栗衛(wèi)東 許 軍

（1 濟(jì)源市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊，河南濟(jì)源 459000；2 平頂山市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊，河南平頂山 467000））

豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus,PCV）屬圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，病毒基因組為單股負(fù)鏈環(huán)狀DNA，病毒呈二十面體對稱，無囊膜結(jié)構(gòu)，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的一種最小的動物病毒[1-3]。豬圓環(huán)病毒2 型（PCV2）是4個PCV 基因型中的一個[4]，也是引起豬圓環(huán)病毒病和豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾?。≒CVAD）的主要致病原，通常造成豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬呼吸道綜合征（PRDC）、豬繁殖障礙、豬增生性壞死性肺炎（PNP） 和新生仔豬先天性震顫（PCT）等多系統(tǒng)功能性障礙疾病[5]。病豬表現(xiàn)為漸進(jìn)性消瘦、呼吸困難、淋巴結(jié)腫大、貧血等多種癥狀。目前已有研究報道PCV 單獨感染動物不會導(dǎo)致明顯的PCVAD[6]，但是，PCV2 主要破壞豬免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致感染豬產(chǎn)生免疫抑制，容易繼發(fā)感染豬細(xì)小病毒病、豬偽狂犬病、豬繁殖與呼吸障礙病、豬瘟等病毒性疾病和鏈球菌、大腸桿菌、副豬嗜血桿菌等細(xì)菌性疾病[7-9]，使豬病診斷和防治復(fù)雜化，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展。1997 年，PCV2 首先在加拿大被分離鑒定出來，2001 年，郎洪武等[10]首次從我國豬體內(nèi)分離到PCV2，目前該病廣泛分布于我國各地養(yǎng)豬場，成為重點關(guān)注和防控的臨床常見疫病。

為了解濟(jì)源市規(guī)?；B(yǎng)豬場PCV2 流行情況，本研究選取5 家規(guī)模化未免疫PCV2 的養(yǎng)豬場中不同生長階段的豬1 332 頭，采用ELISA 法檢測血清PCV2 抗體，旨在為PCV2 防治提供基礎(chǔ)性參考資料。

1 試驗材料與方法

1.1 樣品來源

2021 年2—8 月，從河南省濟(jì)源市5 家未接種免疫PCV2 的規(guī)?；B(yǎng)豬場，按5%比例選取健康仔豬、育肥豬、母豬、種公豬，進(jìn)行前腔靜脈或耳靜脈采血5 mL，室溫靜置2 h，3 500 rpm 離心3 min，取上清血清，-20℃下保存?zhèn)溆?。試驗共采集血清樣? 332 份，按豬場來源、豬群不同生長階段進(jìn)行編號。

1.2 試劑和儀器

豬PCV2 酶聯(lián)免疫吸附抗體檢測（ELISA）試劑盒為武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司生產(chǎn)，Varioskan LUX 多功能酶標(biāo)儀為賽默飛世爾科技（中國）有限公司生產(chǎn)。實驗室備有離心機(jī)、微量振蕩器、37℃恒溫箱、自動洗板機(jī)等。

1.3 試驗方法

PCV2 血清抗體ELISA 檢測方法按照試劑盒說明書操作。取預(yù)包被抗原的微孔酶標(biāo)板，室溫平衡20 min后，設(shè)置樣本孔和標(biāo)準(zhǔn)孔，將10 μL 待檢血清和40 μL樣本稀釋液加入樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)孔加入50 μL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)空白孔，加稀釋液100 μL。將辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記過的檢測抗體分別加入樣本孔和標(biāo)準(zhǔn)品孔，100 μL/孔，用封板膜密封板孔。37℃恒溫箱溫育1 h，棄封板膜，吸水紙拍干液體，再加入用去離子水20 倍稀釋的20×洗滌緩沖液，靜置3 min，用吸水紙拍干液體，反復(fù)5 次，每孔加入底物A、B 液各50 mL，混勻，37℃避光孵育顯色15 min。每孔內(nèi)加50 μL 終止液終止反應(yīng)。以空白對照孔調(diào)零，在酶標(biāo)儀上10 min 內(nèi)以630 nm 波長測定各孔的吸光度OD630nm值。結(jié)果判定：試驗成立條件為陰性對照孔平均OD630nm值＜0.25，陽性對照孔平均OD630nm值≥1.0。待檢血清孔OD630nm值＞0.42 時，結(jié)果判定為陽性，待檢血清孔OD630nm值＜0.38 時，結(jié)果判定為陰性，待檢血清孔OD630nm值為0.38～0.42，結(jié)果判為可疑，需再檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 5 家規(guī)?；i場PCV2 血清抗體檢測結(jié)果

由表1 可知，1 332 份血清中有444 份抗體陽性血清，平均陽性率為33.33%，陽性率介于28.25%～41.67%。在5 家規(guī)?；i場均檢測到陽性血清，表明豬場陽性率為100%。

表1 5 家規(guī)模化豬場PCV2 血清抗體檢測結(jié)果

2.2 5 家規(guī)?；i場不同生長階段豬PCV2 血清抗體檢測結(jié)果

由表2 可知，按照不同生產(chǎn)階段PCV2 抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計分析，種公豬、母豬、仔豬、育肥豬平均陽性率分別為21.57%、36.78%、18.01%、42.62%，種公豬陽性率以1 號豬場最高，為28.57%；母豬陽性率以2 號豬場最高，為44.44%；仔豬陽性率以2 號豬場最高，為26.53%；育肥豬陽性率以1 號豬場最高，為50.00%。每個豬場的不同生長階段豬群都有血清陽性樣品。

表2 不同生長階段豬PCV2 血清抗體檢測結(jié)果

3 討論

本次調(diào)查選擇5 家未免疫PCV2 的規(guī)?；i場中外觀健康的豬群，對1 332 份血樣采用ELISA 方法進(jìn)行PCV2 抗體檢測，共檢出陽性血清樣本444 份，總平均陽性率為33.33%，豬場陽性率為100%。雖然抽樣個體數(shù)較少，但是具有一定代表性，表明河南濟(jì)源市規(guī)?；i場廣泛存在PCV2，有的豬場相當(dāng)嚴(yán)重，比如1 號豬場陽性率達(dá)到41.67%，高于平均值8.34 個百分點，應(yīng)引起畜牧獸醫(yī)部門和養(yǎng)殖場注意。胡慧等[11]對來自河南12 個地區(qū)的226 份豬血清樣品PCV2 抗體檢測，結(jié)果顯示總抗體的陽性率為53.10%。劉琨等[12]報道，河南信陽地區(qū)豬PCV2 總體陽性率為48.9%。盡管本次研究的總體陽性率低于上述地區(qū)檢測結(jié)果，但是PCV2 感染豬群是潛在的帶毒者，病毒可以通過分泌物、鼻液和糞尿等排出，是威脅其他豬群健康的主要傳染源，一旦這些攜帶病毒的豬群受到外界應(yīng)激，機(jī)體免疫機(jī)能會下降，很容易轉(zhuǎn)化為明顯癥狀的發(fā)病豬，且繼發(fā)其他致病性微生物感染。

從生豬不同生長階段的PCV2 抗體檢測結(jié)果看，種公豬、母豬、仔豬、育肥豬均存在PCV2 感染情況，仔豬陽性率最低，為18.01%，這與仔豬受母源抗體的保護(hù)有關(guān)。種公豬陽性率為21.57%，表明由于種公豬價值較高，在豬場生產(chǎn)中的具有重要作用，5 家豬場比較重視種公豬的飼養(yǎng)管理和疫苗接種。母豬、育肥豬平均陽性率分別為36.78%、42.62%，均高于平均陽性率，可能與母豬飼養(yǎng)周期長增加PCV2 感染機(jī)會和育肥豬后期臨近出欄飼養(yǎng)管理不嚴(yán)格等因素有關(guān)，需要進(jìn)一步具體檢測。連慧香等[13]報道，在河南部分地區(qū)的非疫苗免疫豬群中，種用公、母豬的PCV2 抗體陽性率最低，育肥豬和斷奶仔豬抗體陽性率較高。施德蘭[14]等對15 家規(guī)?；i場PCV2 抗體檢測，發(fā)現(xiàn)哺乳仔豬總陽性率為7.20%，商品豬總陽性率為11.00%，育成豬總陽性率為40.00%，種公豬總陽性率為38.57%，種母豬總陽性率為40.76%。上述學(xué)者報道與本研究在不同階段豬群PCV2 結(jié)果有所差異，這與受檢豬場飼養(yǎng)管理、抽樣設(shè)計等不同有關(guān)，但是在不同生長階段的豬群均有PCV2感染方面的研究結(jié)果一致。

根據(jù)本次研究檢測結(jié)果，建議濟(jì)源市規(guī)模化豬場應(yīng)強(qiáng)化商品化PCV2 疫苗接種，定期開展檢測，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，降低或避免應(yīng)激因素，提高豬群營養(yǎng)水平，嚴(yán)格消毒防疫，提高豬體免疫力，重點采取藥物預(yù)防方案控制如副豬嗜血桿菌等病原菌的繼發(fā)感染[15]，最大限度地降低豬群的死亡率，減少經(jīng)濟(jì)損失。

4 小結(jié)

本研究對2021 年濟(jì)源市5 家未接種免疫PCV2 的規(guī)?；B(yǎng)豬場采用ELISA 進(jìn)行PCV2 抗體檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)豬場感染PCV2 比較嚴(yán)重，豬場陽性率為100%，不同生長階段豬群均有PCV2 感染。研究為開展PCV2 疾病的診斷與防控奠定了基礎(chǔ)。