呂文鳳

天津市西青區(qū)疾病預(yù)防控制中心 300393

呼吸道感染疾病主要是因?yàn)榛颊呱眢w免疫能力下降時(shí),病毒或者細(xì)菌侵入到人體的呼吸道,使呼吸道黏膜發(fā)生急性的炎癥改變的一系列呼吸道疾病,患者多表現(xiàn)為咳嗽、咳痰、喘息、氣急等疾病癥狀,但僅依靠疾病癥狀較難判斷患者病情與取得明確診斷(即除了細(xì)菌和病毒之外,一些冷空氣、粉塵、有害氣體等理化刺激因素也可以刺激氣管黏膜引起急性損傷和炎癥反應(yīng),進(jìn)而造成呼吸道感染[1]。此外,還有一些過敏的因素,比如花粉、粉塵、動(dòng)物毛皮以及排泄物都可以引起氣管黏膜出現(xiàn)急性炎癥反應(yīng),從而出現(xiàn)呼吸道感染)。而對(duì)于不同的呼吸道感染病因,需采取不同的治療方法,以便在短時(shí)間內(nèi)消除疾病癥狀,促進(jìn)病情轉(zhuǎn)歸。其中病毒性呼吸道感染疾病常由流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等感染所致,一般表現(xiàn)為上呼吸道感染,由于早期癥狀與普通感冒類似,若患者未及時(shí)采取治療干預(yù),當(dāng)病情發(fā)展嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致呼吸道的堵塞引起呼吸窘迫,甚至累及心臟,引起心肌受損,導(dǎo)致心肌炎。因此,加強(qiáng)病毒性呼吸道感染疾病患者的臨床診斷十分重要。傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)是感染性疾病的傳統(tǒng)檢驗(yàn)方式,雖能通過檢驗(yàn)靶向血清標(biāo)志物取得較高的感染性疾病診斷價(jià)值,但耗時(shí)較長,前提條件較多(血液樣本可受病理性因素、環(huán)境因素等影響),難以為病毒性呼吸道感染患者提供早期明確診斷價(jià)值[2]。故而,尋求一項(xiàng)更為科學(xué)、便捷的檢驗(yàn)方式為當(dāng)前臨床研究重點(diǎn)。分子即時(shí)檢驗(yàn)是隨著醫(yī)療科技不斷發(fā)展,在近幾年發(fā)展出的新型呼吸道檢驗(yàn)技術(shù),具有即時(shí)檢驗(yàn)、床旁檢驗(yàn)、就地檢驗(yàn)等一系列便利優(yōu)勢(shì),且此項(xiàng)檢驗(yàn)技術(shù)可靶向數(shù)十種病原體,自動(dòng)指標(biāo)標(biāo)本中病原體,從而取得準(zhǔn)確的感染性診斷價(jià)值。將其用于病毒性呼吸道感染疾病的臨床診斷中,可取得有效打破傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)的地域、時(shí)間局限,取得理想診斷價(jià)值[3]?；诖?本文就分子即時(shí)檢驗(yàn)在病毒性呼吸道感染疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值展開研究,具體如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象 以天津市某醫(yī)院2020年1月1日—2021年12月31日收治的112例疑似病毒性呼吸道感染疾病患者為研究對(duì)象,其中男62例,女50例;年齡3～80歲 ,平均年齡(45.98±15.11)歲;感染病程1～5d,平均病程(3.02±0.34)d;入院時(shí)體溫38.5～40.5℃,平均體溫(39.75±0.55)℃。本研究取得所有研究對(duì)象自愿簽訂的知情同意書與倫理委員會(huì)批準(zhǔn)文件。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)入組時(shí)均存在不同程度的發(fā)熱、咳嗽、咳痰、干啰音、呼吸窘迫等癥狀;(2)受教育程度均為初中及以上;(3)將病史資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)入組前1周內(nèi)有抗感染治療者;(2)存在精神疾病,認(rèn)知障礙,心、肝、腎等重大器官功能障礙、腦血管疾病者;(3)處于哺乳、妊娠期女性患者;(4)中途轉(zhuǎn)院、退出研究者。

1.2 方法 所有研究對(duì)象入組后均先行分子即時(shí)檢驗(yàn)(美國ABI實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀QuantStudio 6),即將水合溶液和300ml支氣管灌洗液加入Cell Lysis試劑管中,FilmAr-ray工具依次進(jìn)行提取和純化核酸、反轉(zhuǎn)錄和多重聚合酶鏈反應(yīng),使用端點(diǎn)熔解曲線數(shù)據(jù),FilmArray軟件自動(dòng)為每個(gè)目標(biāo)生成結(jié)果。再行傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn),即采集晨起空腹靜脈血在北利自動(dòng)平衡離心機(jī)DT5-1用3 200r/min離心10min后,吸取血清在OLYMPUSAU640全自動(dòng)生化儀按SOP文件檢測(cè)C反應(yīng)蛋白(CRP)、前白蛋白(PAB)、降鈣素原(PCT)及白細(xì)胞(WBC)等生化指標(biāo)(CRP正常范圍:0～5mg/L;PAB正常范圍:280～360mg/L;PCT:0～0.5ng/ml;WBC:4～10×109;超過正常范圍即為陽性)。

1.3 觀察指標(biāo) 所有研究對(duì)象均先行分子即時(shí)檢驗(yàn),再行傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn),最后行實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)檢出100例病毒性呼吸道感染疾病(以此為金標(biāo)準(zhǔn)),統(tǒng)計(jì)對(duì)比分子即時(shí)檢驗(yàn)、傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)的檢查耗時(shí)(從采樣要出診斷結(jié)果)與診斷效能。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢驗(yàn)方式耗時(shí)對(duì)比 經(jīng)對(duì)比,分子即時(shí)檢驗(yàn)耗時(shí)為(1.08±0.07)h,顯著短于傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)的(5.25±0.52)h,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=84.109,P=0.000<0.05)。

2.2 兩種檢驗(yàn)方式診斷準(zhǔn)確率分析 金標(biāo)準(zhǔn)為90.18%(101/112),分子即時(shí)檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病的診斷準(zhǔn)確率與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.174,P=0.677),傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病的診斷準(zhǔn)確率顯著低于金標(biāo)準(zhǔn)(χ2=6.985,P=0.008)。分子即時(shí)檢驗(yàn)與傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等診斷效能均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),但分子即時(shí)檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病的診斷準(zhǔn)確率、靈敏度均顯著高于傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)(P<0.05)。見表1～2。

表1 分子即時(shí)檢驗(yàn)和傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)診斷準(zhǔn)確率分析

表2 分子即時(shí)檢驗(yàn)與傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病診斷效能對(duì)比(%)

3 討論

病毒性呼吸道感染是臨床常見呼吸道感染類型,高發(fā)于免疫力低下的老人與小孩兒,且由于早期癥狀不明顯,大部分患者因反復(fù)發(fā)熱、頭暈頭痛、扁桃體腫大、咽部充血、咽喉腫痛等癥狀就診時(shí),多已存在一定心肺損傷,甚至病毒性心肌炎、病毒性腦炎等嚴(yán)重后果。且此類患者的治療周期較長(多需1～2周),在此期間需不斷評(píng)估患者病情,靈活調(diào)整用藥方案,因此,尋求一項(xiàng)便捷、快速、操作簡(jiǎn)單的檢驗(yàn)技術(shù)為病毒性呼吸道感染患者的臨床研究重點(diǎn)。

傳統(tǒng)的血清生化檢驗(yàn)是利用生物和化學(xué)方法對(duì)采集標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的臨床檢驗(yàn)技術(shù),可涉及機(jī)體循環(huán)功能、代謝功能、免疫功能等多項(xiàng)機(jī)能,因此,適用范圍極度廣泛,在臨床上廣泛應(yīng)用。對(duì)于病毒性呼吸道感染患者而言,傳統(tǒng)的血清生化檢驗(yàn)也可通過血清標(biāo)本檢驗(yàn)取得較高診斷價(jià)值,但傳統(tǒng)的血清生化檢驗(yàn)技術(shù)的血清標(biāo)本可受患者年齡、免疫功能、基礎(chǔ)性疾病、合并癥、環(huán)境因素、心理因素、采樣情況等多種因素影響,進(jìn)而影響檢驗(yàn)結(jié)果[4]。且傳統(tǒng)的血清生化檢驗(yàn)技術(shù)耗時(shí)較長,無法為病毒性呼吸道感染患者的預(yù)后監(jiān)測(cè)與評(píng)估提供靈活檢驗(yàn),難以作為病毒性呼吸道感染患者的臨床診斷與預(yù)后評(píng)估的理想檢驗(yàn)技術(shù)。

分子即時(shí)檢驗(yàn)是近年來隨著醫(yī)療科技發(fā)展而衍生出的新型檢驗(yàn)技術(shù),主要由CE-IVD標(biāo)記的多重巢式PCR以及自動(dòng)化體外診斷系統(tǒng)組成,是集樣品制備、擴(kuò)增、檢測(cè)和分析功能于一體體外診斷設(shè)備。此檢驗(yàn)設(shè)備可靶向甲型流感病毒(H1亞型、H1-2009亞型、H3亞型)、乙型流感病毒、腺病毒、冠狀病毒(HKU1、NL63、229E、OC43)、人類肺病毒、人類鼻病毒/腸病毒、副流感病毒(1型、2型、3型、4型)、呼吸道合胞病毒等數(shù)十種病原體與百日咳鮑特菌、肺炎衣原體和肺炎支原體等3種非典型病原體。其檢驗(yàn)操作始于將300ml未處理的生物/臨床樣品加入反應(yīng)盒中,再進(jìn)行核酸提取、純化、反轉(zhuǎn)錄和多重聚合酶鏈反應(yīng)、熔解曲線分析,最后開展聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。且該儀器與軟件連接,可實(shí)時(shí)分析熔解曲線變化與熒光曲線變化,加之該系統(tǒng)可通過分析樣品擴(kuò)增的DNA熔解曲線,從相應(yīng)的擴(kuò)增中自動(dòng)識(shí)別病原體,最終報(bào)告每種病原體的陰性或陽性結(jié)果[5]。此項(xiàng)檢驗(yàn)技術(shù)較之其他臨床檢驗(yàn)技術(shù)具有更高靈活性,能在實(shí)驗(yàn)室外,于患者護(hù)理現(xiàn)場(chǎng)實(shí)地進(jìn)行標(biāo)本采集、檢測(cè)、分析,且其便利性,還可進(jìn)入患者家庭進(jìn)行自我監(jiān)測(cè)。其次,分子即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)的結(jié)果分析耗時(shí)較短,一般在1h左右即可取得準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果,為患者的病情診斷、評(píng)估提供科學(xué)依據(jù)。將其作為病毒性呼吸道感染患者的臨床診斷檢驗(yàn)技術(shù),可通過縮短患者檢測(cè)與就診時(shí)長,延長患者疾病鑒別與治療決策制定時(shí)長,使患者及時(shí)取得對(duì)癥治療,消除疾病癥狀,這對(duì)促進(jìn)患者病情轉(zhuǎn)歸具有重要意義。最后,分子即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)的便捷與操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì),可在病毒性呼吸道感染疾病患者的預(yù)后評(píng)估與監(jiān)測(cè)中起到較佳保障效果[6]。本研究結(jié)果也顯示,分子即時(shí)檢驗(yàn)檢查方式的檢驗(yàn)耗時(shí)顯著低于傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)(P<0.05);分子即時(shí)檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病的診斷準(zhǔn)確率與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),而傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病的診斷準(zhǔn)確率顯著低于金標(biāo)準(zhǔn)(P<0.05);分子即時(shí)檢驗(yàn)與傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等診斷效能均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),但分子即時(shí)檢驗(yàn)對(duì)病毒性呼吸道感染疾病的診斷準(zhǔn)確率、靈敏度均顯著高于傳統(tǒng)血清生化檢驗(yàn)(P<0.05)。但要注意的是,分子即時(shí)檢驗(yàn)標(biāo)本若采集不當(dāng)也會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果,對(duì)此,應(yīng)重視可影響檢驗(yàn)結(jié)果的一系列因素,嚴(yán)格按照廠商歸并進(jìn)行采樣、檢驗(yàn)操作,避免干擾的同時(shí),定期與臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比,確保醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)檢驗(yàn)結(jié)果的一致性和準(zhǔn)確性,且定期進(jìn)行治療控制與臨床監(jiān)管。

綜上所述,在病毒性呼吸道感染疾病診斷中,采取分子即時(shí)檢驗(yàn),可取得較高診斷效能,且耗時(shí)較短,可為患者的早期診斷與病情評(píng)估均提供科學(xué)依據(jù),值得臨床推廣應(yīng)用。在當(dāng)前信息技術(shù)與醫(yī)療科技不斷發(fā)展的時(shí)代背景下,分子即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)的可檢測(cè)項(xiàng)目不斷增多,其檢驗(yàn)質(zhì)量也得到不斷進(jìn)步,隨著檢驗(yàn)設(shè)備的不斷更新與完善,使其在呼吸道感染性疾病的臨床診斷與治療中得到更為廣泛的認(rèn)可與青睞,可持續(xù)發(fā)揮重要作用。但當(dāng)前臨床對(duì)于分子即時(shí)檢驗(yàn)在病毒性呼吸道感染疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值研究較少,有待后續(xù)深入探索。