劉艷霞，李雁

〔摘要〕 目的 探究扶正祛邪方加減對(duì)氯苯丙氨酸（para-chlorophenylalanine， PCPA）失眠模型小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用及其對(duì)腦組織內(nèi)γ-氨基丁酸A受體α1（gamma-aminobutyric acid A receptor subtype α1， GABA ARα1）、5-羥色胺1A受體（5-hydroxytryptamine 1A receptor， 5-HT1AR）、代謝型谷氨酸受體7（metabotropic glutamate receptor 7， mGluR7）表達(dá)的影響。方法 將50只小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、艾司唑侖組、高劑量組和低劑量組，連續(xù)灌胃給藥7 d后，各組小鼠進(jìn)行戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠實(shí)驗(yàn)和曠場(chǎng)試驗(yàn)的行為學(xué)測(cè)試，分別采用RT-qPCR和Western blot法檢測(cè)腦組織中GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7 mRNA和蛋白的表達(dá)以及mGluR7/GABA ARα1的比值。結(jié)果 與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠睡眠潛伏期延長（P<0.05），睡眠時(shí)間縮短（P<0.05），曠場(chǎng)試驗(yàn)中總的區(qū)域路程延長（P＜0.05），中心區(qū)停留時(shí)間縮短（P＜0.05），腦組織中GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白的表達(dá)均降低（P＜0.05），mGluR7 mRNA和蛋白的表達(dá)升高（P<0.05），mGluR7/GABA ARα1上升（P＜0.05）。與模型組比較，艾司唑侖組和高劑量組、低劑量組小鼠睡眠潛伏期縮短（P＜0.05），睡眠時(shí)間延長（P<0.05），總的區(qū)域路程減少（P＜0.05），中心區(qū)停留時(shí)間增加（P＜0.05），腦組織中GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白的表達(dá)上升（P＜0.05），mGluR7 mRNA和蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1下降（P＜0.05）。與艾司唑侖組比較，高劑量組、低劑量組小鼠睡眠潛伏期和總區(qū)域路程增加（P<0.05），睡眠持續(xù)時(shí)間和中心區(qū)停留時(shí)間減少（P<0.05），GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白表達(dá)下降（P<0.05）、mGluR7 mRNA和蛋白表達(dá)上升（P<0.05），mGluR7/GABA ARα1上升（P<0.05）。與高劑量組比較，低劑量組小鼠睡眠潛伏期、總區(qū)域路程增加（P<0.05），睡眠持續(xù)時(shí)間、中心區(qū)停留時(shí)間減少（P<0.05），GABA ARα1、5-HT1AR mRNA和蛋白表達(dá)下降（P<0.05）、mGluR7 mRNA和蛋白表達(dá)上升（P<0.05），mGluR7/GABA ARα1上升（P<0.05）。結(jié)論 扶正祛邪方加減可以改善PCPA失眠模型小鼠的睡眠，有較好的鎮(zhèn)靜催眠作用，其機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)腦組織內(nèi)GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7水平發(fā)揮作用。

〔關(guān)鍵詞〕 扶正祛邪方加減；失眠；氯苯丙氨酸；γ-氨基丁酸A受體α1；5-羥色胺1A受體；代謝型谷氨酸受體7

〔中圖分類號(hào)〕R285.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０23.07.001

Efficacy of modified Fuzheng Quxie Formula in treating insomnia and its influence on GABA ARα1， 5-HT1AR， and mGluR7 expressions in brain tissue

LIU Yanxia， LI Yan*

Department of Oncology， Municipal Chinese Medicine Hospital of Shanghai University of Chinese Medicine， Shanghai 200071， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To explore the sedative and hypnotic effects of modified Fuzheng Quxie Formula （FZQXF） on insomnia model mice induced by para-chlorophenylalanine （PCPA） and its influence on gamma aminobutyric acid A receptor subtype α1 （GABA ARα1）， 5-hydroxytryptamine 1A receptor （5-HT1AR）， and metabotropic glutamate receptor 7 （mGluR7） expressions in brain tissue. Methods Fifty mice were randomly divided into blank control group， model group， estazolam group， high- and low-dose modified FZQXF groups. After 7 d of continuous intragastric administration， the mice in each group were subjected to behavioral tests including pentobarbital sodium synergistic sleep experiment and open field experiment. Meanwhile， the mRNA and protein expressions of GABA ARα1， 5-HT1AR， and mGluR7 in brain tissue and the ratio of mGluR7/GABA ARα1 were determined by RT-qPCR and Western blot， respectively. Results Compared with blank control group， the mice in model group showed prolonged sleep latency （P<0.05）， shortened sleep time （P<0.05）， longer total regional distance in the open field experiment （P<0.05）， shorter residence time in the central area （P<0.05）， lower mRNA and protein expressions of 5-HT1AR and GABA ARα1 in brain tissue （P<0.05）， higher mRNA and protein expressions of mGluR7 （P<0.05）， and increased mGluR7/GABA ARα1 ratio （P<0.05）. Compared with model group， the mice in estazolam， high- and low-dose modified FZQXF groups showed shortened sleep latency （P<0.05）， prolonged sleep time （P<0.05）， reduced total regional distance （P<0.05）， extended residence time in central area （P<0.05）， higher mRNA and protein expressions of GABA ARα1 and 5-HT1AR in brain tissue （P<0.05）， lower mRNA and protein expressions of mGluR7 （P<0.05）， and increased mGluR7/GABA ARα1 ratio （P<0.05）. Compared with estazolam group， the mice in high- and low-dose modified FZQXF groups showed prolonged sleep latency and total regional distance （P<0.05）， shortened sleep time and residence time in central area （P<0.05）， lower mRNA and protein expressions of GABA ARα1 and 5-HT1AR， higher mRNA and protein expressions of mGluR7 （P<0.05）， and increased mGluR7/GABA ARα1 ratio （P<0.05）. Compared with high-dose modified FZQXF group， the mice in low-dose modified FZQXF group showed longer sleep latency and total regional distance （P<0.05）， shorter sleep time and residence time in central area （P<0.05）， lower mRNA and protein expressions of GABA ARα1 and 5-HT1AR， and increased mGluR7/GABA ARα1 ratio （P<0.05）. Conclusion Modified FZQXF can exert its sedative and hypnotic effects on PCPA-induced insomnia model mice， and its mechanism of sleeping-improving may be related to regulating the levels of GABA ARα1， 5-HT1AR and mGluR7 in brain tissue.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 modified Fuzheng Quxie Formula; insomnia; para-chlorophenylalanine; gamma-aminobutyric acid A receptor subtype α1; 5-hydroxytryptamine 1A receptor; metabotropic glutamate receptor 7

失眠是臨床常見的身心疾病，全球發(fā)病率為10%～50%，是多種疾病發(fā)生的危險(xiǎn)因素，其發(fā)病年齡逐漸年輕化[1-2]。失眠患者多伴有睡眠異常的特征，如入睡困難、睡眠持續(xù)時(shí)間短、多夢(mèng)易醒，醒后難以再次入睡等睡眠障礙，多伴有頭暈頭痛、乏力、易怒、健忘、注意力無法集中、焦慮等表現(xiàn)，長期失眠會(huì)影響患者的生活、工作和學(xué)習(xí)，引發(fā)焦慮抑郁狀態(tài)、代謝性疾病及心血管疾病等[3-4]。目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療失眠以苯二氮■類鎮(zhèn)靜安眠藥為主，短期效果明顯，但長期服用不良反應(yīng)較多，會(huì)產(chǎn)生耐藥性，影響臨床療效和患者的身心健康[5]。近年來，中醫(yī)從整體觀念和辨證論治出發(fā)，在治療失眠上取得較好的效果，且無成癮性和耐藥性，安全性高，是臨床重要的治療手段[6-7]。扶正驅(qū)邪法治療失眠有良好的效果[8]。扶正祛邪方加減是上海市名中醫(yī)李雁教授臨床上治療失眠的經(jīng)驗(yàn)方。本研究擬探討扶正祛邪方加減對(duì)氯苯丙氨酸（para-chlorophenylalanine， PCPA）誘導(dǎo)失眠模型小鼠的藥效及其作用機(jī)制，為臨床診療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康SPF級(jí)雄性C57小鼠50只，體質(zhì)量（20±2） g，購于上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)碼：SCXK（滬）2018-0004，動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)：20180004067009，動(dòng)物倫理審批號(hào)：2022046。動(dòng)物飼養(yǎng)于上海市中醫(yī)醫(yī)院SPF級(jí)別實(shí)驗(yàn)室中，于晝夜12 h交替，室溫為（21±2） ℃，相對(duì)濕度50%～70%，自由飲水?dāng)z食，于清潔干燥的環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2? 藥品及主要試劑

扶正祛邪方組成：生黃芪30 g，生白術(shù)15 g，茯苓15 g，陳皮9 g，天冬15 g，麥冬15 g，北沙參15 g，酸棗仁15 g，五味子20 g，合歡皮20 g。以上中藥均購買自上海市中醫(yī)醫(yī)院，加4倍量的水，浸泡30 min，大火加熱至沸騰后轉(zhuǎn)小火煎煮40 min。再加4倍量的水，大火加熱至沸騰后轉(zhuǎn)小火煎煮40 min。兩次的藥液混勻，濃縮為4.18 g/mL的水煎劑，置于4 ℃冰箱保存以備用。艾司唑侖片（四川大冢制藥有限公司，批號(hào)：H20170205）。

PCPA（美國Sigma公司，批號(hào)：C6506）；戊巴比妥鈉（北京中生瑞泰科技有限公司，批號(hào)：130326）；γ-氨基丁酸受體Aα1（γ-aminobutyric acid A recep？鄄tor α1， GABA ARα1）抗體、代謝型谷氨酸受體7（metabotropic glutamate receptor 7， mGluR7）抗體（美國Affinity抗體公司，批號(hào)：DF8548、AF0171）；5-羥色胺1A受體（5-hydroxytryptamine 1A receptor， 5-HT1AR）抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：bs-1124R）；GAPDH抗體（杭州賢至生物科技有限公司，批號(hào)：AB-P-R001）；RNA提取液、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、2×實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增預(yù)混液（武漢賽維爾生物科技有限公司，批號(hào)：G3013、G3330、G3322）。

1.3? 主要儀器

小鼠自主活動(dòng)測(cè)試儀（南京威美特科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：SPT-CM72ZZ-6）；PCR擴(kuò)增儀、化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)、電泳儀（美國Bio-Rad公司，型號(hào)：CFX 96、1708280、1645050）；全自動(dòng)樣品快速研磨儀（上海凈信科技有限公司，型號(hào)：JXFSTPRP-48L）。

2 方法

2.1? 分組、造模及給藥方法

C57雄性小鼠50只，隨機(jī)抽出10只為空白對(duì)照組，其余40只每天上午腹腔注射吐溫-80配制的PCPA混懸液（300 mg/kg），持續(xù)2 d，建立小鼠失眠模型[9]，空白對(duì)照組小鼠用等體積的生理鹽水腹腔注射。在末次注射PCPA混懸液12 h后，小鼠晝夜節(jié)律消失，白天活動(dòng)增加，對(duì)外界刺激異常敏感，易驚恐打斗，飲食量減少，飲水量明顯增加，提示造模成功[10]。造模成功后，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法將小鼠分為模型組、艾司唑侖組、低劑量組、高劑量組，每組10只。造模分組后第2天，根據(jù)《中藥藥理研究方法學(xué)》[11]中人日用量與動(dòng)物臨床等效劑量的比值計(jì)算中藥給藥劑量，高劑量組：生藥量為261 g，即0.784 g/20 g，濃度為1.568 g/mL；低劑量組為高劑量組的一半，即用藥量為0.392 g/20 g，濃度為0.784 g/mL；艾司唑侖組按1 mg/kg灌胃；空白對(duì)照組和模型組小鼠每日灌胃等體積的生理鹽水。每天1次，連續(xù)7 d，給藥體積均為0.5 mL/20 g。

2.2? 行為學(xué)檢測(cè)

2.2.1? 睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間測(cè)定? 采用戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠法[12]，在最后一次灌胃給藥30 min后，各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（45 mg/kg），使小鼠進(jìn)入睡眠狀態(tài)。小鼠翻正反射消失1 min以上即可認(rèn)為小鼠進(jìn)入睡眠狀態(tài)，觀察睡眠潛伏期（腹腔注射戊巴比妥鈉后至翻正反射消失的時(shí)間）和睡眠持續(xù)時(shí)間（翻正反射消失至翻正反射恢復(fù)的總時(shí)間）。

2.2.2? 曠場(chǎng)試驗(yàn)? 各組小鼠在連續(xù)灌胃的第6天給藥30 min后進(jìn)行曠場(chǎng)試驗(yàn)[13]，將小鼠放在自主活動(dòng)儀中適應(yīng)5 min，用儀器記錄各組小鼠6 min內(nèi)的總區(qū)域路程、總區(qū)域停留時(shí)間。

2.3? 標(biāo)本采集

末次給藥24 h后，快速斷頭將小鼠處死，保留腦組織，在冰上迅速剝離小鼠海馬、下丘腦組織，快速存放于-80 ℃冰箱備用。

2.4? RT-qPCR檢測(cè)小鼠大腦皮質(zhì)中GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7 mRNA表達(dá)水平

取50 mg組織，Trizol法提取總RNA，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書以42 ℃ 60 min，70 ℃ 5 min為反應(yīng)條件逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，后根據(jù)熒光定量PCR試劑盒說明書，配成20 μL的反應(yīng)體系，于PCR儀中以95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s；60 ℃ 30 s共40個(gè)循環(huán)的反應(yīng)條件進(jìn)行擴(kuò)增。結(jié)果采用2-ΔΔCt相對(duì)定量法計(jì)算，引物由上海生工生物工程有限公司合成。引物序列GABA ARα1：正向5'-AGTGCCAGAAATTCCCTCCCAAAG-3'，反向5'-CAATCAGAGCCGAGAACACGAAGG-3'；5-HT1AR：正向5'-AAGGTGGAAAAGAAGGGAGC-3'，反向5'-AATAACTGGGTTGAGCAGGG-3'；mGluR7：正向5'-ATTGGGCAGTGGACAGATGA-3'；反向5'-GGTATCCATCACAGGGCTCA-3'；β-actin：正向5'-AGGGAAATCGTGCGTGAC-3'，反向5'-ATACCCAGGAAGGAAGGCT-3'。

2.5? Western blot法檢測(cè)小鼠海馬組織GABA ARα1、5-HT1AR蛋白表達(dá)量

取50 mg組織，研磨后提取蛋白質(zhì)，用BCA法進(jìn)行蛋白質(zhì)濃度定量，煮8 min使蛋白質(zhì)變性。蛋白質(zhì)上樣質(zhì)量為30 μg，以分離膠100 V、濃縮膠80 V的恒壓條件進(jìn)行電泳，以200 mA、60 min的恒流條件進(jìn)行PVDF轉(zhuǎn)膜；轉(zhuǎn)完膜后用5%脫脂奶粉于搖床上緩慢搖勻封閉120 min，根據(jù)Marker指示裁剪條帶，加入一抗（GABA ARα1、5-HT1AR、GAPDH，1∶1 000）4 ℃孵育過夜；TBST洗滌30 min（10 min/次），加入二抗（HRP標(biāo)記山羊抗兔，1∶1 000）室溫孵育120 min，TBST洗滌30 min（10 min/次），采用ECL法顯影檢測(cè)目的條帶，用凝膠成像系統(tǒng)分析目標(biāo)蛋白灰度值，與內(nèi)參比較作為目標(biāo)蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2.6? 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用“ｘ±s”表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布用獨(dú)立樣本Student's t-test檢測(cè)統(tǒng)計(jì)差異，數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布用Mann-Whitney U test進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間比較用方差分析，方差齊者用LSD檢驗(yàn)，方差不齊者用Dunnett-t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 各組小鼠戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠實(shí)驗(yàn)比較

腹腔注射戊巴比妥鈉后，小鼠表現(xiàn)出不同程度的睡眠狀態(tài)。與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠睡眠潛伏期顯著延長（P<0.01），睡眠持續(xù)時(shí)間顯著縮短（P<0.01）；與模型組比較，艾司唑侖組、高劑量組、低劑量組睡眠潛伏期縮短（P<0.05），睡眠持續(xù)時(shí)間延長（P<0.05）；與艾司唑侖組比較，高劑量組、低劑量組睡眠潛伏期延長（P<0.05），睡眠持續(xù)時(shí)間縮短（P<0.05）；與高劑量組比較，低劑量組睡眠潛伏期延長（P<0.05），睡眠持續(xù)時(shí)間縮短（P<0.05）。詳見圖1。

3.2? 各組小鼠曠場(chǎng)試驗(yàn)比較

與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠總區(qū)域路程顯著增加（P＜0.01），中心區(qū)停留時(shí)間顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，艾司唑侖組、高劑量組、低劑量組總區(qū)域路程減少（P<0.05），中心區(qū)停留時(shí)間增加（P<0.05）；與艾司唑侖組比較，高劑量組、低劑量組總區(qū)域路程增加（P<0.05），中心區(qū)停留時(shí)間減少（P<0.05）；與高劑量組比較，低劑量組總區(qū)域路程增加（P<0.05），中心區(qū)停留時(shí)間減少（P<0.05）。詳見圖2。

3.3? 各組小鼠腦組織中GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7 mRNA的相對(duì)表達(dá)量比較

與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠腦組織中GABA ARα1、5-HT1AR mRNA表達(dá)降低（P＜0.05），mGluR7 mRNA表達(dá)升高（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1上升（P＜0.05）；與模型組比較，艾司唑侖組、高劑量組、低劑量組GABA ARα1、5-HT1AR mRNA表達(dá)上升（P＜0.05），mGluR7 mRNA表達(dá)下降（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1下降（P＜0.05）；與艾司唑侖組比較，高劑量組、低劑量組GABA ARα1、5-HT1AR mRNA表達(dá)下降（P＜0.05），mGluR7 mRNA表達(dá)上升（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1上升（P＜0.05）；與高劑量組比較，低劑量組GABA ARα1、5-HT1AR mRNA表達(dá)下降（P＜0.05），mGluR7 mRNA表達(dá)上升（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1上升（P＜0.05）。詳見圖3。

3.4? 各組小鼠腦組織中GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較

與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠腦組織中GABA ARα1、5-HT1AR蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），mGluR7蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1升高（P＜0.05）；與模型組比較，艾司唑侖組、高劑量組、低劑量組GABA ARα1、5-HT1AR蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），mGluR7蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1降低（P＜0.05）；與艾司唑侖組比較，高劑量組、低劑量組GABA ARα1、5-HT1AR蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），mGluR7蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1升高（P＜0.05）；與高劑量組比較，低劑量組GABA ARα1、5-HT1AR蛋白表達(dá)降低（P＜0.05），mGluR7蛋白表達(dá)升高（P＜0.05），mGluR7/GABA ARα1升高（P＜0.05）。詳見圖4。

4 討論

失眠在中醫(yī)學(xué)中屬“不寐”范疇，其病機(jī)在于陽不入于陰，衛(wèi)不入于營，陰陽失和，陽盛陰衰[14]。陽指太陽、少陽和陽明三陽，陰為太陰、少陰和厥陰三陰，陰陽正常出入交接的基礎(chǔ)在于三陰三陽開闔樞功能的正常。開闔樞理論源于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，是三陰三陽陰陽運(yùn)動(dòng)的形式[15]，若開闔樞功能失調(diào)，陰陽無法正常出入交接，則會(huì)導(dǎo)致失眠的發(fā)生。根據(jù)睡眠覺醒周期規(guī)律并結(jié)合“三陰三陽開闔樞”時(shí)辰理論，從陰陽氣機(jī)的動(dòng)態(tài)變化過程中認(rèn)識(shí)失眠發(fā)生的機(jī)制，在失眠的治療上取得了良好的效果[16-17]。太陰病失眠是常見的失眠類型，其病機(jī)多與陰虛血少，陽氣不能潛藏于內(nèi)有關(guān)。太陰歸屬脾、肺二臟，主司氣、血、陰津的化生。太陰脾臟氣機(jī)為開，主升清，在陽氣的推動(dòng)下，運(yùn)化、布散水谷精微，脾臟功能正常，則陽氣得以收藏，人可睡眠正常。若太陰受到穢濁之氣的影響而導(dǎo)致清陽受阻，則氣機(jī)運(yùn)行受阻發(fā)為不寐。脾主水谷之氣，肺司呼吸之氣，肺、脾與營衛(wèi)之氣的化生和運(yùn)行密切相關(guān)，脾肺二臟功能失常則引發(fā)失眠。扶正祛邪方加減中重用黃芪以增強(qiáng)補(bǔ)氣生血、養(yǎng)心安神之功，白術(shù)、茯苓、陳皮相配以益氣健脾、化濕祛痰，天冬、麥冬、北沙參合用，滋補(bǔ)肺陰以降肺氣，酸棗仁、五味子、合歡皮合用，酸甘斂陰，使陰引而下，陽合于陰。諸藥合用，健脾益肺以開太陰，調(diào)和陰陽以助睡眠。

曠場(chǎng)試驗(yàn)中，總運(yùn)動(dòng)距離、中心區(qū)域停留時(shí)間可以反映動(dòng)物的緊張、焦慮程度[18]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造模后模型組小鼠睡眠潛伏期延長、睡眠持續(xù)時(shí)間縮短、總的區(qū)域路程增加、中心區(qū)停留時(shí)間減少，表明小鼠興奮性增高，具有明顯的緊張、焦慮行為。給藥后高劑量組、低劑量組以及艾司唑侖組小鼠睡眠潛伏期縮短、睡眠時(shí)間延長、總的區(qū)域路程減少、中心區(qū)停留時(shí)間延長，說明藥物可以緩解小鼠煩躁焦慮情緒，改善睡眠。

研究發(fā)現(xiàn)，大腦內(nèi)的γ-氨基丁酸、5-羥色胺、谷氨酸、多巴胺、褪黑素等多種神經(jīng)遞質(zhì)與失眠的發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)[19]。谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，失眠時(shí)會(huì)伴隨大量谷氨酸釋放[20]。mGluR7屬于代謝型谷氨酸受體，可以調(diào)節(jié)谷氨酸以及γ-氨基丁酸神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，調(diào)節(jié)睡眠過程[21]。γ-氨基丁酸是谷氨酸脫羧后形成的產(chǎn)物，對(duì)神經(jīng)元興奮有抑制作用[21]。谷氨酸與γ-氨基丁酸比值的動(dòng)態(tài)失衡與失眠的發(fā)生密切相關(guān)[22]。有研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)GABA AR水平，可以改善大鼠失眠癥狀[23]。5-HT1AR是5-羥色胺家族受體中的研究熱點(diǎn)，與調(diào)節(jié)焦慮及睡眠有關(guān)[24]。有研究證實(shí)，接受大劑量5-HT1A受體激動(dòng)劑注射的大鼠，腦組織中5-羥色胺的釋放減少，覺醒增加[25]。本研究進(jìn)一步對(duì)失眠小鼠腦組織進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，PCPA造模成功后，小鼠腦組織中GABA ARα1和5-HT1AR的含量降低，mGluR7含量升高，腦組織中mGluR7/GABA ARα1的比值上升，表明PCPA誘導(dǎo)了小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平的失衡，引發(fā)小鼠緊張焦慮、失眠狀態(tài)；艾司唑侖和扶正祛邪方加減治療可以升高腦組織中GABA ARα1和5-HT1AR含量，下調(diào)mGluR7水平，降低mGluR7/GABA ARα1的比值，逆轉(zhuǎn)腦組織中GABA ARα1和mGluR7的動(dòng)態(tài)紊亂，維持興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)之間的平衡，緩解小鼠緊張焦慮、失眠狀態(tài)。

綜上所述，扶正祛邪方加減可以縮短PCPA失眠模型小鼠的睡眠潛伏期、延長睡眠時(shí)間，有鎮(zhèn)靜催眠的作用，其機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)腦內(nèi)GABA ARα1、5-HT1AR、mGluR7神經(jīng)遞質(zhì)受體發(fā)揮作用。然而本實(shí)驗(yàn)只研究了腦組織中部分單胺類神經(jīng)遞質(zhì)受體，其他神經(jīng)遞質(zhì)蛋白表達(dá)以及活化情況有待后續(xù)進(jìn)行深入研究。

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