楊天偉，劉 靜，高 鋒，何明霞，許欣景，方藝偉，張春霞

（云南省熱帶作物科學(xué)研究所，云南景洪 666100）

暗褐網(wǎng)柄牛肝菌[Phlebopus portentosus（Berk.& Broome.）Boedijn]是世界上第一個(gè)能夠進(jìn)行菇房人工栽培的牛肝菌類食用菌，目前已實(shí)現(xiàn)工廠化周年栽培生產(chǎn)及經(jīng)濟(jì)林下仿生栽培［1-3］。暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌肉肥厚、味道鮮美、口感脆嫩，富含蛋白質(zhì)、氨基酸、纖維素及多種礦質(zhì)元素，深受國(guó)內(nèi)外消費(fèi)者青睞［4］。為滿足市場(chǎng)需求，暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培規(guī)模不斷擴(kuò)大，收菇后的廢菌渣數(shù)量也隨之增加。

暗褐網(wǎng)柄牛肝菌為“貴族”食用菌，對(duì)栽培生產(chǎn)的養(yǎng)分需求較高，其栽培基質(zhì)由木屑和鋸末60%、谷粒30%、土壤10%構(gòu)成［5］。然而，暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲在生長(zhǎng)過程中不能分泌降解木質(zhì)素所需的漆酶、木質(zhì)素過氧化物酶、錳過氧化物酶等，僅能分泌少量降解纖維素的羧甲基纖維素鈉酶；基因組學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)，暗褐網(wǎng)柄牛肝菌缺乏或只含有少量降解木質(zhì)素和纖維素的調(diào)控基因［5-6］。前期課題組分析了暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培基質(zhì)在出菇前后的營(yíng)養(yǎng)成分變化情況，發(fā)現(xiàn)出菇前后纖維素和木質(zhì)素含量沒有明顯變化；與原材料相比，出菇后栽培基質(zhì)中的纖維素、木質(zhì)素只減少了0.55%和0.34%，表明暗褐網(wǎng)柄牛肝菌對(duì)纖維素、木質(zhì)素的利用率極低［7］?？梢姡岛志W(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣中還存在大量富含纖維素、木質(zhì)素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)未被利用，其再利用值得深入研究。

巨大口蘑（Tricholoma giganteumMassee）又名大白口蘑、金福菇、絡(luò)巴伊菌、大樹菇、白松茸等，是珍稀美味食用菌之一［8-9］，國(guó)內(nèi)主要分布于云南省的普洱市、西雙版納州、德宏州、玉溪市，廣西南寧市，海南省?？谑泻透＝ㄊ「Ｖ菔械葻釒啛釒У貐^(qū)，屬于高溫型真菌，其菌絲最適生長(zhǎng)溫度為28～30 ℃，最適出菇溫度為26～32 ℃［10-11］。巨大口蘑口感鮮美，甜而不膩，極具營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，深受消費(fèi)者喜愛，目前已在中國(guó)、日本、韓國(guó)等有小規(guī)模栽培生產(chǎn)，人工栽培一般以木屑、稻草、玉米芯、甘蔗渣等作為主要原料［12-14］。本研究根據(jù)巨大口蘑人工栽培的營(yíng)養(yǎng)需求，探索以暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣為主料（占栽培料的70%以上），加入少量麩皮、鋸末等原料來栽培巨大口蘑，充分利用暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌包營(yíng)養(yǎng)成分，提高暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培基質(zhì)的總體生物學(xué)轉(zhuǎn)化率，在充分利用資源的同時(shí)產(chǎn)生更多的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益。

1 材料和方法

1.1 材料

暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣，鋸末、麩皮、甘蔗渣、玉米面、石灰等。供試菌株為通過菌種分離篩選出的野生巨大口蘑優(yōu)良菌株，編號(hào)為j003，保存于云南省熱帶作物科學(xué)研究所植物保護(hù)與微生物利用研究中心。

1.2 方法

1.2.1 菌種制作

菌種擴(kuò)繁培養(yǎng)基為馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨2 g、硫酸鎂1 g、磷酸二氫鉀1 g、瓊脂18 g、水1 000 mL。先將馬鈴薯切薄片，煮沸10 min 后用3 層紗布過濾，取汁并定容到1 000 mL，加入其余材料混合均勻，分裝到試管中，經(jīng)高溫高壓滅菌后擺成斜面，冷卻備用。巨大口蘑j003菌株通過轉(zhuǎn)管擴(kuò)繁后得到大量試管菌種。

液體菌種培養(yǎng)基為馬鈴薯200 g、玉米粉5 g、葡萄糖20 g、蛋白胨2 g、硫酸鎂1 g、磷酸二氫鉀1 g、水1 000 mL。先將馬鈴薯和玉米粉混合煮沸10 min，用3 層紗布過濾，取汁并定容到1 000 mL，加入其余藥品混合均勻，分裝到500 mL 三角瓶，每瓶裝250 mL，高溫高壓滅菌30 min，冷卻備用。將巨大口蘑試管菌種轉(zhuǎn)接到液體培養(yǎng)基中，每瓶接入6 塊約5 cm2的菌種塊，置于150 r/min 的搖床，28℃避光培養(yǎng)6～7 d，得到巨大口蘑液體菌種。

1.2.2 廢菌包預(yù)處理

用脫袋、粉碎一體機(jī)將采菇后被雜菌感染或因長(zhǎng)勢(shì)不良被淘汰的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌包（去除塑料菌袋）粉碎成小塊，粉碎后的菌渣堆放好后淋上適量的水，覆蓋薄膜和遮陽(yáng)網(wǎng)進(jìn)行發(fā)酵，每隔7 d 翻堆一次，連續(xù)發(fā)酵1 個(gè)月。通過高溫發(fā)酵，殺死部分細(xì)菌及暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲體。

1.2.3 栽培基質(zhì)配制及栽培種制作

采用不同比例暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣+原材料的方式制作巨大口蘑栽培菌包，其中原材料由鋸末（45%）、木屑（30%）、麩皮（15%）、豆粕（5%）、玉米面（3%）、蔗糖（1%）、石灰（1%）混合均勻而成。分別按表1 的比例稱取暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣和原材料，將二者混合均勻，加水使培養(yǎng)料含水量達(dá)到60%～65%，裝袋制成巨大口蘑的栽培菌包。每個(gè)處理制作20 個(gè)菌包，裝袋后置于121 ℃高溫高壓滅菌鍋中滅菌2 h，冷卻備用。

表1 暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣及原材料用量比例 %

1.2.4 接種

將巨大口蘑液體菌種接入栽培菌袋，每袋接種約10 mL，接種后置于28 ℃培養(yǎng)房中暗光培養(yǎng)，觀察記錄不同處理巨大口蘑的菌絲生長(zhǎng)速度、菌絲滿袋時(shí)間。

1.2.5 覆土

當(dāng)巨大口蘑菌絲長(zhǎng)滿菌袋，其表面出現(xiàn)淡黃色液體時(shí)，菌絲進(jìn)入生理成熟期，可進(jìn)行覆土出菇。每個(gè)處理挖一條長(zhǎng)×寬約1.2 m×1.0 m，深度約20 cm 的畦，脫袋后的菌棒直立擺放在畦床內(nèi)，菌棒之間相隔8～10 cm，空隙用土壤填充，并在表面覆上4～5 cm 土壤。覆土后注意通風(fēng)，適時(shí)噴水，保持土壤濕潤(rùn)。

1.2.6 出菇管理及采收

待土壤表面出現(xiàn)大量白色菌絲后，調(diào)節(jié)水、氣，促使菌絲由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)入生殖生長(zhǎng)；減少噴水，增加通風(fēng)，刺激菌絲倒伏、扭結(jié)。待原基形成后增加適當(dāng)光照，增加空氣濕度，避免直接向原基噴水。當(dāng)原基長(zhǎng)到3 cm 左右，適當(dāng)增加噴水量。根據(jù)巨大口蘑菌柄長(zhǎng)度及菌蓋大小，在菌蓋尚未平展時(shí)及時(shí)采收。記錄每種處理巨大口蘑的鮮菇產(chǎn)量，計(jì)算生物學(xué)轉(zhuǎn)化率，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率=鮮菇重÷栽培基質(zhì)干重×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 廢菌渣用量對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

試驗(yàn)結(jié)果（表2）表明，以不同暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣為主料培養(yǎng)巨大口蘑，菌絲均能正常生長(zhǎng)，菌絲潔白、生長(zhǎng)整齊。70%暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣+30%原材料（處理1），巨大口蘑的菌絲生長(zhǎng)速度為（9.65±0.52）mm/d，35 d 長(zhǎng)滿菌袋，與對(duì)照相比未達(dá)到顯著差異。隨著廢菌渣用量增加，菌絲生長(zhǎng)速度逐漸降低，當(dāng)廢菌渣用量達(dá)到95%時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度為（6.83±0.74）mm/d，需要41 d長(zhǎng)滿菌袋；完全用廢菌渣培養(yǎng)巨大口蘑的生長(zhǎng)速度最低，僅為（6.49±0.33）mm/d，需要43 d 長(zhǎng)滿菌袋，顯著慢于對(duì)照和廢菌渣用量較少（70%～80%）的處理（P＜0.05）。

2.2 出菇情況

覆土約26 d 后，覆土層表面出現(xiàn)大量原基和幼菇（圖1），約33 d 后，子實(shí)體成熟（圖2），需及時(shí)采收。不同比例的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣+原材料栽培巨大口蘑均能出菇，菌包覆土后出菇率為100%。然而子實(shí)體生長(zhǎng)階段，因受高溫天氣及蟲害影響，少量巨大口蘑原基出現(xiàn)枯死或子實(shí)體被蝸牛、蛞蝓危害的現(xiàn)象（圖3），影響巨大口蘑的最終產(chǎn)量。

圖1 巨大口蘑原基和幼菇生長(zhǎng)情況

圖2 成熟的巨大口蘑子實(shí)體

圖3 高溫天氣及昆蟲危害的巨大口蘑子實(shí)體

2.3 產(chǎn)量及生物學(xué)轉(zhuǎn)化率

由表3 可知，采用不同比例的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣為主料栽培巨大口蘑的平均產(chǎn)量為263.87±12.93～401.33±6.10 g/袋，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率在57.36%～87.25%；采用原材料栽培巨大口蘑（對(duì)照）的產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率分別為（410.96±7.42）g/袋和89.34%。暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣為主料栽培的巨大口蘑產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率均低于對(duì)照組，但在成本及資源高效利用方面，以廢菌渣為主料栽培巨大口蘑具有明顯的優(yōu)勢(shì)。暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣用量達(dá)到95%時(shí)（處理6），產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率最低，這與栽培過程中遭遇惡劣氣候環(huán)境造成部分原基枯死有一定關(guān)系。

表3 巨大口蘑的產(chǎn)量及生物學(xué)效率

3 結(jié)論與討論

本研究采用不同比例暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣+原材料的方式成功栽培出巨大口蘑，菌絲生長(zhǎng)速度為6.49±0.33～9.65±0.52 mm/d，鮮菇產(chǎn)量為263.87±12.93～401.33±6.10 g/袋，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為57.36%～87.25%，表明巨大口蘑可以充分利用暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，實(shí)現(xiàn)了資源高效利用。

暗褐網(wǎng)柄牛肝菌已實(shí)現(xiàn)工廠化周年栽培，每天產(chǎn)生的菌渣數(shù)量龐大［2］，而暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的生物學(xué)轉(zhuǎn)化率低，收菇后的廢菌渣中余留了豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。許欣景等［15］發(fā)現(xiàn)，暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣作為有機(jī)肥能夠有效促進(jìn)蔬菜生長(zhǎng)，增加蔬菜產(chǎn)量。采用暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣為主料栽培的巨大口蘑的產(chǎn)量和生物學(xué)轉(zhuǎn)化率雖略低于采用原材料栽培的對(duì)照組，但成本投入低，實(shí)現(xiàn)了農(nóng)業(yè)廢棄資源再次利用，對(duì)產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展有重要意義。

在巨大口蘑栽培生產(chǎn)中，應(yīng)綜合考慮菌種培養(yǎng)周期、鮮菇產(chǎn)量及生物學(xué)轉(zhuǎn)化率，建議將暗褐網(wǎng)柄牛肝菌廢菌渣用量控制在90%以內(nèi)，這樣可以保證菌絲生長(zhǎng)速度快、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率高，栽培效益好。同時(shí)需注意，巨大口蘑為高溫型食用菌，在西雙版納的適宜栽培時(shí)期為4—10 月，這期間高溫多雨，出菇管理十分重要。尤其是原基分化到幼菇生長(zhǎng)階段，既要保證土壤濕潤(rùn)，有散射光，又要避免雨水沖刷和陽(yáng)光直射；水分過量、溫度過高及陽(yáng)光直射都會(huì)影響到原基生長(zhǎng)，甚至造成原基死亡，最終影響鮮菇產(chǎn)量及品質(zhì)。另外，蝸牛、蛞蝓、白蟻等昆蟲危害是影響巨大口蘑產(chǎn)量和品質(zhì)的重要原因，其中蝸牛、蛞蝓會(huì)啃食出菇后的子實(shí)體，白蟻危害土壤中的菌棒，影響菌絲生長(zhǎng)及出菇。因此，人工栽培巨大口蘑建議選擇大棚設(shè)施或菇房栽培。