黃秀華 三明市沙縣區(qū)總醫(yī)院 （福建 三明 365050）

內(nèi)容提要： 目的：探討快速冰凍切片技術(shù)在病理診斷中的應(yīng)用。方法：選取2020年1月～2022年1月在本院進行病理檢查的病理組織標本100例作為觀察對象，采取隨機分配的方式將標本分為觀察組與對照組，每組各50例，其中對照組實施常規(guī)石蠟切片技術(shù)（儀器為LEICA RM2245半自動輪轉(zhuǎn)式切片機，產(chǎn)地品牌：進口德國LEICA），觀察組實施快速冰凍切片技術(shù)（儀器為LEICA CM 1950冰凍切片機，產(chǎn)地品牌：進口德國LEICA）。對比不同切片技術(shù)下標本符合率及相關(guān)指標。結(jié)果：通過比較兩組間標本不同制作方式下的符合率，觀察組符合率和對照組區(qū)別不大；同時在相關(guān)指標中，觀察組清晰度、細胞結(jié)構(gòu)以及細胞形態(tài)指數(shù)均與對照組常規(guī)切片指標相差不大，二者間差異不大，具有統(tǒng)計學意義，P>0.05。結(jié)論：在病理學臨床診斷中實施快速冰凍切片具有較高臨床應(yīng)用價值。對比常規(guī)石蠟切片方式診斷過程速度快，從而針對患者病情做出快速反應(yīng)；術(shù)中實行冰凍切片可避免患者實行二次手術(shù)，臨床醫(yī)生通過術(shù)中冰凍結(jié)果，選擇手術(shù)范圍，具有非常重要的意義。因此臨床中可根據(jù)患者的實際情況選擇是否實行快速冰凍切片。

冰凍切片是病理切片技術(shù)之一，是通過冰凍技術(shù)快速制備病理切片，讓醫(yī)生在術(shù)中得到病理結(jié)果的過程。通?？稍?0min之內(nèi)把組織迅速冷凍，經(jīng)過切片、染色、封片等環(huán)節(jié)，制作出病理切片，病理醫(yī)生立刻作出診斷，提供給臨床醫(yī)生病理報告。冷凍切片的種類較多，有低溫恒冷箱冰凍切片法、二氧化碳冰凍切片法等，現(xiàn)階段臨床實用性最為廣泛地為低溫恒冷箱冰凍切片。在實施快速冰凍切片過程中，如果取材、制作未依照操作規(guī)范執(zhí)行，極易造成病理組織呈冰晶、褶皺、脫落等不良狀態(tài)，使其清晰度及結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。因此技術(shù)人員需在制作期間特別注意不良因素造成的隱患，以保證標本清晰度與切片檢測質(zhì)量，為后續(xù)診斷和治療提供可靠的實驗室檢查依據(jù)[1-3]。本文選取本院病理組織標本100例作為觀察對象，通過為其實行快速冰凍切片技術(shù)檢查，進而明確其適用效果?，F(xiàn)報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月～2022年1月在本院進行病理檢查的病理組織標本100例作為觀察對象，采取隨機分配的方式將標本分為觀察組與對照組，每組各50例。對照組實施常規(guī)石蠟切片技術(shù)處理，觀察組實施快速冰凍切片技術(shù)檢查。其中，觀察組樣本來源男性25例，女性25例，年齡35～45歲，平均（40.12±0.25）歲；對照組樣本來源男性35例，女性15例，年齡35～45歲，平均（40.18±0.15）歲。組間樣本一般資料無顯著差異，具有統(tǒng)計學意義。

1.2 方法

觀察組：實施快速冰凍切片技術(shù)（見圖1）。在標本選擇時需明確選取新鮮活體組織，將組織部位毛發(fā)以及脂肪剔除，注意規(guī)避壞死部位以及傷患出血位置的標本。標本大小需保持在1.5cm×1.5cm左右，標本厚度為<0.2cm，儀器選擇為LEICA CM 1950冰凍切片機（品牌：LEICA；產(chǎn)地：德國），待病理醫(yī)生取材后，用OCT包埋劑完全包裹組織，快速置于恒冷切片機內(nèi)進行冷凍，驟冷愈快愈好，避免冰晶產(chǎn)生，待組織凍透后利用LEICA CM 1950冰凍切片機切片，依照標本調(diào)節(jié)切片機溫度一般為-20～-25?C，切片厚度一般為6～7μm，細胞較質(zhì)密的組織如淋巴結(jié)、肝臟等組織，切片厚度為5μm。而后將其切片放置于玻璃片上，快速置于AF固定液1min左右，水洗，Harris蘇木素加溫染色1min，稍水洗，百分之一鹽酸酒精分化3S，稍水洗，氨水返藍，待其染色水洗呈藍色后，再滴入適量酸性染料水溶性伊紅Y，水洗后乙醇二甲苯脫水透明后用中性樹脂封片[4]。

圖1.快速冰凍切片

對照組：實施常規(guī)石蠟切片技術(shù)（見圖2）。儀器為LEICA RM2245半自動輪轉(zhuǎn)式切片機（品牌：LEICA；產(chǎn)地：德國）。技術(shù)人員接收患者病理標本，清點無誤后簽收，而后對標本實施脫水、包埋、切片、染色、封片等程序，均依照相關(guān)流程執(zhí)行，全程核對組織數(shù)量，注意脫水試劑的濃度，脫水試劑容積應(yīng)為組織的5～10倍以上，保證脫水質(zhì)量，包埋石蠟過濾防止雜質(zhì)，避免刀痕，切片刀鋒利，切片時用力均勻，厚度約3～5μm。Harris蘇木素染色5～10min，流水沖洗，1%鹽酸酒精分化5s左右，水洗，氨水返藍，待其染色水洗呈藍色后，酸性水溶性伊紅Y染1min左右。封固前須由梯度酒精脫水，二甲苯透明，濕封，且在此期間不可出現(xiàn)氣泡，不得有樹膠外溢。標簽須附著玻片左側(cè)，編號字跡清晰[5]。

圖2.常規(guī)石蠟切片

1.3 觀察指標與判定標準

①對比兩種切片檢測后診斷確診率。以兩組患者最終結(jié)果作為參照值，比較組間標本在不同方法下的診斷符合率，且明確組間良性腫瘤、惡性腫瘤以及交界性腫瘤占比情況，隨即作出組間數(shù)據(jù)對比。②兩種切片技術(shù)相關(guān)指標評分。請由本院兩名經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)生對不同技術(shù)下的切片質(zhì)量進行評測，總計分值為10分，分數(shù)越高，切片質(zhì)量越高。

1.4 統(tǒng)計學分析

通過統(tǒng)計學軟件SPSS23.0對患者群體進行數(shù)據(jù)研究，研究資料采用進行表述，相關(guān)數(shù)值進行t檢驗分析，同時兩組數(shù)值在P>0.05條件下，其可判斷為兩組間差異較大，具有統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

2.1 對比兩種切片檢測后診斷確診率

通過診斷結(jié)果可知，觀察組在實施冰凍切片技術(shù)檢測下，檢出良性腫瘤患者24例（48%）、惡性腫瘤20例（40%）、交界性腫瘤4例（8%），共計48例，檢出率96%。對照組在實施常規(guī)切片檢測下，檢出良性腫瘤患者24例（480%）、惡性腫瘤20例（40%）、交界性腫瘤4例（8%），共計48例，檢出率96%。兩組患者檢出效果無明顯差異，有統(tǒng)計學意義，P>0.05。

2.2 兩種切片技術(shù)相關(guān)指標評分

通過對兩組檢查數(shù)據(jù)結(jié)果對比可知，觀察組清晰度為（8.54±0.25）分；細胞結(jié)構(gòu)為（8.13±1.34）分；細胞形態(tài)為（8.49±0.38）分。對照組清晰度為（8.53±0.18）分；細胞結(jié)構(gòu)為（8.09±0.14）分；細胞形態(tài)為（8.89±0.18）分。兩組切片技術(shù)下三項指標無顯著差異，有統(tǒng)計學意義，P>0.05。

3.討論

在腫瘤診斷過程中病理診斷作為金標準，通過對患者實施手術(shù)切除、穿刺等方式，從而獲取病理標本，利用光學顯微鏡等配套儀器對標本實施動態(tài)觀察[6]。隨著現(xiàn)階段病理診斷的路徑不斷優(yōu)化，病理方法的不斷創(chuàng)新，常規(guī)石蠟切片活檢已不能滿足臨床需求，冰凍切片填補了常規(guī)石蠟切片速度慢的缺點[7]。冰凍切片是外科手術(shù)科室與病理科之間的一種緊急會診方式。通過手術(shù)切取一小塊組織，不經(jīng)過常規(guī)固定脫水石蠟包埋等冗繁程序后，通過特制的包埋劑，將組織凍結(jié)于-20?C左右，切成薄片并染色，進行鏡下觀察，以幫助手術(shù)確定組織良惡性，切除方式，切除范圍，確認不易肉眼辨認的組織等，進而能夠明確判定患者位置腫瘤惡性程度，可對患者確病情做到有效評估，便于制定后續(xù)治療方案。隨著現(xiàn)階段快速冷凍切片技術(shù)廣泛實施，其應(yīng)用優(yōu)勢成效也逐步趨于明顯?？焖俦鶅銮衅瑑?yōu)點在于：簡便，不需要對組織固定、脫水、透明、包埋等即可進行切片；組織變化不大；能很好地保存脂肪和類脂等；能比較完好地保存各種抗原活性及酶類；用時短、速度快，可在短時間內(nèi)對手術(shù)標本進行病理診斷，進而確定臨床手術(shù)方案[8]。因此，冰凍切片技術(shù)通過對待檢部位進行冷凍，使其能夠快速達到檢測的適溫標準，從而使檢測流程更為便捷，讓患者能夠在短時間明確的診斷[9]。在使用器械上主要通過恒溫冷凍切片機完成操作，在儀器構(gòu)造上主要由冷箱和切片機組成，其具有快速制冷、主動除霜、自行消毒以及負壓等作用。在功能作用上，其可通過物理降溫使形象組織標本在冷凍環(huán)境下，保持一定硬度進行切片。在實用優(yōu)勢上，該實施過程速度快，可以提高工作效率。同時，恒溫冷凍切片機可依照實際需求調(diào)整切片厚度，制備不同厚度病理切片，以適應(yīng)不同實驗需求。同時，冷凍切片機通過微波、液氮等技術(shù)，可以針對組織標本快速凍結(jié)，確保組織原始形態(tài)、結(jié)構(gòu)保存完好，制備切片質(zhì)量高，適用于各種臨床病理研究。臨床采用冷凍切片機技術(shù)操作便捷，僅需放置標本加以冷凍，即可制備高質(zhì)量切片樣本，適合大部分臨床應(yīng)用。相較于傳統(tǒng)石蠟包埋技術(shù)，冷凍切片機無需依照有毒溶劑和昂貴設(shè)備，成本價格更低，更加環(huán)保。此外，該應(yīng)用技術(shù)能夠在較短的時間內(nèi)向患者及家屬報告疾病發(fā)展情況，降低其心理壓力，縮短等待結(jié)果時長，有利于圍手術(shù)方案順利進行。不過在實施過程中仍需注意應(yīng)注意安全，避免切傷手指，還應(yīng)明確刀片角度和速度，確保切片質(zhì)量和厚度。以及在使用后應(yīng)及時清洗維護，保證設(shè)備的正常使用壽命[10]。

快速冰凍切片技術(shù)可以使檢測效率得以明顯提升，對病理診斷準確性得以有效保證。不過若不依照規(guī)范處理，則標本易成冰晶狀物質(zhì)或成褶皺脫落，進而導致細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)及透明度受到影響。為此需依照臨床作業(yè)實施標準進行嚴格處理[11-13]。為能夠使患者標本保持在良好狀態(tài)下，應(yīng)快速取材，在對患者標本選擇上應(yīng)遵循標本取材規(guī)定，取材大小需保持在1.5cm×1.5cm左右，太大難以切完整，厚度>0.3cm，則冰凍費時，若標本溫度過低，則易影響患者標本保存質(zhì)量，出現(xiàn)脆硬現(xiàn)象。因此，在標本選取上需盡可能進行合理控制，確保切片質(zhì)量，注意觀察冷凍質(zhì)量，冷凍適溫需于0?C以下，并做好特殊環(huán)境的維持工作[13-16]。

人體的體液分為混合液，含有蛋白質(zhì)、核酸、核糖等有機分子以及部分鹽類物質(zhì)。所以人體組織標本需于0?C受凍，進而要求技術(shù)人員需要熟練掌握冰凍技術(shù)，明確冰凍適溫、用時等相關(guān)標準，確?？焖俦鶅黾夹g(shù)順利實施，同時針對切片厚度和質(zhì)量，技術(shù)人員應(yīng)熟練掌握使用規(guī)定和適時流程。在確保切面干凈完整基礎(chǔ)上，染色后還需進行二次脫水處理，最后，在使用中性膠封膜過程中膠量不宜過多，防止膠片膠水溢出[17-20]。

本研究結(jié)果可知，觀察組快速冰凍切片技術(shù)（儀器為LEICA CM 1950冰凍切片機，產(chǎn)地品牌：進口德國LEICA）符合檢出率與對照組常規(guī)切片技術(shù)（LEICA RM2245半自動輪轉(zhuǎn)式切片機，產(chǎn)地品牌：進口德國LEICA）無顯著差異，快速冰凍切片技術(shù)在檢出速度上優(yōu)于常規(guī)活檢，組間差異并不是很大，具有統(tǒng)計學意義，P<0.05。

綜上所述，通過將快速冰凍切片技術(shù)應(yīng)用于臨床病理診斷中，具有良好的檢出效果，優(yōu)點是速度快，可以為后續(xù)診治以及圍術(shù)治療提供有力依據(jù)，常規(guī)和快速冰凍切片技術(shù)具有互補的作用，臨床中可根據(jù)患者的實際情況選擇檢測技術(shù)。