黃穎雪　簡(jiǎn)潔　徐貴萍　吳繼春

【摘要】目的：分離鑒定苗藥三兩銀的非生物堿成分。方法：采用堿性氧化鋁、氨基硅膠和硅膠柱層析分離化合物，通過核磁共振波譜數(shù)據(jù)鑒定結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從三兩銀中分離得到6個(gè)化合物，分別鑒定為三十二碳-1-烯（1）、達(dá)瑪烯二醇3-O-棕櫚酸酯（2）、20，25-epoxydammarane-3β，24α-diol-3-O-palmitate （3）、羽扇豆醇（4）、β-香樹脂醇（5）、（23E）-euph-7，23-dien-3β，25-diol （6）。結(jié)論：所有化合物均為首次從該屬植物中分離得到。

【關(guān)鍵詞】苗藥；三兩銀；化學(xué)成分

【中圖分類號(hào)】R284.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2023）21-0041-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.21.zgmzmjyyzz202318010

Isolation and Identification of Non-alkaloidal Constituents from Miao Medicine Sarcococca RuscifoliaHUANG YingxueJIAN JieXU GuipingWU Jichun

Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， ChinaAbstract：Objective To isolate and identify the non-alkaloidal Constituents from Miao medicine Sarcococca ruscifolia. Methods The compounds were separated by alkaline alumina， aminated silica gel and silica gel column chromatography， and their structures were identified by NMR data. Results Six compounds were isolated and identified as dotriacont-1-ene （1）， dammarenediol II 3-O-palmitate （2）， 20，25-epoxydammarane-3β，24α-diol-3-O-palmitate （3）， lupeol （4）， β-amyrin （5） and （23E）-euph-7，23-dien-3β，25-diol （6）.Conclusion All compounds were isolated from this genus for the first time.

Keywords：Miao Medicine; Sarcococca Ruscifolia; Chemical Composition

野扇花（Sarcococca ruscifolia Stapf.）隸屬于黃楊科野扇花屬［1］，為貴州苗族民間習(xí)用草藥，全株入藥，民間稱為三兩銀、胃友，收錄于2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》，具有行氣活血、祛風(fēng)止痛等功效，用于治療胃脘疼痛、風(fēng)寒濕痹、跌撲損傷等［2］。南亞地區(qū)各國(guó)民間也用該屬植物治療腹瀉、瘧疾、風(fēng)濕和肌肉疼痛等疾病［3］。對(duì)野扇花屬植物的化學(xué)成分和活性研究始于上世紀(jì)60年代，主要集中于其中的生物堿類成分，從中發(fā)現(xiàn)一百余個(gè)孕甾烷型生物堿［3-5］，但是對(duì)非生物堿類成分的研究較少。本課題組在野扇花生物堿的分離過程中，發(fā)現(xiàn)總生物堿浸膏中存在非生物堿。對(duì)非生物堿的分離得到6個(gè)化合物，包括1個(gè)長(zhǎng)鏈烯烴和5個(gè)三萜，報(bào)道如下。

1儀器與材料

1.1儀器Bruker Avance Neo-400 MHz核磁共振波譜儀（TMS為內(nèi)標(biāo)，德國(guó)Bruker公司）；Buchi旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；WFH-308B型三色紫外分析儀（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）；超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；數(shù)顯熱風(fēng)槍（德力西電氣）。

1.2材料柱層析硅膠（200～300目，青島海洋化工有限公司）；柱層析堿性氧化鋁（200～300目，國(guó)藥集團(tuán)）；氨基硅膠（40～75 μm，日本Fuji公司）；GF254薄層硅膠板（青島海洋化工有限公司）。其它試劑分析純。

三兩銀藥材2015年7月采于貴州省貴陽市觀山湖區(qū)，由貴州中醫(yī)藥大學(xué)江洪副教授鑒定為野扇花（Sarcococca ruscifolia Stapf.）枝干。標(biāo)本存放于貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（標(biāo)本號(hào)201507001）。

2提取與分離

干燥的野扇花枝干10 kg，粉碎，浸泡于25 L甲醇中，超聲提取5次，每次30 min。提取液減壓濃縮得浸膏。浸膏加0.5 mol/L H2SO4溶液調(diào)pH至2。酸水液（2.0 L）用等體積乙酸乙酯萃取5次，除去溶脂性非生物堿，然后加飽和Na2CO3溶液調(diào)pH至9。堿水液（2.7 L）加等體積二氯甲烷萃取3次，得總生物堿105 g?？偵飰A經(jīng)堿性氧化鋁柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯 （100∶0→0∶100） 梯度洗脫，分為Fr.A～Fr.Q共16部分。Fr.A經(jīng)硅膠柱層析分離，石油醚∶乙酸乙酯∶二乙胺 （20∶1∶1） 洗脫，得到化合物1 （76 mg）。Fr.B經(jīng)氨基硅膠柱層析，石油醚∶乙酸乙酯 （100∶0→0∶100） 梯度洗脫，分為Fr.B-1～Fr.B-6。Fr.B-1和Fr.B-5分別經(jīng)硅膠柱層析，石油醚∶乙酸乙酯∶二乙胺 （20∶1∶1） 洗脫，得到化合物2 （40 mg）、3 （11 mg）。Fr.C經(jīng)氨基硅膠柱層析，石油醚∶乙酸乙酯 （100∶0→0∶100） 梯度洗脫，分為Fr.C-1～Fr.C-7。Fr.C-6再經(jīng)硅膠柱層析，石油醚∶乙酸乙酯∶二乙胺 （20∶1∶1） 洗脫，得到化合物4 （40 mg）、5 （16 mg）。Fr. I經(jīng)氨基硅膠柱層析，石油醚∶乙酸乙酯 （100∶0→0∶100） 梯度洗脫，分為Fr. I-1～Fr.I-13。Fr.I-5再經(jīng)硅膠柱層析，石油醚∶乙酸乙酯∶二乙胺 （10∶1∶1） 洗脫，最后重結(jié)晶（乙酸乙酯）得到化合物6 （190 mg）。

3結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色油狀，易溶于石油醚，分子式C32H64。薄層層析后10%硫酸-乙醇顯色劑加熱顯紅色。1H NMR （400 MHz， CDCl3）δ： 5.83 （1H，ddt，J=17.0， 10.2， 6.7 Hz， H-2）， 5.08～4.90 （2H， m， H-1）， 2.06～1.94 （2H， m， H-3）;13C NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 139.2 （C-2）， 114.1 （C-1）， 33.9 （C-3）， 32.0 （C-30）， 29.8～29.1 （C-4～C-29）， 22.8 （C-31）， 14.2 （C-32）. 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致，故鑒定化合物1為dotriacont-1-ene。

化合物2：無色油狀，易溶于石油醚，分子式C46H82O3。薄層層析后10%硫酸-乙醇顯色劑加熱顯紫紅色。1H NMR （400 MHz， CDCl3）δ： 5.11 （1H， t，J= 7.0 Hz， H-24）， 4.48 （1H， dd， J=10.5， 5.8 Hz， H-3）， 2.28 （2H，t，J=7.5 Hz， H-1′）， 1.69， 1.62， 1.14， 0.96， 0.88， 0.87， 0.85， 0.85， （each 3H， s， H-18， 19， 21， 26～30）;13C NMR （100 MHz， CDCl3）δ： 173.7 （C-1′）， 131.5 （C-25）， 124.7 （C-24）， 80.6 （C-3）， 75.4 （C-20）， 56.0 （C-5）， 50.7 （C-9）， 50.3 （C-14）， 49.8 （C-17）， 42.3 （C-13）， 40.6 （C-22）， 40.4 （C-8）， 38.7 （C-4）， 37.9 （C-1）， 37.1 （C-10）， 35.2 （C-7）， 34.9 （C-2′）， 31.9 （C-14′）， 31.2 （C-15）， 29.7 （C-4′）， 29.7 （C-5′）， 29.7 （C-6′）， 29.7 （C-7′）， 29.6 （C-8′）， 29.6 （C-13′）， 29.5 （C-9′）， 29.4 （C-10′）， 29.3 （C-11′）， 29.2 （C-12′）， 24.8 （C-3′）， 28.0 （C-28）， 27.5 （C-16）， 25.7 （C-26）， 25.4 （C-12）， 25.2 （C-21）， 23.7 （C-2）， 22.7 （C-23）， 22.6 （C-11）， 21.6 （C-15′）， 18.2 （C-6）， 17.7 （C-27）， 16.6 （C-18）， 16.4 （C-30）， 16.3 （C-19）， 15.5 （C-29）， 14.1 （C-16′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道一致，故鑒定化合物2為達(dá)瑪烯二醇3-O-棕櫚酸酯。

化合物3：無色油狀，易溶于石油醚，分子式C46H82O4。薄層層析后10%硫酸-乙醇顯色劑加熱顯紫紅色。1H NMR （400 MHz， CDCl3）δ： 4.47 （1H， dd，J= 10.6， 5.7 Hz， H-3）， 3.72 （1H， t，J=7.2 Hz， H-24）， 2.28 （2H，t，J=7.5 Hz， H-2′）， 1.48 （3H， m， H-16′）， 1.20 （3H， s， H-27）， 1.12 （3H， s， H-21）， 1.11 （3H， s， H-26）， 0.95（3H， s， H-18）， 0.87（3H， s， H-28）， 0.86 （3H， s， H-30）， 0.84 （6H， s， H-19， 29）;13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 173.7 （C-1′）， 86.4 （C-20）， 86.3 （C-24）， 80.6 （C-3）， 70.2 （C-25）， 56.0 （C-5）， 50.7 （C-9）， 50.0 （C-14）， 49.6 （C-17）， 43.0 （C-13）， 40.4 （C-8）， 38.7 （C-1）， 37.9 （C-4）， 37.1 （C-10）， 35.7 （C-7）， 34.9 （C-22）， 34.9 （C-2′）， 31.9 （C-14′）， 31.5 （C-15）， 29.7 （C-4′）， 29.7 （C-5′）， 29.7 （C-6′）， 29.7 （C-7′）， 29.6 （C-13′）， 29.6 （C-8′）， 29.5 （C-9′）， 29.4 （C-10′）， 29.3 （C-11′）， 29.2 （C-12′）， 28.0 （C-29）， 27.8 （C-27）， 27.0 （C-26）， 27.3 （C-12）， 26.4 （C-23）， 25.7 （C-16）， 25.2 （C-3′）， 24.0 （C-21）， 23.8 （C-2）， 22.7 （C-11）， 21.6 （C-15′）， 18.2 （C-6）， 16.6 （C-30）， 16.4 （C-19）， 16.3 （C-28）， 15.5 （C-18）， 1

化合物5：白色針晶（乙酸乙酯），分子式C30H50O。薄層層析后10%硫酸-乙醇顯色劑加熱顯紫紅色。1H NMR （400 MHz， CDCl3）δ： 5.18 （1H， t，J= 3.7 Hz， H-12）， 3.20 （1H， dd， J = 5.1， 3.1 Hz， H-3）， 1.13， 1.00， 0.97， 0.94， 0.87， 0.83， 0.79， 0.79 （each 3H， s， H-23～30）; 13C NMR （100 MHz， CDCl3） δ： 145.2 （C-13）， 121.7 （C-12）， 79.0 （C-3）， 55.2 （C-5）， 47.6 （C-9）， 47.2 （C-18）， 46.8 （C-19）， 41.7 （C-14）， 39.8 （C-8）， 38.8 （C-1）， 38.6 （C-4）， 37.2 （C-22）， 37.0 （C-10）， 34.7 （C-21）， 33.4 （C-29）， 32.7 （C-7）， 32.5 （C-17）， 31.1 （C-20）， 28.4 （C-28）， 28.1 （C-23）， 27.2 （C-2）， 27.0 （C-16）， 26.2 （C-15）， 26.0 （C-27）， 23.7 （C-30）， 23.5 （C-11）， 18.4 （C-6）， 16.8 （C-26）， 15.6 （C-24）， 15.5 （C-25）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道一致，故鑒定化合物5為β-香樹脂醇。

化合物6：白色羽狀結(jié)晶（乙酸乙酯），分子式C30H50O2。薄層層析后10%硫酸-乙醇顯色劑加熱顯紫紅色。1H NMR （400 MHz， CDCl3）δ： 5.60 （2H， overlaped， H-23， 24）， 5.26 （1H， d，J=3.5 Hz， H-7）， 3.24 （1H， dd， J=11.2， 4.4 Hz， H-3）， 1.96 （2H， m， H-6）， 1.31，1.31，0.96，0.96， 0.86， 0.83， 0.81， 0.74 （each 3H， H-18， 19， 21， 26～30）;13C NMR （100 MHz， CDCl3）δ：145.8 （C-8）， 139.4 （C-24）， 125.6 （C-23）， 117.9 （C-7）， 79.2 （C-3）， 70.7 （C-25）， 52.6 （C-17）， 51.1 （C-14）， 50.6 （C-5）， 48.9 （C-9）， 43.5 （C-13）， 38.9 （C-4）， 38.8 （C-22）， 37.2 （C-1）， 36.5 （C-20）， 34.9 （C-10）， 34.0 （C-15）， 33.6 （C-12）， 30.0 （C-26）， 29.9 （C-27）， 28.1 （C-16）， 27.7 （C-2）， 27.6 （C-28）， 27.2 （C-30）， 23.9 （C-6）， 21.9 （C-18）， 18.4 （C-21）， 18.1 （C-11）， 14.7 （C-29）， 13.1 （C-19）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道一致，故鑒定化合物6為（23E）-euph-7，23-dien-3β，25-diol。

4結(jié)果與討論

通過氧化鋁、氨基硅膠和硅膠柱層析，從苗藥三兩銀總生物堿浸膏中分離得到6個(gè)脂溶性非生物堿，包括1個(gè)長(zhǎng)鏈烯烴和5個(gè)三萜，分別鑒定為三十二碳-1-烯 （1）、達(dá)瑪烯二醇3-O-棕櫚酸酯（2）、20，25-epoxydammarane-3β，24α-diol-3-O-palmitate （3）、羽扇豆醇 （4）、β-香樹脂醇 （5）、（23E）-euph-7，23-dien-3β，25-diol （6），均為首次從該屬植物中分離得到。其中，化合物2、3、6為達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，化合物2的母體達(dá)瑪烯二醇是合成達(dá)瑪烷型人參皂苷的關(guān)鍵中間體［11］，具有降血脂活性［12］；化合物3對(duì)粘性放線菌有弱的抗菌活性［8］；化合物6對(duì)糖尿病靶點(diǎn)α-葡萄糖苷酶具有體外抑制活性［13］?；衔?是一種廣泛存在于多種植物中的羽扇豆烷型五環(huán)三萜，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用［14］?；衔?是一種分布廣泛的齊墩果烷型五環(huán)三萜，具有抗炎、抗菌、抗病毒及降血糖、降血脂等活性［15］。野扇花中存在結(jié)構(gòu)多樣的三萜類成分，值得深入研究。

根據(jù)天然產(chǎn)物化學(xué)性能［16-17］，本實(shí)驗(yàn)中的非生物堿應(yīng)該存在于從酸水液中萃取的乙酸乙酯部分，堿化后從堿水液中萃取的二氯甲烷部分不應(yīng)該有非生物堿?？偵飰A中存在三萜等非生物堿的原因可能是用乙酸乙酯從酸水液中萃取非生物堿的時(shí)候萃取不完全，也可能是酸水液中存在的生物堿增加了非生物堿在酸水中的溶解度。非生物堿的存在增加了后續(xù)生物堿分離純化的難度，也降低了總生物堿活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。今后有必要繼續(xù)研究提高和檢測(cè)總生物堿純度的簡(jiǎn)單方法。

實(shí)驗(yàn)中，首先采用堿性氧化鋁為吸附填料、不含堿性試劑（如二乙胺）的溶液為洗脫劑，接著采用氨基硅膠為吸附填料、同樣用不含堿性試劑的溶液為洗脫劑，最后采用硅膠為吸附填料，用含有堿性試劑的溶液為洗脫劑，可以高效地分離純化脂溶性生物堿和非生物堿。參考文獻(xiàn)

［1］中國(guó)植物志編委會(huì). 中國(guó)植物志［第45（1）卷］［M］. 北京： 科學(xué)出版社， 1980： 49-51.

［2］貴州省藥品監(jiān)督管理局. 貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［M］. 貴陽： 貴州科技出版社， 2003： 336.

［3］ ASHOK K， SATISH C S， MANISHA D S， et al. Chemical and potential biological perspectives of genus Sarcococca （Buxaceae）［J］. The Natural Products Journal， 2015， 5（1）： 28-49.

［4］ 霍少杰， 吳繼春， 杜江. 苗藥三兩銀的生物堿成分研究［J］. 中國(guó)民族民間醫(yī)藥， 2018， 27（2）： 39-41.

［5］ 邱宏聰， 陳明生， 梁冰， 等. 野扇花的研究進(jìn)展［J］. 中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2019， 25（8）： 129-131.

［6］ 陳孝禮， 江文婧， 吳繼春， 等. 紅冬蛇菰的化學(xué)成分研究［J］. 廣州化工， 2022， 50（13）： 73-75.

［7］ 黃曉君， 殷志琦， 葉文才， 等. 女貞子的化學(xué)成分研究［J］. 中國(guó)中藥雜志， 2010， 35（7）： 861-864.

［8］ LI X H， QI H Y， SHI Y P. Dammarane-and taraxastane-type triterpenoids from Saussurea oligantha Franch.［J］. Journal of Asian natural products research， 2008， 10（5）： 397-402.

［9］申晨曉，邵峰，張普照，等.降香檀葉化學(xué)成分研究［J］. 中藥材， 2022（11）： 2607-2613.

［10］XU D F， MIAO L， WANG Y Y， et al. Chemical constituents from Tinospora sagittata and their biological activities［J］. Fitoterapia， 2021（153）：104963.

［11］ 王冬， 劉怡， 許驕陽， 等. 創(chuàng)建釀酒酵母細(xì)胞工廠高效生產(chǎn)人參皂苷前體達(dá)瑪烯二醇Ⅱ［J］. 藥學(xué)學(xué)報(bào)， 2018， 53（8）： 1233-1241.

［12］ 劉宏棟， 高余英， 高琦， 等. 窄葉鮮卑花地上部分化學(xué)成分及降血脂活性研究［J］. 中草藥， 2022， 53（14）： 4276-4284.

［13］ XU D F， MIAO L， WANG Y Y， et al. Chemical constituents from Tinospora sagittata and their biological activities［J］. Fitoterapia， 2021： 104963.

［14］ 韋燕飛， 金麗杰， 劉莎莎， 等. 羽扇豆醇抗腫瘤作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)， 2021， 37（7）： 897-901.

［15］ 晁二昆， 錢廣濤， 孫夢(mèng)楚， 等. 釀酒酵母細(xì)胞中β-香樹脂醇代謝流調(diào)控的研究［J］.中國(guó)中藥雜志， 2020， 45（16）： 3819-3825.

［16］ 徐任生， 趙維民， 葉陽. 天然產(chǎn)物活性成分分離［M］. 北京： 科學(xué)出版社， 2012： 273-304.

［17］ 徐任生， 葉陽， 趙維民. 天然產(chǎn)物化學(xué)［M］.2版.北京： 科學(xué)出版社， 2004： 117.

（收稿日期：2023-02-07編輯：陶希睿）