沈娜，麻文靜，蘇紅萍，李直，馮平

（榆林學(xué)院，陜西榆林 719000）

榆林市地處陜西省北部，是黃土高原與內(nèi)蒙古高原的過渡區(qū)，四季分明，地域遼闊，北部為風(fēng)沙草灘區(qū)，發(fā)展養(yǎng)殖業(yè)具有較大的優(yōu)勢。 近年來，由于政府“3+2+X”產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略的提出與實(shí)施，榆林市肉牛存欄量迅速增長， 肉牛養(yǎng)殖場迅速增多且養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)較高，在榆林市畜牧業(yè)中的產(chǎn)值占比逐年增加[1]。在肉牛實(shí)際生產(chǎn)中， 各種疾病暴發(fā)會造成養(yǎng)殖效益不佳，寄生蟲病便是其中之一。 牛球蟲病是肉牛養(yǎng)殖中常見的慢性、消耗性疾病，是指由艾美爾屬球蟲寄生在牛消化道內(nèi)所引起的寄生蟲病， 通?？梢鸹夹竽c道出血、消瘦、免疫力及生產(chǎn)性能下降等，嚴(yán)重可致死。 病牛和帶蟲牛是該病的主要傳染源，成年牛多數(shù)呈隱性感染，不表現(xiàn)出臨床癥狀，犢牛因其抵抗力較低，易感性較強(qiáng)，所以發(fā)病率和病死率較高[2-3]。

榆林地區(qū)肉牛養(yǎng)殖業(yè)具有較大的發(fā)展?jié)摿?，球蟲病會造成養(yǎng)殖效益低下。 在此背景下，球蟲感染情況調(diào)研和防治顯得尤為重要。 本研究對榆林某肉牛場的球蟲感染狀況及感染種類進(jìn)行調(diào)查，以期為該牛場球蟲病的防治提供參考，從而提高養(yǎng)殖效益，促進(jìn)肉牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

隨機(jī)采集榆林地區(qū)某規(guī)模化肉牛場1～2 月齡犢牛新鮮糞便樣14 份、成年牛新鮮糞便樣40 份，共計(jì)54 份， 分別裝入標(biāo)記好其年齡和編號的自封袋中，置于4 ℃冰箱保存待檢。

1.2 主要儀器與試劑

主要儀器：生物顯微鏡（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（上海博泰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、離心機(jī)（上海菲恰爾分析儀器有限公司）。 主要試劑：飽和食鹽水、2.5%重鉻酸鉀溶液、4%氫氧化鈉溶液。

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 糞樣檢查。 采用飽和食鹽水漂浮法：從樣品的不同部位挑取大小適中的糞便塊，放入干凈且干燥的青霉素小瓶中，加飽和食鹽水至瓶口下方，用細(xì)玻璃棒或小鑷子將其充分?jǐn)囁?，除去液面的雜質(zhì)，滴加飽和食鹽水使青霉素小瓶內(nèi)糞液凸出瓶口呈半球形。 靜置15 min，用干凈載玻片蘸取球面最上端糞液，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3.2 卵囊計(jì)數(shù)。采用斯陶爾氏法進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)進(jìn)而得出感染強(qiáng)度： 在100 mL 三角燒瓶中加入56 mL 0.4%氫氧化鈉水溶液，加入適量待檢糞樣，使混合液體總?cè)莘e達(dá)到60 mL，再加10 個小玻璃珠，充分振蕩使糞便完全破碎混勻， 然后用膠頭滴管吸取0.15 mL混合糞液，滴于載玻片上，在顯微鏡下進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)，觀察時按照“弓”形移動載玻片，避免遺漏或重復(fù)。 為保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，每份糞樣檢查3 個玻片，以3個玻片觀察所得卵囊的平均值乘以100， 為每克糞便中含有的卵囊數(shù)（oocysts per gramme，OPG），即感染強(qiáng)度。

1.3.3 卵囊收集與培養(yǎng)。 取適量球蟲陽性糞便置于燒杯中，加適量清水進(jìn)行搗碎并攪拌均勻。 用3 層脫脂棉紗布過濾至離心管中， 置于離心機(jī)中3 000 r/min繼續(xù)離心10 min，傾倒管內(nèi)上層液體，加蒸餾水?dāng)嚢杈鶆?，離心。如此反復(fù)進(jìn)行2～3 次，直至上清液清亮為止，取沉淀物用膠頭滴管吹吸均勻，移至培養(yǎng)皿中，根據(jù)培養(yǎng)皿體積大小注入適量的2.5%重鉻酸鉀溶液混勻，置于27 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，每隔4～6 h 對培養(yǎng)皿進(jìn)行搖晃吹打，直至85%以上球蟲的卵囊孢子化。

1.3.4 卵囊發(fā)育形態(tài)觀察。 對孢子化卵囊的顏色、大小、形狀和有無卵膜孔等生物學(xué)特征進(jìn)行觀察，并統(tǒng)計(jì)不同種類球蟲卵囊孢子化所需要的時間。 參考文獻(xiàn)[4-6]對觀察到的卵囊進(jìn)行種類鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 肉牛場球蟲感染情況

2.1.1 感染率。 在檢查的54 份肉牛糞便樣品中， 檢出22 份陽性糞便，總感染率達(dá)40.74%。 其中14 份犢牛糞便樣品中陽性糞便8 份， 感染率為57.14%；40 份成年牛糞便樣品中陽性糞便14 份，感染率為35.00%。 詳見表1。

表1 肉牛球蟲感染率

2.1.2 感染強(qiáng)度。感染強(qiáng)度即為OPG。在檢出的22份糞樣中，平均OPG 為236.36 個/g，犢牛平均OPG 為362.50 個/g，成年牛平均OPG 為164.29 個/g。 詳見表2。

表2 肉牛球蟲感染強(qiáng)度（OPG）

2.2 球蟲感染種類及所占比例

通過觀察100 個孢子化卵囊，并按其蟲種進(jìn)行分類、計(jì)數(shù)。 結(jié)果顯示，共檢出8 種艾美耳屬球蟲，所占比例分別為牛艾美耳球蟲19%、 邱氏艾美耳球蟲11%、橢圓艾美耳球蟲25%、加拿大艾美耳球蟲9%、柱狀艾美耳球蟲7%、亞球形艾美耳球蟲21%、奧博艾美耳球蟲1%及阿拉巴艾美耳球蟲7%，優(yōu)勢蟲種為橢圓艾美耳球蟲和亞球形艾美耳球蟲所占比例分別為25%和21%，詳見表3。

表3 球蟲感染種類及所占比例

2.3 各種類球蟲生物學(xué)特征描述

本次試驗(yàn)檢出的8 種艾美耳屬球蟲其孢子化形態(tài)詳見圖1。 8 種艾美耳屬球蟲的主要生物學(xué)特征詳見表4。

圖1 球蟲卵囊孢子化形態(tài)（40×）

表4 各種類球蟲生物學(xué)特征描述

3 討論

本研究共檢測54 份樣品，1～2 月齡犢牛新鮮糞便樣14 份、成年牛新鮮糞便樣40 份，其中陽性樣品22份，總感染率為40.74%。 此結(jié)果高于寧夏（27.46%）[7]、河北部分地區(qū)（33%）[8]的球蟲感染率，接近于新疆庫車縣（40.82%）[9]的球蟲感染率。 造成差異的原因可能與采樣地區(qū)、采樣季節(jié)和牛場的飼養(yǎng)管理有關(guān)，球蟲發(fā)育需要較高的溫度和濕度，多發(fā)于雨水較多的季節(jié)或地區(qū)，一般呈季節(jié)性流行[10]，各地區(qū)間的氣候差異可能會造成感染率的差異，氣候溫潤潮濕的地區(qū)球蟲感染率相較于氣候干燥的地區(qū)感染率較高；同時，牛場的飼養(yǎng)環(huán)境也是影響感染率的一大因素，定期清除堆積的糞便、保持飼養(yǎng)環(huán)境干燥通風(fēng)也會在一定程度上降低感染率。

本次檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，榆林地區(qū)某肉牛場犢牛與成年牛均存在感染情況，1～2 月齡犢牛的感染率為57.14%、 感染強(qiáng)度為362.5， 均高于成年牛的感染率（35%）和感染強(qiáng)度（164.29），這與葉莉莎等[11]、倪曉婷等[12]和花麗茹[13]的結(jié)果基本一致。 這說明犢牛較成年牛更易感染球蟲，符合牛球蟲病的發(fā)病特點(diǎn)。 造成此種現(xiàn)象的原因可能是，成年牛感染球蟲后一般不表現(xiàn)臨床癥狀，呈隱性感染，但帶蟲牛是重要的傳染源，而犢牛免疫系統(tǒng)尚未成熟，感染球蟲后自身清除機(jī)制較弱，發(fā)病率較高。 本研究共鑒定出8 種艾美耳屬球蟲，鑒定種類與馮平等[5]研究結(jié)果相似，但由于飼養(yǎng)品種、采樣時間等原因?qū)е聝?yōu)勢蟲種略有差異。

在實(shí)際生產(chǎn)中養(yǎng)殖場工作人員應(yīng)定期將牛舍、飼喂槽和運(yùn)動場等進(jìn)行消毒， 保證牛舍內(nèi)空氣流通，保持牛舍、飼喂槽干燥清潔。 定期清理糞便與墊草，防止糞便污染。 飼喂料草盡量離地飼喂，避免飼料被污染，定期更換飲水，確保飲水干凈。 盡量將成年牛與犢牛分開養(yǎng)殖，哺乳期母牛在哺喂?fàn)倥Ｇ昂缶鶓?yīng)當(dāng)保持其乳房干凈。 合理制定飼料配比，提高機(jī)體抵抗球蟲感染的能力。 制定相應(yīng)的驅(qū)蟲方案，定期用氨丙啉、莫能菌素等抗寄生蟲藥物進(jìn)行藥物預(yù)防治療，減少球蟲的感染。 一旦發(fā)現(xiàn)病牛，及時隔離、治療。

4 結(jié)論

通過對榆林地區(qū)某肉牛場感染情況的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，該肉牛場球蟲感染情況比較普遍，犢牛的感染率和感染強(qiáng)度均高于成年牛，共檢出并鑒定出8 種艾美爾屬球蟲，分別為牛艾美耳球蟲、邱氏艾美耳球蟲、橢圓艾美耳球蟲、加拿大艾美耳球蟲、亞球形艾美耳球蟲、柱狀艾美耳球蟲、奧博艾美耳球蟲和阿拉巴艾美耳球蟲，其中橢圓艾美耳球蟲和亞球形艾美耳球蟲為該牛場的優(yōu)勢蟲種。 在實(shí)際生產(chǎn)中要注意保持牛舍環(huán)境通風(fēng)干燥，定期清理糞便與墊草，制定安全可行的驅(qū)蟲方案，定期驅(qū)蟲，盡可能降低寄生蟲對牛只的危害，減少由此產(chǎn)生的損失。