吳先林， 江海媚， 張錦芳， 黃海福

廣州中醫(yī)藥大學(xué)深圳醫(yī)院（福田），深圳市中醫(yī)腫瘤醫(yī)學(xué)中心，廣東 深圳 518000

當(dāng)前，惡性腫瘤仍然嚴(yán)重威脅人類健康。我國(guó)是世界第一人口大國(guó)，癌癥新發(fā)人數(shù)遠(yuǎn)超世界其他國(guó)家。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全國(guó)每日大約有1.25 萬人確診癌癥。近30年來，我國(guó)癌癥死亡率增加了80%，發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升趨勢(shì)，癌癥已成為國(guó)人的第一殺手。2020年，中國(guó)新發(fā)癌癥457萬人，占全球新發(fā)人數(shù)的23.7%，死亡人數(shù)300 萬，占全球癌癥死亡人數(shù)的30%，遠(yuǎn)超其他國(guó)家[1]。

腫瘤屬于中醫(yī)“癥瘕”、“積聚”和“巖”等范疇，也有具體部位的腫瘤如“瘰疬”、“噎膈”和“腸蕈”等。中醫(yī)學(xué)對(duì)腫瘤的發(fā)病成因認(rèn)識(shí)，不外乎內(nèi)因和外因。內(nèi)因最主要是機(jī)體正氣不足，外因包括外感六淫、飲食七情所傷，以及氣滯、血瘀、痰凝和毒結(jié)等病理產(chǎn)物的長(zhǎng)期作用[2]。中醫(yī)藥是治療腫瘤的重要手段，在多年的臨床實(shí)踐中，中醫(yī)藥治療腫瘤已經(jīng)形成了扶正固本、以毒攻毒、活血化瘀、清熱解毒和軟堅(jiān)散結(jié)等治則治法，在減輕患者痛苦、延緩腫瘤組織擴(kuò)散、改善生活質(zhì)量和延長(zhǎng)生存期等方面，發(fā)揮了重要的作用[3]。

中醫(yī)實(shí)驗(yàn)研究在探索腫瘤的中醫(yī)病因病機(jī)、驗(yàn)證中藥方劑的有效性和安全性以及闡明中藥的作用機(jī)制和藥效規(guī)律等方面具有重要的作用。腫瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ褪侵嗅t(yī)腫瘤學(xué)的重要研究對(duì)象，基于中醫(yī)“辨證論治”的獨(dú)特性，中醫(yī)腫瘤實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ途哂幸欢ǖ奶厥庑?。本文結(jié)合中醫(yī)腫瘤證候動(dòng)物模型、類器官模型和細(xì)胞模型的最新研究現(xiàn)狀，闡述實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ驮谥嗅t(yī)腫瘤學(xué)中的應(yīng)用和前景，希冀為中醫(yī)腫瘤研究提供思路與依據(jù)。

1 腫瘤的中醫(yī)證型相關(guān)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型

中醫(yī)證型動(dòng)物模型是指根據(jù)中醫(yī)證型的特點(diǎn)和臨床表現(xiàn)，在中醫(yī)整體觀念及辨證論治思想指導(dǎo)下，結(jié)合中醫(yī)病因病機(jī)理論，依據(jù)人類疾病原型制定模型構(gòu)建方法，最后制作成中醫(yī)證候臨床表現(xiàn)相符的動(dòng)物模型。中醫(yī)證候動(dòng)物模型主要分為病的模型、證的模型和病證結(jié)合模型三大類。

1.1 中醫(yī)證候模型研究概述

疾病動(dòng)物模型是研究疾病發(fā)生、發(fā)展機(jī)制和篩選出最有效、最安全的治療方法的動(dòng)物模型，主要制作方法是采用不同致病因素誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生相對(duì)應(yīng)的疾病，如化學(xué)致癌、病毒感染和手術(shù)等。常用的疾病模型動(dòng)物包括小鼠模型、大鼠模型、兔子模型、狗模型和猴子模型等，它們被廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、疾病機(jī)制研究和毒理學(xué)研究等領(lǐng)域[4]。證候動(dòng)物模型是中醫(yī)特有的動(dòng)物模型，是運(yùn)用中醫(yī)病因病機(jī)理論，將“證”形成的內(nèi)外因直接施加在動(dòng)物身上所構(gòu)建的動(dòng)物模型。如外感六淫證候模型，可模擬高溫、低溫、高濕或低濕等不同飼養(yǎng)環(huán)境，閔莉等[5]采用高膽固醇致石飼料結(jié)合人工氣候箱模擬濕熱環(huán)境，制作小鼠膽固醇結(jié)石“濕熱證”模型。內(nèi)傷七情證候模型，可給予一些應(yīng)激性的刺激如驚嚇、禁食或觸怒等建立相應(yīng)的七情內(nèi)傷證候模型，趙海濱等[6]采用禁食禁水、夾尾、行為固定和電擊足底等方法制造大鼠“肝氣郁結(jié)”模型。飲食內(nèi)傷模型，可給予一些特制的飲食如高脂高糖等建立飲食內(nèi)傷模型，喻松仁等[7]采用高脂飲食喂養(yǎng)SD 大鼠8周，建立中醫(yī)肥胖“痰濕證”動(dòng)物模型；王玲等[8]利用基因編輯CRISPR/Cas9 技術(shù)成功構(gòu)建了Parkin 基因敲除小鼠，發(fā)現(xiàn)小鼠基因敲除之后表現(xiàn)出與“腎虛證”相符的一些特點(diǎn)，如生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、反應(yīng)遲鈍、自主活動(dòng)減少、精神倦怠和生育能力下降等，因此認(rèn)為Parkin 基因敲除小鼠可作為一種理想的“腎虛證”動(dòng)物模型。此外，中醫(yī)的“血瘀證”模型、“肝郁氣滯證”模型和“濕證”模型等運(yùn)用非常廣泛。其中，“血瘀證”模型已非常成熟，已發(fā)展出寒凝血瘀、氣滯血瘀、痰濁血瘀等九種證型的造模方法[9]。通過中醫(yī)證候動(dòng)物模型的研究，可以深入了解疾病的中醫(yī)病因病機(jī)，并制作出不同證型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，篩選和驗(yàn)證最合適的中藥處方，為中醫(yī)“辨證論治”提供進(jìn)一步的參考和科學(xué)依據(jù)。

1.2 病證結(jié)合模型

中醫(yī)“病證結(jié)合”動(dòng)物模型是指在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，結(jié)合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)相關(guān)知識(shí)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)病機(jī)制，將疾病和中醫(yī)證型的構(gòu)建方式先后或同時(shí)施加于動(dòng)物身上，使動(dòng)物模型同時(shí)具有疾病與證候特征，形成“疾病+證候”的動(dòng)物模型，即病證結(jié)合模型[10]。開展中醫(yī)病證結(jié)合的動(dòng)物模型研究，對(duì)闡釋中醫(yī)病因病機(jī)的科學(xué)內(nèi)涵、深入研究中醫(yī)基礎(chǔ)理論有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和應(yīng)用前景[11]。袁俊俊[12]依據(jù)“太陰濕土”理論，采用高糖高脂飲食喂養(yǎng)聯(lián)合來曲唑混懸液，制備“痰濕型”多囊卵巢綜合征伴胰島素抵抗大鼠模型；趙榮華等[13]采用HCoV-229E 病毒感染小鼠后再置于高濕低溫的環(huán)境中飼養(yǎng)，制作肺炎寒濕疫毒襲肺小鼠病證結(jié)合模型；陳雋等[14]在左冠狀動(dòng)脈前降支起點(diǎn)下方結(jié)扎大鼠，配合力竭式游泳和禁食法，建立慢性心力衰竭“氣虛血瘀證”模型；孫曉霞等[15]根據(jù)“熱盛傷陰”的中醫(yī)理論，采用自發(fā)性糖尿病小鼠，給予灌胃“傷陰藥”中藥黑順片、肉桂和吳茱萸，建立糖尿病“陰虛證”病證結(jié)合小鼠模型；李鑫等[16]根據(jù)中醫(yī)“怒傷肝”理論，在采用四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的基礎(chǔ)上，加用慢性夾尾激怒大鼠的方式，制作肝纖維化大鼠“肝郁”病證結(jié)合模型。

1.3 中醫(yī)腫瘤證候?qū)嶒?yàn)?zāi)Ｐ?/h3>

中醫(yī)腫瘤證候模型，是在腫瘤動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上制作的一種“病證結(jié)合”動(dòng)物模型。目前，腫瘤動(dòng)物模型的構(gòu)建主要有以下五種：自發(fā)性腫瘤模型、誘發(fā)性腫瘤模型、腫瘤細(xì)胞系移植模型、人源腫瘤組織異種移植模型和基因修飾模型等。中醫(yī)腫瘤證候動(dòng)物模型是在中醫(yī)學(xué)整體觀念及辨證論治思想指導(dǎo)下，把腫瘤發(fā)病原型的某些特征在動(dòng)物身上的一種復(fù)制，也是腫瘤患者中醫(yī)證候表現(xiàn)的模擬與再現(xiàn)[17]。氣虛肝癌模型是在肝癌動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，采用控制飲食法、中藥瀉下法、疲勞力竭法和復(fù)合法同時(shí)構(gòu)建氣虛證的造模方法。采用此方法，可以造成氣虛證肺癌模型[18]、氣虛證乳腺癌模型[19]等多種氣虛證腫瘤模型。張棟等[20]分別采用甲腺素合利血平制作小鼠“陰虛”動(dòng)物模型、采用醋酸氫考制作小鼠“陽虛”模型、采用小鼠球后靜脈叢放血制作“血虛”模型后，再接種肝癌H22 細(xì)胞株，造成“陰虛”肝癌模型、“陽虛”肝癌模型和“血虛”肝癌模型。彭召云等[21]采用小鼠頸背部皮下注射鹽酸腎上腺素，同時(shí)用繃帶細(xì)條束縛小鼠四肢，并加籠外木棒敲擊等方式制作“氣滯血瘀”模型，然后在皮下接種肺癌Lewis 細(xì)胞株制作“氣滯血瘀”肺癌小鼠模型。左嬌嬌等[22]采用目前公認(rèn)的胃癌前病變?cè)炷７椒∟-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍（MNNG）五因素法，以模擬中醫(yī)病因中長(zhǎng)期飲食偏嗜或飲食不潔損傷脾胃功能，并配合禁食等制作胃癌前病變“氣虛血瘀證”大鼠模型。

1.4 中醫(yī)腫瘤證候模型的現(xiàn)狀

當(dāng)前，中醫(yī)腫瘤證候模型具有一定的不足之處。首先，造模時(shí)間長(zhǎng)、干擾因素多。在模型制作過程中，腫瘤模型和證候模型往往需要先后進(jìn)行，先成功制作成證候模型后，再進(jìn)行腫瘤模型的制作，耗時(shí)較長(zhǎng)。對(duì)證候模型如肝郁氣滯模型，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行禁食禁水、夾尾、行為固定和電擊足底等一系列操作[23]，后再進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的接種，這對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)施的干擾過多，使動(dòng)物難以承受。其次，證候模型缺乏客觀化標(biāo)準(zhǔn)。雖然近來年對(duì)中醫(yī)證型的客觀化做了大量的研究，如基于胰腺癌的客觀指標(biāo)與中醫(yī)證型相關(guān)性研究[24]、原發(fā)性肝癌的中醫(yī)辨證分型與血清腫瘤標(biāo)志物水平的相關(guān)性[25]以及非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)證型與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性的研究[26]等。但對(duì)于證候模型制作的成功與否，仍然缺乏一套客觀化和標(biāo)準(zhǔn)化的指標(biāo)。最后，受制于當(dāng)前技術(shù)水平，證候模型仍然無法最大化模擬中醫(yī)病因和發(fā)病過程，比如中醫(yī)外感六淫中的“濕邪”，是高濕度、微生物和機(jī)體免疫功能和病理產(chǎn)物共同作用的結(jié)果，而現(xiàn)今的“濕證”動(dòng)物模型主要采用濕度來模擬，無法最大化地復(fù)制濕邪的致病過程。

2 類器官在中醫(yī)腫瘤中的應(yīng)用

2.1 類器官在中醫(yī)領(lǐng)域中的運(yùn)用

類器官，顧名思義類似于組織器官，指的是由干細(xì)胞經(jīng)體外3D 培養(yǎng)產(chǎn)生的“類似”器官樣、具有自我更新和組裝能力以及結(jié)構(gòu)和功能與來源組織或器官高度相似的微型器官[27-28]。自2009年腸道類器官成功“問世”以來，類器官培養(yǎng)技術(shù)取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，且逐步發(fā)展為生物醫(yī)學(xué)中最具突破性的領(lǐng)域[29]。中醫(yī)藥以整體觀念、辨證論治指導(dǎo)臨床實(shí)踐，具有多途徑、多靶點(diǎn)、多通路的作用特點(diǎn)，依賴于傳統(tǒng)動(dòng)物和細(xì)胞模型的基礎(chǔ)研究具有較大局限性，難以精準(zhǔn)評(píng)價(jià)中醫(yī)藥治療作用，也缺少直觀動(dòng)態(tài)揭示藥效作用機(jī)制的有效方法，使得藥物篩選、中藥安全性評(píng)價(jià)效率較低。類器官以客觀化、可視化、精準(zhǔn)化為特點(diǎn)，應(yīng)用干細(xì)胞技術(shù)，在體外構(gòu)建類似體內(nèi)的組織器官模型，不僅有效避免了動(dòng)物模型物種間差異所造成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差，同時(shí)彌補(bǔ)了細(xì)胞模型缺少整體性和異質(zhì)性的不足，在模擬疾病發(fā)生發(fā)展、藥物有效性篩選及新藥研發(fā)[30]、器官移植和再生醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域取得了突破[31]。李彥軍等[32]采用結(jié)直腸癌患者來源的腫瘤類器官，研究癌基因CUL4B 在調(diào)控直腸癌患者miRNAs 的作用；陳豪等[33]通過建立結(jié)直腸癌患者來源的類器官生物樣本庫，體內(nèi)模型結(jié)直腸組織的生物學(xué)行為，為臨床前模型評(píng)估結(jié)直腸患者的化療效果，可預(yù)判結(jié)直腸患者化療效果，從而指導(dǎo)患者的化療方案。類器官平臺(tái)在各類腫瘤藥物的篩選中發(fā)揮了重要的作用。

中醫(yī)將每個(gè)病人視為不同的個(gè)體，每個(gè)個(gè)體的異質(zhì)性決定了每個(gè)腫瘤患者的癥狀體征完全不一樣，治法治則和遣方用藥也不一樣，這即是中醫(yī)“辨證論治”的治療原則。動(dòng)物和細(xì)胞模型具有非常大的“同質(zhì)性”，作為中醫(yī)的科學(xué)研究和臨床前研究的工具具有一定的局限性。類器官可由具體患者的自身的細(xì)胞培養(yǎng)而來，體現(xiàn)出患者的“異質(zhì)性”，使得中醫(yī)學(xué)研究更加具有說服力，也使中醫(yī)藥的臨床前研究更加精確，從而提高中醫(yī)治療療效。在中醫(yī)的辨證論治臨床實(shí)踐中，由于患者的體質(zhì)不同，同一種病可能采用不同的方劑，不同的病卻采用相同的方劑，即所謂“同病異治，異病同治”，是中醫(yī)個(gè)體化治療的體現(xiàn)。在臨床上，對(duì)于辨證存在模棱兩可或者治療后效果不佳的患者，在遵守相應(yīng)法律法規(guī)條件下，可根據(jù)辨證后制定的處方，先進(jìn)行類器官藥物敏感性檢測(cè)，綜合判斷中醫(yī)處方的優(yōu)劣，進(jìn)一步修正臨床治療方案以提高中醫(yī)臨床治療腫瘤的療效[34]。

2.2 類器官在中醫(yī)腫瘤中的運(yùn)用

在臨床實(shí)踐用藥中，為了更好地消除腫瘤，大部分患者接受聯(lián)合用藥治療或中西醫(yī)結(jié)合治療。韓毅[35]認(rèn)為，體外培養(yǎng)的腫瘤類器官具有很好地模型腫瘤組織的體外生長(zhǎng)，最關(guān)鍵的是和患者具有同樣的遺傳背景和結(jié)構(gòu)，并且在一定程度上保留了來自患者的生物學(xué)信息和相同的藥物反應(yīng)。腫瘤類器官藥物敏感性檢測(cè)類似體外培養(yǎng)細(xì)胞系的藥物敏感性檢測(cè)，既可以進(jìn)行單純的化療藥物篩選，也可以對(duì)藥物組合如化療藥物聯(lián)合中醫(yī)藥進(jìn)行篩選，并從中找到最佳的治療方案，極大地?cái)U(kuò)展了藥效研究和安全性研究[36-37]。

基于中藥抗腫瘤作用通過多組分、多靶標(biāo)和多途徑的特點(diǎn)，對(duì)中藥的有效成分物質(zhì)篩選及中藥安全性評(píng)價(jià)研究，現(xiàn)有動(dòng)物模型和細(xì)胞系并不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)中藥在人體的不良反應(yīng)，使得進(jìn)行中藥研究所投入的時(shí)間和精力遠(yuǎn)超于化學(xué)藥物研究。且二維細(xì)胞培養(yǎng)缺乏細(xì)胞和胞外基質(zhì)的相互作用，細(xì)胞在缺少一個(gè)整體相互作用的情況下，與實(shí)際中人體內(nèi)的藥物反應(yīng)和表達(dá)相差甚遠(yuǎn)，因此研究模式體系的選擇也成為中藥新藥研發(fā)中的弊端，而類器官的無疑為標(biāo)準(zhǔn)化藥物篩選和安全性評(píng)價(jià)提供了新的思路[38]。王璐等[39]通過收集結(jié)直腸癌患者腫瘤組織樣本，并以正常癌旁組織樣本為對(duì)照，構(gòu)建了結(jié)直腸癌類器官模型和正常組織類器官模型，并通過此模型，評(píng)價(jià)幾種有毒中藥單體成分如雷公藤甲素、斑蝥素和蟾毒靈對(duì)結(jié)直腸癌類器官活性的影響，并在正常組織類器官中測(cè)試其毒性，為有毒中藥在結(jié)直腸癌患者中用藥的有效性和安全性提供臨床參考；朱方圓等[40]將8 周齡C57 小鼠胃幽門部分離之后，體外培養(yǎng)成胃類器官，72 小時(shí)后體外出芽形成胃類器官，并采用南蛇藤提取物對(duì)胃類器官進(jìn)行干預(yù)觀察其生長(zhǎng)和形成情況。此外，類器官芯片等新型的體外研究模型已經(jīng)用于中藥等天然藥物的毒性評(píng)價(jià)[41-42]。

3 腫瘤細(xì)胞模型在中醫(yī)腫瘤學(xué)中的研究

腫瘤細(xì)胞系是經(jīng)首次傳代成功后的腫瘤細(xì)胞，具有連續(xù)傳代的“永生化”特征。腫瘤細(xì)胞系在形態(tài)學(xué)、遺傳學(xué)和生物化學(xué)上都保持著腫瘤細(xì)胞的原有特征，可以用來研究腫瘤的生長(zhǎng)分化規(guī)律、腫瘤細(xì)胞的代謝和腫瘤藥物的作用機(jī)制。目前，大多數(shù)腫瘤都有相應(yīng)的腫瘤細(xì)胞系模型，如小鼠肝癌細(xì)胞系、人肝癌細(xì)胞系、人肺癌細(xì)胞系、小鼠乳腺癌細(xì)胞系、人胰腺癌細(xì)胞系和人白血病細(xì)胞系等。腫瘤細(xì)胞模型是研究中醫(yī)復(fù)方、單味藥和單體抗腫瘤作用的重要研究手段。中醫(yī)利用腫瘤細(xì)胞模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，一般是采用中藥復(fù)方或主要有效成分直接或間接作用于細(xì)胞模型。直接作用于細(xì)胞模型的研究方法主要是采用中藥或復(fù)方水煎劑、膏劑、中藥凍干粉和中藥單體等，間接作用是采用中藥復(fù)方的大鼠含藥血清。

3.1 中藥復(fù)方水煎劑或膏劑作用于腫瘤細(xì)胞模型

早期中醫(yī)腫瘤細(xì)胞研究主要采用水煎劑直接作用于腫瘤細(xì)胞并沿用至今，如劉金虎等[43]采用中藥全蝎、白術(shù)、白頭翁組合品發(fā)酵前后水提液，截留不同分子量段的活性成分，觀察其于乳腺癌細(xì)胞株MCF-7 細(xì)胞的抑制作用；黃松麗等[44]采用牽正散合大補(bǔ)陰丸水煎劑作用于大鼠嗜鉻瘤細(xì)胞PC12 細(xì)胞，觀察其增殖和凋亡的影響；張秋艷等[45]采用黃芪注射液合天花粉水煎劑對(duì)小鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞增殖、遷移的作用，以及對(duì)遷移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響；張?zhí)焘萚46]采用槐耳清膏作用于人三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231 和MDAMB-453 細(xì)胞，觀察其對(duì)腫瘤增殖和遷移的作用和機(jī)制。

3.2 中藥復(fù)方凍干粉作用于腫瘤細(xì)胞模型

中藥凍干粉是將中藥提取液中的有效成分凍干而形成的粉末制劑，它是一種穩(wěn)定劑的干燥制劑，能夠保持中藥的天然活性成分不被破壞，并具有較高的生物利用度和穩(wěn)定性。李永盛等[47]采用中藥槐耳有效部位凍干粉，作用于結(jié)腸癌HCT-116 細(xì)胞株，觀察細(xì)胞遷移和侵襲作用；王雪純等[48]采用中藥落地生根凍干粉，作用于人肝癌細(xì)胞株HepG2 細(xì)胞，觀察凍干粉對(duì)人肝癌細(xì)胞的增殖和凋亡影響；呂鵬等[49]采用龍貝逍遙散凍干粉，觀察其于通過調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬功能增強(qiáng)對(duì)乳腺癌耐藥細(xì)胞株MDA-MB-231/ADR 細(xì)胞的增殖、遷移抑制作用；文秀華等[50]采用補(bǔ)肺湯凍干粉作用于人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549 細(xì)胞，觀察其對(duì)肺癌細(xì)胞的抑制作用和相關(guān)機(jī)制。

3.3 中藥含藥血清作用于腫瘤細(xì)胞模型

中藥含藥血清是指用于中藥制劑給予動(dòng)物灌胃后，經(jīng)動(dòng)物體內(nèi)的吸收后進(jìn)入血液循環(huán)，并在一定時(shí)間內(nèi)采取血液，分離所得血清，血清內(nèi)含有一定量的藥物有效成分和代謝產(chǎn)物。中藥含藥血清作用于中醫(yī)腫瘤細(xì)胞模型是目前較為常用的中醫(yī)腫瘤體外研究方法。羅燕等[51]采用肝喜合劑含藥血清作用于人肝癌細(xì)胞株HepG2 細(xì)胞，觀察肝癌細(xì)胞的增殖作用；于丹等[52]采用補(bǔ)中益氣湯含藥血清，觀察其對(duì)被轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β1 介導(dǎo)的DDP 細(xì)胞（人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株）間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用；魏征等[53]采用化瘀解毒方含藥血清，作用于人肺部細(xì)胞A549 細(xì)胞，觀察其對(duì)肺癌細(xì)胞的凋亡作用和機(jī)制。鄭蓮等[54]采用半夏瀉心湯含藥血清，作用于幽門螺桿菌感染的人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1 細(xì)胞，觀察其對(duì)胃癌細(xì)胞的凋亡作用及對(duì)凋亡蛋白表達(dá)的影響。

3.4 中藥單體和有效成分作用于腫瘤細(xì)胞模型

中藥單體是指中藥中的活性成分，為具有特定化學(xué)式的化合物。研究中藥單體抗腫瘤作用，對(duì)于篩選更有效的抗腫瘤藥物、提高藥物療效、降低毒副作用和促進(jìn)中藥現(xiàn)代化具有重要的意義。目前，中藥單體抗腫瘤的篩選和藥效研究，已經(jīng)成為中醫(yī)藥體外細(xì)胞研究的主流。周珊珊等[55]采用決明蒽醌、木犀草素和去氧紫草素三種中藥單體，分別作用于人非小細(xì)胞肺癌A549 和NCIH460 細(xì)胞，觀察三種中藥單體對(duì)于肺癌細(xì)胞株的存活率和毒性。楊晶瑩等[56]采用靈芝主要成分靈芝菌絲多糖，分別作用于人口腔鱗癌細(xì)系HSC-3、人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和人肝癌轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞系HCCLM細(xì)胞，觀察其于三種不同類細(xì)胞系的體外抗腫瘤活性；陳良等[57]對(duì)中藥分心木的16 種有效成份進(jìn)行抗黑色素瘤Hela細(xì)胞活性篩選，篩選出胡桃寧B等兩種具有抗腫瘤活性的中藥單體；龍國(guó)清等[58]從中藥苦參中篩選出11 個(gè)中藥單體化合物，觀察其對(duì)人乳腺鱗狀癌HCC1806 細(xì)胞、人乳腺癌MCF-7細(xì)胞和肺癌H1299細(xì)胞等6種腫瘤細(xì)胞系的體外抑制活性，篩選出苦參酮、胡椒酸等多種具有抗腫瘤活性的中藥單體；周夢(mèng)楠等[59]通過從中藥玄參分離出23 個(gè)中藥單體化合物，觀察中藥單體體外抗肝癌HepG2 細(xì)胞、肺癌A549 細(xì)胞和結(jié)腸癌4T1 細(xì)胞的抗腫瘤活性，篩選出反式-咖啡酸甲酯等兩種具有抗腫瘤活性的中藥單體。

4 當(dāng)前研究現(xiàn)狀的不足與展望

“證候”是中醫(yī)辨證論治的主要依據(jù)，而“證候動(dòng)物模型”是中醫(yī)特有的動(dòng)物模型。當(dāng)前，諸如“血瘀證”“肝郁氣滯證”和“濕證”等證候動(dòng)物模型在中醫(yī)研究中已受到廣泛的運(yùn)用。對(duì)于中醫(yī)證候動(dòng)物模型的驗(yàn)證，陳小野等[60]學(xué)者很早就提出，應(yīng)該從癥狀、病因和治療等方面進(jìn)行。中醫(yī)的腫瘤證候模型是在證候模型的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步制作腫瘤模型，為典型的“病證結(jié)合”動(dòng)物模型。中醫(yī)腫瘤證候模型，對(duì)于腫瘤的證候形成機(jī)理、方藥驗(yàn)證和安全性評(píng)價(jià)具有重要的意義。由于證候的復(fù)雜性和客觀化原因，中醫(yī)腫瘤的證候動(dòng)物模型，對(duì)于模擬中醫(yī)腫瘤的發(fā)病病因、病機(jī)和不同證型的特點(diǎn)，仍然有很大的不足，中醫(yī)腫瘤證候模型需要在中醫(yī)證候因素不斷標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)上，繼續(xù)深入研究和改進(jìn)。

類器官平臺(tái)是在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的一種延伸，可以模擬人體器官的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能，同樣可以在中醫(yī)腫瘤證候研究中發(fā)揮重要作用。類器官可用以研究中醫(yī)證候的特征和機(jī)制，從而為中醫(yī)的“辨證論治”提供科學(xué)的依據(jù)。此外，類器官還可以用于中藥有效組分或方劑的篩選、藥效學(xué)研究和安全性評(píng)價(jià)。通過直接從患者腫瘤細(xì)胞構(gòu)建的類器官，可以更加準(zhǔn)確地模擬人體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)和發(fā)展，并為中藥的選方和辨證論治提供更加客觀的依據(jù)。然而，類器官平臺(tái)模擬的僅僅是人體腫瘤或器官在體外的一種形態(tài)結(jié)構(gòu)和某些生物學(xué)功能，無法代表人體的整體，而腫瘤的中醫(yī)證候是腫瘤發(fā)展到某個(gè)階段病因、病位、病勢(shì)、邪正關(guān)系等一系列病理變化的總稱，是在中醫(yī)“整體觀念”指導(dǎo)下的一種概括，兩者在本質(zhì)上存在差異。對(duì)于中藥改善免疫功能的研究，單獨(dú)的類器官構(gòu)建無法模擬機(jī)體的免疫反應(yīng)，必須借助于類器官共培養(yǎng)技術(shù)[61]，限制了類器官在中醫(yī)科研中的運(yùn)用。類器官及器官芯片模式體系建立和相關(guān)平臺(tái)的出現(xiàn)，為我們從整體評(píng)價(jià)中醫(yī)藥的科學(xué)性提供了可能，也是對(duì)動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的一種補(bǔ)充和延伸。