劉建輝，鞏碧釧，胡秋輝，蘇安祥，徐 輝，謝旻皓，楊文建

（南京財(cái)經(jīng)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇省現(xiàn)代糧食流通與安全協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇省食用菌保鮮與深加工工程研究中心，江蘇 南京 210023）

三嗪類(lèi)除草劑因其高效、廣譜、廉價(jià)等作用特點(diǎn)，在全球范圍內(nèi)普遍使用，且廣泛應(yīng)用于果蔬等農(nóng)作物的生產(chǎn)中[1]。然而，該類(lèi)除草劑的立體化學(xué)反應(yīng)穩(wěn)定性高，環(huán)境持久性長(zhǎng)，在施用過(guò)程中可遷移至水體、土壤和農(nóng)作物，進(jìn)而進(jìn)入至人體，對(duì)人體產(chǎn)生致癌和內(nèi)分泌干擾等不可逆的副作用，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康[2-3]。此外，三嗪類(lèi)農(nóng)藥可產(chǎn)生多種降解產(chǎn)物，如脫乙基莠去津、脫異丙基莠去津和羥基化莠去津等[4]，其毒性類(lèi)似或更甚于原物質(zhì)[5]。目前，已在土壤、地下水、飲用水、農(nóng)作物、水生動(dòng)物等中均能檢測(cè)到三嗪類(lèi)除草劑及其降解物殘留[6-7]。三嗪可以吸附到水果或蔬菜的表面/表皮，并最終滲透到水果或蔬菜的果肉中[8]。

針對(duì)三嗪類(lèi)除草劑極易在環(huán)境與食物中殘留從而對(duì)生物體帶來(lái)嚴(yán)重危害，許多國(guó)家都對(duì)食品中的殘留量進(jìn)行了限制，例如歐盟已經(jīng)停止了該類(lèi)除草劑在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用，美國(guó)環(huán)保署將其列入了優(yōu)先控制的污染物名單[9]。我國(guó)最新GB 2763—2021《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》對(duì)蔬菜、水果、谷類(lèi)、油料和油脂中三嗪類(lèi)除草劑的最大殘留限量為0.01～0.5 mg/kg[10]。但因其極易殘留的特點(diǎn)，仍需建立高效的檢測(cè)方法以監(jiān)測(cè)其在環(huán)境與食品中的殘留。然而，農(nóng)作物樣品基質(zhì)復(fù)雜，且三嗪類(lèi)農(nóng)藥代謝物通常以結(jié)合狀態(tài)存在，因此在檢測(cè)前的樣品前處理過(guò)程比較繁瑣。在眾多已報(bào)道的前處理方法中，固相萃取技術(shù)應(yīng)用最廣。但通用型的固相萃取柱如C鍵合硅膠等非選擇性的吸附溶劑，選擇性和特異性差，難以用于復(fù)雜基體中微量物質(zhì)的吸附萃取[11]。因此，開(kāi)發(fā)一種凈化富集能力強(qiáng)的前處理技術(shù)，對(duì)于檢測(cè)復(fù)雜樣品中三嗪類(lèi)化合物具有重要意義。

分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymers，MIPs）對(duì)目標(biāo)分子（稱(chēng)為“模板”）具有結(jié)合性能高、特異性強(qiáng)和穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于痕量分析[12]?？坠廨x等[13]以莠去津?yàn)槟０褰⒘朔肿佑≯E固相萃取方法，可萃取并檢測(cè)煙葉中的三嗪類(lèi)除草劑。Zhou Tianyu等[14]制備了阿特拉津MIPs，其工藝簡(jiǎn)單、成本低，并通過(guò)結(jié)合MIPs固相萃取與高效液相色譜-質(zhì)譜（high performance liquid chromatograph-mass spectrometry，HPLC-MS）技術(shù)，成功吸附并檢測(cè)了茶葉樣品中的三嗪類(lèi)化合物。但目前多數(shù)MIPs只停留在針對(duì)單一模板的印跡聚合物的制備，識(shí)別位點(diǎn)單一，不能對(duì)多種三嗪類(lèi)目標(biāo)分子產(chǎn)生特異性作用[15]。而使用兩種或多種結(jié)構(gòu)類(lèi)似物作為模板，多模板分子印跡可以擴(kuò)展單模板分子印跡的應(yīng)用，以實(shí)現(xiàn)同時(shí)識(shí)別、提取和分離一種以上分析物[16-17]。

本研究團(tuán)隊(duì)前期制備了以滅蠅胺為虛擬模板的MIPs，提高了三嗪類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)效率和精度[18]。由于三嗪類(lèi)除草劑的特性官能團(tuán)為三嗪環(huán)，除選取滅蠅胺外，也可聯(lián)用同樣結(jié)構(gòu)相似的三聚氰胺作為替代的雙虛擬模板分子[19]。為進(jìn)一步增加識(shí)別與吸附位點(diǎn)，提高對(duì)三嗪類(lèi)化合物的吸附效率，本研究擬聯(lián)用滅蠅胺和三聚氰胺，開(kāi)發(fā)雙虛擬模板分子印跡聚合物，并對(duì)材料進(jìn)行優(yōu)化與吸附性能表征，聯(lián)合應(yīng)用HPLC法檢測(cè)蘋(píng)果、黃瓜、玉米等果蔬中的三嗪類(lèi)農(nóng)藥殘留。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘋(píng)果、黃瓜、玉米等樣品 江蘇省南京市蘇果超市；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品滅蠅胺、三聚氰胺、阿特拉津、撲草凈、西草凈、莠滅凈、吡蟲(chóng)啉（純度均大于98%）以及甲基丙烯酸（methacrylic acid，MAA）、乙二醇二甲基丙烯酸酯（ethylene dimethacrylate，EGDMA）、三羥甲基丙烷三甲基丙烯酸酯（trimethylpropane trimethacrylate，TRIM）、偶氮二異丁腈（azobisisobutyronitrile，AIBN）（均為分析純）、乙腈（色譜純）美國(guó)Sigma公司；冰乙酸、甲醇、三氯甲烷（均為分析純）上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Nicolet 6700傅里葉變換紅外光譜儀 美國(guó)Thermo Fisher公司；DZ-3BCII真空干燥箱 上海奧析科學(xué)儀器有限公司；ZNCL-G15型智能磁力攪拌器 河南愛(ài)博特科技發(fā)展有限公司；Allegra 64R離心機(jī) 美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司；固相萃取裝置 美國(guó)Supelco公司；SU8010掃描電鏡 日本Hitachi公司；1260系列HPLC儀 美國(guó)Agilent公司；HSC-24A氮吹儀 南京科捷分析儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 雙模版MIPs制備及優(yōu)化

稱(chēng)取0.6 mmol滅蠅胺、0.4 mmol三聚氰胺和4 mmol MAA，向其中加入15 mL乙腈-水溶液（3∶1，V/V）進(jìn)行混合，超聲30 min以使其預(yù)聚合。之后向其中加入與功能單體MAA等量的交聯(lián)劑TRIM，以及30 mg AIBN再進(jìn)行超聲5 min，之后為排除其中氧氣，置于氮吹儀中通入氮?dú)? min。封閉混合液后再將其置于60 ℃水浴條件下持續(xù)24 h。反應(yīng)結(jié)束之后獲得塊狀雙模版分子聚合物，采用甲醇-乙酸（4∶1，V/V）溶液將研磨后的模板分子洗脫，用HPLC儀檢測(cè)直至提取液中無(wú)模板分子存在。所得印跡聚合物分別用甲醇和水沖洗3 次以上，于60 ℃真空干燥。非印跡聚合物（non-imprinted polymers，NIPs）作為對(duì)照，其制樣方法與MIPs相同，區(qū)別在于無(wú)須添加兩種模板分子。同時(shí)，為使MIPs的吸附量達(dá)到最佳，選取不同的制孔劑（乙腈與三氯甲烷）、交聯(lián)劑（EGDMA和TRIM）以測(cè)定MIPs的吸附量，并且對(duì)雙模板中滅蠅胺與三聚氰胺的含量進(jìn)行優(yōu)化。

1.3.2 雙模板分子印跡聚合物表征

1.3.21 紅外光譜表征

將干燥溴化鉀粉末充分研磨，用壓片機(jī)壓片，測(cè)定其紅外光譜以調(diào)整基線。稱(chēng)取5 mg干燥的MIPs、NIPs和滅蠅胺、三聚氰胺標(biāo)品以及溴化鉀粉末，研磨均勻并壓成薄片，于4000～500 cm-1范圍分別掃描，以表征其紅外光譜[20]。

1.3.22 掃描電鏡表征

將導(dǎo)電膠涂抹并分散在待測(cè)試樣上，并對(duì)試樣再鍍金處理，在掃描電鏡下觀察試樣結(jié)構(gòu)。

1.3.3 雙模板分子印跡聚合物吸附性能

1.3.31 動(dòng)力學(xué)吸附實(shí)驗(yàn)

分別稱(chēng)量10 mg MIPs與NIPs，溶于80 mg/L的撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液中并于25 ℃水浴中充分?jǐn)嚢琛Ｓ诓煌瑫r(shí)間點(diǎn)（15、30、60、90、120、150、180、210、240 min）進(jìn)行取樣，離心后取上清液，過(guò)0.22 μm濾膜，應(yīng)用HPLC檢測(cè)其含量，并利用式（1）計(jì)算試樣對(duì)撲草凈溶液的吸附量（Q）：

式中：Q為平衡狀態(tài)時(shí)聚合物對(duì)目標(biāo)分子的吸附量/（μ g/g）；C0為標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥溶液的初始質(zhì)量濃度/（m g/L）；C為標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥溶液的平衡質(zhì)量濃度/（mg/L）；V為所加農(nóng)藥溶液的體積/mL；M為MIPs或NIPs的添加量/mg。

1.3.32 靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)及Scatchard模型擬合

準(zhǔn)確稱(chēng)量雙模版MIPs和非印跡聚合物NIPs各10 mg，加入1 mL不同質(zhì)量濃度（25、50、75、100、125、150、175、200 mg/L）撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液。在25 ℃恒溫環(huán)境下振蕩2 h，5000 r/min離心10 min后采用HPLC方法測(cè)定上清液中目標(biāo)分析物的濃度。利用式（1）計(jì)算MIPs、NIPs對(duì)撲草凈溶液的吸附量。

按照式（2）繪制Scatchard標(biāo)準(zhǔn)曲線，據(jù)此得出聚合物的吸附常數(shù)Kd與最大表觀吸附量Qmax。

式中：Q為聚合物對(duì)目標(biāo)分子的吸附量/（μg/g）；C為目標(biāo)物質(zhì)的平衡濃度/（mg/L）；Qmax為吸附位點(diǎn)的最大表觀結(jié)合量/（μg/g）；Kd為吸附位點(diǎn)的解離平衡常數(shù)/（μg/L）。

1.3.33 選擇性吸附實(shí)驗(yàn)

將10 mg MIPs分別與1 mL的撲草凈、阿特拉津、莠滅凈、西草凈以及吡蟲(chóng)啉農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液（80 mg/L）混合均勻，并置于室溫混合2 h，利用HPLC測(cè)定上層清液的濃度。同時(shí)作為對(duì)照，按同樣方法測(cè)定MIPs對(duì)滅蠅胺和三聚氰胺的吸附能力。計(jì)算雙模版MIPs的印跡因子和選擇性指數(shù)以評(píng)判其特異性吸附能力[21]。

1.3.4 HPLC檢測(cè)條件

待測(cè)液制備好后，HPLC儀裝備C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），上樣量為10 μL，以甲醇-水（7∶3，V/V）作為流動(dòng)相，流速為0.8 mL/min，檢測(cè)柱溫為30 ℃。

1.3.5 MIPs固相萃取柱的制備及優(yōu)化

采用干法裝柱的方式，MIPs的填柱量為30 mg，裝入固相萃取柱中，壓實(shí)填料后制成分子印跡固相萃取柱（molecularly imprinted solid phase extraction column，MISPE）。以撲草凈為例，考察不同洗脫條件下，MISPE對(duì)其吸附能力。采用6 mL乙腈-水溶液（3∶1，V/V）對(duì)所制備的萃取柱進(jìn)行活化；制備4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，取1 mL進(jìn)行上樣；以3 mL甲苯溶液進(jìn)行淋洗；3 mL 5%乙酸-乙腈溶液進(jìn)行洗脫。獲得的溶液經(jīng)氮?dú)獯蹈珊髲?fù)溶于1 mL乙腈中。采用同樣操作，以常規(guī)C18固相萃取柱作為對(duì)照。

1.3.6 方法學(xué)評(píng)價(jià)

將含有三嗪類(lèi)殺蟲(chóng)劑的黃瓜、蘋(píng)果和玉米樣品切碎，分別取5 g，向其中加入20 mL乙腈并充分混勻，重復(fù)離心合并上清液。取1 mL氮?dú)獯蹈?，再溶于等量乙?水溶液，依照優(yōu)化后的MISPE制備方法進(jìn)行HPLC檢測(cè)。

1.3.7 吸附再生性實(shí)驗(yàn)

采用所制備的雙模板MISPE，重復(fù)檢測(cè)4 種三嗪類(lèi)殺蟲(chóng)劑，以50 μg/L乙腈溶液洗脫共20 次，其中每5 次測(cè)定其三嗪類(lèi)農(nóng)藥的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 雙模板分子印跡聚合物制備條件優(yōu)化

由于不同模板分子間含有固定形狀的孔穴，其獨(dú)特的化學(xué)性質(zhì)決定模板分子的特異性吸附功能，所以在預(yù)組裝階段中，模板分子之間的配比會(huì)使最終的共聚物產(chǎn)生不同的結(jié)合位點(diǎn)與吸附活性[22]。表1表明，滅蠅胺和三聚氰胺這兩種模板分子物質(zhì)的量之比為3∶2時(shí)，所制備的印跡聚合物吸附量最大（2.36～2.93 mg/g）。以乙腈作為制孔劑時(shí)，其聚合物吸附量（0.71～2.93 mg/g）高于三氯甲烷（0.42～1.84 mg/g），且易研磨，因此選用乙腈作為制孔劑。交聯(lián)劑可選用二元交聯(lián)劑EGDMA和三元交聯(lián)劑TRIM，它們分別與模板分子按物質(zhì)的量比1∶20與1∶4進(jìn)行交聯(lián)制備印跡聚合物，比較發(fā)現(xiàn)選取TRIM為交聯(lián)劑時(shí)MIPs的吸附量更優(yōu)，這歸因于其更易產(chǎn)生聚合度更強(qiáng)的交聯(lián)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)[23]。因此，最終的制備體系選用滅蠅胺和三聚氰胺3∶2混合為雙模板分子，MAA為功能單體，TRIM為交聯(lián)劑，且三者的物質(zhì)的量比為1∶4∶4，此條件下MIPs識(shí)別性能和吸附量最佳。

表1 聚合體系的設(shè)計(jì)和優(yōu)化Table 1 Design and optimization of polymerization system

2.2 MIPs的形態(tài)結(jié)構(gòu)表征

2.2.1 紅外光譜分析

采用紅外吸收光譜實(shí)驗(yàn)對(duì)MIPs、NIPs以及模板分子三聚氰胺的表面化學(xué)特征進(jìn)行表征與比較，結(jié)果如圖1所示。MIPs與NIPs均在1733、1455、1155 cm-1處分別含有C＝O、O—H和C—O—C 3 個(gè)特征峰，證明成功進(jìn)行本體聚合反應(yīng)。除此之外，對(duì)于MIPs來(lái)說(shuō)，在1551 cm-1處已經(jīng)沒(méi)有三聚氰胺的特征吸收峰，說(shuō)明其中的模板分子已完全洗脫[24]。

圖1 MIPs、NIPs和三聚氰胺的紅外光譜圖Fig.1 Infrared spectra of MIPs,NIPs and melamine

2.2.2 MIPs和NIPs的掃描電鏡分析

為獲得聚合物的微觀形貌，利用掃描電鏡對(duì)MIPs（圖2A）和NIPs（圖2B）進(jìn)行更進(jìn)一步觀測(cè)。結(jié)果顯示，與NIPs相比，MIPs聚合物顯示成微球狀，其表面褶皺程度更為豐富。可認(rèn)為MIPs的比表面積更大，且結(jié)合位點(diǎn)更多，且宏觀表現(xiàn)上其吸附效果優(yōu)于NIPs。而對(duì)于NIPs來(lái)說(shuō)，其中并無(wú)模板分子印跡，因此其分子結(jié)合形態(tài)呈不規(guī)律狀。

圖2 MIPs（A）和NIPs（B）的掃描電鏡形態(tài)（×30000）Fig.2 Scanning electron micrographs of MIPs (A) and NIPs (B) (× 30000)

2.3 三嗪類(lèi)MIPs的吸附性能

2.3.1 靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)及Scatchard模型擬合分析

通常靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)可以用來(lái)判斷MIPs的吸附能力，如圖3所示。圖3A表明，隨著三嗪農(nóng)藥撲草凈的濃度增加，MIPs和NIPs對(duì)其吸附能力都明顯增強(qiáng)，說(shuō)明兩者都具有一定水平的物理吸附能力。然而在各個(gè)質(zhì)量濃度下，MIPs比NIPs具有更高的吸附量?？赡苡捎贛IPs聚合物分子中產(chǎn)生與三嗪類(lèi)農(nóng)藥分子結(jié)構(gòu)特異性結(jié)合的孔穴，產(chǎn)生了額外的物理吸附與化學(xué)吸附。而對(duì)于不含特異性結(jié)合位點(diǎn)的NIPs來(lái)說(shuō)，其吸附能力相對(duì)較差[25]。

圖3 MIPs和NIPs的靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)（A）及Scatchard模型（B）分析Fig.3 Static adsorption characteristics (A) and Scatchard model analysis (B) of MIPs and NIPs

圖3B為聚合物的Scatchard模型擬合圖，圖中各點(diǎn)并不呈線性，但進(jìn)行線性擬合后，可看成是斜率不同的兩條線性直線，證實(shí)所制備的MIPs中含有兩個(gè)特異性結(jié)合位點(diǎn)[26]。通過(guò)兩個(gè)擬合線性方程的斜率和截距，計(jì)算出該聚合物的兩種吸附位點(diǎn)的最大吸附量分別為2.85、5.46 mg/g，結(jié)合常數(shù)分別為26.688、80.775 mg/L。

2.3.2 吸附動(dòng)力學(xué)分析

動(dòng)態(tài)吸附及動(dòng)力學(xué)模型通常用于反映吸附反應(yīng)的速率及隨時(shí)間變化的規(guī)律，由圖4可知，在前100 min，吸附曲線斜率比較大，說(shuō)明MIPs與NIPs吸附比較快速，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)吸附量呈上升趨勢(shì)。而在100 min之后，MIPs與NIPs的吸附曲線較為平緩，都逐步達(dá)到吸附平衡狀態(tài)。然而，在吸附過(guò)程中，MIPs表現(xiàn)出比NIPs更快的吸附速度，而且在吸附平衡時(shí)其對(duì)三嗪類(lèi)農(nóng)藥撲草凈的吸附量也更高，這是由MIPs的特定孔穴所導(dǎo)致的特異性吸附[27]。

圖4 MIPs和NIPs的吸附動(dòng)力學(xué)Fig.4 Adsorption kinetics of MIPs and NIPs

2.3.3 選擇性吸附實(shí)驗(yàn)分析

對(duì)7 種典型三嗪類(lèi)農(nóng)藥進(jìn)行選擇性吸附，MIPs與其對(duì)照NIPs對(duì)農(nóng)藥的吸附量（Q）、印跡因子（imprinting factors，IF）和選擇性指數(shù)（selectivity index，SI）如表2所示。不同種類(lèi)農(nóng)藥的IF均大于1，說(shuō)明MIP對(duì)相應(yīng)農(nóng)藥的吸附作用是NIPs的1 倍以上。吡蟲(chóng)啉屬于氯化煙酰類(lèi)殺蟲(chóng)劑，由表2可知，MIPs與NIPs對(duì)其吸附量大體一致，證實(shí)MIPs對(duì)三嗪類(lèi)殺蟲(chóng)劑呈現(xiàn)出更優(yōu)良的選擇性。此外，由于吡蟲(chóng)啉是含氮結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，和模板分子相比具有不同的結(jié)構(gòu)，無(wú)法適應(yīng)聚合物中的特異性孔穴，故吸附率最低[28]。滅蠅胺和三聚氰胺雙模板MIPs可以增強(qiáng)吸附能力，是由于兩者在和交聯(lián)劑發(fā)生共聚反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生了協(xié)同作用，優(yōu)化了印跡孔穴，從而呈現(xiàn)出最匹配的結(jié)合狀態(tài)[29]。此外，在模板分子聚合物中形成孔穴時(shí)，體積大的模板分子有助于大空隙的形成，從而更利于分子吸附進(jìn)程[30]。

表2 聚合物對(duì)不同底物的印跡因子與選擇性指數(shù)Table 2 IF and SI of polymers for different pesticide compounds

2.4 雙模板分子印跡固相萃取條件的優(yōu)化

為優(yōu)化淋洗條件，選用甲苯、乙腈、二氯甲烷、水為淋洗液，HPLC檢測(cè)后得到目標(biāo)分析物的回收率，如圖5所示。當(dāng)乙腈和二氯甲烷作為淋洗液時(shí)，三嗪類(lèi)農(nóng)藥的回收率相對(duì)最低。而甲苯作為淋洗劑時(shí)，回收率相對(duì)最高，淋洗損失量最少。這是由于甲苯中甲基較小，所引起的極性非常弱，而且其溶解性比較好，能夠減少三嗪類(lèi)農(nóng)藥的淋洗損失[31]。

圖5 不同淋洗液對(duì)固相萃取回收率的影響Fig.5 Influence of different single eluents on the recovery of solid phase extraction

同時(shí)，洗脫液的優(yōu)化也有助于分析物后續(xù)的洗脫過(guò)程，一般選用極性較強(qiáng)的溶劑[32]。分別選擇乙腈、甲醇、乙酸-甲醇（5%、10%）、乙酸-乙腈（5%、10%）作為洗脫液，對(duì)目標(biāo)分析物分別洗脫后經(jīng)HPLC檢測(cè)。如圖6所示，選取5%乙酸-乙腈時(shí)，回收率最高，說(shuō)明其洗脫效果最好。

圖6 不同洗脫液對(duì)固相萃取回收率的影響Fig.6 Influence of different binary eluents on the recovery of solid phase extraction

通過(guò)條件優(yōu)化，確定最終MIPs的填柱量為30 mg，裝入固相萃取柱后制成MISPE柱。3 mL乙腈和等體積水配比作為活化液，取1 mL上樣液，以3 mL甲苯溶液為淋洗液，3 mL 5%乙酸-乙腈溶液為洗脫液，進(jìn)行HPLC檢測(cè)，以獲得最大的回收率。

2.5 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.5.1 線性范圍與檢出限

配制含4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照優(yōu)化的條件進(jìn)行HPLC測(cè)定，所得線性方程的相關(guān)參數(shù)如表3所示。這些三嗪類(lèi)農(nóng)藥線性方程的線性系數(shù)均大于0.99，線性范圍均在0.05～1.00 μg/mL之間。阿特拉津的檢出限為0.02 ng/mL，西草凈為0.03 ng/mL，撲草凈和莠滅凈分別為0.01 ng/mL。

表3 4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥的線性方程參數(shù)與檢出限Table 3 Linear relationships and detection limits of four triazine pesticides

2.5.2 常規(guī)固相萃取與分子印跡固相萃取的檢測(cè)

以黃瓜加標(biāo)樣品的（0.1 μg/mL）檢測(cè)為例，分別對(duì)MISPE柱和C18柱的吸附能力進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖7。結(jié)果表明，與C18柱相比，經(jīng)MISPE柱萃取過(guò)后，降低了黃瓜中色素等雜質(zhì)的含量，同時(shí)也實(shí)現(xiàn)了對(duì)三嗪類(lèi)農(nóng)藥的富集。

圖7 加標(biāo)黃瓜樣品提取圖Fig.7 Extracted ion chromatograms of spiked cucumber samples

2.5.3 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

為驗(yàn)證雙模版MIPs固相萃取-HPLC聯(lián)用對(duì)三嗪類(lèi)殺蟲(chóng)劑的測(cè)定效果，分別檢測(cè)3 種果蔬樣品中三嗪類(lèi)農(nóng)藥，得到平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。在加標(biāo)質(zhì)量濃度為0.1、0.25、0.5 μg/mL時(shí)，黃瓜樣品中阿拉特津、撲草凈、莠滅凈和西草凈的平均回收率均在85.1%～102.3%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.3%～6.8%之間。蘋(píng)果樣品中各分析物的平均回收率在75.2%～95.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.4%～5.7%之間；玉米樣品中平均回收率在85.2%～95.3%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.6%～5.1%之間。由此可知，該雙模版MISPE柱滿足果蔬中三嗪類(lèi)農(nóng)藥的特異性檢測(cè)要求，檢出限低、精密度高。

表4 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)Table 4 Recoveries and precision RSD

2.5.4 重復(fù)使用實(shí)驗(yàn)

采用所制備的MISPE柱進(jìn)行重復(fù)上樣，共20 次，其中每隔5 次檢測(cè)洗脫液中的阿拉特津、撲草凈、莠滅凈和西草凈4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥含量，回收率結(jié)果見(jiàn)表5。重復(fù)使用15 次后，回收率仍保持在80%以上，說(shuō)明MISPE柱可重復(fù)性好。

表5 分子印跡固相萃取柱的重復(fù)利用率Table 5 Reusability of MISPE%

2.5.5 材料性能評(píng)價(jià)

將本檢測(cè)方法與其他測(cè)定三嗪類(lèi)除草劑的方法進(jìn)行比較，表6顯示出吸附劑類(lèi)型、檢測(cè)方法、檢出限、回收率等方面的對(duì)比。與其他報(bào)道的方法相比，該方法制備的吸附材料具有較好的回收率和相似/更低的檢出限，表明該方法具有靈敏度高、精確度好、檢出限低的優(yōu)點(diǎn)。

3 結(jié)論

以滅蠅胺和三聚氰胺為雙模板分子，其物質(zhì)的量之比為3∶2，且采用MAA為功能單體，TRIM為交聯(lián)劑時(shí)，制備的雙模版分子印跡聚合物材料MIPs的吸附性能為最優(yōu)。對(duì)其吸附性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，表現(xiàn)出比NIPs更高的吸附量和良好的選擇性，說(shuō)明兩種模版分子在和交聯(lián)劑相互作用產(chǎn)生共聚反應(yīng)時(shí)，產(chǎn)生協(xié)同作用。通過(guò)聯(lián)用MIPs固相萃取-HPLC法以檢測(cè)黃瓜、蘋(píng)果和玉米中4 種三嗪類(lèi)農(nóng)藥，在加標(biāo)質(zhì)量濃度為0.1～0.5 μg/mL時(shí)，平均回收率為83.2%～102.3%，標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～6.8%，且檢出限較低。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，明顯增強(qiáng)了檢測(cè)效率和精密度，能適用于三嗪類(lèi)農(nóng)藥的痕量檢測(cè)，在農(nóng)藥殘留的定性定量分析中具有較好的應(yīng)用前景。