国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

小兒柴桂退熱口服液治療冠狀病毒感染的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

2023-12-25 12:49曹文軒秦瑞瞳李麗靜
人參研究 2023年6期
關(guān)鍵詞:谷甾醇靶點(diǎn)化合物

劉 佳,曹文軒,黃 劍,秦瑞瞳,李麗靜,于 澎

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,長(zhǎng)春 130117;2.東北師范大學(xué)藥物基因和蛋白篩選國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室,長(zhǎng)春 130117;3.華東理工大學(xué)生物工程學(xué)院,上海 200237)

冠狀病毒(Coronaviruses, CoVs)是廣泛存在于自然界的是一種有包膜的單鏈RNA 病毒,被國(guó)際病毒學(xué)分類委員會(huì)分為α、β、γ 和δ,共4 個(gè)屬[1]。 冠狀病毒的廣泛分布,人—?jiǎng)游镛D(zhuǎn)化和基因材料的頻繁重組可能是導(dǎo)致冠狀病毒在人類中頻繁和周期性出現(xiàn)的原因[2-4]。 作為一種人畜共患病毒,它極大的威脅了人類和動(dòng)物的安全。 目前已明確7 種CoVs 可使人類感染, 包括HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV 和SARS-CoV-2[5]。 其中2002年的SARS - CoV 和2019年肆虐全球的SARS-CoV-2 的感染人數(shù)和死亡人數(shù)令人痛心。

研究表明,1~3 歲的幼兒是冠狀病毒的感染重災(zāi)區(qū),但多為輕癥,主要為呼吸道感染,也存在肺外表觀。 其中HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1 每年均會(huì)引起大量感染,且兒童感染頻率高于成人[6,7]。也有報(bào)道稱HCoV-HKU1 可能誘發(fā)幼兒急性哮喘的發(fā)作[8]。 自SARS- CoV-2 感染爆發(fā)至2022年大部分地區(qū)實(shí)施常態(tài)化管理后, 兒童感染后多系統(tǒng)炎癥綜合征導(dǎo)致病癥較明顯,因此不能忽視兒童感染CoVs 所帶來(lái)的潛在風(fēng)險(xiǎn)[9]。

中醫(yī)藥在防治CI 的工作中扮演著重要的角色,結(jié)合冠狀病毒所引發(fā)的致病特點(diǎn)和臨床癥狀,CI 病灶主要集中在肺部,屬于“瘟病”范疇,以“濕、熱、毒、瘀、虛”為主要病機(jī)[10]。 小兒柴桂退熱口服液(Xiaoer Chaigui Tuire Oral Liquid,XCTOL)是近年來(lái)在臨床應(yīng)用較多的一種純中藥制劑,該藥物對(duì)SARS-CoV-2 變異株兒童感染者引起的發(fā)熱、頭痛、咳嗽,黃鼻涕等癥狀效果良好[11,12]。 臨床研究表明,XCTOL 能有效對(duì)抗病毒感染,提高機(jī)體抵抗力,增加合并用藥的治療效果,縮短臨床治療時(shí)間[13]。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)被認(rèn)為是一種用于探究中藥復(fù)方作用機(jī)制和開(kāi)發(fā)新藥的創(chuàng)新方式[14]。 分子對(duì)接技術(shù)也是新藥結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)和計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)的重要途徑。 本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)探究XCTOL 中的活性化合物,預(yù)測(cè)其對(duì)抗CI 的潛在機(jī)制,探索其活性化合物與關(guān)鍵作用蛋白的對(duì)接關(guān)系[15,16]。結(jié)合對(duì)XCTOL 以往的研究, 本文將應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)合分子對(duì)接的方法探討XCTOL 對(duì)CI 的治療靶點(diǎn)以及起到治療效果的主要成分。

1 資料與方法

1.1 XCTOL 活性成分篩選

利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)[17](TCMSP,https://tcmsp-e.com/)對(duì)XCTOL 中所含中藥進(jìn)行對(duì)應(yīng)活性成分檢索,包括柴胡、桂枝、葛根、浮萍、黃芩、白芍、蟬蛻。 以口服生物利用度(OB)≥30%及類藥性(DL)0.18 作為篩選條件,構(gòu)建XCTOL 活性成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)。

1.2 XCTOL 活性成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

利用Pubchem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)XCTOL 組方中活性成分化學(xué)信息進(jìn)行檢索,從中獲得SMILE 號(hào),將SMILE 號(hào)導(dǎo)入SwissTarget Prediction 靶點(diǎn)預(yù)測(cè)平臺(tái),設(shè)置種屬為“homo sapiens”,進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè),將得到的靶點(diǎn)進(jìn)行整合和去重處理。

1.3 冠狀病毒疾病靶點(diǎn)檢索

以“Coronavirus”為檢索關(guān)鍵詞,利用Genecard 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)冠狀病毒疾病靶點(diǎn)進(jìn)行檢索,將得到的靶點(diǎn)進(jìn)行整合和去重處理。

1.4 交集靶點(diǎn)篩選及Venn 圖繪制

在Venny2.1.0 平臺(tái)分別錄入XCTOL 和CoVs 的對(duì)應(yīng)靶點(diǎn),得到兩者的交集,作為XCTOL 治療CoVs的潛在作用靶點(diǎn),并將其進(jìn)行可視化處理。

1.5 中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將XCTOL 中活性成分及其預(yù)測(cè)的靶點(diǎn)、 疾病靶點(diǎn)和中藥分別導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 軟件中, 構(gòu)建 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò),并進(jìn)行可視化處理,其中中藥、活性成分、靶點(diǎn)交集和非靶點(diǎn)交集分別用不同的形狀和顏色表示。

1.6 蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)(PPI)構(gòu)建

將XCTOL 與CoVs 的交集靶點(diǎn)輸入至STRING(https://cn.string-db.org/) 平臺(tái), 設(shè)置種類為“Homo sapiens” 獲取蛋白相互作用信息。 將作用結(jié)果導(dǎo)入至Cytoscape3.7.2 軟件中進(jìn)行可視化處理并進(jìn)行拓?fù)浞治?,根?jù)Degree 值的大小進(jìn)行排序,篩選出核心靶點(diǎn)。

1.7 富集分析

選取XCTOL 與CoVs 的交集靶點(diǎn), 利用DAVID(https://david.ncifcrf.gov/) 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)其進(jìn)行GO(gene ontology)和KEGG 通路分析,分析XCTOL 抗CI 的生物過(guò)程和信號(hào)通路。

1.8 分子對(duì)接分析

利用Pubchem 數(shù)據(jù)庫(kù)下載XCTOL 中活性化合物SDF 格式的3D 結(jié)構(gòu),利用Open Babel 軟件將其轉(zhuǎn)換為pdb 格式。 利用PDB(https://www1.rcsb.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索并下載蛋白質(zhì)小分子的晶體結(jié)構(gòu), 運(yùn)用Autodock 1.5.6 軟件分別對(duì)化合物及靶蛋白進(jìn)行加氫及加電荷處理,保存為pdbqt 格式。 將保存后的靶蛋白作為受體,化合物作為配體,在Autodock 1.5.6 軟件進(jìn)行分子對(duì)接, 對(duì)接的結(jié)果以結(jié)合能Binding Energy給出,以pdbqt 格式保存,Pymol 軟件將結(jié)果進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果

2.1 XCTOL 活性成分篩選

通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索和篩選得到XCTOL 中活性化合物共74 個(gè)(共有成分4 個(gè)),其中柴胡13 個(gè),桂枝3個(gè),葛根4 個(gè),浮萍6 個(gè),黃芩32 個(gè),白芍8 個(gè),蟬蛻8 個(gè)。 XCTOL 中部分活性化合物基本信息見(jiàn)表1。

2.2 “中藥-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

該網(wǎng)絡(luò)共有975 個(gè)節(jié)點(diǎn), 其中包含7 個(gè)藥物節(jié)點(diǎn)、79 個(gè)活性成分節(jié)點(diǎn)和889 個(gè)靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn),共有7332條邊。其中中心圓形代表藥物,外周圓形代表化合物,青色方形代表靶點(diǎn),紅色方形代表共有成分,每條邊表示節(jié)點(diǎn)之間的相互作用關(guān)系,詳見(jiàn)圖1。 對(duì)構(gòu)建后的網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治觯Y(jié)果表明,包括β-谷甾醇、槲皮素、谷甾醇、山奈酚和芍藥苷在內(nèi)的60 種活性化合物的Degree 值大于100,說(shuō)明這些化合物與超過(guò)100個(gè)疾病靶點(diǎn)之間形成相互作用, 這些可能是XCTOL作用與新冠病毒的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。隨后對(duì)網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行拓?fù)浞治觯?根據(jù)Degree 值排名篩選出排名前五的化合物,作為關(guān)鍵化合物。

圖1 XCTOL-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

2.3 XCTOL 治療COVID-19 的潛在作用靶點(diǎn)

通過(guò)Genecard 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到冠狀病毒相關(guān)靶點(diǎn)1650 個(gè), 與XCTOL 靶點(diǎn)進(jìn)行映射后獲得交集靶點(diǎn)169 個(gè), 以上結(jié)果運(yùn)用Venny 平臺(tái)進(jìn)行可視化處理,詳見(jiàn)圖2。

圖2 XCTOL-冠狀病毒作用靶點(diǎn)示意圖

2.4 蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析

PPI 網(wǎng)絡(luò)圖顯示該網(wǎng)絡(luò)共有136 個(gè)節(jié)點(diǎn)和1874條邊,平均Degree 值為27.55,圖中節(jié)點(diǎn)大小與Degree值成正比關(guān)系,節(jié)點(diǎn)的Degree 值越大,圖中顯示的節(jié)點(diǎn)越大。 Degree 值代表了蛋白與蛋白之間作用的強(qiáng)弱,作用較強(qiáng)的蛋白可能在生物學(xué)功能中發(fā)揮著重要作用。 其中PPI 網(wǎng)絡(luò)中Degree 值排名前5 的蛋白為腫瘤壞死因子(TNF)、血清白蛋白(ALB)、腫瘤抑制蛋白p53(TP53)、胱天蛋白酶3(CASP3)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGFA),這些靶蛋白可能是XCTOL 發(fā)揮抗冠狀病毒作用的關(guān)鍵靶點(diǎn),詳見(jiàn)圖3。

圖3 XCTOL 治療冠狀病毒的靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)

2.5 富集分析

通過(guò)DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)XCTOL 與CoVs 交集靶點(diǎn)進(jìn)行富集分析, 選取富集顯著性排名前10 的GO 分析結(jié)果進(jìn)行整理, 包括BP、MF 和CC 條目共30 個(gè),詳見(jiàn)圖4。其中BP 主要涉及調(diào)控蛋白質(zhì)磷酸化、正向基因表達(dá)、 炎癥反應(yīng)和DNA 損傷的內(nèi)在凋亡信號(hào)等過(guò)程;CC 主要定位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞外間質(zhì)、細(xì)胞表面和胞質(zhì)核周區(qū)等位置;MF 主要涉及調(diào)控蛋白結(jié)合、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、酶結(jié)合、ATP 結(jié)合及蛋白激酶活性等方面。

圖4 GO 生物功能分析

通過(guò)DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)XCTOL 與冠狀病毒交集靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG 通路富集分析, 選取P 值排名前20的通路進(jìn)行整理和分析,詳見(jiàn)圖5。 主要富集在HIF1信號(hào)通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路、VEGF 信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、流感和肝炎病毒等信號(hào)通路。

圖5 KEGG 通路分析

2.6 分子對(duì)接分析

選取XCTOL 中關(guān)鍵化合物分別與PPI 分析中的關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接,結(jié)合能(Binding Affinity)小于0 說(shuō)明化合物與靶蛋白之間具有對(duì)接活性,選取對(duì)接活性最佳的化合物和蛋白對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化分析, 詳見(jiàn)圖6。 小分子beta-sitosterol (β-谷甾醇)和stigmasterol(豆甾醇)與配體蛋白的對(duì)接活性高于其他小分子。

圖6 分子對(duì)接能量熱圖和分子蛋白之間詳細(xì)對(duì)接位點(diǎn)(C1:beta-sitosterol ;C2:kaempferol;C3:paeoniflorin;C4:quercetin;C5:stigmasterol)

3 討論

CoVs 是自然界中存在較為廣泛的一類病毒,研究表明CoVs 會(huì)導(dǎo)致人和動(dòng)物的呼吸道、 消化道和神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病[18]。 當(dāng)細(xì)胞遭受HCoV-229E 病毒感染后,幾乎會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞因子風(fēng)暴相關(guān)炎性因子大量分泌現(xiàn)象,進(jìn)而出現(xiàn)病毒感染癥狀[19]。 CoVs 入侵細(xì)胞還可能會(huì)“劫持”自噬途徑,利用自噬膜結(jié)構(gòu)特點(diǎn)促進(jìn)自身復(fù)制,加劇CI 癥狀[20]。 其中不同類人群感染CoVs的嚴(yán)重程度亦有區(qū)分, 例如新生兒和有基礎(chǔ)病感染SARS-CoV-2 的重癥率、死亡率更高[21],兒童相比于成人感染HCoV-229E 有可能引起嚴(yán)重的呼吸道感染癥狀[22]。 但是,并不是所有的藥物都適用于兒童,例如美國(guó)FDA 在2021年先后批復(fù)包括巴尼韋單抗、埃特司韋單抗等在內(nèi)的用于預(yù)防或治療SARS-CoV-2 的藥物[23],目前只能用于部分成人及12 歲以上的兒童。目前,中醫(yī)藥治療CI 在全國(guó)各地得到了廣泛應(yīng)用,例如XCTOL 作為純中藥制劑, 用于治療流感病毒導(dǎo)致的肺炎等癥,值得深挖和推廣。

本研究從XCTOL 中篩選出5 個(gè)關(guān)鍵活性成分—β-谷甾醇(beta-sitosterol)、豆甾醇(Stigmasterol)、槲皮素 (quercetin)、 山奈酚 (kaempferol) 和芍藥苷(Paeoniflorin)。 利用分子對(duì)接技術(shù)將以上關(guān)鍵成分與PPI 分析中的關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行對(duì)接,結(jié)果表明β-谷甾醇和豆甾醇與靶蛋白的親和力較強(qiáng)。 這提示β-谷甾醇和豆甾醇可能在XCTOL 治療CI 中發(fā)揮重要作用。 β-谷甾醇和豆甾醇同屬于植物甾醇—一類曾被譽(yù)為“生命鑰匙”的天然產(chǎn)物,具有抗氧化,免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用等[24]。 其中,β-谷甾醇可以通過(guò)抑制炎癥小體NLRP3 的激活抑制casp1 的產(chǎn)生以及MAPK 信號(hào)通路的激活,從而抑制TNF-α,白介素-1β,6,8 的分泌起到抗炎作用[25]。 豆甾醇可以抑制多種炎癥介質(zhì)和基質(zhì)的降解, 通過(guò)阻礙IL-1β 誘導(dǎo)的NF-κB 通路來(lái)發(fā)揮其抑制炎癥, 還可以明顯減少炎癥環(huán)境中COX-2 和iNOS mRNA 的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用[26,27]。

KEGG 通路分析顯示,XCTOL 與CI 共有靶點(diǎn)主要富集在HIF1 信號(hào)通路、PI3K-Akt 信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路、 流感和肝炎病毒等信號(hào)通路。 HIF-1 信號(hào)通路參與不依賴O2的能量生產(chǎn)和血管生成(如VEGF)及紅細(xì)胞生成,從而增加組織的氧氣輸送[28,29]。 CI 患者通常表現(xiàn)出B 淋巴細(xì)胞水平降低,這可能與HIF-1 激活有關(guān)[30]。 缺氧和HIF-1 信號(hào)的激活削弱了IgG 抗體的產(chǎn)生, 同時(shí)HIF-1α 操作B細(xì)胞Ig 同型變異, 影響了二次免疫的過(guò)程, 導(dǎo)致SARS-CoV-2 患者免疫過(guò)程受阻[31]。 PI3K-Akt 信號(hào)通路在調(diào)控炎癥細(xì)胞激活和傳遞素釋放過(guò)程中起重要作用,是呼吸道慢性炎癥發(fā)生過(guò)程中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)路徑[32]。有研究表明,SARS-CoV-2 刺突通過(guò)細(xì)胞內(nèi)ROS 抑制的PI3K/AKT/mTOR 軸誘導(dǎo)自噬, 進(jìn)而導(dǎo)致受感染細(xì)胞的炎癥反應(yīng)和凋亡[33]。 VEGF 是一種強(qiáng)有力的血管通透性因子, 在SARS-CoV-2 感染的肺組織中誘導(dǎo)血管滲漏,導(dǎo)致血漿外滲和肺水腫,進(jìn)一步加劇組織缺氧[34,35]。有研究表明,SARS-CoV-2 患者的尸檢中發(fā)現(xiàn)感染的肺泡組織中存在大量的外滲物質(zhì)[36,37],重癥患者體內(nèi)VEGF 水平顯著升高[38], 這提示發(fā)生了VEGF 誘導(dǎo)的嚴(yán)重血管效應(yīng)。在SARS-CoV-2 誘導(dǎo)的細(xì)胞因子中,TNF-α 通過(guò)誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞死亡,在損傷重要器官中發(fā)揮作用。 臨床研究表明抑制TNF 信號(hào)通路不會(huì)導(dǎo)致病毒的重復(fù)感染,這對(duì)患者而言是有益的[39]。

PPI 網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果顯示,除TNF 和VEGFA 之外,血清白蛋白(ALB)、腫瘤抑制蛋白p53(TP53)、胱天蛋白酶3(CASP3)作為XCTOL 發(fā)揮治療COVID-19作用的關(guān)鍵靶基因也參與了調(diào)控過(guò)程。ALB 約占血清總蛋白的50%,其參與自由基清除、維持膠體滲透壓的生物過(guò)程,是與營(yíng)養(yǎng)狀況和全身炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的一項(xiàng)指標(biāo)[40]。 同時(shí)ALB 是預(yù)測(cè)CI 嚴(yán)重程度的一項(xiàng)重要指標(biāo),當(dāng)出現(xiàn)病毒感染時(shí),患者基礎(chǔ)代謝率較高,肝功能受損導(dǎo)致ALB 的合成受阻,ALB 表現(xiàn)出水平降低[41]。 TP53 基因與癌癥的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān),幾乎所有的癌癥都具有TP53 基因異常這一共同特征,其實(shí)質(zhì)是基因突變[42]。 有研究表明,TP53 基因?qū)ωi的SARS-CoV-2 相關(guān)蛋白ACE2 受體蛋白具有組織和性別特異性調(diào)控作用[43],同時(shí)有研究報(bào)道TP53 通過(guò)ACE2 在人體內(nèi)降解抑制冠狀病毒的復(fù)制, 并在豬的冠狀病毒感染中可抑制豬體內(nèi)干擾素介導(dǎo)的抗病毒免疫[44]。 CASP3 由啟動(dòng)因子caspase 激活,活化的CASP3催化許多細(xì)胞蛋白,在DNA 斷裂、核坍塌、染色質(zhì)凝聚等過(guò)程中發(fā)揮作用[45]。CI 患者由于病毒感染激發(fā)的氧化應(yīng)激增加活性氧(ROS)的產(chǎn)生[46],高水平的ROS產(chǎn)生可能啟動(dòng)細(xì)胞凋亡過(guò)程[47],CASP3 會(huì)參與這一過(guò)程。XCTOL 以多靶點(diǎn)和多通路的方式調(diào)控CoVs 入侵機(jī)體后的多個(gè)生物過(guò)程,這可能是其發(fā)揮作用的潛在分子機(jī)制,也是未來(lái)相關(guān)藥物設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)的切入點(diǎn)。

綜上所述,本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)相結(jié)合的手段, 篩選XCTOL 中活性成分與關(guān)鍵靶蛋白相互作用的關(guān)鍵活性成分和信號(hào)通路,表明其可能通過(guò)調(diào)控炎癥反應(yīng)和細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等過(guò)程控制病毒的進(jìn)一步侵染,具有多成分組合與調(diào)控多種途徑的特點(diǎn)。 本研究為XCTOL 應(yīng)用于兒童感染CoVs 的治療和臨床推廣提供了理論基礎(chǔ)。

猜你喜歡
谷甾醇靶點(diǎn)化合物
碳及其化合物題型點(diǎn)擊
碳及其化合物題型點(diǎn)擊
維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點(diǎn)
腫瘤免疫治療發(fā)現(xiàn)新潛在靶點(diǎn)
β-谷甾醇和豆甾醇對(duì)小鼠急性結(jié)腸炎的治療作用研究
例析高考中的鐵及其化合物
β-谷甾醇在復(fù)雜體系中抗氧化作用的研究
不同植物油對(duì)γ-谷維素與β-谷甾醇有機(jī)凝膠的影響
心力衰竭的分子重構(gòu)機(jī)制及其潛在的治療靶點(diǎn)
β-谷甾醇和γ-谷維素的鍵合物對(duì)軟質(zhì)奶油的水分分布影響
江阴市| 富宁县| 当涂县| 九江市| 兴城市| 沁水县| 屯昌县| 龙州县| 乾安县| 灵山县| 静海县| 朝阳县| 修武县| 宜阳县| 自贡市| 治多县| 宁都县| 全南县| 柘荣县| 青阳县| 互助| 巴青县| 黄石市| 文成县| 武安市| 长顺县| 内黄县| 高邑县| 濮阳县| 玉龙| 常德市| 鄂托克旗| 嵩明县| 乌兰察布市| 罗甸县| 庄河市| 宁乡县| 大同市| 温宿县| 尼玛县| 洛隆县|