于小雨

（赤峰市醫(yī)院病理科，內(nèi)蒙古 赤峰， 024000）

隨著人們生活方式、飲食結(jié)構(gòu)的改變，我國胃癌發(fā)病率逐漸增高，調(diào)查顯示，2021年胃癌新發(fā)病例、死亡病例分別為47.9萬例、37.4萬例，2022年新發(fā)病例、死亡病例分別為68萬例、99.8萬例[1-2]。胃癌的發(fā)生和多方面因素存在聯(lián)系，以幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染為主[3]。研究指出，F(xiàn)as配體(Fas ligand, Fast)在惡性腫瘤的發(fā)生中占據(jù)了重要的地位[4]。巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(Macrophage migration inhibition factor，MIF)參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移過程[5]。P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)參與了惡性腫瘤細(xì)胞的凋亡過程。所以，測定幽門螺桿菌感染胃癌患者胃黏膜MIF、P-gp、FasL的表達(dá)對(duì)胃癌后續(xù)治療方案的合理制訂具有重要的指導(dǎo)性意義。本研究選擇針對(duì)赤峰市醫(yī)院病理科2020年5月—2022年5月留存的胃癌患者胃黏膜組織開展研究，對(duì)其MIF、P-gp、FasL表達(dá)進(jìn)行探究，旨在為幽門螺桿菌感染胃癌后續(xù)治療發(fā)展提供重要的參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年5月—2022年5月赤峰市醫(yī)院病理科留存的胃癌患者胃黏膜組織為A組（n=59），選取同期留存的距離癌組織邊緣超過5 cm且經(jīng)過病理確診為正常黏膜組織為B組（n=59）。A組男30例，女29例；年齡28～70歲，平均年齡（44.61±4.37）歲；B組男32例，女27例；年齡30～70歲，平均年齡（45.21±5.07）歲。上述兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。另外，以Warthin-Starry銀染法測定結(jié)果為依據(jù)，確定A組有無合并Hp感染分組：①Hp陰性組（n=35），包括男性患者20例，女性患者15例；年齡29～70歲，平均年齡（43.69±3.41）歲；TNM分期為19例Ⅰ期+Ⅱ期、16例Ⅲ期+Ⅳ期；分化程度為15例高分化、中低分化20例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。②Hp陽性組（n=24），包括男性患者16例，女性患者8例；年齡31～70歲，平均（44.21±4.05）歲；TNM分期為14例Ⅰ期+Ⅱ期、10例Ⅲ期+Ⅳ期；分化程度為11例高分化、中低分化13例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例。上述一般資料（年齡、性別結(jié)構(gòu)、TNM分期、分化程度等）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究納入對(duì)象對(duì)研究內(nèi)容知曉并簽署知情同意書。本研究經(jīng)赤峰市醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①受檢者神志清楚，可與他人正常溝通、交流，依從性良好；②符合《中國胃癌篩查與早診早治指南（2022，北京）》[6]，結(jié)合臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查、病理組織活檢等確診為胃癌。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①胃癌復(fù)發(fā)或伴有認(rèn)知障礙、心理疾病；②合并凝血功能障礙、先天性免疫缺陷病、重要臟器功能衰竭等；③取材前已進(jìn)行放化療；④既往存在Hp感染史。

1.3 檢測方法

安排同一組醫(yī)生進(jìn)行取材及MIF、P-gp、FasL水平測定操作。

檢測前，與受檢者主動(dòng)交談，介紹MIF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率的意義，以取得患者的理解，同時(shí)指導(dǎo)患者簽署知情同意書。

檢測時(shí)，抗MIF的試劑盒為人巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：上海西格生物科技有限公司），抗P-gp的試劑盒為人P-糖蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司），抗FasL的試劑盒為人凋亡相關(guān)因子配體酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（生產(chǎn)企業(yè)：武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司）。按照免疫組化法測定MIF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率情況，即取出適量的胃癌患者胃黏膜組織、距離癌組織邊緣超過5 cm且經(jīng)過病理確診為正常的黏膜組織，分別進(jìn)行10%甲醛固定，再完成常規(guī)石蠟包埋；石蠟切片，并放在67 ℃烘箱內(nèi)烘片2 h，脫蠟至水，經(jīng)磷酸緩沖鹽溶液（PBS）（pH=7.4）沖洗，共3次，3 min/次；取一定量檸檬酸鹽緩沖液（＜500 mL）于微波盒內(nèi)，加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織放在已煮沸的緩沖液內(nèi)繼續(xù)煮20 min進(jìn)行修復(fù)；除去檸檬酸鹽緩沖液，于切片滴入適量的新鮮配制的二氨基聯(lián)苯胺，顯微鏡下觀察5 min；蒸餾水進(jìn)行沖洗，用蘇木素復(fù)染，再經(jīng)自來水沖洗；將PBS作為陰性對(duì)照，而已知陽性切片為陽性對(duì)照。

檢測后，安排2名病理醫(yī)生進(jìn)行切片病理分析，結(jié)果有爭議時(shí)詢問高級(jí)職稱的影像學(xué)專家，得出最終結(jié)論。

1.4 觀察指標(biāo)

以A組與B組為觀察指標(biāo)，統(tǒng)計(jì)MIF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率。MIF、P-gp、FasL表達(dá)定位均在細(xì)胞質(zhì)，在顯微鏡下觀察5個(gè)視野，根據(jù)染色程度、染色細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分，即（1）無染色為0分；淡黃色為1分；黃色為2分；棕黃色為3分。（2）著色細(xì)胞數(shù)在5%及以下，記錄0分；著色細(xì)胞數(shù)為6%～25%，記錄1分；著色細(xì)胞數(shù)為26%～50%，記錄2分；著色細(xì)胞在51%及以上，記錄3分。依照得分計(jì)算陽性表達(dá)情況，得分在1分及以下，視為陰性；得分為2～3分，視為弱陽性；得分為4～5分，視為中度陽性；得分在6分及以上，視為強(qiáng)陽性。

分析MIF、P-gp、Fas與Hp陽性組的臨床病理特征關(guān)系，包括臨床分期、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。

以病理學(xué)組織活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，聯(lián)合檢測時(shí)只要一項(xiàng)指標(biāo)呈陽性標(biāo)準(zhǔn)，即可判斷為陽性。比較MIF、P-gp、FasL聯(lián)合項(xiàng)目指標(biāo)與單一項(xiàng)目指標(biāo)對(duì)Hp陽性組胃癌患者的診斷效能，包括敏感度、特異度。采用受試者操作特征（ROC）曲線分析MIF、P-gp、FasL診斷Hp陽性組患者的敏感度、特異度。

（2）特異度=真陰性人數(shù)/（真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù)）×100%；

（3）敏感度=真陽性人數(shù)/（真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù)）×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

選擇SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（）表示，兩組組間差異比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]描述，數(shù)據(jù)組間差異行χ2檢驗(yàn)。用Medcalc軟件繪制ROC曲線，分析單一項(xiàng)目檢測及聯(lián)合檢測的診斷價(jià)值。以以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較A組與B組患者M(jìn)IF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率

A組患者M(jìn)IF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率較B組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 比較A組與B組患者M(jìn)IF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率 [n（%）]

2.2 MIF、P-gp、Fas與Hp陽性組的臨床病理特征關(guān)系分析

Ⅲ期+Ⅳ期Hp陽性組MIF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率較Ⅰ期+Ⅱ期高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；中低分化Hp陽性組MIF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率較高分化組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)陽性組MIF、P-gp、FasL表達(dá)陽性率較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 ZMIF、P-gp、Fas與Hp陽性組的臨床病理特征關(guān)系分析

2.3 聯(lián)合項(xiàng)目指標(biāo)檢測診斷Hp陽性組胃癌患者的ROC曲線分析

聯(lián)合檢測篩查敏感度、特異性較MIF、P-gp、Fas單一項(xiàng)目指標(biāo)檢測高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表3、圖1。

圖1 聯(lián)合項(xiàng)目指標(biāo)檢測與單一項(xiàng)目指標(biāo)檢測診斷Hp陽性組的ROC曲線圖

表3 聯(lián)合檢測對(duì)Hp陽性組胃癌患者的診斷分析 （%）

3 討論

胃癌是一種較常見的疾病，具有起病隱匿、發(fā)病率高等特點(diǎn)，是目前危及人體健康安全的重要因素之一。胃癌的發(fā)生與飲食、環(huán)境、遺傳、藥物及Hp等存在聯(lián)系，早期癥狀缺乏特異性，表現(xiàn)為食欲減退、惡心、反酸等癥狀，不易被發(fā)現(xiàn)，確診時(shí)已處于中晚期階段，錯(cuò)過最佳手術(shù)治療時(shí)機(jī)[7]。有研究指出，早期胃癌患者經(jīng)手術(shù)治療預(yù)后較好，5年生存率超過90%以上[8]。

Hp作為一種需氧螺旋狀革蘭氏陰性桿菌，具有一定的傳染性，持續(xù)感染已成為胃癌的重要誘因[9]。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，半數(shù)以上胃癌的發(fā)生與Hp感染有關(guān)[10]，因此有理由認(rèn)為Hp在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中起到了重要作用。

隨著相關(guān)報(bào)道增多，人們對(duì)胃癌與Hp感染關(guān)系認(rèn)識(shí)程度逐步加深，Hp誘發(fā)胃癌是一個(gè)復(fù)雜的免疫反應(yīng)過程，即促進(jìn)炎性細(xì)胞聚集，使其增生、釋放細(xì)胞因子，引發(fā)分子改變，造成癌變。胃癌的發(fā)生被認(rèn)為是多因子、多步驟相互作用的復(fù)雜生物學(xué)過程[11]。MIF是一種由親水性原子排列構(gòu)成，具有雙重作用特性的蛋白，參與惡性腫瘤發(fā)展、炎性反應(yīng)過程，可促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖、分裂、新生血管形成[12]。有研究指出，MIF在乳腺癌、胰腺癌、肝癌等惡性腫瘤中呈高表達(dá)[13]。研究顯示，A組患者M(jìn)IF表達(dá)陽性率較B組高，說明MIF參與胃癌的發(fā)生，故呈高表達(dá)。P-gp是一種位于細(xì)胞膜上的ATP，參與機(jī)體能量代謝過程，也是參與介導(dǎo)腫瘤多藥耐藥性的重要蛋白[14]。有研究表明，惡性腫瘤細(xì)胞中P-gp呈高表達(dá)，參與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、進(jìn)展[15-16]。本研究結(jié)果顯示，A組P-gp表達(dá)陽性率較B組高，說明P-gp參與胃癌的發(fā)生，故呈高表達(dá)。Fasl是一種跨膜蛋白，可介導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，當(dāng)其結(jié)合受體Fas分子，并產(chǎn)生特異性反應(yīng)，可向細(xì)胞內(nèi)傳遞細(xì)胞凋亡信號(hào)[17-18]。有研究指出，惡性腫瘤患者細(xì)胞內(nèi)P-gp明顯增高，攻擊浸潤性活化的T細(xì)胞，使惡性腫瘤細(xì)胞凋亡[19-20]。本研究結(jié)果顯示，A組Fasl表達(dá)陽性率較B組高，說明Fasl參與胃癌的發(fā)生，故呈高表達(dá)。

結(jié)合上述分析，進(jìn)一步探究Fasl、MIF、P-gp與Hp陽性組臨床分析、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Fasl、MIF、P-gp高表達(dá)與Hp陽性胃癌患者密切相關(guān)，即臨床分期越高、分化程度越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Hp陽性胃癌患者胃黏膜組織Fasl、MIF、P-gp高表達(dá)。此外，進(jìn)一步分析聯(lián)合項(xiàng)目檢測對(duì)Hp陽性組胃癌患者的診斷效能，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測篩查敏感度、特異度較MIF、P-gp、Fas單一項(xiàng)目指標(biāo)檢測高，說明聯(lián)合項(xiàng)目檢測效果更理想。

綜上所述，MIF、P-gp、Fasl在胃癌患者胃黏膜組織中呈高表達(dá)，且胃癌合并Hp感染患者M(jìn)IF、P-gp、Fasl水平更高，尤其是Ⅲ期+Ⅳ期、中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌合并Hp感染患者，而MIF、P-gp、Fasl的聯(lián)合檢測診斷效果更理想，能夠?yàn)槠浜罄m(xù)治療提供重要依據(jù)。