江麗慧

【摘要】目的? ? 分析慢性乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）載量、前S2蛋白（Pre S2）陽(yáng)性率與乙型肝炎患者肝纖4項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性。方法? ? 選取上饒市第二人民醫(yī)院2019年1月—2021年12月收治的68例乙肝患者為研究對(duì)象，測(cè)定其血清HBV-DNA載量、Pre S2陽(yáng)性率及血清肝纖指標(biāo)[層粘連蛋白（LN）、透明質(zhì)酸（HA）、Ⅳ型膠原（ⅣC）、Ⅲ型前膠原肽（PⅢ）]水平，按照HBV-DNA載量與Pre S2檢測(cè)結(jié)果，將患者分為低載量組、中載量組、高載量組及Pre S2陽(yáng)性組與Pre S2陰性組，比較各組肝纖指標(biāo)水平，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果? ? 高載量組血清LN、HA、PⅢ水平明顯低于中載量組與低載量組，且中載量組明顯低于低載量組（P<0.05），3組Ⅳ C水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；高載量組Pre S2陽(yáng)性率明顯高于其余2組（P<0.05），中載量組明顯高于低載量組（P<0.05）。Pre S2陽(yáng)性組患者血清LN、HA及PⅢ水平明顯低于Pre S2陰性組（P<0.05），2組Ⅳ C水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。相關(guān)性分析顯示，HBV-DNA載量、Pre S2陽(yáng)性率與LN、HA、PⅢ水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論? ? 慢性乙型肝炎患者HBV-DNA載量、Pre S2陽(yáng)性率與LN、HA、PⅢ密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】? 乙型肝炎病毒； 脫氧核糖核酸； 前S2蛋白； 肝纖維化；相關(guān)性

中圖分類(lèi)號(hào)：R575.1? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-1721（2023）22-0115-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.22.038

乙型肝炎（乙肝）為乙型肝炎病毒（HBV）感染所致，是我國(guó)流行最廣、臨床發(fā)病率最高、傳染性極強(qiáng)的病毒性肝炎[1]。HBV基因中前S2區(qū)域與編碼形成的前S2蛋白（Pre S2）為當(dāng)前乙型肝炎相關(guān)研究的主要課題，既往研究指出，Pre S2在HBV感染宿主之后肝細(xì)胞復(fù)制、機(jī)體對(duì)病毒的免疫清除等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[2]。有調(diào)查顯示，全球因HBV感染發(fā)展為肝功能衰竭、肝硬化病變和因肝癌而死亡的病例數(shù)達(dá)100萬(wàn)例/年[3]。肝纖維化是肝組織受損后肝臟之中纖維結(jié)締組織出現(xiàn)的異常增生現(xiàn)象，參與多種慢性肝病產(chǎn)生過(guò)程，屬于肝硬化病變必經(jīng)之路，同時(shí)貫穿肝硬化發(fā)展全過(guò)程。有報(bào)道稱(chēng)，我國(guó)肝硬化常見(jiàn)誘因?yàn)橐腋?，由乙肝發(fā)展為肝纖維化的病例數(shù)約60萬(wàn)例/年，臨床早期診斷并給予有效治療對(duì)改善患者預(yù)后具有重要意義[4-5]。血清學(xué)檢測(cè)屬于肝纖維化評(píng)估主要輔助方式，相關(guān)標(biāo)志物以層黏蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原肽（PⅢ）、透明質(zhì)酸（HA）與Ⅳ型膠原（Ⅳ C）為主，即肝纖4項(xiàng)。本研究探討了HBV脫氧核糖核酸（HBV-DNA）載量、Pre S2陽(yáng)性率與乙肝患者肝纖4項(xiàng)指標(biāo)水平的相關(guān)性，希望為臨床早期診治乙肝提供一定指導(dǎo)依據(jù)。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 臨床資料? ? 選取2019年1月—2021年12月上饒市第二人民醫(yī)院收治的68例慢性乙型肝炎患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：與《慢性乙型肝炎防治指南》[6]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)相符；具有乙肝病史或者乙肝表面抗原（HBsAg）陽(yáng)性超過(guò)6個(gè)月；入院前6個(gè)月內(nèi)無(wú)抗病毒治療史與抗纖維化治療史；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤患者；患有其他病毒性肝炎，如甲型、丙型或丁型肝炎等；合并藥物性肝損傷、酒精性肝病、失代償期肝硬化或者自身免疫性肝病等；合并慢性腎功能衰竭或者結(jié)締組織疾病等其他纖維化病變。按照HBV-DNA載量將62例乙肝患者分為3組，3組性別、年齡及其母親HBV感染情況等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

1.2? ? 方法? ? 采集患者空腹靜脈血樣本，室溫靜置0.5 h后離心處理，分離血清樣本，-20 ℃環(huán)境之中保存待測(cè)。HBV-DNA檢測(cè)，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量（PCR-熒光探針）法測(cè)定HBV-DNA載量，相關(guān)試劑盒由廣州中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司提供，采用PCR定量檢測(cè)儀（美國(guó)ABI公司，7300PLUS型）。按照HBV-DNA載量進(jìn)行分組，1×103～1×105拷貝/mL為低載量組，1×105拷貝/mL～1×107拷貝/mL為中載量組，1×107拷貝/mL以上為高載量組。

Pre S2采取酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行測(cè)定，相關(guān)試劑盒由上?？迫A實(shí)業(yè)有限公司提供。血清層粘連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原肽（PⅢ）、透明質(zhì)酸（HA）以及Ⅳ型膠原（Ⅳ C）水平的檢測(cè)采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀（MAGLUMI4000PIUS，深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程有限公司）與配套試劑。

1.3? ? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? ? 使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析，相關(guān)性檢驗(yàn)使用Spearman分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 不同HBV-DNA載量組肝纖4項(xiàng)指標(biāo)水平比較? ? 高載量組血清LN、HA、PⅢ水平明顯低于中載量組與低載量組，且中載量組明顯低于低載量組（P<0.05）；3組Ⅳ C水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

2.2? ? 不同HBV-DNA載量組Pre S2陽(yáng)性率比較? ? 高載量組Pre S2陽(yáng)性率明顯高于其他2組，中載量組明顯高于低載量組（P<0.05），見(jiàn)表3。

2.3? ? Pre S2陽(yáng)性組與陰性組肝纖4項(xiàng)指標(biāo)水平比較? ? Pre S2陽(yáng)性組患者血清LN、HA及PⅢ水平明顯低于Pre S2陰性組（P<0.05），2組Ⅳ C水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表4。

2.4? ? 相關(guān)性分析? ? HBV-DNA載量、Pre S2陽(yáng)性率與LN、HA、PⅢ水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），見(jiàn)表5。

3? ? 討論

既往研究指出，肝纖維化進(jìn)程主要為肝細(xì)胞反復(fù)受損以及細(xì)胞外間質(zhì)不斷增加的過(guò)程[7]，其中，間質(zhì)合成涉及肝間質(zhì)以及肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，主要包含有膠原蛋白（常見(jiàn)為Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅳ型，其中Ⅳ型為Ⅳ C）、蛋白聚糖（常見(jiàn)為HA）與非膠原蛋白（常見(jiàn)為L(zhǎng)N等），PⅢ主要反映肝臟之中Ⅲ型膠原合成情況，均在肝纖維化病變產(chǎn)生與發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[8]。LN水平可以及時(shí)反映機(jī)體基質(zhì)膠原更新情況，LN和Ⅳ C水平綜合反映了肝臟部位纖維化狀態(tài)。本研究中，不同HBV-DNA載量組LN、HA、PⅢ水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示乙肝患者LN、HA、PⅢ水平可能與HBV-DNA載量有關(guān)。對(duì)于慢性乙肝患者而言，HBV-DNA載量能夠評(píng)估HBV復(fù)制程度，病毒復(fù)制期間會(huì)刺激免疫系統(tǒng)，引起免疫病理反應(yīng)，造成肝細(xì)胞損傷，從而引發(fā)肝纖維化病變。本研究發(fā)現(xiàn)，HBV-DNA載量與LN、HA、PⅢ水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。乙肝是一種免疫介導(dǎo)疾病，在人體感染HBV后會(huì)出現(xiàn)免疫應(yīng)答，處于免疫耐受期時(shí)，機(jī)體病毒清除能力較弱，因此HBV-DNA復(fù)制活躍，一般表現(xiàn)為HBV-DNA載量高水平[9]。然而，隨著肝纖維化病變逐漸加重，將會(huì)到達(dá)免疫清除期，血清HBV-DNA載量會(huì)在非特異性免疫清除作用加強(qiáng)的條件下呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。免疫清除過(guò)程中會(huì)對(duì)肝細(xì)胞造成反復(fù)免疫性損傷，加快細(xì)胞炎癥壞死，進(jìn)一步加重纖維化病變，因此在纖維化較重的時(shí)候，HBV-DNA載量反而較低。3組Ⅳ C水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可能因?yàn)棰?C表達(dá)水平在肝臟纖維化早期不會(huì)產(chǎn)生較大改變，待發(fā)展至肝硬化階段才呈現(xiàn)明顯變化。

HBV蛋白S編碼區(qū)組成包括Pre S1、Pre S2以及S基因，分別編碼3種不同蛋白，依次為小分子蛋白（主要指S蛋白，具有產(chǎn)生保護(hù)性抗體作用）、中分子蛋白（主要指M蛋白，即Pre S2+S蛋白物質(zhì)）、大分子蛋白（主要指L蛋白，組成為Pre S1、Pre S2以及S蛋白）。既往研究表明，Pre S2與人體肝體細(xì)胞表面分布著聚合蛋白受體（PHSA2R），故提出了聚合人血清白蛋白（PHSA）可以介導(dǎo)HBV附著并且侵襲肝細(xì)胞，引起HBV感染的觀(guān)點(diǎn)[10]。Pre S2上存在PHSA2R結(jié)合部位，因此可能屬于PHSA2R活性主要分子基礎(chǔ)。有報(bào)道稱(chēng)，血清Pre S2不僅關(guān)系到PHSA2R活性，同時(shí)亦與乙肝e抗原（HBeAg）、HBV-DNA載量等病毒復(fù)制標(biāo)志物具有平行關(guān)系[11]。本研究中，Pre S2陽(yáng)性率高載量組>中載量組>低載量組，表明HBV-DNA載量越高的患者Pre S2陽(yáng)性率越高。本研究中，當(dāng)HBV-DNA載量處于高水平時(shí)，依然有部分患者檢出Pre S2陰性，考慮可能由于HBV-DNA C區(qū)啟動(dòng)子或者C區(qū)基因突變，導(dǎo)致宿主免疫功能提高。Pre S2測(cè)定不僅可為乙肝早期診斷提供指導(dǎo)，同時(shí)在乙肝急性期對(duì)患者進(jìn)行連續(xù)動(dòng)態(tài)觀(guān)察，有利于早期了解患者轉(zhuǎn)歸[12]。本研究結(jié)果顯示，Pre S2陽(yáng)性率與LN、HA、PⅢ水平呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），肝纖維化程度越低，Pre S2陽(yáng)性率越高?？紤]與LN、HA、PⅢ水平越高，HBV-DNA載量越低有關(guān)。

綜上所述，慢性乙型肝炎患者HBV-DNA載量、Pre S2陽(yáng)性率與血清LN、HA、PⅢ密切相關(guān)，檢測(cè)HBV-DNA載量、Pre S2陽(yáng)性率可為肝纖維化的診治提供指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張國(guó)民，繆寧，鄭徽，等.中國(guó)2005—2016年乙型病毒性肝炎報(bào)告發(fā)病的年齡和地區(qū)特征[J].中國(guó)疫苗和免疫，2018，24（2）：121-126.

[2] TAGHIABADI M，HOSSEINI S Y，GORZIN A A，et al.Comparison of pre-S1/S2 variations of hepatitis B virus between asymptomatic carriers and cirrhotic/hepatocellular carcinoma-affected individuals[J].Clin Exp Ophchalmol，2019，5（2）：161-168.

[3] MEGAHED FAK，ZHOU X，SUN P.The interactions between HBV and the innate immunity of hepatocytes[J].Int J Appl Mech，2020，12（3）：285.

[4] 趙超群，蔡虹，陳龍，等.乙肝肝硬化肝膽濕熱及肝腎陰虛證物質(zhì)基礎(chǔ)研究[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2020，22（4）：1121-1131.

[5] 栗紅江，胡素玲，何久勝，等.瞬時(shí)彈性成像技術(shù)（FibroScan）檢測(cè)和血miR-21水平與乙肝肝硬化患者肝臟纖維化程度的關(guān)系及對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)[J].影像科學(xué)與光化學(xué)，2020，38（6）：956-961.

[6] 王貴強(qiáng)，段鐘平，王福生，等.慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）[J].實(shí)用肝臟病雜志，2020，23（1）：9-32.

[7] YUAN L Z，JIANG J，LIU X，et al.HBV infection-induced liver cirrhosis development in dual-humanised mice with human bone mesenchymal stem cell transplantation[J].Gut，2019，68（11）：2044-2056.

[8] 吳智慧，丁媛.慢性乙型肝炎肝硬化患者恩替卡韋抗病毒干預(yù)后肝臟彈性成像定量變化觀(guān)察[J].肝臟，2020，25（6）：630-632.

[9] SHEN J Y，DAI J L，ZHANG Y，et al.Baseline HBV-DNA load plus AST/ALT ratio predicts prognosis of HBV-related hepatocellular carcinoma after hepatectomy：a multicentre study[J].J Viral Hepatitis，2021，28（11）：1587-1596.

[10] TENG C F，LI T C，HUANG H Y，et al.Hepatitis B virus pre-S2 deletion（nucleotide 1 to 54）in plasma predicts recurrence of hepatocellular carcinoma after curative surgical resection[J].PLoS One，2020，15（11）：e0242748.

[11] JENG? L? B，LI T C，HSU S C，et al.Association? of? low serum albumin level with higher hepatocellular carcinoma recurrence in patients with hepatitis B virus Pre-S2 mutant after curative surgical resection[J].J Clin Med，2021，10（18）：4187.

[12] MA H，LIM T H，LEERAPUN A，et al.Therapeutic vaccine BRII-179 restores HBV-specific immune responses in patients with chronic HBV in a phase Ib/IIa study[J].Jhep Rep，2021，3（6）：100361.（收稿日期：2023-05-15）