劉懷特，曹 揚(yáng)，杜培華，周莎莎，李中勇，張學(xué)英，徐繼忠，梁博文

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，河北保定 071001）

蘋(píng)果是多年生經(jīng)濟(jì)作物，我國(guó)的蘋(píng)果栽培面積和產(chǎn)量位居世界第一[1]。研究表明，植物需要從土壤中獲取至少14 種必需的營(yíng)養(yǎng)元素，以維持正常的生長(zhǎng)發(fā)育，當(dāng)土壤中的營(yíng)養(yǎng)元素缺失時(shí)，植物會(huì)產(chǎn)生一系列的應(yīng)答反應(yīng)[2-3]，比如土壤中氮素虧缺會(huì)導(dǎo)致植株生長(zhǎng)緩慢，葉色變黃，甚至作物產(chǎn)量降低等現(xiàn)象[4]。為緩解營(yíng)養(yǎng)缺乏而造成的缺素癥狀，農(nóng)業(yè)上常采取施肥措施，但施肥不科學(xué)容易導(dǎo)致資源浪費(fèi)、環(huán)境退化和生態(tài)環(huán)境破壞等問(wèn)題[4]。因此，如何提升養(yǎng)分脅迫下蘋(píng)果養(yǎng)分吸收利用效率，對(duì)減少人工合成肥料的施用與生態(tài)環(huán)境的保護(hù)具有重要意義。

氮是植物生長(zhǎng)必需的大量元素，對(duì)植物器官分化、物質(zhì)代謝及果實(shí)品質(zhì)形成等過(guò)程具有不可替代性，參與蘋(píng)果生長(zhǎng)發(fā)育的各個(gè)階段，在細(xì)胞發(fā)育和生命活動(dòng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[5-6]。研究表明，銨態(tài)氮(NH4+)和硝態(tài)氮(NO3-)是植物體內(nèi)主要的氮源，NO3-可通過(guò)植物根表皮和表皮細(xì)胞從土壤中吸收利用[7-8]，對(duì)植物生長(zhǎng)的促進(jìn)作用顯著[9]，而NH4+可以更快地填充土壤溶液中的無(wú)機(jī)氮溶解池。AMT1和AMT2是植物中兩類(lèi)主要的NH4+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，負(fù)責(zé)植物體內(nèi)NH4+的轉(zhuǎn)運(yùn)與吸收[10]，NRT1與NRT2家族參與植物器官對(duì)NO3-的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)[11]。

褪黑素是一種強(qiáng)抗氧化劑，能夠抑制活性氧的積累，調(diào)控逆境響應(yīng)基因的表達(dá)，對(duì)鹽堿、重金屬和干旱等環(huán)境脅迫具有很強(qiáng)的緩解作用[12]。研究表明，在養(yǎng)分脅迫和干旱脅迫下，施加褪黑素會(huì)促進(jìn)氮、磷和鉀的吸收與分配[13-14]；低氮脅迫下，外源褪黑素可以促進(jìn)小麥幼苗的生長(zhǎng)，提高幼苗莖部和根部NO3-含量[15]；低NO3-條件下，褪黑素可以促進(jìn)葉片15NO3-積累，增加15NO3-含量和15NO3-吸收通量[16]。上述研究表明，褪黑素在單一元素虧缺或其他環(huán)境脅迫下能夠促進(jìn)植株生長(zhǎng)及養(yǎng)分吸收。

雖然對(duì)單一元素虧缺或其他環(huán)境脅迫下蘋(píng)果植株氮素吸收利用的研究很多，但是關(guān)于外源褪黑素對(duì)養(yǎng)分全缺情況下蘋(píng)果植株氮代謝酶活性及基因表達(dá)的影響研究尚缺乏。因此，本試驗(yàn)以平邑甜茶實(shí)生苗為材料，在水培條件下模擬養(yǎng)分脅迫，從養(yǎng)分脅迫下平邑甜茶幼苗的氮代謝關(guān)鍵酶活性、氮代謝及氮轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)等方面，探究外源褪黑素對(duì)養(yǎng)分脅迫下蘋(píng)果幼苗氮代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，為外源褪黑素提升蘋(píng)果砧木氮素吸收利用效率提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)以平邑甜茶幼苗為試驗(yàn)材料，于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)園(38°23′ N，115°28′ E)中進(jìn)行，將經(jīng)低溫層積處理30 天的平邑甜茶種子種于育苗缽中，待幼苗長(zhǎng)至7～8 片葉時(shí)，將其轉(zhuǎn)移至盛有1/2 Hoagland 營(yíng)養(yǎng)液的水培盆中，通過(guò)氣泵通氣以保持植物根部正常生長(zhǎng)，使用H3PO4調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)液的pH為6.1±0.1，每5 天更換1 次營(yíng)養(yǎng)液。

首先進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，第12 天時(shí)，將材料分成兩組，一組為對(duì)照組，另一組施加0.1 μmol/L 褪黑素，第15 天時(shí)，開(kāi)始進(jìn)行正式處理。將幼苗均勻分成4 個(gè)處理組，分別為1/2 Hoagland 營(yíng)養(yǎng)液(CK)、1/2 Hoagland 營(yíng)養(yǎng)液+0.1 μmol/L 褪黑素(MCK)、1/20 Hoagland 營(yíng)養(yǎng)液(ST)、1/20 Hoagland 營(yíng)養(yǎng)液+0.1 μmol/L 褪黑素(MST)，每個(gè)處理3 次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)40 株幼苗，共120 株幼苗，每5 天處理1 次，共處理20 天。

在每次試驗(yàn)處理之前(第0、5、10、15 天上午9：00) 和第20 天時(shí)，采集頂端(生長(zhǎng)點(diǎn)) 以下第5～6 片健康、無(wú)破損的成熟葉片，同時(shí)在第20 天采集幼苗根系，液氮冷凍后置于-80℃冰箱保存，用于后續(xù)酶活性、基因定量表達(dá)和褪黑素含量的測(cè)定分析，每個(gè)指標(biāo)進(jìn)行3 次生物學(xué)重復(fù)。

1.2 氮代謝關(guān)鍵酶活性的測(cè)定

硝酸還原酶(NR)、亞硝酸還原酶(NiR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、Fd-谷氨酸合成酶(Fd-GOGAT) 和NADH-谷氨酸合成酶(NADH-GOGAT)活性采用蘇州科銘生物技術(shù)有限公司的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.3 熒光定量PCR 檢測(cè)

按照多糖多酚植物樣本RNA 提取試劑盒(北京聚合美生物科技有限公司)的說(shuō)明書(shū)從葉和根中提取總RNA，使用UEIriRT-PCR System for First-Strand cDNA Synthesis system (蘇州宇恒生物科技有限公司)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，使用Roche LightCycler 96 real-time PCR system (Roche，Basel，Switzerland)分析基因的相對(duì)表達(dá)量，以β-Actin為內(nèi)參基因，每個(gè)樣品進(jìn)行3 次重復(fù)，引物序列見(jiàn)表1。

1.4 褪黑素含量的測(cè)定

褪黑素含量的測(cè)定參照Cao 等[17]的方法。取0.5 g 樣品于液氮中研磨成粉末，加入5 mL 甲醇，超聲35 min，4℃，10000×g離心15 min，上清液過(guò)0.22 μm 有機(jī)濾膜后，使用高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)葉片中褪黑素含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

使用Excel 2016 和IBM SPSS Statistics 20 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析，采用SigmaPlot 10.0 繪制圖表，使用單因素方差分析(ANOVA)比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Tukey’s多區(qū)間檢驗(yàn)(P<0.05)評(píng)價(jià)處理間差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源褪黑素對(duì)褪黑素含量及其相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖1 所示，處理20 天中，CK 處理的褪黑素合成相關(guān)基因的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，MCK 處理的MdTDC、MdT5H和MdAANAT的表達(dá)量呈先上升后下降的趨勢(shì)，在處理第10 天達(dá)到峰值，MdASMT的表達(dá)呈上升趨勢(shì)，在處理第20 天值最高。ST 處理的MdTDC、MdT5H、MdAANAT和MdASMT的表達(dá)量呈先上升后下降的趨勢(shì)，MST 處理的MdTDC和MdAANAT的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，在處理第20 天值最高，MdT5H的表達(dá)量呈先下降再上升后下降的趨勢(shì)，在處理第15 天達(dá)到峰值，MdASMT的表達(dá)量呈先上升再下降后上升的趨勢(shì)，在處理第20 天值最高。處理第20 天時(shí)，與CK 處理相比，ST 處理上調(diào)了褪黑素合成相關(guān)基因MdTDC、MdT5H、MdAANAT和MdASMT的表達(dá)。與ST 處理相比，外源褪黑素提高了蘋(píng)果幼苗葉中MdTDC、MdT5H、MdAANAT和MdASMT的表達(dá)水平。如圖2 所示，養(yǎng)分脅迫下，蘋(píng)果幼苗葉片中褪黑素含量顯著增加，外源施加褪黑素顯著增加了蘋(píng)果幼苗葉中的褪黑素含量(P<0.05)。MCK 處理較CK 處理顯著增加了30.21%，MST 處理較ST 處理顯著增加了3.10%。

圖1 外源褪黑素對(duì)養(yǎng)分正常和脅迫條件下蘋(píng)果葉片中褪黑素合成相關(guān)基因表達(dá)量的影響Fig.1 Effects of exogenous melatonin on the relative expression of melatonin synthesis-related genes in M.hupehensis leaves under normal and low nutrient supply conditions

圖2 外源褪黑素對(duì)養(yǎng)分正常和脅迫條件下蘋(píng)果葉片中內(nèi)源褪黑素含量的影響Fig.2 Effects of exogenous melatonin on endogenous melatonin content in M.hupehensis leaves under normal and low nutrient supply conditions

2.2 外源褪黑素對(duì)葉片和根中氮代謝關(guān)鍵酶活性的影響

如圖3 所示，在養(yǎng)分正常和脅迫條件下，外源褪黑素均提高了蘋(píng)果葉片中氮代謝酶活性。與CK相比，MCK 處理顯著提高了葉片中的NR、NiR、GS、Fd-GOGAT 和NADH-GOGAT 活性(P<0.05)，分別較CK 提高了28.13%、13.72%、17.36%、9.34%和26.82%；ST 處理顯著降低了葉片中的NR、NiR、GS、Fd-GOGAT 和NADH-GOGAT 活性(P<0.05)，分別較CK 降低了50.00%、36.75%、29.66%、14.01%和36.59%；與ST 處理相比，MST 顯著提高了養(yǎng)分脅迫下葉片中的NR、NiR、GS 和Fd-GOGAT 活性(P<0.05)，分別較ST 處理提高了65.62%、51.49%、59.63%和17.53%。

圖3 外源褪黑素對(duì)養(yǎng)分正常和脅迫條件下蘋(píng)果葉片中NR、NiR、GS、Fd-GOGAT 和NADH-GOGAT 酶活性的影響Fig.3 Effects of exogenous melatonin on the activities of NR, NiR, GS, Fd-GOGAT and NADH-GOGAT in M.hupehensis leaves under normal and low nutrient supply conditions

如圖4 所示，在養(yǎng)分正常和脅迫條件下，外源褪黑素均提高了蘋(píng)果根中氮代謝酶活性。與CK 相比，MCK 處理顯著提高了葉片中的NADH-GOGAT活性(P<0.05)，較CK 提高了26.88%；ST 處理顯著降低了根中的NR、NiR、GS、Fd-GOGAT 和NADHGOGAT 活性(P<0.05)，分別較CK 降低了25.00%、9.56%、43.25%、15.88%和44.04%；與ST 處理相比，外源褪黑素顯著提高了養(yǎng)分脅迫下根中的NiR、GS 和Fd-GOGAT 活性(P<0.05)，分別提高了19.52%、52.09%和12.72%。

2.3 外源褪黑素對(duì)葉片和根中氮代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖5 所示，處理第20 天時(shí)，在養(yǎng)分正常和脅迫條件下，外源褪黑素均上調(diào)了蘋(píng)果葉片中氮代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平。養(yǎng)分正常條件下，外源褪黑素顯著上調(diào)了NR、NiR和GS基因的表達(dá)水平(P<0.05)，MCK 處理分別為CK 處理的1.37、1.77 和1.40 倍。ST 處理的幼苗葉片中NR、GS和NADHGOGAT基因的表達(dá)水平顯著下調(diào)(P<0.05)，分別較CK 降低了51.07%、37.64%和24.51%。與ST 處理相比，外源褪黑素顯著提高了養(yǎng)分脅迫下葉中NR、NiR、GS、Fd-GOGAT和NADH-GOGAT基因的表達(dá)水平(P<0.05)，MST 處理分別為ST 處理的2.16、2.08、2.22、1.71 和1.19 倍。

如圖6 所示，處理第20 天時(shí)，在養(yǎng)分正常和脅迫條件下，外源褪黑素均上調(diào)了蘋(píng)果根中氮代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平。養(yǎng)分正常條件下，外源褪黑素顯著上調(diào)了NiR基因的表達(dá)水平(P<0.05)，MCK 處理為CK 處理的1.88 倍。ST 處理根中的NR、NiR、GS、Fd-GOGAT和NADH-GOGAT基因的表達(dá)水平顯著低于CK (P<0.05)，分別較CK 降低了62.22%、60.25%、48.41%、59.14%和57.90%；MST 處理顯著提高了養(yǎng)分脅迫下根中NiR、GS、Fd-GOGAT和NADH-GOGAT基因的表達(dá)水平(P<0.05)，分別為ST 處理的1.31、1.41、1.74 和1.54 倍。

圖6 外源褪黑素對(duì)養(yǎng)分正常和脅迫條件下蘋(píng)果根部NR、NiR、GS、Fd-GOGAT和NADH-GOGAT 基因相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.6 Effects of exogenous melatonin on the relative expression of NR, NiR, GS, Fd-GOGAT and NADH-GOGAT genes in M.hupehensis roots under normal and low nutrient supply conditions

2.4 外源褪黑素對(duì)葉片中氮轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖7 所示，處理20 天內(nèi)，MCK 處理葉片中NO3-轉(zhuǎn)運(yùn)基因MdNRT1.1、MdNRT2.5、MdNRT2.7的表達(dá)量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，NH4+轉(zhuǎn)運(yùn)基因MdAMT1.2、MdAMT1.5和MdAMT2.1的相對(duì)表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，ST 和MST 處理葉片中NO3-轉(zhuǎn)運(yùn)基因MdNRT1.1、MdNRT2.5、MdNRT2.7和NH4+轉(zhuǎn)運(yùn)基因MdAMT1.2、MdAMT1.5和MdAMT2.1的相對(duì)表達(dá)量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，在處理第10 天或第15 天達(dá)到峰值，這些基因的表達(dá)在CK 處理的葉片中相對(duì)穩(wěn)定。處理第20 天時(shí)，與CK 處理相比，ST 處理葉中的MdNRT1.1、MdNRT2.5、MdNRT2.7、MdAMT1.2、MdAMT1.5和MdAMT2.1的表達(dá)量上調(diào)。與ST 處理相比，外源褪黑素提高了MdNRT2.4、MdNRT2.5、MdNRT2.7、MdAMT1.2和MdAMT2.1的表達(dá)水平。MST 處理的葉片中MdNRT2.4的表達(dá)水平呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，處理第20 天值最高，為ST 處理的9.23 倍。

圖7 外源褪黑素對(duì)養(yǎng)分正常和脅迫條件下平邑甜茶幼苗葉片中氮轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.7 Effects of exogenous melatonin on the expression of nitrogen transport-related genes in leaves of M.hupehensis under normal and low nutrient supply conditions

3 討論

當(dāng)土壤中的營(yíng)養(yǎng)元素缺乏時(shí)，易導(dǎo)致植物產(chǎn)生缺素癥狀[2]，褪黑素作為抗氧化劑，可以通過(guò)調(diào)節(jié)關(guān)鍵基因表達(dá)來(lái)應(yīng)對(duì)環(huán)境脅迫[18]。本試驗(yàn)通過(guò)水培來(lái)模擬養(yǎng)分脅迫，通過(guò)測(cè)定平邑甜茶幼苗的褪黑素合成基因表達(dá)量、褪黑素含量、氮代謝酶活性以及氮代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)量，探究外源褪黑素對(duì)養(yǎng)分脅迫下蘋(píng)果幼苗氮代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。結(jié)果表明，對(duì)養(yǎng)分脅迫下的蘋(píng)果幼苗外源施加褪黑素，能上調(diào)平邑甜茶幼苗葉中褪黑素合成基因的表達(dá)水平，顯著提高蘋(píng)果幼苗葉中褪黑素含量，提高蘋(píng)果幼苗葉和根中氮代謝酶活性，增強(qiáng)氮代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)。

在植物正常生長(zhǎng)條件下，褪黑素水平可以保持相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。然而，褪黑素水平受環(huán)境脅迫的強(qiáng)烈影響。研究表明，植物中褪黑素的形成始于色氨酸，包括4 個(gè)酶促步驟，由色氨酸脫羧酶(TDC)、色氨酸羥化酶(TPH)、色胺-5-羥化酶(T5H)、5-羥色胺-N-乙?；D(zhuǎn)移酶(SNAT)、5-羥色胺-N-乙?；D(zhuǎn)移酶(ASMT)等進(jìn)行催化，因此，TDC、T5H、SNAT、ASMT 等酶的相關(guān)基因參與褪黑素合成過(guò)程[12,19]。干旱脅迫下，桃苗的ASMT和TDC表達(dá)顯著上調(diào)，經(jīng)褪黑素處理的植株表達(dá)量進(jìn)一步升高[19]，上調(diào)褪黑素生物合成基因MdTDC1、MdAANAT2、MdT5H4和MdASMT1的表達(dá)可以調(diào)節(jié)干旱脅迫下平邑甜茶植株的水分平衡[20]。此外，外源施加褪黑素可以增加內(nèi)源褪黑素含量[21-22]，也可以自我調(diào)節(jié)褪黑素合成基因的表達(dá)[18]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，養(yǎng)分脅迫下，蘋(píng)果幼苗葉片中褪黑素合成相關(guān)基因的表達(dá)上調(diào)，褪黑素含量升高，同時(shí)，外源施加褪黑素會(huì)提高養(yǎng)分脅迫下蘋(píng)果幼苗葉片中褪黑素合成相關(guān)基因MdTDC、MdT5H、MdAANAT和MdASMT的表達(dá)水平，增加內(nèi)源褪黑素的含量。這表明養(yǎng)分脅迫一定程度上會(huì)刺激褪黑素合成基因的表達(dá)，致使褪黑素含量增加以響應(yīng)養(yǎng)分脅迫，外源褪黑素可以進(jìn)一步促進(jìn)褪黑素合成基因的表達(dá)，提高內(nèi)源褪黑素的含量。

NR、NiR、GS、Fd-GOGAT 和NADH-GOGAT是氮代謝過(guò)程的關(guān)鍵酶，硝酸鹽在NR 的催化下變成亞硝酸鹽，NiR 將亞硝酸鹽還原成銨，GS 參與植物體內(nèi)的氨同化過(guò)程，將植株體內(nèi)的NH4+催化成谷氨酰胺，F(xiàn)d-GOGAT 和NADH-GOGAT 將其催化成谷氨酸，參與植物體內(nèi)氨基酸循環(huán)，GOGAT 能夠與GS 結(jié)合，完成氨同化[4]。研究表明，氮磷虧缺會(huì)嚴(yán)重影響蘋(píng)果葉片氮代謝酶活性，低氮情況下，蘋(píng)果砧木的NR 活性低于正常供氮[7]，適氮低磷與低氮適磷均會(huì)導(dǎo)致嘎啦植株中NR 和NiR 活性降低[23]。低氮脅迫降低了平邑甜茶幼苗葉片的NR、NiR、GS與GOGAT 活性，外源褪黑素會(huì)緩解氮代謝酶活性的降低[4]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與CK 處理相比，ST 處理的葉和根中NR、NiR、GS、Fd-GOGAT 和NADHGOGAT 活性降低，外源褪黑素可以減小下降幅度。褪黑素可以調(diào)控氮代謝相關(guān)基因的表達(dá)。研究表明，低氮條件下植物NR、NiR、GS的表達(dá)顯著下調(diào)，外源褪黑素能增強(qiáng)低氮條件下植物NR、NiR、GS、Fd-GOGAT和NADH-GOGAT基因的表達(dá)[4,24]，這與本研究的結(jié)果一致。表明低氮脅迫會(huì)抑制氮代謝關(guān)鍵酶活性及氮代謝基因表達(dá)，外源褪黑素可以通過(guò)提高氮代謝關(guān)鍵酶活和氮代謝基因的表達(dá)水平，從而提高蘋(píng)果幼苗氮代謝水平。

褪黑素能夠緩解養(yǎng)分脅迫導(dǎo)致的植物氮轉(zhuǎn)運(yùn)受阻現(xiàn)象。研究表明，低氮脅迫會(huì)促進(jìn)植株NRT和AMT家族部分基因的表達(dá)，如低氮脅迫下，蘋(píng)果植株的NRT1.1基因表達(dá)量上調(diào)[13]，油菜的BnAMT1.1、BnAMT1.2、BnAMT1.5、BnAMT1.4和BnAMT2.1以及BnNRT2.4a、BnNRT2.4b、BnNRT2.5a和Bn NRT2.5b的表達(dá)上調(diào)[25]，本試驗(yàn)中，ST 處理葉中的NRT1.1、AMT2.1、AMT1.2和AMT1.5的表達(dá)量上調(diào)，表明養(yǎng)分脅迫可能一定程度上提高了平邑甜茶幼苗對(duì)NO3-和NH4+的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)能力。低NH4+脅迫下，外源褪黑素不同程度上調(diào)了AMT1.2、AMT1.5、AMT2.1、NRT1.1的表達(dá)水平，促進(jìn)了平邑甜茶葉片或根部對(duì)NH4+的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)[4]。本研究中，養(yǎng)分脅迫下，外源褪黑素提高了NRT2.4、NRT2.5、NRT2.7、AMT1.2和AMT2.1的表達(dá)水平，表明外源褪黑素可能通過(guò)增強(qiáng)平邑甜茶幼苗的NH4+和NO3-轉(zhuǎn)運(yùn)基因表達(dá)，來(lái)促進(jìn)蘋(píng)果植株對(duì)氮的吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)。

4 結(jié)論

養(yǎng)分脅迫下，平邑甜茶幼苗葉片中褪黑素合成基因的表達(dá)上調(diào)，內(nèi)源褪黑素含量顯著提高，蘋(píng)果幼苗葉片及根中氮代謝酶活性顯著降低，氮代謝相關(guān)基因表達(dá)水平顯著下調(diào)，氮轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)上調(diào)，表明蘋(píng)果幼苗在養(yǎng)分脅迫條件下通過(guò)提高內(nèi)源褪黑素合成基因的表達(dá)，提高對(duì)氮的利用。添加外源褪黑素強(qiáng)化了內(nèi)源褪黑素的效果，尤其在養(yǎng)分脅迫條件下，總之，外源褪黑素可以通過(guò)促進(jìn)蘋(píng)果植株對(duì)氮的代謝和吸收轉(zhuǎn)運(yùn)來(lái)緩解養(yǎng)分脅迫。