許晨新，張景正，嚴(yán)寶飛，張思訪，劉 嘉

江蘇衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院 藥學(xué)院，江蘇 南京 211800

我國(guó)是茶葉生產(chǎn)、加工和消費(fèi)大國(guó)，茶葉資源種類(lèi)豐富，是我國(guó)特色地理標(biāo)志性產(chǎn)品[1]。唐代《茶經(jīng)》中記載茶葉有助于睡眠、促進(jìn)消化、利尿排毒等功效?，F(xiàn)代研究亦表明茶葉富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如茶多酚、氨基酸、生物堿、微量元素和糖類(lèi)等成分[2]，具有抗氧化、抗腫瘤、降血壓、調(diào)血脂、殺菌消炎等藥理作用[3-9]。茶葉中的主要活性成分含量因產(chǎn)地不同而略有差異，其有效物質(zhì)的種類(lèi)和含量成為評(píng)價(jià)茶葉品質(zhì)的重要依據(jù)[10]。雨花茶是我國(guó)十大名茶之一，是江蘇省優(yōu)質(zhì)名茶代表，2005年獲批國(guó)家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品[11-12]。雨花茶屬于綠茶，作為未發(fā)酵茶，保留了許多天然成分，其茶多酚含量高于其他茶類(lèi)[13]。

茶多酚是茶葉中的活性成分，主要由多羥基酚類(lèi)化合物構(gòu)成，是茶葉中多酚類(lèi)物質(zhì)的總稱(chēng)[14-15]。茶多酚主要包括兒茶素類(lèi)、黃酮類(lèi)、黃酮醇類(lèi)和花色苷類(lèi)等多酚物質(zhì)，約占茶葉干重的20%～35%[16]，其中兒茶素類(lèi)約占60%～80%[17]，主要由沒(méi)食子酸、兒茶素、表兒茶素、咖啡因、表沒(méi)食子兒茶素等組成[18]。目前，茶多酚已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健品和化妝品等領(lǐng)域[19]。有關(guān)茶多酚抗腫瘤機(jī)制研究多集中在其單體中，不能整體體現(xiàn)茶多酚的多成分、多靶點(diǎn)和多通路抗腫瘤的機(jī)制。

近年來(lái)，指紋圖譜技術(shù)已廣泛應(yīng)用于食品和藥用植物領(lǐng)域，其可以直觀反映食品和藥物的質(zhì)量標(biāo)示成分并用于品質(zhì)控制和鑒別[20]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作為探索中藥作用機(jī)制及活性成分開(kāi)發(fā)的一種有力工具，其通過(guò)“藥物-靶點(diǎn)-疾病”的網(wǎng)絡(luò)圖，一方面可以有效揭示多分子協(xié)同機(jī)制，另一方面可以預(yù)測(cè)中藥成分分子的潛在作用機(jī)制，從而進(jìn)一步尋求新藥物[21]。本研究擬采用HPLC分析方法，建立雨花茶的HPLC指紋圖譜及其含量測(cè)定方法。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法構(gòu)建雨花茶“主要成分-核心靶點(diǎn)-主要通路”的網(wǎng)絡(luò)圖，以期為雨花茶抗腫瘤機(jī)制的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

雨花茶樣品購(gòu)于南京及周邊地區(qū)，來(lái)源信息詳見(jiàn)表1，茶品均置于冰箱冷藏保存。

表1 雨花茶信息Table 1 Origin of Yuhua tea product

1.2 儀器與試劑

1.2.1 主要試劑

色譜級(jí)乙腈購(gòu)于Merck公司，分析純甲酸購(gòu)于上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，分析純乙醇購(gòu)于上海久億化學(xué)試劑有限公司；對(duì)照品沒(méi)食子酸（批號(hào)：RP191126）、表沒(méi)食子兒茶素（批號(hào)：RP210614）、兒茶素（批號(hào)：RP210819）、咖啡堿（批號(hào)：RP201026）、表兒茶素（批號(hào)：RP190620）、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（批號(hào)：RP210806）、表兒茶素沒(méi)食子酸酯（批號(hào)：RP210727）均購(gòu)于成都麥德生科技有限公司；對(duì)照品質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%。

1.2.2 儀器設(shè)備

安捷倫1260 Infinity高效液相色譜儀：配有G1311C型四元梯度泵、G1329B型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A型柱溫箱、G4212B型DAD檢測(cè)器及ChemStation工作站（美國(guó)安捷倫公司）；X105BDU型十萬(wàn)分之一電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；Heraeus Fresco 21型高速冷凍離心機(jī)（賽默飛科技有限公司）；KH5200B型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；Milli-Q實(shí)驗(yàn)室純水儀（德國(guó)Milli-Q達(dá)姆施塔特默克集團(tuán)）。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水（A），乙腈（B）；梯度洗脫（0～5 min，5% B；5～35 min，5%～12% B；35～50 min，12%～16% B；50～60 min，16%～80% B；60～70 min，80%～5% B）；進(jìn)樣量為5 μL；柱溫為30℃；流速為1.0 mL/min。

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸、表沒(méi)食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯、表兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)照品適量，加甲醇配制成濃度分別為1.03 mg/mL、2.28 mg/mL、2.12 mg/mL、1.62 mg/mL、2.11 mg/mL、2.84 mg/mL、2.03 mg/mL的對(duì)照品貯備液。臨用時(shí)稀釋成系列濃度的對(duì)照品工作液。

1.3.3 供試品溶液的制備

取各批次雨花茶樣品0.50 g，加15 mL濃度為55%的乙醇，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲提取90 min，取出放冷補(bǔ)足失重，經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾即得供試品溶液。

1.3.4 含量測(cè)定

（1）專(zhuān)屬性考察。分別取混合對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行進(jìn)樣分析，考察樣品各組分的分離度。

（2）線性關(guān)系考察。取對(duì)照品溶液稀釋成系列濃度的對(duì)照品工作液進(jìn)樣測(cè)定并記錄峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)（X，μg）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行回歸分析。

（3）精密度實(shí)驗(yàn)。取同一對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，以咖啡堿為參照峰，測(cè)定各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值。

（4）穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取S1供試品溶液，分別在0 h、4 h、8 h、16 h、24 h、32 h、48 h連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定，以咖啡堿為參照峰，計(jì)算各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值。

（5）重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。取6份S1供試品溶液分別進(jìn)樣測(cè)定，以咖啡堿為參照峰，計(jì)算各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值。

（6）加樣回收率實(shí)驗(yàn)。分別稱(chēng)取已知含量的6份樣品，每份0.1 g，加適量對(duì)照品溶液進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各成分的含量及平均加樣回收率。

1.3.5 指紋圖譜構(gòu)建及相似度評(píng)價(jià)

按照“1.3.3”方法制備S1～S12供試品溶液，將12批雨花茶樣品的AIA數(shù)據(jù)采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）”進(jìn)行分析，建立其指紋圖譜并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。

1.3.6 雨花茶網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

（1）主要成分及其靶點(diǎn)的篩選。根據(jù)雨花茶的指紋圖譜特征峰與定量成分，基于TCMSP、Swiss Target Prediction、PubChem、UNIPROT數(shù)據(jù)庫(kù)獲取其活性成分信息并對(duì)其成分的靶點(diǎn)信息去重，基于Gene cards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)檢索腫瘤相關(guān)靶點(diǎn)將藥物靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)取交集得到共有靶點(diǎn)。

（2）成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建。將成分和靶點(diǎn)信息導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件，構(gòu)建“成分-靶點(diǎn)”可視化網(wǎng)絡(luò)圖。

（3）PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)的篩選。將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇物種為“人類(lèi)”，設(shè)置最低要求互作分?jǐn)?shù)為0.9，構(gòu)建蛋白互作關(guān)系，得出核心靶點(diǎn)。

（4）GO生物過(guò)程富集分析。通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇人類(lèi)基因?qū)患悬c(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因進(jìn)行GO分析（p＜ 0.05）。

（5）KEGG信號(hào)通路富集分析。通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇人類(lèi)基因?qū)患悬c(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因進(jìn)行KEGG生物富集分析（p＜ 0.05）。

（6）成分-靶點(diǎn)-通路的可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建。將成分和靶點(diǎn)以及前10條通路的相關(guān)信息導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件，構(gòu)建雨花茶的“成分-靶點(diǎn)-通路-疾病”的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察結(jié)果

2.1.1 系統(tǒng)適應(yīng)性

混合對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖見(jiàn)圖1。各組分分離度均大于1.5，表明該方法的系統(tǒng)適應(yīng)性和專(zhuān)屬性良好。

圖1 樣品（A）和對(duì)照品（B）色譜圖Figure 1 Chromatogram of sample（A）and standard（B）

2.1.2 線性關(guān)系

以濃度為橫坐標(biāo)（X，μg），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程見(jiàn)表2。線性關(guān)系良好。

表2 雨花茶中7個(gè)成分的線性關(guān)系考察結(jié)果Table 2 Linear relationship of 7 components in Yuhua tea

2.1.3 精密度

精密吸取混合對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，以咖啡堿為參照峰，結(jié)果各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值分別小于0.56%和1.32%，表明儀器精密度良好。

2.1.4 穩(wěn)定性

S1供試品溶液分別在0 h、4 h、8 h、16 h、24 h、32 h、48 h內(nèi)各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值分別小于0.73%和3.22%，表明供試品溶液穩(wěn)定。

2.1.5 重復(fù)性

6份S1供試品溶液中各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD值分別小于0.61%和2.75%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.6 加樣回收率

沒(méi)食子酸、表沒(méi)食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯、表兒茶素沒(méi)食子酸酯的平均加樣回收率分別為96.32%、98.12%、97.77%、101.25%、99.87%、102.75%和96.32%，RSD值分別為2.39%、1.78%、3.02%、2.89%、1.64%、2.49%和2.33%。

2.2 茶樣中兒茶素等活性成分及含量

12批雨花茶中7種（個(gè)）成分含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。12批茶樣中沒(méi)食子酸、表沒(méi)食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯、表兒茶素沒(méi)食子酸酯的含量分別為2.809～3.776 mg/g、24.900～37.619 mg/g、1.771～3.452 mg/g、34.598～47.811 mg/g、12.716～14.965 mg/g、98.753～132.464 mg/g和22.370～29.978 mg/g；從上述7種（個(gè)）成分來(lái)看，茶樣中表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯的平均含量最高為115.599 mg/g，兒茶素的平均含量最低為2.706 mg/g；從茶多酚總量來(lái)看，高淳地區(qū)雨花茶的平均含量最高為261.430 mg/g，江寧地區(qū)雨花茶的平均含量次之為251.896 mg/g，溧陽(yáng)和棲霞地區(qū)雨花茶的平均含量最低且兩地區(qū)較為接近，分別為215.330 mg/g和217.865 mg/g。從茶多酚平均含量來(lái)看，高淳和江寧地區(qū)的雨花茶質(zhì)量較優(yōu)。

表3 雨花茶中7種活性成分含量測(cè)定結(jié)果Table 3 Content determination results of 7 components in Yuhua tea mg·g-1

2.3 HPLC指紋圖譜的建立及相似度評(píng)價(jià)

共標(biāo)定13個(gè)共有峰，生成對(duì)照指紋圖譜R（圖2）。12批雨花茶相似度均大于0.990，表明各批次雨花茶之間組分相似，所建立的指紋圖譜質(zhì)量穩(wěn)定。

圖2 雨花茶HPLC指紋圖譜Figure 2 HPLC fingerprint of Yuhua tea

2.4 基于成分-靶點(diǎn)-通路的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

2.4.1 主要成分及其靶點(diǎn)

根據(jù)雨花茶的指紋圖譜特征峰與定量成分，基于TCMSP、Swiss Target Prediction、PubChem、UNIPROT數(shù)據(jù)庫(kù)獲取沒(méi)食子酸、表沒(méi)食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯、表兒茶素沒(méi)食子酸酯7個(gè)化合物的成分信息（表4），同時(shí)獲取7個(gè)成分的靶點(diǎn)信息并去除重復(fù)靶點(diǎn)共得到231個(gè)靶點(diǎn)。基于Gene cards、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)檢索腫瘤相關(guān)靶點(diǎn)。將藥物靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)取交集，共得到134個(gè)靶點(diǎn)（圖3）。

圖3 雨花茶成分-疾病靶點(diǎn)交集Venn圖Figure 3 Venn diagram of the intersection of Yuhua tea components and disease targets

表4 雨花茶7個(gè)成分的MOLID信息Table 4 MOLID information of 7 components of Yuhua Tea

2.4.2 成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

雨花茶7個(gè)成分與134個(gè)共有靶點(diǎn)的“成分-靶點(diǎn)”可視化網(wǎng)絡(luò)圖如圖4所示，該網(wǎng)絡(luò)由141個(gè)節(jié)點(diǎn)和388條邊組成。應(yīng)用“Analysis network”對(duì)其進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觯玫紻egree中位數(shù)為1，Betweenness Centrality中位數(shù)為0，Closeness Centrality中位數(shù)為0.410 557 185。根據(jù)Degree值的大小，排名前三位的成分分別為表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（MOL006821）、咖啡堿（MOL003973）及表兒茶素沒(méi)食子酸酯（MOL005467）；排名前三的靶點(diǎn)為PTGS1、PTGS2和ESR1，提示這些成分與靶點(diǎn)和腫瘤相關(guān)。

圖4 雨花茶成分-靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)圖Figure 4 Network construction of Yuhua Tea Components and targets

2.4.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選

134個(gè)交集靶點(diǎn)的蛋白互作關(guān)系如圖5所示。根據(jù)Degree值大小，排名前10的關(guān)鍵靶點(diǎn)依次為JUN、HIF1A、STAT3、ESR1、MAPK3、TP53、MAPK1、FOS、SP1和RELA，提示這些關(guān)鍵靶點(diǎn)可能是雨花茶抗腫瘤的核心靶點(diǎn)。

圖5 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）分析Figure 5 Protein interaction network（PPI）analysis

2.4.4 GO生物過(guò)程富集分析

通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇人類(lèi)基因?qū)?34個(gè)靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因進(jìn)行GO分析（p＜ 0.05）（圖6）。結(jié)果顯示，GO生物過(guò)程富集分析共富集得到2455個(gè)條目。其中BP有2224個(gè)條目，主要涉及對(duì)外來(lái)生物刺激的反應(yīng)（Response to xenobiotic stimulus）、氧化應(yīng)激反應(yīng)（Response to oxidative stress）、細(xì)胞對(duì)化學(xué)應(yīng)激的反應(yīng)（Cellular response to chemical stress）等；CC共有66個(gè)條目，主要涉及細(xì)胞膜筏（Membrane raft）、細(xì)胞膜微結(jié)構(gòu)域（Membrane microdomain）、RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合物（RNA Polymerase II transcription regulator complex）等；MF共有165個(gè)條目，主要涉及磷酸酶結(jié)合（Phosphatase binding）、蛋白磷酸酶結(jié)合（Protein phosphatase binding）、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合（DNA-binding transcription factor binding）等。

圖6 生物學(xué)過(guò)程（GO）富集分析Figure 6 Enrichment analysis of biological processes（GO）

2.4.5 KEGG信號(hào)通路富集分析

通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇人類(lèi)基因?qū)?34個(gè)靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的基因進(jìn)行KEGG生物富集分析（p＜ 0.05），如圖7所示。結(jié)果顯示，KEGG生物過(guò)程富集共得到165條信號(hào)通路，篩選出前20條信號(hào)通路，其中排名靠前的10條信號(hào)通路分別為前列腺癌（hsa05215）、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染（hsa05167）、胰腺癌（hsa05212）、乙型肝炎（hsa05161）、內(nèi)分泌的阻力（hsa01522）、人類(lèi)巨細(xì)胞病毒感染（hsa05163）、黑色素瘤（hsa05218）、非小細(xì)胞肺癌（hsa05223）、癌癥中的蛋白聚糖（hsa05205）和膀胱癌（hsa05219）。KEGG富集分析結(jié)果表明，雨花茶中7個(gè)成分均與腫瘤作用關(guān)系密切。

圖7 KEGG信號(hào)通路富集柱狀圖及氣泡圖Figure 7 Enrichment column and bubble diagram of KEGG signal pathway

2.4.6 雨花茶成分-靶點(diǎn)-通路的可視化網(wǎng)絡(luò)關(guān)系

構(gòu)建了雨花茶的“成分-靶點(diǎn)-通路-疾病”的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖。如圖8所示，綠色部分代表雨花茶及其7個(gè)成分，藍(lán)色部分代表靶點(diǎn)，橙色部分代表通路及疾病。由圖可知，圖形面積大小與Degree值呈正相關(guān)。排名前10的靶點(diǎn)分別為T(mén)P53、CDKN1A、MAPK1、MAPK3、MAP2K1、RAF1、E2F1、AKT1、CCND1和RB1，提示這些靶點(diǎn)可能是雨花茶抗腫瘤的重要靶點(diǎn)。

圖8 成分-靶點(diǎn)-通路的網(wǎng)絡(luò)圖Figure 8 Network diagram of components-targets-pathways

3 結(jié)論與討論

3.1 討論

雨花茶作為我國(guó)十大名茶之一，具有清熱解毒、利尿通便、提神明目等多重功效。唐代《新修本草》中記載：“茗味甘、苦，微寒，無(wú)毒。主瘺瘡，利小便，祛痰熱渴?！迸R床上已有包含茶多酚提取物的心腦健膠囊用于高血脂、高血壓、頭暈?zāi)垦５劝Y狀的治療。目前，已有文獻(xiàn)應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究茶葉抗癌的作用機(jī)制，但尚未有指紋圖譜結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究方法對(duì)雨花茶抗腫瘤作用機(jī)制的研究。本研究在前期研究基礎(chǔ)上建立了不同產(chǎn)地雨花茶指紋圖譜及兒茶素組分的含量測(cè)定方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地雨花茶中兒茶素組分含量差異較大，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯為雨花茶中含量最高的成分，兒茶素為含量最低的成分。

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法構(gòu)建了“雨花茶成分-靶點(diǎn)-疾病通路”的網(wǎng)絡(luò)，探究雨花茶抗腫瘤潛在分子作用機(jī)制，得到7種成分的134個(gè)潛在靶點(diǎn)和165條信號(hào)通路。7種成分中，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯、咖啡堿、表兒茶素沒(méi)食子酸酯三個(gè)成分在網(wǎng)絡(luò)中作用較大。已有研究表明，表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯可以通過(guò)促進(jìn)抑制癌癥基因的表達(dá)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)甲基化水平，影響多條信號(hào)通路等多種途徑發(fā)揮其抗腫瘤效應(yīng)[22]?？Х葔A具有興奮中樞神經(jīng)、促進(jìn)血液循環(huán)、利尿和醒酒作用[23]，亦有研究表明[24-25]咖啡堿能保護(hù)肉毒堿抵抗細(xì)胞性神經(jīng)腫瘤病和抑制肝細(xì)胞性肝癌干細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而增強(qiáng)對(duì)肝癌干細(xì)胞的殺傷作用。表兒茶素沒(méi)食子酸酯在芳基乙酰胺脫乙酰酶的代謝中具有特異性抑制作用[26]，同時(shí)對(duì)于B16F10黑素瘤細(xì)胞中黑素的生成具有明顯抑制作用[27]。可見(jiàn)，茶葉中的兒茶素等成分具有抑菌、消炎、降“三高”和抗腫瘤等多重作用，對(duì)于抵抗多種腫瘤細(xì)胞具有潛在的防治作用。

根據(jù)PPI蛋白互作得到的核心靶點(diǎn)中，排名前十的靶點(diǎn)為JUN、HIF1A、STAT3、ESR1、MAPK3、TP53、MAPK1、FOS、SP1和RELA，說(shuō)明這些靶點(diǎn)具有重要作用。JUN和FOS蛋白組成的AP-1轉(zhuǎn)錄因子，可通過(guò)調(diào)節(jié)含有AP-1結(jié)合位點(diǎn)靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化以及腫瘤血管生成及腫瘤轉(zhuǎn)移[28]。缺氧誘導(dǎo)因子1A（HIF1A）是腫瘤缺氧信號(hào)通路的中樞調(diào)節(jié)因子，可參與血管新生、糖酵解、紅細(xì)胞生成以及在細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移中發(fā)揮作用[29]。細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）是一條雙重功能信號(hào)通路，可通過(guò)介導(dǎo)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化、參與腫瘤的增殖、分化、血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移和免疫逃避等多項(xiàng)生理調(diào)節(jié)[30-31]。雌激素受體α（ESR1）基因與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和治療反應(yīng)密切相關(guān)[32]。絲裂原活化蛋白激酶3/1（MAPK3、MAPK1）信號(hào)通路對(duì)于LH誘導(dǎo)的卵母細(xì)胞減數(shù)分裂、排卵和黃體的生成必不可少[33]；同時(shí)MAPK1在癌癥形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用，如在卵巢癌中MAPK1過(guò)度激活可促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖侵襲及遷移[34]。TP53作為一個(gè)抑癌基因，突變頻率較高，在晚期非小細(xì)胞肺癌中大約50%存在突變失活，研究已證實(shí)TP53基因發(fā)生突變后腫瘤往往更具侵襲性，預(yù)后較差，因而我國(guó)人群中TP53突變可能是晚期非小細(xì)胞肺癌不良預(yù)后因素[35]。特異性蛋白1（SP1）作為一種轉(zhuǎn)錄因子，可通過(guò)結(jié)合RNA和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄穩(wěn)定性的能力從而影響癌癥。研究表明SP1通過(guò)促進(jìn)ARRB1表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而抑制T-ALL進(jìn)程[36]。真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子（RELA）通過(guò)調(diào)節(jié)多種靶基因的表達(dá)，參與炎癥因子、免疫反應(yīng)和腫瘤細(xì)胞的凋亡、增殖和分化的調(diào)控，RELA還可通過(guò)磷酸化、乙?；图谆刃揎椇缶珳?zhǔn)調(diào)控NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性，在調(diào)節(jié)炎癥、腫瘤、代謝等重要生理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用[37]。

3.2 結(jié)論

雨花茶中的成分可能通過(guò)JUN、HIF1A、STAT3、ESR1、MAPK3、TP53、MAPK1、FOS、SP1、RELA介導(dǎo)腫瘤相關(guān)通路和NF-κB信號(hào)通路，參與炎癥反應(yīng)與發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗缺氧、抗腫瘤等作用。本研究首次采用指紋圖譜結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探究雨花茶抗腫瘤的作用機(jī)制，并測(cè)定其中7種活性成分的含量，可為基于抗腫瘤作用的雨花茶等茶的質(zhì)量控制等提供參考依據(jù)。