鐘錦英,傅明駿,曾憲源,王藝?yán)?

(1.集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,農(nóng)業(yè)部東海海水健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 廈門(mén) 361021;2.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院,福建 龍巖 364012)

氧化應(yīng)激是指生物體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡的一種狀態(tài)。線粒體電子傳遞過(guò)程中產(chǎn)生活性氧(reactive oxygen species,ROS)。吞噬細(xì)胞的激活也可以刺激ROS的產(chǎn)生,這被稱為呼吸爆發(fā)活動(dòng)(respiratory burst)。當(dāng)ROS產(chǎn)生的數(shù)量過(guò)多,機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的平衡被打破后,會(huì)造成一系列的氧化應(yīng)激損傷,如脂質(zhì)過(guò)氧化、蛋白質(zhì)失活和DNA的損傷等。因此,生物體建立起抗氧化系統(tǒng)來(lái)中和ROS的有害影響。

MnSOD可以使有氧呼吸的生物免受呼吸過(guò)程中產(chǎn)生的氧自由基的侵害,對(duì)于維持細(xì)胞的氧化平衡非常重要。根據(jù)定位的不同,MnSOD有兩種類型,線粒體MnSOD(mtMnSOD)和細(xì)胞質(zhì)MnSOD(cytMnSOD)[2-3]。mtMnSOD在真核細(xì)胞的線粒體、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)菌中都有發(fā)現(xiàn),而cytMnSOD只在甲殼動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)。目前已經(jīng)在甲殼動(dòng)物如日本囊對(duì)蝦(Marsupenaeusjaponicus)、中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)和中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeuschinensis)等中鑒定出許多MnSOD的同源物。已有研究表明,MnSOD在日本囊對(duì)蝦[4],中華絨螯蟹[5]和中國(guó)明對(duì)蝦[6]等甲殼動(dòng)物的免疫調(diào)節(jié)中起到重要的作用。MnSOD被確定為參與超氧化物歧化酶鏈中的第一個(gè)成員[7]。已發(fā)現(xiàn)肽聚糖(peptidoglycan,PGN)[8]、副溶血弧菌(Vibrioparahemolyticus)[9-11]、ROS[12]、聚肌苷酸胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid Poly I：C)[8]等可以上調(diào)MnSODs基因的表達(dá)。有研究還發(fā)現(xiàn),在卵子發(fā)生和胚胎發(fā)育過(guò)程中,甲殼動(dòng)物和魚(yú)類的SOD的活性都呈現(xiàn)增加的趨勢(shì),這表明SOD基因在性腺的發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用[13]。至今,從無(wú)脊椎動(dòng)物到脊椎動(dòng)物,已有許多關(guān)于MnSOD的研究報(bào)道。但是在蝦蟹等甲殼動(dòng)物中,關(guān)于MnSOD的研究尚顯薄弱。

擬穴青蟹(Scyllaparamamosain)是我國(guó)海洋養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的海水蟹類。青蟹的養(yǎng)殖面臨抱卵率及成活率低、容易受環(huán)境影響而產(chǎn)生氧化應(yīng)激等問(wèn)題。本研究從擬穴青蟹性腺EST文庫(kù)中獲得SpmtMnSOD和SpcytMnSOD基因片段,運(yùn)用RACE-PCR方法獲得基因全長(zhǎng),并利用生物信息學(xué)的方法對(duì)其進(jìn)行預(yù)測(cè)分析,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析MnSOD基因在不同組織、性腺發(fā)育過(guò)程以及在副溶血弧菌、PGN和Poly I：C誘導(dǎo)后的表達(dá)譜,為深入了解擬穴青蟹MnSOD基因在性腺發(fā)育和免疫應(yīng)激中的作用奠定基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

擬穴青蟹購(gòu)買(mǎi)自漳州市漳浦青蟹養(yǎng)殖場(chǎng)。按照性腺指數(shù)(gonado-somatic index,GSI)對(duì)其性腺發(fā)育進(jìn)行分期,參照本實(shí)驗(yàn)室前期的方法將雄蟹性腺發(fā)育分為3個(gè)時(shí)期,雌蟹性腺發(fā)育分為6個(gè)時(shí)期[14]。經(jīng)冰水浴麻醉后,取心、肝胰腺、血淋巴、鰓、肌肉、精巢、卵巢、腦神經(jīng)節(jié)和胸神經(jīng)節(jié)等放入RNA later中,后轉(zhuǎn)存于-20℃冰箱中保存,用于后續(xù)基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)。

選取體重100～120 g的青蟹,在海水養(yǎng)殖場(chǎng)暫養(yǎng),每天喂食新鮮花蛤。7天后,取活力強(qiáng)的個(gè)體進(jìn)行注射,開(kāi)展動(dòng)物應(yīng)激實(shí)驗(yàn)。將青蟹分為4組：對(duì)照組(SP)注射50 μL生理鹽水;實(shí)驗(yàn)組分別為注射50 μL的PGN(69554,fromBacillussubtilis1 mg/mL,Sigma)組、50 μL的Poly I：C(P9582,1 mg/mL,Sigma)組、50 μL的副溶血弧菌(1×106CFU/mL)組。均從青蟹游泳足基部進(jìn)行注射,注射3、6、12、24 h后取肝胰腺、血細(xì)胞和鰓(n=5),方法如上所述。

1.2 總RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄及SMART-RACE擴(kuò)增cDNA全長(zhǎng)

采用Trizol 試劑(Invitrogen)提取樣品的總RNA,采用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(Promega)將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以3′和5′RACE cDNA 第一條鏈為模板,利用RACE特異引物(GSP1和GSP2,表1)和試劑盒通用引物(UPM和NUP)進(jìn)行兩輪PCR。PCR的擴(kuò)增條件根據(jù)RACE試劑盒(Takara)的說(shuō)明書(shū)來(lái)操作。將3′和5′RACE 擴(kuò)增的目的產(chǎn)物送往上海生工生物工程有限公司測(cè)序。將已知的EST 序列、5′RACE序列和 3′RACE 序列進(jìn)行拼接,得到基因的全長(zhǎng)cDNA序列。

表1 本研究所使用的引物Tab.1 Primers used in this study

1.3 生物信息學(xué)分析

基因序列特征所使用的生物信息學(xué)軟件均參照文獻(xiàn)[14]進(jìn)行。

1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

精卵巢各發(fā)育階段的定量實(shí)驗(yàn)以18S rRNA為內(nèi)參基因,各組織的表達(dá)和刺激后的定量實(shí)驗(yàn)以EF-1α為內(nèi)參基因。反應(yīng)體系：5 μL 2× Realtime PCR Master Mix(Takara),0.25 μL正向引物F(10 μmol/L),0.25 μL反向引物R(10 μmol/L),4.5 μL cDNA第一條鏈。定量反應(yīng)條件為：95 ℃ 1 min;95 ℃ 20 s,60 ℃ 20 s,72 ℃ 20 s,40個(gè)循環(huán)。每組5只青蟹。根據(jù)定量PCR儀給的CT值,計(jì)算2-ΔΔCT值,基因表達(dá)水平表示為2-ΔΔCT的平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)誤差的平均值,用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,使用單因素方差分析(ANOVA)組間的差異性,P<0.05表示具有顯著性差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 MnSODs基因的全長(zhǎng)克隆和序列分析

本研究克隆獲得了2個(gè)擬穴青蟹MnSOD基因(SpmtMnSOD和SpcytMnSOD)的cDNA全長(zhǎng)序列。SpmtMnSODcDNA(GenBank登錄號(hào)：FJ605170)序列全長(zhǎng)為1 154 bp,包括33 bp的5′ UTR、657 bp的ORF和464 bp的3′ UTR(包含polyA部分)。軟件預(yù)測(cè)顯示其編碼218個(gè)氨基酸,包含16個(gè)氨基酸的信號(hào)肽序列,蛋白分子量約為24.18 kDa,等電點(diǎn)約為7.09。SpcytMnSODcDNA(GenBank登錄號(hào)：GU213434)序列全長(zhǎng)為1 184 bp,包括92 bp的5′ UTR、861 bp的ORF和231 bp的3′ UTR(包含polyA部分)。軟件預(yù)測(cè)顯示其編碼286個(gè)氨基酸,無(wú)信號(hào)肽序列,位于細(xì)胞質(zhì)中,蛋白分子量約為31.33 kDa,等電點(diǎn)約為6.31。根據(jù)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)(圖1、2),SpmtMnSOD和SpcytMnSOD蛋白序列都包含有1個(gè)MnSOD 特征序列,分別為180DVWEHAYY187和243DVWEHAYY250;4個(gè)錳結(jié)合位點(diǎn),分別為(H48、H96、D180、H184)和(H110、H158、D243、H247);3個(gè)絲氨酸磷酸化位點(diǎn),分別為(S50、S104、S124)和(S19、S40、S190);4個(gè)酪氨酸磷酸化位點(diǎn),分別為(Y31、Y56、Y190、Y197)和(Y7、Y47、Y118、Y277)。此外,SpmtMnSOD 可能存在1個(gè)蘇氨酸(T8)磷酸化位點(diǎn)和3個(gè)N-豆蔻?；蛄?(GGHINH、GSVENM、GSGWGW,圖1)。

圖1 擬穴青蟹SpmtMnSOD cDNA序列和推導(dǎo)的氨基酸序列Fig.1 cDNA and deduced amino acid sequence of SpmtMnSOD from Scylla paramamosain下劃線為信號(hào)序列(氨基酸殘基1～16),加框(180DVWEHAYY187)為MnSOD的特征序列,加粗及灰色背景(H48、H96、D180、H184)推測(cè)為Mn結(jié)合位點(diǎn)。

圖2 擬穴青蟹SpcytMnSOD cDNA序列和推導(dǎo)的氨基酸序列Fig.2 cDNA and deduced amino acid sequence of SpcytMnSOD from S. paramamosain加框(243DVWEHAYY250)為MnSOD蛋白的特征序列;加粗及灰色背景(H110、H158、D243、H247)推測(cè)為Mn結(jié)合位點(diǎn)。

2.2 擬穴青蟹SpmtMnSOD和SpcytMnSOD在各組織中的表達(dá)特性

以EF-1α為內(nèi)參基因,實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,SpmtMnSOD和SpcytMnSOD基因在各組織的表達(dá)存在明顯差異。SpmtMnSOD基因在心臟的表達(dá)量最高,其次是鰓、卵巢和肝胰腺,其余組織的表達(dá)量較低[圖3(a)]。SpcytMnSOD基因在肝胰腺的表達(dá)量最高,其次是卵巢、心臟和鰓,其余組織的表達(dá)量較低[圖3(b)]。

圖3 SpmtMnSOD和SpcytMnSOD在各組織中的表達(dá)情況Fig.3 Expression of SpmtMnSOD and SpcytMnSOD in different tissuesSpmtMnSOD和SpcytMnSOD都是將血中的表達(dá)水平設(shè)為1倍,柱上不同字母代表具有顯著性差異(P<0.05)。

2.3 擬穴青蟹SpmtMnSOD和SpcytMnSOD在性腺各發(fā)育期的表達(dá)

以18S rRNA為內(nèi)參基因,在卵巢發(fā)育的各階段,SpmtMnSOD和SpcytMnSOD基因在O6期(完全成熟期)的表達(dá)量顯著高于卵巢其它發(fā)育階段(P<0.05)。在精巢發(fā)育的不同階段,SpmtMnSOD和SpcytMnSOD的表達(dá)量都低,雖然呈上升趨勢(shì),但并無(wú)顯著性差異(P>0.05,圖4)。

圖4 SpmtMnSOD和SpcytMnSOD在性腺各發(fā)育期的表達(dá)譜Fig.4 Expression profiles of SpmtMnSOD and SpcytMnSOD during different stages of gonad developmentalO1至O6為卵巢各發(fā)育時(shí)期：O1為增殖期;O2為卵黃發(fā)生前期;O3為卵黃發(fā)生初期;O4為卵黃發(fā)生中期;O5為卵黃發(fā)生晚期;O6為完全成熟期;T1至T3為精巢各發(fā)育時(shí)期：T1為精原細(xì)胞期;T2為精母細(xì)胞期和精子細(xì)胞期;T3為成熟精子期;SpmtMnSOD和SpcytMnSOD都是將T1的表達(dá)水平設(shè)為1倍,柱上不同字母代表具有顯著性差異(P<0.05)。

2.4 擬穴青蟹SpmtMnSOD和SpcytMnSOD在副溶血弧菌、PGN和Poly I：C刺激下的表達(dá)

在副溶血弧菌感染后(圖5),SpmtMnSOD在12 h鰓中的表達(dá)量是對(duì)照組的2.0倍[P<0.05,圖5(c)],在肝胰腺和血中變化不明顯[圖5(a)、(e)];SpcytMnSOD的表達(dá)量在12 h肝胰腺中是對(duì)照組的1.6倍[P<0.05,圖5(b)],在3 h和12 h時(shí)的鰓中分別是對(duì)照組的1.8倍和2.4倍[P<0.05,圖5(d)],在血中變化不明顯[圖5(f)]。

圖5 肝胰腺、鰓和血中的SpmtMnSOD和SpcytMnSOD分別在副溶血弧菌(Vp)、PGN和Poly I：C刺激后的表達(dá)譜Fig.5 Expression profiles of SpmtMnSOD and SpcytMnSOD in hepatopancreas,gill and haemocytes after V. parahaemolyticus,PGN and PolyI：C challenge注射生理鹽水(SP)組為對(duì)照組,“*”表示3、6、12、24 h的實(shí)驗(yàn)組與相應(yīng)時(shí)間的對(duì)照組之間的顯著性差異(P<0.05)。

在PGN刺激后,SpmtMnSOD的表達(dá)量在3、6、12 h時(shí)的肝胰腺中顯著上升,分別是對(duì)照組的2.9、3.9、3.3倍[P<0.05,圖5(a)],在鰓和血中的表達(dá)量雖有所上升,但未達(dá)到顯著性差異(P>0.05);SpcytMnSOD的表達(dá)量在3、6、12 h時(shí)的肝胰腺中分別是對(duì)照組的1.8、1.6、2.7倍[P<0.05,圖5(b)],在6、24 h時(shí)的鰓中分別是對(duì)照組的1.4、1.7倍[P<0.05,圖5(d)],在6、12 h時(shí)的血中分別是對(duì)照組的4.0、2.8倍[P<0.05,圖5(f)]。

在Poly I：C刺激后,SpmtMnSOD的表達(dá)量在6 h和12 h時(shí)的肝胰腺中分別是對(duì)照組的2.2倍和1.2倍[P<0.05,圖5(a)],在3 h和6 h時(shí)的鰓中分別是對(duì)照組的5.1倍和2.4倍[P<0.05,圖5(c)],在3 h和6 h時(shí)的血中分別是對(duì)照組的2.8倍和2.2倍[P<0.05,圖5(e)];SpcytMnSOD的表達(dá)量在12 h時(shí)的肝胰腺是比對(duì)照組的2.9倍[P<0.05,圖5(b)],在6 h和12 h時(shí)的鰓中分別是對(duì)照組的1.7倍和1.9倍[P<0.05,圖5(d)],在3 h和6 h時(shí)的血中分別是對(duì)照組的2.1倍和2.0倍[P<0.05,圖5(e)]。

2.5 討論

2.5.1 擬穴青蟹SpmtMnSOD和SpcytMnSOD基因的序列特征及組織表達(dá)特性

SOD普遍存在于需氧生物體內(nèi),是機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的第一道防線,能有效清除機(jī)體產(chǎn)生的過(guò)量超氧陰離子,保持機(jī)體內(nèi)自由基代謝平衡,防御機(jī)體受到氧化損傷[1,15]。本實(shí)驗(yàn)從擬穴青蟹克隆獲得2種MnSOD的cDNA全長(zhǎng),分別為SpmtMnSOD和SpcytMnSOD。MnSOD特征序列在擬穴青蟹SpmtMnSOD和SpcytMnSOD蛋白序列中均有發(fā)現(xiàn),分別為180DVWEHAYY187和243DVWEHAYY250,保守的Mn離子結(jié)合位點(diǎn)在這2個(gè)蛋白序列中都存在,通過(guò)同源比對(duì)發(fā)現(xiàn)MnSOD在脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物中的保守性都很高。熒光定量PCR的結(jié)果顯示青蟹中SpmtMnSOD和SpcytMnSODmRNA普遍表達(dá)于各組織中,表明它們可能參與清除各種正常生理過(guò)程所產(chǎn)生的ROS和活性氧中間體(ROI)。青蟹SpmtMnSOD和SpcytMnSOD的mRNA在心臟的表達(dá)水平高于其他組織。在小鼠中活性氧ROS的產(chǎn)生增加和抗氧化物的儲(chǔ)備量的下降等會(huì)引起心肌的梗死[16],推測(cè)SOD基因在保護(hù)心臟免受氧化應(yīng)激起到重要的作用。

SpmtMnSOD和SpcytMnSOD的mRNA表達(dá)水平在卵巢、肝胰腺和鰓中的表達(dá)水平較高,這一結(jié)果與克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)和中華絨螯蟹鰓和肝胰腺中的表達(dá)相似[5,17-18]。在凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)中,cytMnSOD在鰓和附肢的表達(dá)量相對(duì)較高[19],然而在日本囊對(duì)蝦中,mtMnSOD和cytMnSOD在各組織的表達(dá)相對(duì)一致[4]。表達(dá)量的不同可能與物種差異以及各組織所執(zhí)行的功能有關(guān)。卵巢在發(fā)育過(guò)程中需要積累大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),這期間會(huì)產(chǎn)生大量的ROS,為了氧化還原系統(tǒng)的穩(wěn)定性,需要大量的SODs來(lái)清除超氧自由基。有研究發(fā)現(xiàn)人體中抗氧化酶在卵母細(xì)胞成熟階段高表達(dá),這種儲(chǔ)備可能是用于胚胎的發(fā)育[20]。這可能也是SpmtMnSOD和SpcytMnSOD在青蟹成熟的卵巢中表達(dá)量較高的主要原因。肝胰腺不僅是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和脂類儲(chǔ)存的主要場(chǎng)所,還是蝦蟹生理活動(dòng)的中心,因此需要一個(gè)較為完善的抗氧化系統(tǒng)來(lái)保證肝胰腺中物質(zhì)和能量代謝的正常進(jìn)行[21]。鰓的主要功能是呼吸作用,其呼吸上皮細(xì)胞內(nèi)富含線粒體,呼吸過(guò)程會(huì)產(chǎn)生大量ROS;另一方面,鰓容易暴露于外界環(huán)境中,在外界環(huán)境各種因子的作用下也容易產(chǎn)生自由基以損害機(jī)體,因此,需要SODs清除過(guò)多的自由基以維持其體內(nèi)自由基的動(dòng)態(tài)平衡[21]。

2.5.2 擬穴青蟹SpmtMnSOD和SpcytMnSOD基因在應(yīng)對(duì)副溶血弧菌、PGN和Poly I：C刺激下的免疫應(yīng)激

無(wú)脊椎動(dòng)物防御病原體主要依賴于先天免疫。先天免疫系統(tǒng)是由病原體觸發(fā)的,并且是由模式識(shí)別蛋白(PRPs)介導(dǎo)。PRPs 可以識(shí)別入侵微生物表面的保守分子,如被確定為病原體相關(guān)分子模式(PAMPs)的副溶血弧菌、PGN和Poly I：C。PRPs與PAMPs的結(jié)合會(huì)觸發(fā)一系列免疫反應(yīng),從而激活宿主免疫防御系統(tǒng)[22]。

先天性免疫防御系統(tǒng)的激活,會(huì)產(chǎn)生吞噬作用,這個(gè)過(guò)程會(huì)產(chǎn)生ROS,盡管適量的ROS會(huì)對(duì)宿主防御和信號(hào)傳導(dǎo)有利,但是過(guò)量會(huì)產(chǎn)生氧化應(yīng)激。對(duì)甲殼類動(dòng)物的研究表明,MnSOD 對(duì)細(xì)菌或病毒的入侵表現(xiàn)出顯著的反應(yīng)[5,18]。鰓、肝胰腺和血細(xì)胞是甲殼類動(dòng)物重要的免疫防御器官。在本研究中,青蟹在注射副溶血弧菌后,SpmtMnSOD和SpcytMnSOD的mRNA表達(dá)在鰓中都明顯增加,這與副溶血弧菌侵入羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)體內(nèi)時(shí),MnSOD的活性顯著上升相一致[11]。副溶血弧菌感染后,SpcytMnSOD在肝胰腺中的表達(dá)上升,而SpmtMnSOD在肝胰腺的表達(dá)無(wú)明顯變化,推測(cè)MnSOD在應(yīng)對(duì)PAMPs 刺激的免疫防御中發(fā)揮了重要作用,二者不同可能是由于SpmtMnSOD本身在肝胰腺中就具有較高的活性,和/或較長(zhǎng)的半衰期,足以應(yīng)對(duì)副溶血弧菌的應(yīng)激,所以其基因的表達(dá)沒(méi)有明顯的上升趨勢(shì)。本研究中發(fā)現(xiàn)PGN刺激后,SpmtMnSOD的表達(dá)量在肝胰腺中顯著上升,而SpcytMnSOD的表達(dá)量在肝胰腺、鰓和血中均有所增加,與孟凡倫等發(fā)現(xiàn)注射PGN可以提高中國(guó)對(duì)蝦(Penaeuschinensis)的溶菌、抗菌、SOD活力的結(jié)果[23]相似,MnSOD表達(dá)量升高,推測(cè)其在青蟹的抗細(xì)菌感染中起到一定作用。

在Poly I：C刺激后,SpmtMnSOD和SpcytMnSOD的表達(dá)在肝胰腺、鰓和血中均有所增加,推測(cè)Poly I：C通過(guò)提高M(jìn)nSOD活力,從而起到抗病毒感染的作用。血細(xì)胞中的呼吸爆發(fā)與SOD的表達(dá)已被廣泛用于評(píng)估蝦對(duì)病原體的防御能力[24]。血細(xì)胞對(duì)于無(wú)脊椎動(dòng)物的先天性免疫反應(yīng)極為重要,參與甲殼動(dòng)物的細(xì)胞免疫和體液免疫,過(guò)量產(chǎn)生ROS可誘導(dǎo)溶酶體膜穩(wěn)定性的退化,進(jìn)而導(dǎo)致中華絨螯蟹血細(xì)胞數(shù)量減少[25];在凡納濱對(duì)蝦中,注射Poly I：C時(shí),血細(xì)胞中的ROS表達(dá)增加,MnSOD基因的表達(dá)也上升[22],這與本研究中,血細(xì)胞中MnSOD基因的表達(dá)也是一致的。說(shuō)明MnSOD基因在抗氧化應(yīng)激和抗細(xì)菌、病毒感染中起到重要的作用。

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)擬穴青蟹SpMnSOD在性腺成熟期高表達(dá),為卵子成熟和胚胎發(fā)育提供抗氧化防御作用。同時(shí)SpMnSOD的表達(dá)在應(yīng)對(duì)外來(lái)病原菌入侵的不同時(shí)段表現(xiàn)為不同程度的升高,說(shuō)明其參與了機(jī)體氧化還原系統(tǒng)的平衡,同時(shí)也參與了機(jī)體的先天免疫反應(yīng),在清除機(jī)體由免疫應(yīng)激產(chǎn)生的過(guò)量的自由基中起到重要的作用。