王 琴，劉冬梅，趙平華，許 玲，李長(zhǎng)江，王啟硯*，何梟宇*

（1.荊門(mén)市中心醫(yī)院，湖北 荊門(mén) 448000；2.荊門(mén)市食品藥品質(zhì)量檢驗(yàn)所，湖北 荊門(mén) 448000；3.成都草源康生物科技有限公司，四川 成都 611130）

皮子藥（麻口皮子藥） 為蕓香科植物野花椒ZanthoxylumsimulansHance 的干燥干皮及枝皮，主要分布于湖南、貴州、江西、江蘇、浙江、安徽等省，具有祛風(fēng)散寒、活血止痛、解毒消腫的功效，臨床用于治療風(fēng)寒濕痹、腹痛泄瀉、咽喉疼痛、牙齦腫痛、無(wú)名腫毒、跌打損傷、毒蛇咬傷、吐血、衄血［1-2］。目前，從該植物中分離得到的化學(xué)成分為木脂素、苯丙素、生物堿、甾醇、揮發(fā)油、黃酮等［3-6］，但對(duì)該植物干皮和枝皮的系統(tǒng)研究較少，為明確該藥用資源的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究采用多種色譜技術(shù)對(duì)皮子藥的乙醇提取物開(kāi)展全面的化學(xué)成分研究，從中分離得到8 個(gè)化合物，其中化合物1 為新化合物，化合物3、8 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Bruker Avance Ⅲ600MHz 核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker 公司）；AB SCIEX TripleTOF TM5600+四極桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（美國(guó)AB Sciex 公司）；Ultimate 3000 高效液相色譜儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）；LC-100 半制備型液相色譜儀（上海伍豐科學(xué)儀器有限公司）。

Sephadex G-10 制備型C18色譜柱（300 mm×15 mm，10 μm） （大連依利特分析儀器有限公司）；反相色譜硅膠（RP-18，德國(guó)Merck 公司）；Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠 （美國(guó)GE 公司）；D101 型大孔吸附樹(shù)脂（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；柱用正相硅膠（200～300 目）、TLC 硅膠板GF254（青島海洋化工廠(chǎng)）。甲醇為色譜純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；其余試劑均為分析純。

皮子藥于2021 年購(gòu)自成都草源康生物科技有限公司，經(jīng)荊楚理工學(xué)院楊成雄教授鑒定為ZanthoxylumsimulansHance 的干皮及枝皮，植物樣本（編號(hào)PZY-JCLG-202105） 存放在荊楚理工學(xué)院協(xié)同創(chuàng)新平臺(tái)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

取皮子藥8 kg，陰干后粉碎過(guò)篩，用7 倍量95%乙醇回流提取3 次，每次4 h，合并提取液，減壓濃縮至無(wú)醇味，得浸膏775 g。加水分散，依次用二氯甲烷、醋酸乙酯進(jìn)行萃取，每部分萃取3次，合并萃取液，減壓濃縮后得二氯甲烷部位、醋酸乙酯部位，剩余水溶液用1%醋酸正丁醇萃取2次，減壓蒸干溶劑，得正丁醇部位。

二氯甲烷部位（54 g） 加適量石油醚、乙酸乙酯溶解，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-醋酸乙酯（50 ∶1～1 ∶1） 梯度洗脫，TLC 檢識(shí)合并，得到Fr.A～Fr.D。Fr.D 經(jīng) Sephadex LH-20，以氯仿-甲醇（2 ∶1） 洗脫，得到Fr.D-1～Fr.D-2。Fr.D-1 經(jīng)凝膠柱，以氯仿-甲醇（1 ∶1） 洗脫，得到化合物5（24.3 mg）。Fr.D-2 經(jīng)硅膠柱，以氯仿-甲醇（5 ∶1～1 ∶1） 梯度洗脫，得到化合物6 （30.2 mg）、7（35.4 mg）。

醋酸乙酯部位（107 g） 加適量氯仿、甲醇溶解，經(jīng)硅膠柱，以氯仿-甲醇（10 ∶1～1 ∶1） 梯度洗脫，TLC 檢識(shí)合并，得到Fr.E～Fr.H。Fr.F～Fr.G 經(jīng)Sephadex LH-20，以氯仿-甲醇（1 ∶2） 分離，再經(jīng)RP-18 柱，以甲醇-1%醋酸水（60 ∶40）純化，得到化合物4 （22.0 mg）、8 （18.7 mg）。

正丁醇部位（116 g） 加水混懸，經(jīng)D101 大孔樹(shù)脂柱，以10%、30%、50%、70% 乙醇梯度洗脫，得到Fr.J～Fr.M。Fr.L 經(jīng)RP-18 柱，以甲醇-2%醋酸水（50 ∶50） 分離，再經(jīng)半制備HPLC，以甲醇-2%醋酸水（40 ∶60） 純化，得到化合物3（15.3 mg，tR＝11.4 min）；Fr.K 經(jīng)半制備HPLC，以甲醇-2%醋酸水（10 ∶90～20 ∶80） 梯度洗脫，得到化合物1 （11.4 mg，tR＝18.6 min）、2 （19.0 mg，tR＝13.7 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無(wú)定形粉末，［α］D10＝-23.9（c0.1，CH3OH），紫外光譜λCH3OH max （logε）為278.3 nm （3.42），IR （KBr）νmax為3 454、1 632、1 401、1 216、1 119 cm-1，HR-ESI-MSm／z：395.097 7 ［M+Na］+，373.115 8 ［M+H］+（計(jì)算值為C16H20O10Na，C16H21O10），推測(cè)分子式C16H20O10，不飽和度為7，1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。1H-NMR 中顯示1 組苯環(huán)氫信號(hào)δH7.32（2H，brs），表明存在1 個(gè)1，3，4，5-四取代苯環(huán)結(jié)構(gòu)，δC147.4、140.5、147.4 進(jìn)一步表明其為氧取代苯環(huán)；HMBC 譜顯示，δH3.90 （6H，s） （2個(gè)-OCH3片段） 與δC147.4 相關(guān)，δH7.32 （2H，brs） 與δC165.9 相關(guān)，故確定為丁香?；?；通過(guò)譜學(xué)數(shù)據(jù)對(duì)比，發(fā)現(xiàn)化合物1 與已知化合物綠原酸的高場(chǎng)信號(hào)相似，故推測(cè)為奎寧酸母核；HMBC 譜中，δH5.41 （1H，q，J＝6.2 Hz） 與δC165.9 相關(guān)，由此可確定丁香?；涂鼘幩崮负说倪B接方式。最終確定化合物1 為新化合物，命名為3-O-丁香酰奎寧酸，其結(jié)構(gòu)式和HMBC 相關(guān)見(jiàn)圖1。

圖1 化合物1 的結(jié)構(gòu)和主要關(guān)聯(lián)HMBC 圖譜Fig．1 Structure and key HMBC correlations of compound 1

表1 化合物1 的1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)Tab．1 1H-NMR and 13C-NMR data on compound 1

化合物2：類(lèi)白色粉末，HR-ESI-MSm／z：373.113 4 ［M+H］+，分子式C16H18O9。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.56 （1H，d，J＝15.9 Hz，H-7'），7.05 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-2'），6.95 （1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H-6'），6.78（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5'），6.26 （1H，d，J＝15.9，1.6 Hz，H-8'），5.33 （1H，td，J＝9.0，4.5 Hz，H-3），4.17 （1H，td，J＝3.2，2.5 Hz，H-5），3.73 （1H，dd，J＝8.5，3.2 Hz，H-4），2.20 （2H，m，H-2），2.07 （2H，m，H-6）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：175.6 （C-7），167.3 （C-9'），148.2 （C-4'），145.7 （C-3'），145.4 （C-7'），126.4 （C-1'），121.6 （C-6'），115.1 （C-5'），113.8 （C-2'），113.7 （C-8'），74.7 （C-1），72.0 （C-3），70.6 （C-4），69.9（C-5），37.3 （C-6），36.8 （C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］ 報(bào)道基本一致，故鑒定為綠原酸。

化合物3：白色針狀結(jié)晶，HR-ESI-MSm／z：342.171 5 ［M+H］+，分子式C20H24NO4。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.72 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-8），6.58 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-9），6.54 （1H，s，H-3），3.85 （1H，m，H-6），3.83（3H，s，2-OCH3），3.77 （3H，s，10-OCH3），3.49 （1H，dd，J＝12.1，5.8 Hz，H-5a），3.24（3H，s，N-CH3），3.23 （1H，m，overlapped，H-5b），3.16 （1H，m，H-7a），2.97 （1H，m，H-7b），2.78 （3H，s，N-CH3），2.61 （1H，m，H-4a），2.38 （1H，m，H-4b）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：150.8 （C-2），149.6 （C-10），146.2 （C-11），145.8 （C-1），124.9 （C-7a），121.1 （C-8），120.8 （C-3a），119.9 （C-11a），117.2 （C-1a），116.7 （C-8），109.7 （C-9），108.7 （C-3），69.3 （C-6），60.7 （C-5），55.0（10-OCH3），54.8 （2-OCH3），52.6，42.2 （NCH3），30.1 （C-7），23.2 （C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8-9］ 報(bào)道基本一致，故鑒定為木蘭花堿。

化合物4：無(wú)色油狀物，HR-ESI-MSm／z：359.149 7 ［M+H］+，分子式C20H22O6。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.96 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-2），6.94 （1H，d，J＝1.7 Hz，H-2'），6.81 （1H，dd，J＝8.1，1.7 Hz，H-6），6.79（1H，dd，J＝8.1，1.7 Hz，H-6'），6.77 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-5），6.76 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-5'），4.83 （1H，d，J＝6.2 Hz，H-7），4.41（1H，d，J＝7.0 Hz，H-7'），4.09 （1H，brd，J＝9.4 Hz，H-9a），3.85 （3H，s，3-OCH3），3.84（3H，s，3'-OCH3），3.82 （1H，dd，J＝9.4，6.2 Hz，H-9b），3.77 （1H，dd，J＝8.7，8.5 Hz，H-9'a），3.27 （1，dd，J＝8.7，8.5 Hz，H-9'b），3.36 （1H，m，H-8），2.91 （1H，m，H-8）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：147.7 （C-3），147.4 （C-3'），146.0 （C-4），145.2 （C-4'），132.5 （C-1），129.9 （C-1'），118.8 （C-6），118.0 （C-6'），114.7 （C-5），114.6 （C-5'），109.4 （C-2），109.1 （C-2'），88.1 （C-7），82.1（C-7'），70.6 （C-9），69.2 （C-9'），55.0 （3，3'-OCH3），54.2 （C-8），49.9 （C-8'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10-12］ 報(bào)道基本一致，故鑒定為表松脂酚。

化合物5：白色無(wú)定形粉末，HR-ESI-MSm／z：447.202 7 ［M+H］+，分子式C24H30O8。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.68 （4H，s，J＝1.7 Hz，H-2），4.75 （2H，d，J＝4.2 Hz，H-7，7'），4.29 （2H，dd，J＝9.2，6.9 Hz，H-9a，9'a），3.93 （2H，dd，J＝9.2，3.6 Hz，H-9b，9'b），3.84 （12H，s，3，3'，5，5'-OCH3），3.74 （6H，s，4，4'-OCH3），3.12 （2H，m，H-8，8'）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：153.3 （C-3，3'，5，5'），137.4 （C-4，4'），137.0 （C-1，1'），102.7 （C-2，2'，6，6'），85.9 （C-7，7'），71.6 （C-9，9'），59.7 （4，4'-OCH3），55.2 （3，3'，5，5'-OCH3），54.3 （C-8，8'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13-14］ 報(bào)道基本一致，故鑒定為鵝掌楸樹(shù)脂酚B 二甲醚。

化合物6：無(wú)色膠狀物，HR-ESI-MSm／z：353.140 7 ［M-H2O+H］+，分子式C21H20O6。1HNMR （600 MHz，CD3OD）δ：6.97 （1H，brs，H-2'），6.91 （1H，brs，H-5'），6.90 （1H，brs，H-6'），6.88 （1H，d，J＝1.6 Hz，H-2），6.84（1H，dd，J＝8.0，1.6 Hz，H-6），6.77 （1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），5.92 （2H，s，-O-CH2-O-），4.71 （1H，d，J＝5.2 Hz，H-7），4.70 （1H，d，J＝5.2 Hz，H-7'），4.22 （2H，dd，J＝9.1，6.9 Hz，H-9a，9'a），3.84 （2H，dd，J＝9.1，4.3 Hz，H-9b，9'b），3.83 （3H，s，4'-OCH3），3.81（3H，s，3'-OCH3），3.10 （2H，m，H-8，8'）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：150.2 （C-3'），149.1 （C-4'），148.3 （C-3），147.6 （C-4），135.2 （C-1），133.8 （C-1），119.9 （C-6），119.0 （C-6'），112.1 （C-5'），110.3 （C-2'），108.9 （C-5），107.4 （C-2），101.5 （-O-CH2-O-），86.1 （C-7），86.0 （C-7'），72.2 （C-9），72.1 （C-9'），56.8 （4'-OCH3），56.7 （3'-OCH3），54.7 （C-8'），54.5 （C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15-16］ 報(bào)道基本一致，故鑒定為去甲檳郎堿。

化合物7：無(wú)色針狀結(jié)晶，HR-ESI-MSm／z：353.140 0 ［M-H2O+H］+，分子式C21H22O6。1HNMR （600 MHz，CD3OD）δ：6.99 （1H，d，J＝1.3 Hz，H-2'），6.94 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5'），6.92 （1H，dd，J＝8.2，1.3 Hz，H-6'），6.88 （1H，d，J＝1.6 Hz，H-2），6.85 （1H，dd，J＝7.9，1.6 Hz，H-6），6.77 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-5），5.93 （2H，s，-O-CH2-O-），4.87（1H，d，J＝6.1 Hz，H-7），4.42 （1H，d，J＝6.9 Hz，H-7'），4.11 （1H，brd，J＝9.4 Hz，H-9a），3.85 （1H，dd，J＝9.4，6.3 Hz，H-9b），3.84 （3H，s，4'-OCH3），3.82 （3H，s，3'-OCH3），3.78 （1H，dd，J＝9.1，8.2 Hz，H-9'a），3.40 （1H，m，H-8），3.24 （1H，dd，J＝9.1，8.2 Hz，H-9'b），2.90 （1H，m，H-8'）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：149.5 （C-3），148.7 （C-4），148.6 （C-3'），147.9 （C-4'），135.8 （C-1'），132.0 （C-1），120.3 （C-6'），118.0 （C-6），111.7 （C-5），109.8 （C-2），108.9 （C-5'），107.1 （C-2'），101.5 （-O-CH2-O-），88.5 （C-7'），82.7 （C-7），71.5 （C-9'），70.3 （C-9），56.3 （3-OCH3），56.4 （4-OCH3），55.1 （C-8'），50.9 （C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］ 報(bào)道基本一致，故鑒定為辛夷脂素。

化合物8：無(wú)色油狀物，HR-ESI-MSm／z：449.195 1 ［M+Na］+，分子式C25H30O6。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.98 （1H，d，J＝1.5 Hz，H-2'），6.97 （1H，d，J＝1.5 Hz，H-2），6.91 （1H，d，J＝8.2 Hz，H-5'），6.89 （1H，dd，J＝8.2，1.5 Hz，H-6'），6.80 （1H，dd，J＝8.1，1.5 Hz，H-6），6.77 （1H，d，J＝8.1 Hz，H-5），5.46 （1H，brt，H-2″），4.85 （1H，d，J＝6.1 Hz，H-7），4.54 （2H，brd，J＝6.7 Hz，H-1″），4.44 （1H，d，J＝7.0 Hz，H-7'），4.12（1H，brd，J＝9.6 Hz，H-9a），3.86 （3H，s，3-OCH3），3.84 （1H，m，H-9b），3.83 （3H，s，3'-OCH3），3.79 （1H，brt，H-9'a），3.38 （1H，m，H-8'），3.28 （1H，brt，H-9'b），2.93 （1H，m，H-8），1.77 （3H，brs，H-4″），1.73 （3H，brs，H-5″）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：149.8 （C-3），147.8 （C-4），147.4 （C-3'），145.2 （C-4'），137.4 （C-3″），134.2 （C-1），129.9 （C-1'），119.8 （C-2″），118.4 （C-6），118.0 （C-6'），114.6 （C-5），113.7 （C-5'），109.8 （C-2），109.1 （C-2'），87.8 （C-7），82.1（C-7'），70.6 （C-9），69.3 （C-9'），65.6 （C-1″），55.0 （3'-OCH3），54.9 （3-OCH3），54.3（C-8'），49.9 （C-8），24.5 （C-4″），16.8 （C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17-18］ 報(bào)道基本一致，故鑒定為planispine A。

4 討論

課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，皮子藥醋酸乙酯部位和正丁醇部位具有抗氧化作用，因此，本研究采用多種色譜分離方法與波譜技術(shù)從皮子藥中分離得到8個(gè)化合物，其中化合物1～2 為有機(jī)酸類(lèi)，化合物3為生物堿類(lèi)，化合物4～8 為木脂素類(lèi)，該系列化合物可為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和生物活性研究提供參考，并可為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。