■ 譚展清 李光玉 劉可園 趙海平 邢寶瑞 孫朝陽 胡 肖 崔 凱

(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東青島 266109)

貉是我國重要的經(jīng)濟動物之一，其皮毛具有很高的經(jīng)濟價值。每年在貉取皮期會產(chǎn)生大量的屠體，其作為貉養(yǎng)殖的副產(chǎn)品并沒有被充分利用，如果將貉屠體加工生產(chǎn)為肉骨粉，不但可以避免嚴(yán)重的資源浪費和環(huán)境污染，而且可以緩解我國動物源性蛋白質(zhì)飼料緊缺的問題[1]。肉骨粉是指用畜禽屠宰后所剩的不宜人類食用的家畜軀體、骨、內(nèi)臟等做原料，經(jīng)加熱、脫脂、干燥、粉碎制得的產(chǎn)品[2]，產(chǎn)品粗蛋白含量為50%～60%，且氨基酸組分較為平衡，價格較魚粉便宜[3]。張亞飛[4]研究發(fā)現(xiàn)，將貂狐貉屠體按1∶2∶7 比例混合后，經(jīng)上述高溫高壓工藝流程生產(chǎn)出的新鮮狐貉貂混合屠體肉骨粉粗蛋白含量為45.0%，粗脂肪含量為11.2%，鈣含量為12.2%，總磷含量為6.0%，水分含量為8.5%，其營養(yǎng)成分含量符合《飼料用骨粉及肉骨粉》（GB/T 20193—2006）中的一級指標(biāo)。本研究中的貉屠體肉骨粉與傳統(tǒng)肉骨粉區(qū)別在于將貉完整屠體進(jìn)行加工，除去正常生產(chǎn)過程中無法避免的少量雜質(zhì)外，還混有少量毛、角、爪、糞便等物質(zhì)。加工后的肉骨粉成品呈金黃色或黃褐色粉狀，有肉香味，無腐敗氣味。肉骨粉是動物性蛋白飼料中一種重要原料，營養(yǎng)成分豐富，但由于原料和生產(chǎn)工藝差異較大，其營養(yǎng)成分也不盡相同[5]。大部分對毛皮動物胴體的處理是作為蛋白質(zhì)飼料原料生產(chǎn)肉骨粉和寵物罐頭（貓、狗糧）[6]。國內(nèi)對毛皮動物胴體利用較少，2021年水貂、狐、貉取皮后的屠體約17.18萬噸[7]，一些養(yǎng)殖戶將毛皮動物屠體當(dāng)作蛋白補充飼料使用，多采用高溫水煮，絞碎，工藝簡單、難以完全滅菌，質(zhì)量無法保證。本研究以貉屠體為原料，采用濕法水解生產(chǎn)貉源肉骨粉，分析其營養(yǎng)價值，對其安全性進(jìn)行評價，將毛皮動物屠體變廢為寶的同時也為養(yǎng)殖戶降低養(yǎng)殖成本，增加額外收入，減少對環(huán)境的污染，為貉源肉骨粉的生產(chǎn)和應(yīng)用提供理論參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

材料：分別以濰坊、煙臺、威海、菏澤、青島、臨沂、秦皇島、唐山、滄州、衡水、吉林、松原、錦州、大連、哈爾濱、大慶、雞西17個具有代表性的地市級的貉養(yǎng)殖地作為采樣地區(qū)，隨機從采樣地區(qū)選取6月齡9 kg左右的貉各3 只，共51 只，取皮后的貉屠體作為試驗樣品，屠體冷凍保存無變質(zhì)，于青島農(nóng)業(yè)大學(xué)單胃動物科學(xué)研究室利用烘箱、小型粉碎機等設(shè)備加工制成肉骨粉。

1.2 試驗試劑及儀器

磺胺二甲基嘧啶（SMZ）、磺胺甲噁唑、磺胺間甲氧嘧啶（SMM）、磺胺嘧啶、青霉素（Penicillin）、慶大霉素（Gen）、土霉素（Oxytetracycline）ELISA 試劑盒，以上所有試劑均購自江蘇晶美生物技術(shù)有限公司；犬細(xì)小陽性血清（本實驗室分離保存），Taq DNA 聚合酶、DL1000 Marker 為TaKaRa 產(chǎn)品；Agarosele le 瓊脂糖、Gelstaim 10000×核酸染料均為Tran產(chǎn)品；DNA/RNA共提試劑盒為TianGEN產(chǎn)品。

藥品：濃硫酸、濃鹽酸、濃硝酸、商品硫酸銅、甲醇。

儀器：全自動凱氏定氮儀（K1160 型，濟南海能儀器股份有限公司），玻璃索氏抽提裝置、紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司），熒光和可見光凝膠（以色列DNR 成像系統(tǒng)有限公司），PCR 儀（PCRtouch、杭州晶格科學(xué)儀器有限公司），SCI小型高速離心機（SCILOGEX 賽洛捷克，上?？蒲派锟萍加邢薰荆?，DYY-6D 型電泳儀（北京市六一儀器廠），連續(xù)波長酶標(biāo)儀（Infinite M Nano 型，帝肯上海貿(mào)易有限公司），可調(diào)式旋渦混合器（上海嘉鵬科技有限公司），商用高壓鍋（佛山市川粵智能商廚有限公司），生化培養(yǎng)箱（天津市萊玻特瑞儀器儀器設(shè)備有限公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品處理

貉屠體肉骨粉制備：將貉屠體放入絞肉機中將其混勻絞碎2 次，將絞碎好的肉骨泥用紗布包好放入高壓鍋中100 ℃高壓2 h，拿出紗布包放入螺旋榨油器過濾水分和油脂，將肉骨泥攤勻在的托盤上，放入65 ℃的烘箱中8 h 拿出，冷卻2 h 自然回溫，粉碎處理，裝入自封袋做好標(biāo)簽，放入-16 ℃冰箱保存。

1.3.2 17個地區(qū)貉源肉骨粉常規(guī)營養(yǎng)成分分析

水分含量測定參照GB/T 6435—2014；粗蛋白（CP）含量測定參照GB/T 6432—2018；粗脂肪（EE）含量測定參照GB/T 6433—2006；粗灰分含量測定參照GB/T 6438—2007；鈣（Ca）含量測定參照GB/T 6436—2018；總磷（P）含量測定參照GB/T 6437—2018。

1.3.3 17個地區(qū)貉源肉骨粉重金屬測定

重金屬的檢測由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究中心完成，鉛、總砷、汞、鎘、鉻的測定采用ICP-MS 法，鉛、總砷、鎘、鉻測定參照GB/T 5009.268—2016，汞的測定參照GB/T 5009.17—2021。

1.3.4 17個地區(qū)貉源肉骨粉藥物殘留測定

磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺嘧啶、青霉素、慶大霉素、土霉素含量的測定方法按照江蘇晶美生物科技有限公司所提供的試劑盒說明書方法進(jìn)行。

1.3.5 17個地區(qū)貉源肉骨粉犬細(xì)小病毒檢測

犬細(xì)小病毒檢測采用RT-PCR 擴增技術(shù)，按照DNA/RNA共提試劑盒說明書方法從17個地區(qū)貉源肉骨泥中提取犬細(xì)小病毒DNA，引物合成參照GeneID:28715659，應(yīng)用Primer Premier 5.0計算機軟件設(shè)計并合成1對特異性擴增引物，目的片段大小為286bp（CPV）。

反應(yīng)體系（20 μL）：Taq DNA聚合酶10 μL，上下游引物各1 μL，cpv滅活病毒模板2 μL，加水至20 μL。

PCR反應(yīng)程序：98 ℃ 3 min，98 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，40 個循環(huán)；最后72 ℃，7 min，4 ℃保存。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)Excel 2019 進(jìn)行初步處理后，應(yīng)用Spss 26版統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，Duncan’s多重比較分析差異顯著性。P<0.01 為差異極顯著，P<0.05 差異顯著。試驗結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 貉源肉骨粉常規(guī)營養(yǎng)成分分析

貉源肉骨粉常規(guī)營養(yǎng)成分分析結(jié)果見表1。由表1 可知，17 個地區(qū)貉源肉骨粉粗蛋白、粗灰分、總磷、鈣、水分含量滿足《飼料用骨粉及肉骨粉》（GB/T 20193—2006）對肉骨粉的要求，其中粗蛋白含量和粗灰分含量符合飼料用肉骨粉一等級肉骨粉的要求，除濰坊貉源肉骨粉外，其余16 個地區(qū)貉源肉骨粉的粗脂肪含量均高于國標(biāo)，其中菏澤貉源肉骨粉粗脂肪含量高達(dá)22.99%。

表1 各地區(qū)貉源肉骨粉中常規(guī)營養(yǎng)指標(biāo)分析結(jié)果（%）

表2 飼料用肉骨粉質(zhì)量指標(biāo)（%）

2.2 貉源肉骨粉藥物殘留檢測

由表3 可見，本試檢測貉源肉骨粉中磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、青霉素、土霉素、慶大霉素含量均低于表4《食品中獸藥最大殘留限量》（GB/T 31650—2019）所規(guī)定的含量。

表3 各地區(qū)貉源肉骨粉中藥物殘留指標(biāo)分析結(jié)果（ng/kg）

表4 食品中獸藥最大殘留限量（ng/kg）

2.3 貉源肉骨粉重金屬檢測

貉源肉骨粉藥物殘留檢測結(jié)果見表5，由表5 可知，本試驗測得貉源肉骨粉中重金屬元素含量，鉛、鎘、總砷、鉻和汞均低于《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB/T 13078—2017）規(guī)定的限量值（見表6），如果將貉源肉骨粉應(yīng)用到飼料中，不會引起鉛、砷、汞、鎘、鉻等重金屬元素的安全問題。

表6 貉源肉骨粉重金屬限量值（μg/kg）

2.4 貉源肉骨泥犬細(xì)小病毒檢測

PCR 擴增結(jié)果陽性對照組在1.0%的瓊脂糖凝膠電泳，在凝膠成像儀下可觀察到大小約為286 bp貉細(xì)小病毒VP2基因的部分片段的片段，其余17個地區(qū)貉源肉骨泥均沒有擴增出任何片段，說明這17 個貉源肉骨泥中并無犬細(xì)小病毒。

圖1 PCR凝膠成像圖

3 討論

3.1 貉源肉骨粉的營養(yǎng)價值

由表1 的各地區(qū)貉源肉骨粉中常規(guī)營養(yǎng)指標(biāo)分析結(jié)果中得知，17個地區(qū)的貉源肉骨粉粗蛋白含量均滿足《飼料用骨粉及肉骨粉》（GB/T 20193—2006）對肉骨粉的要求，貉源肉骨粉的粗脂肪含量除了濰坊地區(qū)，其余地區(qū)均高于12%，分析原因可能是貉屠體的脂肪約占活體的19.96%[8]，由于貉源肉骨粉的制作過程是將整貉屠體進(jìn)行加工，在處理過程中只是對屠體表面的脂肪進(jìn)行簡單地剔除，其次由于實驗室條件有限，后續(xù)對高壓水解后的肉骨泥處理采用螺旋榨油器，人工進(jìn)行去油脂，實驗室加工肉骨粉少了工業(yè)上高速離心，甩出油脂的步驟。本研究中菏澤貉源肉骨粉的粗脂肪含量最高，遠(yuǎn)高于國標(biāo)，除了生產(chǎn)工藝問題，各貉養(yǎng)殖地區(qū)間也存在由于飼喂條件不同，菏澤貉子屠體相對肥胖的原因。張銳[9]在河北昌黎縣隨機選取當(dāng)?shù)厮?、狐、貉胴體按2∶7∶1 混合加工肉骨粉檢測其常規(guī)營養(yǎng)成分，其粗蛋白、粗脂肪、鈣、磷含量分別40.0%、15.2%、12.2%、6.0%，其中造成脂肪含量超標(biāo)的關(guān)鍵原因是在實驗室條件下生產(chǎn)肉骨粉，生產(chǎn)工藝問題導(dǎo)致脂肪含量高于肉骨粉國標(biāo)之外，其余指標(biāo)均符合飼料用肉骨粉國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。張亞飛[4]采用高溫高壓水解、固液分離等工廠化生產(chǎn)狐貉貂混合屠體加工成的肉骨粉中主要營養(yǎng)成分：粗蛋白含量為45.0%、粗脂肪含量為11.2%、鈣含量為12.2%、總磷含量為6.0%、水分為8.5%，生產(chǎn)出的肉骨粉粗脂肪含量符合飼料用骨粉及肉骨粉國標(biāo)要求說明在工廠化生產(chǎn)的條件下，通過脫脂工藝可解決粗脂肪含量超標(biāo)問題，其余粗灰分、水分、鈣、總磷含量均符合國標(biāo)要求，毛皮動物加工成的混合肉骨粉從營養(yǎng)成分指標(biāo)上是合格的。張銳[9]研究發(fā)現(xiàn)貉的平均屠宰率為61.99%，貉胴體的凈肉率為59.79%，且貉胴體中蛋白質(zhì)、油脂、鈣磷含量較高，含有大量微量元素，是非常優(yōu)質(zhì)的動物源產(chǎn)品，也進(jìn)一步說明了貉源肉骨粉屠體加工成肉骨粉可作為備選的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料原料。我國飼用蛋白資源嚴(yán)重匱乏以及大宗非糧蛋白資源利用率極低，制約了我國畜牧業(yè)現(xiàn)代化進(jìn)程[10]。如能將貉源肉骨粉合理使用，大力發(fā)展蛋白飼料替代飼料中豆粕用量，可促進(jìn)我國飼料和養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

3.2 貉源肉骨粉藥物殘留的評價

目前在貉養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用可產(chǎn)生殘留的藥物添加劑主要有：β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酰類、氨基糖苷類、磺胺類、微量元素等[11]。這些藥物殘留會對貉產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)和毒性反應(yīng)，還會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，還可以產(chǎn)生致病菌交叉感染等[12]。養(yǎng)殖戶在貉養(yǎng)殖過程中可能存在不規(guī)范使用藥物的情況，造成畜產(chǎn)品中殘留超標(biāo)，從而危害畜體健康，通過糞、尿可直接進(jìn)入土壤和水體，導(dǎo)致土壤中微生物對抗生素的抗性水平增加。研究發(fā)現(xiàn)抗菌藥物能從飼料向畜禽糞便遷移，在豬、雞的飼料中添加藥物后，在畜禽的糞便中發(fā)現(xiàn)了藥物的殘留；對糞便進(jìn)行堆肥發(fā)酵成為有機肥后，部分藥物被降解，但仍有一些藥物繼續(xù)殘留[13]。說明部分藥物會通過由畜禽糞便堆肥制作有機肥的過程進(jìn)入環(huán)境土壤的殘留遷移途徑，可能會導(dǎo)致藥物殘留惡性循環(huán)。目前針對飼料獸藥殘留量在豬肉、禽類身上的研究相對較多，但對于貉源肉骨粉的獸藥殘留量較少，本文選取在貉養(yǎng)殖過程中最常用的幾種藥物進(jìn)行獸藥殘留檢測，17個地區(qū)貉源肉骨粉藥物殘留量檢測結(jié)果含量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于《食品中獸藥最大殘留限量》（GB/T 31650—2019）所規(guī)定的含量，為促進(jìn)貉源肉骨粉的開發(fā)和安全使用提供理論依據(jù)。

3.3 貉源肉骨粉重金屬殘留量的評價

飼料污染問題中所說的重金屬元素實際上主要指汞（Hg）、鎘（Cd）、鉛（Pb）以及砷（As）等生物毒性顯著的元素[14]。隨著對動物所需微量元素的重視，動物所必需的元素（如銅、鋅等）可能存在在飼料中被超量添加的情況，使得這些元素變成飼料中重金屬污染源。重金屬污染物不同于有機污染物，它們不易分解，可以在飼料和環(huán)境中長期殘留，當(dāng)其隨飼料進(jìn)入動物體內(nèi)后一般不會被分解，而是蓄積在動物機體的某些器官（如肝臟和腎臟等）中，進(jìn)入畜禽機體會導(dǎo)致受害畜禽生長發(fā)育緩慢，生長性能下降，患病甚至中毒死亡。同時，貉是食肉動物，當(dāng)選擇價格較低的飼料時，其重金屬含量可能超標(biāo)，會造成糞便中重金屬含量增加，從而對土壤、作物、水體甚至人類生存構(gòu)成威脅[15]。研究發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)飼料級肉粉存在重金屬污染問題，飼料是重金屬進(jìn)入動物體內(nèi)的主要途徑之一，國產(chǎn)飼料級肉粉重金屬污染嚴(yán)重，可能是因為肉粉中動物內(nèi)臟和皮毛重金屬含量高，有效控制貉子養(yǎng)殖過程中含重金屬類產(chǎn)品的使用量，是貉源肉骨粉生產(chǎn)和使用的前提條件，因此，對貉源肉骨粉的重金屬檢測是必要的。本文測得貉源肉骨粉中重金屬元素含量表5 所示，貉源肉骨粉中的總砷、鉛和鉻汞和鎘均低于限量值，不會引起重金屬飼料安全問題。

3.4 貉源肉骨泥中犬細(xì)小病毒

貉細(xì)小病毒引起貉的細(xì)小病毒性腸炎是一種急性、烈性、高度接觸性病毒性傳染病，以病貉嘔吐、劇烈腹瀉、高發(fā)病率和高死亡率為主要特征，是危害貉養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要傳染病之一[16]。貉細(xì)小病毒性腸炎常由犬細(xì)小病毒、水貂細(xì)小病毒或者狐貍細(xì)小病毒引起，最常見為犬細(xì)小病毒，犬細(xì)小病毒病的病原為細(xì)小病毒科細(xì)小病毒屬的犬細(xì)小病毒，該病毒無囊膜，犬細(xì)小病毒對外界環(huán)境抵抗能力極強，病毒在pH 3～11 時穩(wěn)定，能耐受65 ℃加熱30 min 仍保持感染活性，低溫長期存放對犬細(xì)小病毒的感染活性無明顯影響[17]。本試驗中對貉源肉骨泥犬細(xì)小病毒的檢測結(jié)果均無犬細(xì)小病毒的存在，后續(xù)肉骨泥的加工過程中100 ℃高壓2 h，進(jìn)一步確保貉源肉骨粉的安全性。

4 結(jié)論

貉源肉骨粉符合動物飼料原料要求，且營養(yǎng)豐富。貉肉骨粉安全性符合要求，貉源肉骨粉中的幾種常見藥物的殘留和重金屬殘留均符合國標(biāo)要求同時也不含犬細(xì)小病毒。