥典》要求的有9批次，達(dá)標(biāo)率為100%。另外，何首烏用量較大，野生資源消耗快，因而應(yīng)加快何首烏人工栽培。前期研究也表明，盡管何首烏栽培品因產(chǎn)地、栽培技術(shù)的不同而表現(xiàn)出活性成分含量差異，但其品質(zhì)基本與野生品相近。故擴(kuò)大人工栽培能充分彌補(bǔ)市場(chǎng)需求空缺，保護(hù)野生種植資源。

研究表明，何首烏中二苯乙烯苷具有保護(hù)神經(jīng)、改善記憶、抗氧化等作用。蒽醌類成分是解毒消癰、潤(rùn)腸通便的關(guān)鍵物質(zhì)基礎(chǔ)，其中結(jié)合型蒽醌瀉下通便作用遠(yuǎn)強(qiáng)于游離型蒽醌。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，何首烏樣品中結(jié)合蒽醌含量隨生長(zhǎng)年限不斷上升，同時(shí)游離蒽醌含量也呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，這說(shuō)明結(jié)合蒽醌和游離蒽醌在前三年迅速積累。

5結(jié)束語(yǔ)

在黔西南州人工栽培何首烏中，有7批次的二苯乙烯苷含量符合藥用標(biāo)準(zhǔn)；結(jié)合蒽醌含量全部符合藥用標(biāo)準(zhǔn)，以安龍產(chǎn)（三年）何首烏品質(zhì)最佳，普安次之，白碗窯次之，這主要是因?yàn)榉N植水平較為先進(jìn)，也可能是安龍較低的海拔和適宜的夏季溫度利于何首烏有效成分的富集。三年生栽培何首烏中二苯乙烯苷含量明顯高于一年生，而一年生何首烏已符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，故可選擇一年采收，將三年生何首烏作為精品藥材生產(chǎn)。

【參考文獻(xiàn)】

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2020年版一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020.

[2]俞云，汪佰莉，張雨，等.何首烏苷對(duì)亞急性衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬內(nèi)ChAT和AChE表達(dá)的影響[J].四川動(dòng)物，2017，36（1）：48-53.

[3]黃曉冰，黃靄霞，王光寧，等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分的含量[J].食品與藥品，2019，21（2）：111-115.

[4]李帥鋒，鄭傳柱，張麗，等.不同采收期對(duì)何首烏中二苯乙烯苷和蒽醌類成分含量的影響[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2015，17（11）：1177-1179，1183.

【作者簡(jiǎn)介】

金昭，女，1985年出生，執(zhí)業(yè)中藥師，學(xué)士，研究方向?yàn)橹兴?、民族藥和中成藥質(zhì)量控制。

通信作者：王丹丹，女，1995年出生，執(zhí)業(yè)藥師，碩士，研究方向?yàn)橹兴?、民族藥和中成藥質(zhì)量控制。zunyiwangdd@163.com。

（編輯：侯睿琪）