陳穎，滿金輝，石玥，黃鈺瑩，張曉芹，王馨，劉珊瑚，何高潔，安克露，王曉暉，魏勝利*

1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 102488；2.北京中醫(yī)藥大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，北京 102488；3.北京中醫(yī)藥大學(xué) 北京中醫(yī)藥研究院 中藥現(xiàn)代研究中心，北京 102488

ROP（Rho-related GTPases from plants）是一類植物特有的小G 蛋白。ROP 蛋白通過鳥嘌呤三核苷酸磷酸（GTP，激活）/鳥嘌呤二核苷酸磷酸（GDP，失活）狀態(tài)的改變，與下游信號分子共同調(diào)控植物多種生命活動(dòng)，在植物生長發(fā)育、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和抗逆境脅迫響應(yīng)方面具有重要作用。ROP 鳥苷酸交換因子（ROP guanine nucleotide exchange factor，RopGEF）是其上游活化因子，能夠催化ROP 蛋白結(jié)合形式的轉(zhuǎn)變（GDP 轉(zhuǎn)化為GTP 結(jié)合形式），從而使之發(fā)揮相關(guān)功能[1-3]。因此對RopGEF 蛋白的功能研究成為近年來植物信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的熱點(diǎn)。研究表明，RopGEF 蛋白參與植物對低溫、干旱、高病蟲害、激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等的應(yīng)答，但是目前關(guān)于其在藥用植物中的功能研究較少。Shin等[4]克隆了擬南芥中14個(gè)RopGEFs基因，研究分析了其在非生物脅迫處理下的不同表達(dá)模式，結(jié)果表明14個(gè)RopGEFs的轉(zhuǎn)錄水平受冷、熱、旱、鹽等非生物脅迫的影響發(fā)生顯著變化。脫落酸（ABA）處理?xiàng)l件下，擬南芥RopGEF1～RopGEF6、RopGEF11、RopGEF14表 現(xiàn)出了不同的應(yīng)答模式[5]。擬南芥RopGEF1參與了生長素輸入載體AUX1 的極性分布和輸出載體PIN7 和PIN2 的差異積累[6]。在茶樹葉片中克隆得到的鳥苷酸交換因子CsRopGEF1和CsRopGEF3在ABA 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中受到不同的調(diào)控作用[7]。

丹參Salvia miltiorrhizaBunge為唇形科鼠尾草屬藥用植物，其干燥根和根莖是常用的大宗藥材，《神農(nóng)本草經(jīng)》中位列上品，能夠活血祛瘀、清心除煩、涼血消癰及通經(jīng)止痛[8]。丹參的化學(xué)成分主要有二萜類、三萜類、酚酸類、黃酮類及含氮類化合物、內(nèi)酯類化合物、多糖等，其中二萜類與酚酸類化合物是丹參的主要活性成分[9]。丹參在臨床主要用于保護(hù)心腦血管系統(tǒng)、保肝、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗纖維化等[10]。低溫、干旱、高鹽、病蟲害等逆境脅迫會(huì)影響丹參的產(chǎn)量和質(zhì)量[11-13]，并且激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)影響丹參的生長發(fā)育和體內(nèi)活性成分的生物合成。RopGEF 蛋白在植物調(diào)控對逆境脅迫的應(yīng)激反應(yīng)和激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起到重要作用。因此本研究擴(kuò)增了丹參中的SmRopGEF1基因，利用生物信息學(xué)分析其原核表達(dá)與亞細(xì)胞定位，探究了其在不同非生物脅迫和外源激素誘導(dǎo)處理下的表達(dá)模式，可為研究丹參防御反應(yīng)機(jī)制、選育抗逆優(yōu)良品種、提高產(chǎn)量和品質(zhì)提供參考。

1 材料

1.1 樣品與試劑

丹參樣品于2020 年9 月采自北京市房山區(qū)良鄉(xiāng)國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)園信息中心，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院魏勝利教授鑒定為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhizaBunge。

Trans1-T1、Rosetta（DE3）、DH5ɑ感受態(tài)細(xì)胞，GoScript Reverse Transcription System 反轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自北京全式金生物技術(shù)股份有限公司；pET28a、pCAMBIA1300-35S-GFP 載體均購自武漢轉(zhuǎn)導(dǎo)生物實(shí)驗(yàn)室有限公司；膠回收純化試劑盒（南京諾唯贊有限公司）；載體pMD19-T，內(nèi)切酶BamHⅠ、XhoⅠ、KPnⅠ均購自TaKaRa 公司；異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）、2×Phanta Flash Master Mix、瓊脂糖、核酸Marker 和染料均購自北京拜爾迪公司；Plant RNA Kit（Omega 公司）；引物由北京六合華大基因科技有限公司合成。

1.2 儀器

HH-S4A 型水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）；HWY-1102C 型搖床（上海智誠分析儀器制造有限公司）；GL-88B 型渦旋器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；WD-9413B 型凝膠成像儀（北京六一生物科技有限公司）；NanoDrop One 型超微量分光光度計(jì)（Thermo Fisher 公司）；JY300E 型凝膠電泳儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）；PL602E 型電子天平（Mettler-Toledo 公司）；T100 型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀、CFX96 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）儀（Bio-Rad 公司）；HZQ-211C型振蕩培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；TGL-16型高速冷凍離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；LSM980 型激光共聚焦顯微鏡 [卡爾蔡司（上海）管理有限公司]。

2 方法

2.1 樣品處理

選取無病害、長勢良好的丹參立刻置于液氮中保存，之后儲(chǔ)存于-80 ℃冰箱中。取丹參剛采摘的健康葉片，經(jīng)清潔后置于含激素的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，選擇生長良好且長勢相同的丹參愈傷組織進(jìn)行非生物脅迫和激素誘導(dǎo)處理。非生物脅迫為低溫（4 ℃）、NaCl（150 mmol·L-1）和甘露醇（400 mmol·L-1）；外源激素為ABA（150 μmol·L-1）、茉莉酸甲酯（MeJA，150 μmol·L-1）及生長素（IAA，150 μmol·L-1）3 種，在經(jīng)過0、12、24、36、48 h處理后分別提取RNA作為檢測樣品。

2.2 丹參葉片RNA提取及cDNA的合成

RNA 提取參照Plant RNA Kit 產(chǎn)品說明書進(jìn)行，提取RNA 樣品濃度由超微量分光光度計(jì)測定，并進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳分析，檢測RNA 完整性和質(zhì)量，以確保滿足后續(xù)分析的需要。反轉(zhuǎn)錄方法參照試劑盒說明書進(jìn)行。

2.3 SmRopGEF1基因克隆

根據(jù)丹參轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)庫，篩選與發(fā)育相關(guān)的基因，依據(jù)片段兩端使用Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)基因的特異性擴(kuò)增引物SmRopGEF1-F1、SmRopGEF1-R1（表1）。將丹參葉片RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反轉(zhuǎn)錄后的cDNA 作為擴(kuò)增模板，擴(kuò)增體系：cDNA 1.6 μL、2×Phanta Flash Master Mix 25 μL、10 μmol·L-1正反引物各2 μL，ddH2O 補(bǔ)足使終體積為50 μL。反應(yīng)程序：98 ℃預(yù)變性30 s；98 ℃變性10 s，53.4 ℃退火5 s，72 ℃延伸10 s，28 個(gè)循環(huán)；72 ℃最終延伸1 min；擴(kuò)增產(chǎn)物于4 ℃條件保存。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測及凝膠成像分析，快速切下目的條帶，回收后按照純化試劑盒的操作流程進(jìn)行?；厥蘸蟮漠a(chǎn)物與pMD19-T連接，之后轉(zhuǎn)化進(jìn)Trans1-T1 感受態(tài)細(xì)胞中，在平板（氨芐抗性）上進(jìn)行篩選，經(jīng)菌落PCR 驗(yàn)證后送北京六合華大基因科技有限公司測序。

表1 SmRopGEF1基因擴(kuò)增引物序列信息

2.4 SmRopGEF1基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析

通過Protparam 在線工具（https://web.expasy.org/protparam/）對SmRopGEF1基因編碼的蛋白理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測，對SmRopGEF1基因編碼蛋白質(zhì)的氨基酸組成、相對分子質(zhì)量、理論等電點(diǎn)和穩(wěn)定性等參數(shù)進(jìn)行分析；利用TMHMM 2.0 軟件（https://services.healthtech.dtu.dk/service.php? TMHMM-2.0）進(jìn)行蛋白序列的跨膜螺旋分析；用ExPASY 中的SOPMA 在線工具（https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgibin/npsa_automat.pl?page=npsa%20_sopma.html）預(yù)測基因編碼蛋白的二級結(jié)構(gòu)。通過SWISS-MODEL工作站構(gòu)建SmRopGEF1 蛋白的三級結(jié)構(gòu)模型；將SmRopGEF1氨基酸序列輸入美國國家生物技術(shù)信息中心（NCBI）中CDD 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行結(jié)構(gòu)域預(yù)測，應(yīng)用DNAMAN 將SmRopGEF1 蛋白與其他物種RopGEF1 蛋白的氨基酸序列進(jìn)行比對分析；從擬南芥數(shù)據(jù)庫（https://www.arabidopsis.org/）和NCBI中下載與SmRopGEF1 相似度較高的氨基酸序列，通過MEGA 6.0軟件構(gòu)建鄰接（neighbor-joining）進(jìn)化樹，Bootstrap重復(fù)次數(shù)為1000次。

2.5 SmRopGEF1 蛋白原核表達(dá)載體構(gòu)建和異源表達(dá)

使用BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切目的基因PCR 產(chǎn)物與pET28a 質(zhì)粒，回收純化酶切產(chǎn)物，經(jīng)T4 連接酶連接，轉(zhuǎn)化Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)形成單克隆，經(jīng)菌落PCR、測序正確后進(jìn)行質(zhì)粒pET28a-SmRopGEF1提取，之后轉(zhuǎn)化Rosetta（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，選取單克隆接種于LB液體培養(yǎng)基（含卡那霉素），180 r·min-1、37 ℃搖床活化過夜，按1∶100加入到LB 液體培養(yǎng)基（含卡那霉素），180 r·min-1、37 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)至600 nm 處吸光度（A600nm）為0.5 左右，調(diào)整溫度為16 ℃，加入0.8 mmol·L-1IPTG 振蕩培養(yǎng)22 h 后12 000 r·min-1、4 ℃進(jìn)行離心（離心半徑為8.4 cm），收集大腸埃希氏菌，使菌體懸浮于40 mmol·L-1磷酸鉀（KPB）緩沖液（含5 mmol·L-1咪唑，100 mmol·L-1NaCl，pH 7.9）中。將含有菌體懸浮液的離心管置于冰上，利用超聲破碎儀破碎細(xì)胞，之后12 000 r·min-1、4 ℃離心30 min（離心半徑為8.4 cm）。鎳柱純化，進(jìn)行10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）電泳分析。

2.6 SmRopGEF1蛋白亞細(xì)胞定位

利用KPnⅠ和BamH Ⅰ雙酶切目的基因SmRopGEF1PCR 產(chǎn)物與雙元載體pCAMBIA1300-35S-GFP，對酶切產(chǎn)物進(jìn)行純化，T4 連接酶連接酶切后的產(chǎn)物與載體，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5ɑ感受態(tài)細(xì)胞。37 ℃恒溫培養(yǎng)，進(jìn)行菌落PCR 及測序鑒定，對序列正確的單克隆菌斑進(jìn)行菌液擴(kuò)繁，提取pCAMBIA1300-35S-GFP-SmRopGEF1 重組質(zhì)粒，將細(xì)胞核標(biāo)記物和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化至擬南芥原生質(zhì)體，弱光下培養(yǎng)10 h，在激光共聚焦顯微鏡下觀察SmRopGEF1蛋白的亞細(xì)胞定位。

2.7 SmRopGEF1基因在不同脅迫時(shí)間的表達(dá)分析

采用qRT-PCR 測定丹參愈傷中SmRopGEF1基因在低溫（4 ℃）、NaCl（150 mmol·L-1）、甘露醇（400 mmol·L-1）、ABA（150 μmol·L-1）、MeJA（150 μmol·L-1）及IAA（150 μmol·L-1）不同處理?xiàng)l件下分別經(jīng)過0、12、24、36、48 h處理時(shí)的表達(dá)模式，不同處理?xiàng)l件樣品有3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)。選取SmActin7為內(nèi)參（GenBank 登錄號：HM051058.1），設(shè)計(jì)qRT-PCR 特異引物（表1），在qRT-PCR 儀上檢測表達(dá)情況。反應(yīng)總體系為20 μL；Nuclease-Free H2O 8.2 μL、STBR Premix ExTaq酶10 μL、上下游引物（10 μmol·L-1）各 0.4 μL、cDNA 模板1 μL。反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性3 min，95 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，40 個(gè)循環(huán)（每次循環(huán)后采集熒光），循環(huán)后95 ℃變性10 s，65～95 ℃做熔解曲線分析，每個(gè)溫度以0.5 ℃上升，停留5 s。觀察熔解曲線，判斷qRT-PCR 產(chǎn)物的特異性，采用2-ΔΔCt方法進(jìn)行定量分析計(jì)算。

3 結(jié)果與分析

3.1 SmRopGEF1基因cDNA克隆

從丹參葉片轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選葉片發(fā)育相關(guān)基因SmRopGEF1設(shè)計(jì)基因特異性引物，以丹參反轉(zhuǎn)錄后的cDNA 為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，經(jīng)電泳對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測（圖1），膠回收純化測序序列與轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)一致，成功克隆出SmRopGEF1，序列長度為1701 bp，編碼566個(gè)氨基酸。

圖1 SmRopGEF1基因的擴(kuò)增

3.2 SmRopGEF1基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析

3.2.1 SmRopGEF1蛋白理化性質(zhì)分析和跨膜區(qū)域分析 推測SmRopGEF1蛋白總原子數(shù)為8706個(gè)，分子式為C2748H4332N756O840S30，相對分子質(zhì)量為62 362.99，不穩(wěn)定系數(shù)和理論等電點(diǎn)分別為56.11、5.86，預(yù)測為不穩(wěn)定蛋白，總的親水性平均系數(shù)為-0.355，屬于親水性蛋白。通過TMHMM 2.0 預(yù)測到SmRopGEF1蛋白沒有跨膜螺旋結(jié)構(gòu)，序列在膜外。

3.2.2 SmRopGEF1蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測 結(jié)果表明，SmRopGEF1 的二級結(jié)構(gòu)由隨機(jī)卷曲（random coil）、α-螺旋（α-helices）、延伸鏈（extended strand）和β-折疊（β-turn）組成，占比分別為41.87%、45.76%、8.13%、4.24%。推測上述4 種中最多的二級結(jié)構(gòu)元件為α-螺旋，而隨機(jī)卷曲、β-折疊和延伸鏈分散在整個(gè)蛋白中（圖2）。

圖2 SmRopGEF1蛋白的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測

3.2.3 SmRopGEF1 蛋白的三級結(jié)構(gòu)分析 以2ntx.1.A 為模板，對SmRopGEF1 的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測，結(jié)果表明，SmRopGEF1 與2ntx.1.A 的相似性為54.06%，具有參考價(jià)值，具體三維結(jié)構(gòu)見圖3。

圖3 SmRopGEF1蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測

3.2.4 SmRopGEF1 蛋白氨基酸序列分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析 SmRopGEF1具有保守的PRONE結(jié)構(gòu)域。與其他植物中的RopGEF1 氨基酸序列進(jìn)行比對，結(jié)果顯示，SmRopGEF1 氨基酸序列與芡歐鼠尾草Salvia hispanicaL.、紫 蘇Perilla frutescens（L.）Britt.、一串紅Salvia splendensKer Gawl.序列相似度分別為94.58%、93.99%、93.50%（圖4）。為進(jìn)一步了解SmRopGEF1 在植物RopGEF 家族中的進(jìn)化位置，下載與SmRopGEF1 相似度較高的氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖5），SmRopGEF1 與芡歐鼠尾草和一串紅同源性較高。

圖4 SmRopGEF1蛋白與其他物種RopGEF蛋白氨基酸序列對比

圖5 SmRopGEF1基因與其他RopGEF基因的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系

3.3 SmRopGEF1蛋白原核表達(dá)分析

將構(gòu)建好的原核表達(dá)載體pET28a-SmRopGEF1質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希氏菌Rosetta（DE3）中，挑取單克隆菌斑，經(jīng)菌落PCR 鑒定陽性克隆，成功構(gòu)建pET28a-SmRopGEF1 原核表達(dá)載體。經(jīng)過純化，利用10% SDS-PAGE 檢測發(fā)現(xiàn)在62 000 左右出現(xiàn)SmRopGEF1蛋白條帶（圖6）。

圖6 SmRopGEF1重組蛋白SDS-PAGE凝膠電泳

3.4 SmRopGEF1蛋白的亞細(xì)胞定位分析

使用細(xì)胞核Marker 作為標(biāo)記物，將其和紅色熒光蛋白序列融合。結(jié)果表明融合蛋白pCAMBIA1300-35s-GFP-SmRopGEF1 主要分布在細(xì)胞核，可以與細(xì)胞核標(biāo)記物Osghd7 共同定位于細(xì)胞核，然而有g(shù)fp基因的pCAMBIA1300-35S-GFP 載體注射后熒光在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核和細(xì)胞上都有分布（圖7）。以上結(jié)果表明，SmRopGEF1 蛋白主要定位在植物細(xì)胞的細(xì)胞核，在細(xì)胞核中發(fā)揮作用。

圖7 SmRopGEF1蛋白在擬南芥葉片中的亞細(xì)胞定位

3.5 SmRopGEF1 基因在非生物脅迫及激素誘導(dǎo)處理下的表達(dá)分析

為了驗(yàn)證SmRopGEF1在植物防御反應(yīng)及激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用，對丹參長勢相同的愈傷組織分別進(jìn)行非生物脅迫（低溫、鹽及干旱）和激素誘導(dǎo)（IAA、ABA、MeJA）處理。以0 h 處理的丹參愈傷組織樣品為對照，不同處理時(shí)間點(diǎn)取樣，提取丹參愈傷組織的RNA，之后進(jìn)行qRT-PCR 檢測，分析SmRopGEF1的表達(dá)水平。鹽脅迫下，SmRopGEF1表達(dá)水平先升高，再降低，之后又升高，并在36 h達(dá)到最高；冷脅迫下，SmRopGEF1表達(dá)水平先升高，后降低，并在24 h 達(dá)到最高，為0 h 的5.6 倍；干旱脅迫后丹參愈傷中SmRopGEF1表達(dá)量下降，12 h 時(shí)表達(dá)水平最低（圖8A）。丹參愈傷組織經(jīng)IAA、ABA激素誘導(dǎo)后SmRopGEF1表達(dá)量沒有顯著變化，MeJA 誘導(dǎo)后SmRopGEF1表達(dá)量先升高，后降低，之后上升，在48 h時(shí)達(dá)到峰值（圖8B）。

圖8 非生物脅迫和激素誘導(dǎo)處理下SmRopGEF1基因的相對表達(dá)量（,n=3）

4 討論

RopGEF 在植物抗逆反應(yīng)及激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起到重要作用。本研究擴(kuò)增了SmRopGEF1基因，并首次在大腸桿菌中異源表達(dá)了SmRopGEF1 蛋白，序列分析結(jié)果表明SmRopGEF1 蛋白含有1 個(gè)保守的PRONE 結(jié)構(gòu)域，與芡歐鼠尾草和一串紅具有較高的同源性。已有研究表明，RopGEF 蛋白能夠定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核中，如擬南芥RopGEF4 蛋白在細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中均有表達(dá)[14]；擬南芥RopGEF5 蛋白定位在細(xì)胞膜及細(xì)胞膜周圍的細(xì)胞質(zhì)中，并且在膜上不對稱定位[15]；擬南芥RopGEF2主要分布在近細(xì)胞膜處、細(xì)胞質(zhì)和線粒體中[16]。本研究應(yīng)用擬南芥瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)證明SmRopGEF1為核蛋白，可能在細(xì)胞核中發(fā)揮作用。

RopGEF 在植物防御中發(fā)揮重要作用。例如，擬南芥在受到低溫脅迫、鹽脅迫和熱脅迫時(shí)，GEF7、GEF9、GEF10被顯著誘導(dǎo)表達(dá)；受到低溫脅迫、鹽脅迫和滲透脅迫時(shí)，GEF8、GEF13被顯著誘導(dǎo)表達(dá)；在受到鹽脅迫和熱脅迫時(shí)，GEF3和GEF11被顯著誘導(dǎo)表達(dá)；在受到低溫和鹽脅迫時(shí)，GEF4和GEF12被顯著誘導(dǎo)表達(dá)；受到熱脅迫時(shí)，GEF2和GEF6被顯著誘導(dǎo)表達(dá)[17]。本研究通過qRTPCR實(shí)驗(yàn)分析SmRopGEF1基因在不同脅迫下的表達(dá)量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鹽脅迫和冷脅迫能夠顯著提高SmRopGEF1的表達(dá)，而干旱脅迫顯著降低SmRopGEF1的表達(dá)，說明SmRopGEF1基因在植物抗逆過程中起到重要作用。RopGEF基因在植物信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中也起到重要作用。例如，100 μmol·L-1ABA 處理后，擬南芥葉中RopGEF4表達(dá)量先升后降，根中呈下降趨勢；RopGEF8表達(dá)量在葉片和根中均先上升后下降[14]。經(jīng)外源ABA（100 μmol·L-1）誘導(dǎo)后，茶樹CsRopGEF1和CsRopGEF3基因的相對表達(dá)量分別顯著下調(diào)和上調(diào)，表明這2 個(gè)基因能夠?qū)ν庠碅BA 進(jìn)行響應(yīng)且響應(yīng)模式不同[5]。水稻OSRopGEF7A能夠響應(yīng)生長素的誘導(dǎo)，用1 μmol·L-1NAA處理幼苗，隨著處理時(shí)間的延長，OSRopGEF7A的表達(dá)量也增加，并在處理12 h 時(shí)達(dá)到最高水平[18]。本研究表明，SmRopGEF1基因在生長素和ABA 的誘導(dǎo)下表達(dá)量變化不明顯，但是MeJA 誘導(dǎo)下能夠顯著升高，表明SmRopGEF1基因可能參與MeJA 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。本研究通過對SmRopGEF1基因的亞細(xì)胞定位和不同脅迫、激素誘導(dǎo)下的表達(dá)分析，為丹參中RopGEF 蛋白功能的進(jìn)一步研究和抗逆品種的選育提供了參考。