趙羽彤,陳興勇,劉政權(quán),常鵬輝,彭錦州,吉倩昀

(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院/地方畜禽遺傳資源保護(hù)與生物育種安徽省級(jí)實(shí)驗(yàn)室,安徽 合肥 230036)

雛雞出殼后在營(yíng)養(yǎng)上經(jīng)歷了由完全依靠?jī)?nèi)源性養(yǎng)分(卵黃囊)到依賴外源性飼料養(yǎng)分的轉(zhuǎn)折,并將未吸收的卵黃囊從蛋腔中轉(zhuǎn)入腹腔中作為暫時(shí)的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源[1]。良好的卵黃囊吸收效果可維持其早期生命力和后期生長(zhǎng)發(fā)育[2]。卵黃免疫球蛋白IgY,又稱卵黃抗體,能有效地填補(bǔ)雛禽自身建立免疫機(jī)能的空檔期,刺激雛雞腸道生長(zhǎng)發(fā)育及免疫機(jī)能的建立[3]。卵黃囊中IgY隨其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)一起進(jìn)入雛雞體內(nèi),至 7日齡左右卵黃抗體(IgY)由雛雞自身產(chǎn)生的抗體IgA取代,雛雞逐漸建立自身免疫力[4]。因此,卵黃囊吸收效果直接影響雛雞免疫水平。

常規(guī)育雛初始溫度為32～35 ℃,以后每周降低2～3 ℃,至5～6周齡時(shí)溫度降至20 ℃左右[5]。在出雛初期,雛雞自身產(chǎn)生的熱量并不能根據(jù)環(huán)境溫度變化調(diào)節(jié),因此,環(huán)境溫度對(duì)雛雞早期生長(zhǎng)至關(guān)重要[6]。初生雛雞需經(jīng)歷一系列后處理,包括性別鑒定、免疫注射和運(yùn)輸,最終進(jìn)入育雛舍內(nèi),并被提供其良好的環(huán)境溫度。因此,初生早期,環(huán)境溫度不高會(huì)影響雛雞卵黃吸收和腸道健康[7]。研究表明,雛雞運(yùn)輸過(guò)程的低溫環(huán)境是導(dǎo)致其7日齡死亡率增加的關(guān)鍵因素之一,且第1周20 ℃育雛溫度導(dǎo)致雛雞體重顯著降低[8]。初生雛雞卵黃囊吸收依靠一定的育雛溫度,早期較低的育雛溫度是否通過(guò)降低卵黃囊吸收進(jìn)而導(dǎo)致雛雞健康下降尚不得知。

卵黃囊在腸道的吸收效果直接決定腸道發(fā)育健康。腸道是家禽最重要的消化器官,主要負(fù)責(zé)食物的消化和氨基酸、碳水化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收,對(duì)提高機(jī)體飼料效率有重要意義[9]。家禽通過(guò)腸黏膜吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要為糖類、脂肪和蛋白質(zhì),而單糖直接吸收是雞獲得糖類的主要途徑[2]。GLUT2屬于GLUT家族,在腸上皮細(xì)胞的基底外側(cè)膜上能夠?qū)翁沁\(yùn)輸出細(xì)胞進(jìn)入血液,滿足孵化后早期生長(zhǎng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求[10]。此外,GLUT2在葡萄糖重吸收過(guò)程中也起到重要作用[11]。蛋白質(zhì)分子質(zhì)量大,機(jī)體不能直接分解吸收,需要被分解為小肽以供機(jī)體吸收,PepT1是質(zhì)子偶聯(lián)寡肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的成員之一,膳食氨基酸可以通過(guò)肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Pept1的作用作為二肽和三肽運(yùn)輸?shù)侥c上皮細(xì)胞中[12]。腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收可通過(guò)腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度和絨隱比來(lái)反映,較長(zhǎng)的絨毛長(zhǎng)度和較小的隱窩深度說(shuō)明腸道上皮細(xì)胞成熟度高,消化酶的合成和分泌加快,腸道消化功能增強(qiáng)[13]。

為了探究初生雛雞早期較低的育雛溫度是否影響卵黃吸收及腸道發(fā)育,本試驗(yàn)以世界公約組織收錄的淮南麻黃雞為對(duì)象,比較早期不同育雛溫度對(duì)卵黃囊吸收、免疫球蛋白水平、腸道發(fā)育以及消化相關(guān)基因表達(dá)水平的影響,為初生雛雞后處理環(huán)境溫度提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與樣本采集

選取1日齡淮南麻黃雞雛雞189只(淮南市興楊食品有限公司),隨機(jī)均分為3組,育雛溫度分別為33、30和27 ℃,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)21只,2.5 d后統(tǒng)一育雛溫度為33 ℃。飼料營(yíng)養(yǎng)水平按照美國(guó)國(guó)家研究委員會(huì)(NRC)[14]標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,粗蛋白20%、粗纖維2.6%、鈣1%、磷(可利用磷)0.45%、鈉0.18%、賴氨酸1.08%、蛋氨酸0.45%、含硫氨酸(蛋氨酸+胱氨酸)0.77%、蘇氨酸0.65%,以上均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

育雛期內(nèi)分別于0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、7.0和14.0日齡從每個(gè)重復(fù)中取3只雛雞,記錄屠宰前活重;心臟采血,分離血清,用于抗體分析;屠宰記錄法氏囊、脾臟和卵黃囊重;收集卵黃囊液于-20 ℃保存,用于脂肪酸組成和含量分析,只取前2.5 d卵黃囊樣品用于分析;取小腸各段的中間部位,4%多聚甲醛固定,用于腸道結(jié)構(gòu)分析;取小腸各段中間部位,-80 ℃保存,用于RNA提取。

1.2 脂肪酸測(cè)定

卵黃囊脂肪酸測(cè)定參照文獻(xiàn)[15]的方法并進(jìn)行適當(dāng)修改。將0.6 g卵黃囊中卵黃組織轉(zhuǎn)移至10 mL離心管,加入0.66 mL C11∶0內(nèi)標(biāo)(5 mg·mL-1)、0.66 mL 95%乙醇和1.33 mL純水,于全自動(dòng)樣品快速研磨儀中55 Hz研磨3 min。轉(zhuǎn)移混合物至含33 mg焦性沒(méi)食子酸、33 mg沸石和3.3 mL鹽酸(8.3 mol·L-1)燒瓶中。75 ℃水浴孵育40 min,加入3 mL 95%乙醇、10 mL乙醚和石油醚同體積混合物。振搖5 min后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中靜置5 min,收集醚層提取液。重復(fù)上述步驟3次,將提取液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干,殘留物即為脂肪提取物。加入1.6 mL 2% NaOH-甲醇溶液,80 ℃水浴孵化3 min。加入1.4 mL 150 g·L-1三氟化硼甲醇溶液,繼續(xù)80 ℃水浴孵化3 min。待燒瓶冷卻至室溫后加入2 mL正庚烷,振蕩5 min,再加入3 mL飽和氯化鈉水溶液,靜置5 min。吸取上層正庚烷提取液1.5 mL至含有0.6 g無(wú)水硫酸鈉的離心管中,振蕩1 min并靜置5 min后吸取1 mL上清液,經(jīng)0.22 μm有機(jī)相濾器過(guò)濾后至進(jìn)樣瓶中待測(cè)定。樣品用安捷倫7890A氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)進(jìn)行分析,色譜柱為DEGS毛細(xì)管柱(DB-WAX,30 m×0.25 mm×0.25 mm)。柱溫箱參數(shù):初始柱溫60 ℃,保持2 min后以15 ℃·min-1升高至200 ℃,然后以3 ℃·min-1升高至230 ℃,保持19 min。載氣為高純氮?dú)?流速為0.8 mL·min-1。進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度240 ℃,進(jìn)樣體積1 μL,分流比10∶1。使用37種脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品(CDAA-252795,上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限公司)定性脂肪酸。使用C11為內(nèi)標(biāo),通過(guò)公式計(jì)算各脂肪酸含量,同時(shí)計(jì)算飽和脂肪酸(SFA)、單不飽和脂肪酸(MUFA)、多不飽和脂肪酸(PUFA)和總脂肪酸(TFA)含量。

1.3 免疫器官指數(shù)計(jì)算及免疫球蛋白檢測(cè)

屠宰后分離免疫器官,稱重,計(jì)算器官指數(shù)。計(jì)算公式:器官指數(shù)=器官重/活體重。

使用免疫球蛋白試劑盒(SU-B60107、SU-B60110、SU-B60340、SU-B60105,泉州市睿信生物科技有限公司),采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)分別檢測(cè)血清中免疫球蛋白IgG、IgM、IgY、IgA的含量。

1.4 腸道切片的HE染色

腸道組織固定后,經(jīng)脫蠟、浸水、染核、分色、藍(lán)化、染質(zhì)、脫水、透明、封片,迅速滴加適量中性樹(shù)膠(國(guó)藥集團(tuán)),加蓋玻片后封片,用光學(xué)顯微鏡(IX73,Olympus)觀察并拍攝小腸絨毛結(jié)構(gòu)照片,每張切片隨機(jī)取6個(gè)測(cè)量絨毛長(zhǎng)度及隱窩深度并記錄數(shù)據(jù)。

1.5 總RNA提取和cDNA合成

小腸各段組織RNA提取:使用Trizol法提取RNA,棄上清液,留下 RNA 沉淀,向離心管中加入 1 mL 75%乙醇(江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司),4 ℃、12 000 r·min-1離心 5 min。取沉淀,開(kāi)蓋干燥 5～10 min。待干燥后加入 30～50 μL DEPC水(D2917391,上海翊圣生物科技有限公司)吹打溶解沉淀,放入-80 ℃冰箱中保存。小腸組織RNA的反轉(zhuǎn)錄步驟根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒(11123ES10,上海翊圣生物科技有限公司)進(jìn)行操作。

1.6 實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)分析

基因序列查自NCBI網(wǎng)站(www.ncbi.nlm.nih.gov),根據(jù)所需的雞基因序列,使用 Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物,內(nèi)參為雞GAPDH基因。所有引物由通用生物系統(tǒng)有限公司(安徽)合成。引物序列見(jiàn)表1。小腸十二指腸、空腸、回腸組織的qPCR(25 μL)體系:12.5 μL Trans StartTMTop Green qPCR Supermix(北京全式金生物技術(shù)有限公司),上、下游引物各0.5 μL和2 μL cDNA,9.5 μL ddH2O。qPCR步驟:95 ℃ 5 min,40個(gè)循環(huán)(95 ℃ 10 s,50 ℃ 15 s,72 ℃ 20 s),72 ℃延伸5 min,每個(gè)樣品重復(fù)3次。采用2-ΔΔCT法處理數(shù)據(jù)。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,并采用鄧肯氏多重比較法進(jìn)行0.05水平上的差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 各溫度組間淮南麻黃雞雛雞體重及卵黃囊重的比較分析

如表2所示:育雛2 d內(nèi),各溫度組間雛雞體重?zé)o顯著差異(P>0.05)。育雛2.5 d后,30 ℃組雛雞體重顯著高于27 ℃組(P<0.05);育雛7 d,30 ℃和33 ℃組雛雞體重顯著高于27 ℃組(P<0.05);育雛14 d,30 ℃組雛雞體重顯著高于33 ℃和27 ℃組(P<0.05)。育雛1.5 d,雛雞卵黃囊重在30 ℃組顯著高于33 ℃組(P<0.05),其他育雛時(shí)間各組間卵黃囊重?zé)o顯著差異(P>0.05)。

表2 育雛溫度對(duì)雛雞體重及卵黃囊重的影響Table 2 Effect of temperature on body and yolk sac weight of chicks

2.2 各育雛溫度組間卵黃囊脂肪酸組成和含量的比較分析

雛雞卵黃囊主要由15種脂肪酸組成(圖1),主要包括C16∶0、C18∶1n9t、C18∶0、C18∶2n6t,分別占總脂肪酸含量的34.61%、24.37%、16.1%、13.65%,其次是C22∶0、C20∶4n6、C18∶1n9c、C20∶5n3、C16∶1,其含量占總脂肪酸含量的5.3%、1.14%、1.07%、0.56%、0.51%。雛雞卵黃囊內(nèi)脂肪酸含量在各育雛溫度組間無(wú)顯著差異(P>0.05,表3)。

圖1 卵黃囊樣品的GC-MS總離子圖Fig.1 Total ion diagram of yolk sac sample by GC-MSC11∶0為脂肪酸含量測(cè)定內(nèi)標(biāo)。C11∶0 is the internal standard for determination of fatty acid content.

表3 育雛溫度對(duì)總脂肪酸含量的影響Table 3 The effect of brooding temperature on total fatty acid content

2.3 各育雛溫度組間雛雞免疫器官和免疫球蛋白水平的比較分析

2.3.1 雛雞免疫器官指數(shù)分析如表4所示,育雛7日齡,30 ℃組脾臟重顯著高于其他2組(P<0.05),27與33 ℃組間無(wú)顯著差異。育雛期間雛雞免疫指數(shù)在各溫度組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 育雛溫度對(duì)免疫器官重及免疫器官指數(shù)的影響Table 4 Effect of brooding temperature on immune organs weight and immune organ index

2.3.2 雛雞免疫球蛋白含量分析如圖2所示,育雛期間3個(gè)溫度組雛雞血清中IgA含量和IgG含量無(wú)顯著差異。育雛7 d,30 ℃組IgM含量顯著高于其他2組(P<0.05)。在育雛2 d,30 ℃組IgY含量顯著高于其他2組(P<0.05),育雛7 d,30 ℃組IgY含量顯著高于27 ℃組(P<0.05)。

圖2 育雛溫度對(duì)孵化后各日齡雞血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM、IgY)含量的影響Fig.2 Effects of brooding temperature on the content of serum immunoglobulin(IgA,IgG,IgY and IgM)in chicks同一時(shí)間點(diǎn)的不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下同。In the same time different letters mean significant difference(P<0.05).The same as follows.

2.4 不同育雛溫度對(duì)小腸形態(tài)的影響

2.4.1 十二指腸形態(tài)測(cè)量如圖3、圖4所示,育雛2.5 d,30 ℃組腸絨毛長(zhǎng)度顯著高于27 ℃組(P<0.05)。育雛1 d,30 ℃組腸隱窩深度顯著高于33 ℃組(P<0.05),育雛2 d和2.5 d時(shí),30 ℃組腸隱窩深度顯著高于27 ℃組(P<0.05)。育雛1 d,33 ℃組腸絨隱比顯著高于其他2組(P<0.05),育雛14 d,30 ℃組和27 ℃組腸絨隱比顯著高于33 ℃組(P<0.05)。

圖3 雛雞小腸各段的HE染色形態(tài)圖Fig.3 HE staining morphology of various segments of the small intestine in chicks

圖4 育雛溫度對(duì)十二指腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度的影響Fig.4 Effects of brooding temperature on villi length and crypt depth in duodenum

2.4.2 空腸形態(tài)測(cè)量如圖3、圖5所示:育雛7 d,27 ℃組腸絨毛長(zhǎng)度顯著高于其他2組(P<0.05);育雛 14 d,30 ℃、27 ℃組腸絨毛長(zhǎng)度顯著高于33 ℃組(P<0.05)。育雛1 d和1.5 d,30 ℃組腸隱窩深度顯著高于33 ℃組(P<0.05);育雛14 d,30 ℃組腸隱窩深度顯著低于其他2組(P<0.05)。育雛0.5 d,33 ℃組腸絨隱比顯著高于其他2組(P<0.05);育雛1.5 d,30 ℃組腸絨隱比顯著低于其他2組(P<0.05);育雛7 d,27 ℃組腸絨隱比顯著高于其他2組(P<0.05);育雛14 d,30 ℃組腸絨隱比顯著高于其他2組(P<0.05)。

圖5 育雛溫度對(duì)空腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度的影響Fig.5 Effects of brooding temperature on villus length and crypt depth of jejunum

2.4.3 回腸形態(tài)測(cè)量如圖3、圖6所示:育雛1.5 d,30、27 ℃組腸絨毛長(zhǎng)度顯著高于33 ℃組(P<0.05);育雛2.5 d,33 ℃組腸絨毛長(zhǎng)度顯著高于27 ℃組(P<0.05);育雛14 d,27 ℃組腸絨毛長(zhǎng)度顯著高于其他 2組(P<0.05)。育雛2 d,30 ℃組腸隱窩深度顯著高于其他 2組(P<0.05);育雛14 d,30、27 ℃組腸隱窩深度顯著高于33 ℃組(P<0.05)。育雛2 d,30 ℃組腸絨隱比顯著低于其他2組(P<0.05);育雛2.5 d,33 ℃組腸絨隱比顯著高于其他2組(P<0.05);育雛14 d,27 ℃組腸絨隱比顯著低于其他2組(P<0.05)。

圖6 育雛溫度對(duì)回腸絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度的影響Fig.6 Effects of brooding temperature on villus length and crypt depth of ileum

2.5 育雛溫度對(duì)相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量的影響

如圖7所示,十二指腸中GLUT2表達(dá)量在各個(gè)時(shí)間段無(wú)顯著差異(P>0.05)。育雛1.5 d,27 ℃組空腸GLUT2表達(dá)量顯著高于其他2組(P<0.05);育雛7 d,33 ℃組顯著高于27 ℃組(P<0.05)。在回腸中,育雛1 d,33和30 ℃組GLUT2表達(dá)量顯著高于27 ℃組;育雛2 d,30 ℃組顯著高于27 ℃組;育雛7 d,30 ℃組顯著高于 27 ℃組;育雛14 d,30 ℃組顯著高于其他2組。育雛1、2 d,33 ℃組PepT1表達(dá)量顯著高于其他2組(P<0.05);育雛14 d,30和27 ℃組PepT1表達(dá)量顯著高于33 ℃組(P<0.05)。育雛1.5 d,27 ℃組空腸PepT1表達(dá)量顯著高于其他2組(P<0.05)。育雛1和2 d時(shí),30 ℃組回腸PepT1表達(dá)量顯著高于其他2組(P<0.05);育雛14 d,30和27 ℃組均顯著高于33 ℃組(P<0.05)。

圖7 不同育雛溫度下?tīng)I(yíng)養(yǎng)吸收相關(guān)基因在小腸中的表達(dá)量Fig.7 Expression levels of genes related to nutrient uptake in small intestine at different brooding temperatures

3 討論

出雛初期,雛雞自身體溫調(diào)節(jié)機(jī)能不完善,需要外界環(huán)境溫度維持自身代謝需要。因此,環(huán)境溫度在育雛早期發(fā)揮重要作用[6]。本研究中,33 ℃組卵黃囊吸收效果良好,說(shuō)明早期1～3日齡高溫育雛有助于卵黃吸收。30 ℃組體重高于27 ℃和33 ℃組,可見(jiàn),適宜的環(huán)境溫度有助于刺激雛雞采食。低溫環(huán)境下飼養(yǎng)蛋雛鴨,雛鴨的維持需要代謝能均有隨環(huán)境溫度降低而升高的趨勢(shì)[16]。低溫時(shí)維持需要代謝能增加,刺激采食量,卻無(wú)法彌補(bǔ)能量及營(yíng)養(yǎng)源的不足。本研究中,27 ℃組體重低于30 ℃組,可能因?yàn)檫^(guò)低的溫度使雛雞維持需要代謝能增加,雛雞需要增加采食量并消耗能量以維持機(jī)體代謝需要。

Sahan等[17]檢測(cè)出52周齡和36周齡母雞所產(chǎn)鮮蛋黃中脂肪酸主要為C16∶0、C18∶1n9t、C18∶0、C18∶2n6t。本研究中卵黃囊中所含主要脂肪酸種類與其一致,且C16∶0、C18∶1n9t、C18∶0、C18∶2n6t分別占總脂肪酸含量的34.61%、24.37%、16.1%、13.65%。3個(gè)育雛溫度處理下,雛雞卵黃囊中各脂肪酸含量均無(wú)顯著影響,僅卵黃囊重出現(xiàn)顯著差異,說(shuō)明雛雞生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程對(duì)卵黃囊各組分的營(yíng)養(yǎng)需求相對(duì)一致。

除遺傳因素外,環(huán)境是影響免疫系統(tǒng)發(fā)育的關(guān)鍵因素,特別是在發(fā)育早期[18]。免疫器官的發(fā)育情況和功能狀態(tài)可直接決定鳥(niǎo)類的免疫水平[19]。家禽體內(nèi)淋巴管和淋巴結(jié)發(fā)育不全,因此在雛雞的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,脾臟是重要的免疫器官之一。法氏囊是鳥(niǎo)類獨(dú)有的體液免疫器官,在B淋巴細(xì)胞分化中起重要作用[20]。本研究主要探究育雛前60 h不同溫度對(duì)后期脾臟及法氏囊發(fā)育的影響,發(fā)現(xiàn)7日齡時(shí)30 ℃組雛雞脾臟重顯著高于其他2組,說(shuō)明高溫育雛不能促進(jìn)免疫器官發(fā)育,適宜的育雛溫度有助于免疫器官發(fā)育。

免疫球蛋白可以通過(guò)抗原誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化為抗體,作為體液免疫的第一道屏障,在維持動(dòng)物免疫功能方面起著重要作用[21]。Hamal等[22]檢測(cè)了母雞血清、卵黃、蛋清及雛雞血清中的免疫球蛋白含量,發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白IgY是母體抗體轉(zhuǎn)移到雛雞血液循環(huán)中的直接指標(biāo),預(yù)期轉(zhuǎn)移比例約為30%。本研究中,30 ℃組雛雞免疫球蛋白IgY含量顯著高于其他2個(gè)溫度組,因此推測(cè)30 ℃組對(duì)雛雞卵黃囊中卵黃抗體吸收較好,能獲得更高的免疫水平。

家禽小腸絨毛高度和隱窩深度是評(píng)價(jià)小腸消化吸收功能的重要指標(biāo)。小腸絨毛高度越高,與食糜接觸的表面積越大,表明腸道的吸收功能越強(qiáng)[23]。隱窩深度則是反映腸上皮細(xì)胞增殖率和成熟度的重要指標(biāo)[24]。Zhang等[25]在探究雛雞生長(zhǎng)期間小腸的發(fā)育情況發(fā)現(xiàn),十二指腸腸絨毛最早增長(zhǎng),且比空腸和回腸的絨毛長(zhǎng)度更高,和本研究結(jié)果一致,十二指腸絨毛長(zhǎng)度比其他2個(gè)腸段更長(zhǎng),且育雛溫度30 ℃十二指腸的腸絨毛及腸隱窩顯著高于其他2個(gè)溫度組,說(shuō)明育雛溫度30 ℃對(duì)雛雞十二指腸的腸道形態(tài)產(chǎn)生積極影響。腸絨隱比與腸上皮細(xì)胞的新陳代謝有關(guān),比值升高表明腸道形態(tài)較好,消化吸收功能增強(qiáng),比值降低則表明黏膜受損,消化吸收功能降低[26]。14日齡時(shí),30 ℃組雛雞十二指腸空腸絨隱比顯著高于33 ℃組,說(shuō)明30 ℃組雛雞十二指腸和空腸發(fā)育更好,吸收營(yíng)養(yǎng)能力更強(qiáng)。與本試驗(yàn)結(jié)果類似,Hammond等[27]將2種近親小鼠在不同溫度下飼養(yǎng),發(fā)現(xiàn)適應(yīng)低溫環(huán)境的小鼠比適應(yīng)高溫的小鼠胃腸道發(fā)育更好。

葡萄糖是重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞葡萄糖攝取和葡萄糖穩(wěn)態(tài)中起著至關(guān)重要的作用[28]。GLUT2是轉(zhuǎn)運(yùn)吸收小腸葡萄糖的2個(gè)主要載體之一,在腸上皮細(xì)胞基底外側(cè)發(fā)揮作用,將葡萄糖和果糖運(yùn)輸?shù)窖貉h(huán)中[29-30]。腸道中GLUT2的表達(dá)直接影響雞腸道糖類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。本試驗(yàn)結(jié)果表明,溫度對(duì)空腸和回腸中GLUT2的表達(dá)量有更顯著影響,尤其30 ℃組回腸一直高于27 ℃組,因此推測(cè)溫度對(duì)卵黃囊吸收效果產(chǎn)生影響,進(jìn)而影響雛雞回腸營(yíng)養(yǎng)吸收,且育雛溫度30 ℃對(duì)雛雞葡萄吸收的影響一直持續(xù)到雛雞生長(zhǎng)后期。張愛(ài)華[31]探究肉仔雞腸道中PepT1的表達(dá)差異與發(fā)育規(guī)律后發(fā)現(xiàn),雛雞小肽吸收主要部位是十二指腸,回腸作用相對(duì)最小。本研究中,十二指腸中PepT1表達(dá)量高于空腸,回腸表達(dá)量最少,說(shuō)明溫度會(huì)影響PepT1的表達(dá)量,但不影響其主要吸收部位。Freeman等[32]在研究PepT1在消化道中的表達(dá)情況時(shí)也發(fā)現(xiàn),PepT1 mRNA表達(dá)量在絨毛下部100～200 μm中迅速增加,在十二指腸和空腸腸細(xì)胞中最豐富,回腸上皮水平較低。本研究結(jié)果顯示,在育雛期間,溫度對(duì)卵黃囊的吸收產(chǎn)生影響,育雛溫度30 ℃對(duì)雛雞后期十二指腸及回腸產(chǎn)生積極影響,有助于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收。

綜上,育雛早期溫度對(duì)雛雞生長(zhǎng)發(fā)育有顯著影響,33 ℃育雛有助于前1.5 d卵黃囊吸收,30 ℃育雛有助于雛雞體重增加、小腸形態(tài)發(fā)育、雛雞免疫水平建立及腸道營(yíng)養(yǎng)吸收相關(guān)基因的表達(dá)。