王亞楠，孫 宏，王秀珍，梁國英，蔡國鋒，劉 凱，裴思穎，張金朋*

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040； 2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001； 3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040）

抑郁癥是現(xiàn)代社會(huì)一種普遍的、危及生命的、高度復(fù)發(fā)的精神疾病，主要表現(xiàn)為快感缺乏、情緒抑郁，導(dǎo)致抑郁癥患者的復(fù)發(fā)率、死亡率和自殺率較高［1-2］，可能成為世界范圍內(nèi)殘疾的主要來源［3］。目前抑郁癥的機(jī)制研究主要集中在神經(jīng)遞質(zhì)減少、下丘腦-垂體-腎上腺軸改變和免疫系統(tǒng)異常等方面［4-5］。新的證據(jù)表明腸道菌群不僅影響胃腸功能，還可通過微生物-腸道-腦軸調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的生理功能和行為［6-9］。研究者通過16S rRNA 基因測序方法發(fā)現(xiàn)重度抑郁癥（MDD） 患者顯示出腸道微生物群組成的劇烈改變［10-11］，即與健康對照組比較，抑郁受試者的擬桿菌門、變形桿菌門和放線菌門水平增加，厚壁菌門數(shù)量減少。以上結(jié)果表明腸道菌群與抑郁癥之間存在一定聯(lián)系。探究腸道菌群在抑郁狀態(tài)下對大腦功能的影響對于開發(fā)治療抑郁癥的藥物具有重要意義。

柴胡加龍骨牡蠣湯記載于張仲景《傷寒論》，其有和解少陽、鎮(zhèn)驚安神之功，目前臨床常用其治療抑郁癥［12］。因此，本研究應(yīng)用慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激（CUMS） 法制備抑郁大鼠模型，采用腸道微生物測序和腦組織神經(jīng)遞質(zhì)定量結(jié)合的方式，探討柴胡加龍骨牡蠣湯通過作用于腸道菌群調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)對抑郁癥的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物 80 只SPF 級(jí)SD 雄性大鼠，8 周齡，體質(zhì)量（200±20） g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK （黑） 2019-001］，飼養(yǎng)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障系統(tǒng)內(nèi)，環(huán)境溫度（24±2）℃，相對濕度50% ～70%，12 h/12 h 晝夜交替照明，定時(shí)定點(diǎn)換水并添加飼料，每天更換墊料。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)審批（倫理號(hào)HZYLLBA201903）。

1.2 儀器 DK-98-II 型恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）； SP131010-33Q 型渦旋振蕩器 （美國Barnstead公司）； ABI GeneAmp?9700 型 PCR 儀 （ 美國 Applied Biosystems 公司）； EP5417R 型高速臺(tái)式離心機(jī) （德國Eppendorf 公司）； RT-6100 型酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）； SA215 型曠場裝置（江蘇賽昂斯生物科技有限公司）。

1.3 試劑與藥物 柴胡加龍骨牡蠣湯中藥顆粒劑［組方藥材柴胡12 g、黃芩9 g、龍骨15 g、牡蠣15 g、黨參9 g、桂枝9 g、茯苓15 g、半夏9 g、大黃9 g、珍珠母（代鉛丹）15 g、生姜9 g、大棗10 g，北京康仁堂藥業(yè)有限公司］。鹽酸氟西汀膠囊（法國禮來公司，批號(hào)9492AA）。大鼠五羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素 （NE）、乙酰膽堿 （Ach）ELISA 試劑盒 （江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司，貨號(hào)MM-71127R2、MM-0556R2、MM-0517R2 ）； E.Z.N.A.?soil DNA kit （美國BioTek 公司）； AxyPrep DNA Gel Extraction Kit （美國Axygen 公司）； QuantusTMFluorometer ［普洛麥格（北京） 生物技術(shù)有限公司］。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥 大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、西藥組和中藥低、中、高劑量組，于屏障系統(tǒng)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，除正常組外其余各組大鼠采用慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激（CUMS） 法制備抑郁模型［13-14］，刺激方法包括禁水（24 h）、夾尾（距尾根1 cm，持續(xù)3 min）、冷水游泳（4 ℃，持續(xù)5 min）、束縛（3 h）、熱刺激（45 ℃，持續(xù)5 min）、禁食（24 h）、晝夜顛倒（白天給予黑暗環(huán)境，夜晚給予光照）、潮濕墊料（24 h），每天隨機(jī)選擇2 種不同刺激方法，在相鄰2 d 不重復(fù)使用，持續(xù)49 d。于刺激第29天各組開始灌胃給藥，給藥劑量按照大鼠與人劑量折算系數(shù)計(jì)算得出，每天1 次，中藥低、中、高劑量組分別給予柴胡加龍骨牡蠣湯顆粒劑2.89、5.78、11.56 g/kg （相當(dāng)于成人每日服藥量的1、2、5 倍），西藥組給予鹽酸氟西汀2.06 mg/kg，正常組和模型組給予等體積生理鹽水。

2.2 行為學(xué)評(píng)估 分別于實(shí)驗(yàn)的第28 天（造模第28 天，未給藥第0 天）、49 天（給藥第21 天） 2 個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，評(píng)估各組大鼠造模情況、給藥后藥效。

2.2.1 曠場實(shí)驗(yàn) 在安靜、光線穩(wěn)定的環(huán)境中，將大鼠放入長、寬各100 cm，高為40 cm 的黑色立方體敞箱中，將敞箱底部劃分為25 個(gè)大小相等正方形格子，以中間9 個(gè)格子為中央?yún)^(qū)，周圍16 個(gè)格子為周圍區(qū)，輕輕將大鼠放入最中間的格子，視頻記錄分析5 min 內(nèi)在敞箱中的水平運(yùn)動(dòng)總距離、垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)、中央停留區(qū)時(shí)間。

2.2.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 在安靜、光線穩(wěn)定的環(huán)境中，將各組大鼠輕輕置于直徑40 cm、高62 cm 的圓形透明水桶中，水深約為30 cm，水溫22～25 ℃，保證大鼠頭部露出水面時(shí)后肢無法觸及水桶底部，計(jì)時(shí)6 min，視頻記錄在后4 min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。實(shí)驗(yàn)期間，及時(shí)清理大鼠糞便并更換清水，結(jié)束后擦干水分。

2.3 取材 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，每組收集5 份大鼠糞便，每份取3～5 粒，置于凍存管中，暫存于液氮中，用于16S rRNA 基因測序。收集糞便后，以3% 戊巴比妥鈉麻醉大鼠，冰上開顱取全腦，仔細(xì)分離海馬組織后稱定質(zhì)量，隨后置于-80 ℃冰箱中保存。

2.4 ELISA 法檢測海馬組織神經(jīng)遞質(zhì)水平 按照試劑盒說明書制備5-HT、NE、Ach 梯度溶液，檢測海馬組織三者水平。

2.5 16S rRNA 測序 通過Illumina 公司的Miseq PE300 平臺(tái)進(jìn)行測序，使用5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′和5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′序列對16S rRNA 基因V3-V4 可變區(qū)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，每個(gè)樣本重復(fù)3 次。以NEXTFLEX Rapid DNA-Seq Kit 進(jìn)行建庫，原始測序序列質(zhì)控和拼接過程使用fastp 軟件、FLASH 軟件分析。根據(jù)97%的相似度對序列進(jìn)行OTU 聚類并剔除嵌合體，基于得到的OTU 序列進(jìn)行后續(xù)的微生物組學(xué)分析。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過SPSS 22.0 軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（±s） 表示，多組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠一般情況 正常組大鼠飲食、飲水正常，活動(dòng)自如，反應(yīng)靈敏，排便正常，體型偏胖，健康狀況良好； 模型組大鼠飲食、飲水、排便量減少，大便干燥，精神狀態(tài)較差，體型瘦弱； 與模型組比較，中藥各劑量組、西藥組大鼠飲食、飲水、精神狀態(tài)、體質(zhì)量好轉(zhuǎn)，排便量、大便狀態(tài)恢復(fù)。

3.2 柴胡加龍骨牡蠣湯對大鼠行為學(xué)的影響

3.2.1 曠場實(shí)驗(yàn) 造模第28 天，如表1 所示，與正常組比較，模型組大鼠水平運(yùn)動(dòng)總距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間減少（P＜0.05）； 模型組、各給藥組水平運(yùn)動(dòng)總距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間無顯著差異（P＞0.05），表明造模成功。

表1 造模第28 天各組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝8）

表1 造模第28 天各組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝8）

注： 與正常組比較，*P＜0.05。

組別水平運(yùn)動(dòng)總距離/m中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)/次中央?yún)^(qū)停留時(shí)間/s正常組24.40±1.7119.4±1.1450.62±1.56模型組8.94±1.77*4.8±0.84*9.30±0.73*中藥低劑量組8.94±0.174.8±1.309.31±0.44中藥中劑量組8.71±0.464.6±1.349.24±0.42中藥高劑量組9.07±1.264.2±0.839.50±1.38西藥組9.31±1.274.4±0.899.46±1.55

給藥第21 天，如表2 所示，與正常組比較，模型組大鼠水平運(yùn)動(dòng)總距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間減少（P＜0.05）； 與模型組比較，各給藥組大鼠水平運(yùn)動(dòng)總距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間增加（P＜0.05）；與西藥組比較，中藥高劑量組大鼠水平運(yùn)動(dòng)總距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間無明顯變化（P＞0.05），而中藥低、中劑量組大鼠水平運(yùn)動(dòng)總距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間減少（P＜0.05）。

表2 給藥第21 天各組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝8）

表2 給藥第21 天各組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝8）

注： 與正常組比較，*P＜0.05； 與模型組比較，＃P＜0.05； 與西藥組比較，＆P＜0.05。

組別水平運(yùn)動(dòng)總距離/m中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)/次中央?yún)^(qū)停留時(shí)間/s正常組29.59±1.0819.6±1.1450.99±1.75模型組13.03±1.79*4.6±0.89*5.68±1.05*中藥低劑量組15.85±0.76＃＆8.8±0.84＃＆ 18.48±1.32＃＆中藥中劑量組18.67±0.63＃＆11.6±0.89＃＆ 28.69±1.08＃＆中藥高劑量組23.38±1.99＃15.2±1.64＃39.46±1.46＃西藥組27.29±1.94＃16.6±1.82＃40.19±1.39＃

3.2.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 如表3 所示，造模第28 天，與正常組比較，模型組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間增加（P＜0.05）。給藥第21 天，與正常組比較，模型組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間增加（P＜0.05）； 與模型組比較，各給藥組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間減少（P＜0.05）； 中藥各劑量組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間多于西藥組（P＜0.05）。

表3 各組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間比較（s，±s，n＝8）

表3 各組大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間比較（s，±s，n＝8）

注： 與正常組比較，*P＜0.05； 與模型組比較，＃P＜0.05； 與西藥組比較，＆P＜0.05。

組別造模第28 天給藥第21 天正常組42.29±1.6140.42±2.01模型組79.09±1.92*108.51±2.92*中藥低劑量組78.97±2.5885.99±2.32＃＆中藥中劑量組79.30±3.1576.43±2.47＃＆中藥高劑量組78.61±2.2953.84±2.25＃＆西藥組78.84±3.1348.59±1.31＃

3.3 柴胡加龍骨牡蠣湯對大鼠海馬組織神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響 如表4 所示，與正常組比較，模型組大鼠海馬組織5-HT、NE、Ach 水平降低（P＜0.05）； 與模型組比較，各給藥組大鼠海馬組織5-HT、NE、Ach 水平升高（P＜0.05）；與西藥組比較，中藥高劑量組大鼠海馬組織NE、Ach 水平無明顯變化（P＞0.05），各劑量組大鼠海馬5-HT 水平降低（P＜0.05）。

表4 各組大鼠海馬組織神經(jīng)遞質(zhì)水平比較（μg/mg，±s，n＝8）

表4 各組大鼠海馬組織神經(jīng)遞質(zhì)水平比較（μg/mg，±s，n＝8）

注： 與正常組比較，*P＜0.05； 與模型組比較，＃P＜0.05； 與西藥組比較，＆P＜0.05。

組別5-HTNEAch正常組0.45±0.0060.17±0.0110.42±0.006模型組0.22±0.007*0.08±0.004*0.26±0.009*中藥低劑量組0.29±0.006＃＆0.10±0.004＃＆0.29±0.006＃＆中藥中劑量組0.34±0.008＃＆0.12±0.004＃＆0.32±0.005＃＆中藥高劑量組0.39±0.004＃＆0.14±0.007＃0.35±0.007＃西藥組0.44±0.009＃0.15±0.003＃0.37±0.009＃

3.4 柴胡加龍骨牡蠣湯對大鼠腸道菌群的影響

3.4.1 腸道菌群物種多樣性分析 如圖1A ～1B 所示，Shannon、Simpson 的稀釋性曲線均已趨向平緩，表明所有樣本群落豐富度、多樣性、覆蓋度、均勻度良好，測序數(shù)據(jù)量足夠大，可充分反映各組大鼠糞便樣本中絕大部分的腸道微生物多樣性信息，能用于后續(xù)微生物組學(xué)分析。如圖1C～1D 所示，與正常組比較，模型組Shannon 指數(shù)降低（P＜0.05），Simpson 指數(shù)升高（P＜0.05），表明CUMS 誘導(dǎo)抑郁癥造模使大鼠腸道菌群的物種豐富度、多樣性升高；與模型組比較，各給藥組Shannon 指數(shù)升高（P＜0.05），Simpson 指數(shù)降低（P＜0.05），表明中藥和西藥均可降低CUMS 誘導(dǎo)抑郁癥模型大鼠的腸道菌群多樣性。

圖1 各組大鼠腸道菌群α 多樣性分析（±s，n＝5）

3.4.2 腸道菌群結(jié)構(gòu)分析 采用基于OTU 的主成分分析（PCA，圖2A）、weighted UniFrac 主坐標(biāo)分析（PCoA，圖2B）、非度量多維尺度分析（NMDS，圖2C） 評(píng)估各組微生物群落之間的差異。由此可知，各組樣本內(nèi)部均能夠聚類，表明腸道菌群趨于一致； 正常組和模型組菌群結(jié)構(gòu)組成存在差異（P＜0.05），表明CUMS 誘導(dǎo)抑郁癥模型大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂； 中藥組和西藥組腸道菌群結(jié)構(gòu)偏離模型組，并趨向正常組，表明中藥和西藥可使抑郁癥大鼠的腸道菌群結(jié)構(gòu)向正常狀態(tài)回調(diào)。

圖2 各組大鼠腸道菌群β 多樣性分析（n＝5）

3.4.3 不同分類水平物種組成分析 如圖3A 所示，在門水平上，與正常組比較，模型組大鼠糞便樣本中擬桿菌門（Bacteroidetes）、變形菌門 （Proteobacteria） 相對豐度升高，厚壁菌門（Firmicutes） 相對豐度降低； 與模型組比較，中藥組可升高厚壁菌門豐度，降低擬桿菌門和變形菌門豐度。如圖3B 所示，在綱水平上，與正常組比較，模型組大鼠糞便樣本中梭菌綱（Clostridia）、桿菌綱（Bacilli）豐度降低，擬桿菌綱 （Bacteroidia）、丙型變形菌綱（Gammaproteobacteria） 豐度升高； 與模型組比較，中藥組可升高梭菌綱和桿菌綱相對豐度，降低擬桿菌綱、丙型變形菌綱相對豐度。結(jié)果表明，各組間腸道菌群組成有著高度的特異性，CUMS 誘導(dǎo)抑郁癥大鼠的腸道菌群中有益菌豐度減少，有害菌豐度增加，而柴胡加龍骨牡蠣湯給藥可增加抑郁癥大鼠腸道菌群中益生菌豐度。

圖3 各組大鼠腸道菌群在門水平（A）、綱水平（B） 上的組成

3.4.4 關(guān)鍵差異菌屬分析 多個(gè)分組間比較采用線性判別效應(yīng)量分析（LEfSe），結(jié)果見圖4A。各組中富集的差異菌屬用不同顏色表示，根據(jù)線性判別分析值（LDA score） 大于2、組間非參數(shù)因子秩和驗(yàn)檢篩選差異菌屬，見圖4B。如表5 所示，與正常組比較，模型組大腸桿菌-埃希氏菌、擬桿菌豐度升高（P＜0.05）； 與模型組比較，各給藥組大腸桿菌-埃希氏菌、擬桿菌豐度降低（P＜0.05），表明中藥和西藥均具有減少CUMS 誘導(dǎo)抑郁癥大鼠腸道內(nèi)有害菌的作用。值得注意的是，與正常組比較，模型組乳酸桿菌（g_Lactobacillus） 豐度降低（P＜0.05）； 與模型組比較，中藥各劑量組乳酸桿菌豐度升高（P＜0.05），表明中藥可特異性地升高腸道中有益菌豐度。

表5 各組大鼠腸道中細(xì)菌相對豐度比較（±s，n＝5）

表5 各組大鼠腸道中細(xì)菌相對豐度比較（±s，n＝5）

注： 與正常組比較，*P＜0.05； 與模型組比較，＃P＜0.05。

菌屬正常組模型組中藥低劑量組中藥中劑量組中藥高劑量組西藥組g_Escherichia-Shigella32.0±52.9915 326.8±967.10*7 388.8±508.50＃1 219.0±1 474.41＃62.8±111.88＃2 984.0±3 898.59 g_Bacteroides48.4±61.543 430.8±3 952.47* 1 129.4±164.56＃838.0±1 781.34＃169.2±154.02＃1 064.8±1 127.40 g_Coriobacteriaceae_UCG-0027.8±7.291 434.8±1 661.91*291.6±229.03＃102.2±115.01＃76.2±38.86＃189.6±334.90 g_UBA18192.2±1.79163.0±179.14*122.8±215.14＃15.6±13.74＃13.2±22.01＃54.6±29.48 g_Fusicatenibacter327.2±538.785.2±10.03*0.6±1.34＃23.2±31.01＃1 516.8±1 329.75＃12.6±13.56 g_Lachnospiraceae_ND3007_group12.2±15.300.00±0.00*0.8±1.79＃15.8±34.77＃35.6±70.18＃0.2±0.45 g_Lactobacillus11 684.6±9 145.49569.0±883.43*3 472.8±4 724.47＃ 6 426.4±6 197.74＃ 8 390.8±5 156.44＃1 373.6±1 443.13 g_Marvinbryantia25.2±35.911.0±1.22*30.2±31.54＃24.2±34.36＃45.4±43.51＃4.8±8.56 g_UCG-008151.6±273.990.0±0.00*2.0±3.94＃73.0±142.94＃199.4±261.87＃153.8±164.91＃g_Enterococcus9.2±10.85439.8±162.85*389.0±442.24＃2 141.0±4 760.59＃4.4±6.54＃19.6±15.18＃

3.4.5 腸道菌群調(diào)節(jié)腦功能的作用分析 如圖5 所示，腸道菌屬g_Escherichia-Shigella、g_Bacteroides、g_Coriobacteriaceae_UCG-002、g_UBA1819、g_Anaerostipes、g_Enterococcus與大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間呈正相關(guān)（P＜0.05），與曠場實(shí)驗(yàn)水平運(yùn)動(dòng)總距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間及5-HT、NE、Ach 水平呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；g_Fusicatenibacter，g_Lachnospiraceae_ND3007_group，g_Lactobacillus，g_Marvinbryantia，g_UCG-008 與大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），與曠場實(shí)驗(yàn)水平運(yùn)動(dòng)總距離、中央?yún)^(qū)進(jìn)入次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時(shí)間及5-HT、NE、Ach 水平呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)果表明，多種腸道菌屬與柴胡加龍骨牡蠣湯藥效有關(guān)聯(lián)，抑郁癥大鼠多種抑郁樣癥狀受到腸道中有害菌和益生菌的共同調(diào)節(jié)。

圖5 腸道細(xì)菌與行為學(xué)和生理生化指標(biāo)的相關(guān)性分析（n＝25）

4 討論

本研究采用16S rRNA 基因測序方法，探索柴胡加龍骨牡蠣湯對CUMS 誘導(dǎo)的抑郁癥大鼠腸道微生物群和糞便代謝表型的影響。結(jié)果表明，各組大鼠腸道微生物群落中各個(gè)層級(jí)的豐度存在差異； 同時(shí)，在CUMS 造模后，宿主神經(jīng)遞質(zhì)也受到干擾，表明抑郁癥不僅改變了腸道菌群，還影響了宿主神經(jīng)遞質(zhì)代謝，最終導(dǎo)致宿主抑郁樣行為。柴胡加龍骨牡蠣湯干預(yù)可調(diào)節(jié)腸道菌群，增加抑郁癥大鼠腸道菌群中益生菌豐度，表明腸道菌群的改變可能調(diào)節(jié)宿主代謝影響腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)，進(jìn)而改善抑郁。

研究者最近利用16S rRNA 基因測序發(fā)現(xiàn)，抑郁癥會(huì)影響重度抑郁癥患者微生物群的穩(wěn)定性［15］，與健康對照組比較，抑郁癥患者擬桿菌門、變形菌門和放線菌門豐度增加，而厚壁菌門豐度減少。本研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠擬桿菌門豐度升高和厚壁菌門豐度降低； 而柴胡加龍骨牡蠣湯給藥可增加抑郁癥大鼠腸道中有益菌群厚壁菌門、梭菌綱、桿菌綱、乳酸桿菌和瘤胃球菌豐度，降低有害菌擬桿菌門豐度。

飲食可作為調(diào)節(jié)抑郁癥的重要干預(yù)方式［16］。飲食進(jìn)入人體消化系統(tǒng)，代謝產(chǎn)生的神經(jīng)遞質(zhì)可通過腸腦軸作用于宿主大腦［17］，腸道微生物群和腦組織神經(jīng)遞質(zhì)代謝的變化可能是消化系統(tǒng)受損的直接后果，研究發(fā)現(xiàn)與腸道菌群有關(guān)的血清素代謝、色氨酸代謝、γ-氨基丁酸代謝對宿主的腦功能有重要作用［18-20］。本研究發(fā)現(xiàn)，柴胡加龍骨牡蠣湯可通過調(diào)節(jié)腸道菌群影響抑郁癥大鼠海馬組織5-HT、NE、Ach 水平，表明腸道菌-神經(jīng)遞質(zhì)-腦軸是柴胡加龍骨牡蠣湯治療抑郁癥的重要機(jī)制。多種腸道益生菌和有害菌與大鼠的行為學(xué)指標(biāo)密切相關(guān)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)CUMS 造模的大鼠排便不通暢，但未進(jìn)行量化分析。本研究結(jié)果表明，腸道微生物群是柴胡加龍骨牡蠣湯發(fā)揮治療抑郁效果的重要作用靶點(diǎn)，調(diào)節(jié)腸道菌群的組成和功能有助于抑郁患者的臨床治療。

綜上所述，柴胡加龍骨牡蠣湯對CUMS 誘導(dǎo)的大鼠抑郁癥具有改善作用，可調(diào)節(jié)其相關(guān)的腸道菌群紊亂，改變宿主腦組織代謝穩(wěn)態(tài)。探究腸腦軸與疾病的關(guān)系有助于開發(fā)基于菌群的疾病診斷、預(yù)防和治療工具。