滕俊萍 索 峰 張 燕 王 億 緱靈山 顧茂勝

徐州市婦幼保健院 (江蘇 徐州 221009)

亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)是葉酸-甲硫氨酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶，可以將5,10-亞甲基四氫葉酸催化為5-甲基四氫葉酸參與多種人體內(nèi)生化反應(yīng)。在人類及其它真核生物中，亞甲基四氫葉酸還原酶是由兩個(gè)黃素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide,FDA)分子以非共價(jià)結(jié)合形成的二聚體[1]。因此，MTHFR基因上的位點(diǎn)突變會導(dǎo)致FDA分子發(fā)生解離，引起酶結(jié)構(gòu)和活性改變，造成同型半胱氨酸水平增加及DNA 甲基化水平降低[2]。

MTHFR基因 C677T 位點(diǎn)多態(tài)性與癌癥、心血管疾病、妊娠不良結(jié)局、胎兒發(fā)育異常及男性不育等多種臨床疾病有關(guān)，也有研究報(bào)道證實(shí)孕婦機(jī)體葉酸水平不足與胎兒出生缺陷的發(fā)生有密切關(guān)系[3]。但葉酸過量服用也可能引起消化道反應(yīng)、影響鋅元素吸收，誘發(fā)驚厥，增加后代自閉癥、過敏性疾病等疾病的患病風(fēng)險(xiǎn)[4-5]。其中葉酸缺乏是由于機(jī)體利用能力差和葉酸補(bǔ)充不足等因素引起，而MTHFR基因多態(tài)性會造成葉酸的利用能力受到影響。因此，檢測葉酸代謝相關(guān)代謝基因的多態(tài)性，依據(jù)葉酸缺乏風(fēng)險(xiǎn)大小合理補(bǔ)充葉酸，有助于降低孕期女性疾病風(fēng)險(xiǎn)，減少新生兒出生缺陷發(fā)生。本研究通過對徐州地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性進(jìn)行分析，對育齡女性葉酸代謝能力進(jìn)行精準(zhǔn)評估，以期為孕期女性精準(zhǔn)補(bǔ)充葉酸提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象2015年6月至2021年6月于徐州市婦幼保健院行孕前及孕期檢查的育齡女性4983例，均為徐州市常住人口。所有研究對象均未重復(fù)納入，納入標(biāo)準(zhǔn)：孕前及孕期檢查的育齡女性，排除易造成葉酸代謝異常的家族性遺傳性疾病、血液系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)疾病及急慢性疾病等，檢測均經(jīng)過知情同意。

1.2 方法使用紫頭管(乙二胺四乙酸，EDTA)采集2mL靜脈血，Lab-Aid 824 全血基因組DNA核酸提取試劑(Zeesan,Xiamen)獲取基因組DNA，NanoDrop 2000檢測DNA純度與濃度。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法及MTHFR C677T基因檢測試劑盒(江西諾德醫(yī)療器械有限公司)行位點(diǎn)多態(tài)性檢測。所有實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照操作說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法使用SPSS 21.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用百分比(%)表示計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)組間差異是否具有顯著性，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡分析針對入組樣本群體亞甲基四氫葉酸還原酶C677T位點(diǎn)的基因型(CC，CT，TT)進(jìn)行哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg)檢驗(yàn)，結(jié)果顯示實(shí)際頻數(shù)和理論頻數(shù)無顯著差異(χ2=1.071,P=0.585 ＞0.05)符合哈-溫平衡，入組群體具備代表性，見表1。

表1 Hardy-Weinberg遺傳平衡分析

2.2 MTEERC677T 基因多態(tài)性分布統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示徐州地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T位點(diǎn)野生型(CC)、雜合突變類型(CT)及純合突變類型(TT)頻率分別為20.61%(1027/4983)、48.44%(2414/4983)和30.95%(1542/4983)，其中雜合突變CT型為主，人體對葉酸的利用能力處于中等水平，對葉酸的代謝基本正常，但是為了降低胎兒發(fā)生神經(jīng)椎管畸形的風(fēng)險(xiǎn)，建議孕婦根據(jù)醫(yī)生建議適量補(bǔ)充葉酸。純合突變型TT占比超過30%，這部分育齡期婦女存在葉酸代謝障礙，需要根據(jù)醫(yī)生建議加大葉酸的補(bǔ)給，避免對個(gè)體和新生兒產(chǎn)生影響。數(shù)據(jù)見表2。

表2 徐州地區(qū)育齡女性與其它地區(qū)MTFR C677T基因型與基因頻率比較

表2 徐州地區(qū)育齡女性與其它地區(qū)MTFR C677T基因型與基因頻率比較

組別 例數(shù) 基因型頻率 χ2P 基因頻率 χ2 P CC CT TT C T例數(shù)/頻率 例數(shù)/頻率 例數(shù)/頻率 數(shù)量/頻率 數(shù)量/頻率本研究 4983 1027/20.6% 2414/48.4% 1542/31.0% 4468/44.29% 2749/55.71%張家口 860 158/18.4% 429/49.9% 273/31.7% 2.274 0.321 745/43.31% 975/56.69% 197.602 0.000新鄉(xiāng) 1352 201/14.9% 625/46.2% 526/38.9% 39.828 0.000 1027/37.98% 1677/62.02% 455.800 0.000鄭州 249 46/18.5% 123/49.4% 80/32.1% 0.679 0.712 215/43.17% 283/56.83% 68.557 0.000西安 3492 800/22.9% 1710/49.0% 982/28.1% 10.649 0.005 3310/47.39% 3674/52.61% 301.876 0.000德陽 2573 1047/(40.7%) 1171(45.5%) 355(13.8%) 451.123 0.000 3265/63.45% 1881/36.55% 3.033 0.082三河市 701 95/15.8% 281/46.8% 325/37.4% 69.036 0.000 471/33.59% 931/66.41% 384.674 0.000淄博 1041 130/12.5% 457/43.9% 454/43.6% 75.005 0.000 717/34.44% 1365/65.56% 494.334 0.000臨沂 825 138/16.7% 398/48.2% 289/35.1% 9.073 0.011 674/40.8% 976/59.2% 244.519 0.0012武漢 2899 1069/36.9% 1367/47.1% 463/16.0% 344.511 0.000 3505/60.45% 2293/39.55% 1281.231 0.000蘇州 1887 565/29.9% 913/48.4% 409/21.7% 92.854 0.000 2043/54.13% 1731/45.87% 62.053 0.000鎮(zhèn)江 2885 877/30.4% 1378/47.8% 630/21.8% 127.428 0.000 3132/54.28% 2638/45.72% 76.873 0.000昆明 297 116/39.1% 139/46.8% 42/14.1% 70.600 0.000 371/62.46% 223/37.54% 0.070 0.791廣東 1124 578/51.4% 463/41.2% 83/7.4% 532.902 0.000 1619/72.02% 629/27.98% 76.336 0.000瓊海 1221 756/61.9% 390/31.9% 75/6.2% 872.794 0.000 1902/77.89% 540/22.11% 207.422 0.000

2.3 徐州地區(qū)育齡女性MTHFRC677T基因多態(tài)性分布與文獻(xiàn)報(bào)道的比較將本研究獲得的徐州地區(qū)育齡女性的MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性結(jié)果與已有文獻(xiàn)報(bào)道的其它地區(qū)進(jìn)行比較。結(jié)果顯示與新鄉(xiāng)、西安、德陽、三河市、淄博、武漢、蘇州、鎮(zhèn)江、昆明、廣東、瓊海等地結(jié)果相比，徐州地區(qū)育齡女性MTHFR C677T基因型頻率有顯著差異(P＜0.05)。然而，徐州地區(qū)與張家口、鄭州、臨沂等地育齡女性相比，無明顯差異(P＞0.05)。另外，此次納入的育齡女性群體與張家口、新鄉(xiāng)、西安、鄭州、淄博、三河市、臨沂、武漢、蘇州、鎮(zhèn)江、廣東、瓊海等區(qū)域育齡女性MTHFR C677T位點(diǎn)的等位基因頻率比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與德陽、昆明等地相比無顯著差異(P＞0.05)，見表2。

3 討 論

新生兒出生缺陷的發(fā)生與孕婦機(jī)體內(nèi)葉酸水平不足有密切聯(lián)系。有研究報(bào)道證實(shí)圍孕期補(bǔ)充葉酸可以降低新生兒神經(jīng)管缺陷發(fā)生率，降低妊娠高血壓、流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)等風(fēng)險(xiǎn)[6]。亞甲基四氫葉酸還原酶基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性可影響編碼的酶活性和酶水平，影響血漿中葉酸及甲硫氨酸水平[7]。因此，檢測葉酸代謝相關(guān)基因位點(diǎn)多態(tài)性可以指導(dǎo)孕婦合理補(bǔ)充葉酸。本實(shí)驗(yàn)分析了徐州地區(qū)4983例育齡女性樣本，發(fā)現(xiàn)徐州地區(qū)育齡女性MTHFR C677T位點(diǎn)CC型、CT型及TT型頻率分別為20.6%(1027/4983)、48.4%(2414/4983)和31.0%(1542/4983)，突變基因T的頻率為55.71%。通過了解徐州地區(qū)育齡女性MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性趨勢，本文對于因地制宜制定合理的葉酸補(bǔ)充方案具有重要參考價(jià)值。

研究資料顯示，我國神經(jīng)管畸形發(fā)生率的大體趨勢是北高南低的趨勢，這與MTHFR純合突變TT基因型的趨勢相一致[7]。本研究TT基因型頻率為31.0%，與國內(nèi)其他地區(qū)進(jìn)行比較TT基因型頻率處于較高水平。徐州地區(qū)位于中國東部南北中部區(qū)域，是江蘇的最北部，北面毗鄰山東。徐州地區(qū)育齡女性TT基因型頻率低于淄博、臨沂、新鄉(xiāng)等北方地區(qū)，低于南方地區(qū)，符合上述規(guī)律[8-14]。2017版《圍受孕期增補(bǔ)葉酸預(yù)防神經(jīng)管缺陷指南》推薦無高危因素的圍受孕期女性每日增補(bǔ)葉酸0.4mg或0.8mg，對于CT或TT型的孕婦，需要增加葉酸補(bǔ)充劑量或延長孕前增補(bǔ)時(shí)間[4]。

人體內(nèi)葉酸水平受膳食結(jié)構(gòu)影響較大。有研究報(bào)道顯示中國育齡婦女膳食葉酸攝入量南方比北方地區(qū)育齡婦女高，北方地區(qū)的農(nóng)村較城鎮(zhèn)低[15-16]。值得注意的是，我國神經(jīng)管畸形的患病率也具有北方較南方高的特點(diǎn)，且北方地區(qū)農(nóng)村的發(fā)病率高于城鎮(zhèn)[17]。此外，血液葉酸水平與膳食葉酸攝入量情況具有相似性。這提示，圍孕期葉酸的補(bǔ)充劑量除參考葉酸代謝基因多態(tài)性之外，需考慮膳食葉酸攝入量。對于在北方地區(qū)生活的育齡婦女，可以考慮適當(dāng)增加富含葉酸食物的攝入量。

徐州地區(qū)人群葉酸代謝基因多態(tài)性具有明顯的地域特征，本研究通過對葉酸代謝關(guān)鍵酶MTHFR基因C677T位點(diǎn)多態(tài)性展開研究，為本地區(qū)育齡女性葉酸補(bǔ)充劑量的合理選擇提供科學(xué)依據(jù)。

研究結(jié)果顯示，參與研究的孕齡婦女群體中TT型占31.0%，CT型占48.4%，其中育齡女性出現(xiàn)葉酸代謝障礙的占比較高。對于葉酸代謝障礙的圍孕期女性，常規(guī)劑量的葉酸補(bǔ)充(400μg/d)無法滿足妊娠需求，需要結(jié)合孕婦個(gè)體實(shí)際情況適當(dāng)補(bǔ)充額外劑量葉酸。此外，在建議孕婦合理增補(bǔ)葉酸的同時(shí)，需要提示育齡婦女多食用富含葉酸的食物，養(yǎng)成健康生活方式。