陳 平,葛利麗,趙瑩瑩

(1.淮安市第二人民醫(yī)院檢驗科,江蘇 淮安 223002;淮安市第二人民醫(yī)院血液凈化中心,江蘇 淮安 223002)

新生兒ABO溶血病(ABO hemolytic disease of the newbor,ABO-HDN)指的是因母嬰ABO血型不合引發(fā)的新生兒溶血癥狀,這種情況多發(fā)生于母親O型血,嬰兒則為A、B型血時。其具體致病機理為母體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒血型抗原不匹配的抗體,且抗體通過胎盤進入新生兒體內(nèi),進而引發(fā)嬰兒免疫性溶血[1-4]。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示,我國ABO-HDN發(fā)病概率在0.8%左右,ABO-HDN患兒以不同程度黃疸、水腫以及貧血為典型特征,對機體健康存在一定影響[5]。光照、靜脈注射免疫球蛋白等方式是減輕溶血的主要手段,部分病情嚴重患兒可能需要進行換血治療。醫(yī)務(wù)人員建議對ABO-HDN進行早期診治,確?；純耗軌颢@得較好的預(yù)后,截至目前,ABO-HDN診斷的公認標準仍需要以新生兒時期的檢查為主[6]。但部分基層醫(yī)院設(shè)備不完善,醫(yī)務(wù)人員預(yù)防意識薄弱,可能在患兒表現(xiàn)出具體癥狀后才進行相應(yīng)檢查,容易延誤病情,對患兒身體與家庭帶來負擔[7-8]。本研究擬從母血以及臍帶血標本出發(fā),通過對107例高風險人群母血中的免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)抗體效價以及臍血血清C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、血紅蛋白(Hemoglobin,Hb)進行檢測,分析其在早期ABO-HDN診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性收集2020年4月至2022年4月淮安市第二人民醫(yī)院檢驗科收入的按時產(chǎn)檢且正常分娩的107例孕婦(O型血且與丈夫ABO血型不合)臨床資料。其中,孕婦年齡為20～40歲,平均(28.70±7.01)歲;分娩時孕周為36～41周,平均(38.34±1.70)周;產(chǎn)婦類型為經(jīng)產(chǎn)婦29例,初產(chǎn)婦78例;新生兒性別為男60例,女47例;分娩方式為順產(chǎn)61例,剖宮產(chǎn)46例。本研究符合《赫爾辛基宣言》內(nèi)容。診斷標準:參照《新生兒疾病診療規(guī)范》[9]中關(guān)于ABO-HDN定義擬定診斷標準,即母嬰血型不合,新生兒出生后黃疸出現(xiàn)過早且隨病情加重,出生后新生兒外周靜脈血溶血三項試驗結(jié)果證實為ABO-HDN。溶血三項試驗:于新生兒出生后3 d空腹狀態(tài)下抽取外周靜脈血,進行直接抗人球蛋白試驗(Direct antiglobulin test,DAT)、游離與放射試驗以及紅細胞抗體散射試驗。當DAT或游離與放射試驗單項陽性時判斷為疑似HDN,需根據(jù)患兒黃疸情況以及總膽紅素確診;當患兒DAT、游離與放射試驗、紅細胞抗體散射試驗均為陽性存在2～3項陽性或者紅細胞抗體散射試驗單項陽性時可確診為ABO-HDN。病例納入標準:①孕期于本院按時產(chǎn)檢且在本院生產(chǎn);②母體為O型血,且存在與丈夫ABO不合情況;③分娩時孕周在36周以上(含36周);④單胎妊娠且分娩時未出現(xiàn)宮內(nèi)窘迫、窒息等;⑤完成相應(yīng)母血血型IgG抗體效價檢測以及臍血血清檢測,新生兒出生后進行三項溶血檢查。排除標準:①新生兒除A、B、AB外其他血型,有其他同族免疫溶血;②新生兒合并其他感染疾病或存在敗血癥等血液系統(tǒng)疾病;③合并先天發(fā)育不良、先天心臟疾病、免疫功能異常等;④母體存在兩個以上性伴侶;⑤臨床資料缺失或檢查結(jié)果不清晰。

1.2 檢測方法

1.2.1 母血血型IgG抗體效價檢測:采用微柱凝膠技術(shù)在分娩前對孕晚期產(chǎn)婦進行血清IgG抗-A(B)抗體效價檢測,具體操作步驟如下:于清晨空腹狀態(tài)下取受試者靜脈血6 ml,3000 r/min離心15 min,取上層血清并加入樣本釋放劑,混合搖勻,37 ℃水浴30 min破壞血清內(nèi)免疫球蛋白M抗體,將標本用0.9%氯化鈉溶液倍比稀釋(1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512),配置標準紅細胞懸液加入抗人球蛋白檢測卡,將倍比稀釋后標本加入該卡,于37 ℃孵育15 min,取出后1500 r/min離心9 min。結(jié)果≥1∶64可擬定為HDN陽性。

1.2.2 臍血血清CRP、Hb檢測:取新生兒臍帶血3 ml,3000 r/min離心10 min,選全自動免疫及時檢測分析儀(貝克曼庫爾特有限公司,型號:UniCel DxI800)以乳膠增強透射免疫比濁法測CRP水平,試劑盒選儀器配套;選全自動血液分析儀(雷度米特醫(yī)療設(shè)備有限公司,型號:ABL90)以比色法測Hb水平。

2 結(jié) 果

2.1 107例新生兒靜脈血溶血三項試驗結(jié)果分析 在依據(jù)納入排除規(guī)則選取的107例新生兒中,總共有50例確診為ABO-HDN,發(fā)生率為46.73%。母嬰血型為O-A型、O-B型、O-AB型的新生兒分別有49、46、12例,通過溶血三項試驗結(jié)合臨床體征確診為ABO-HDN的分別有24例(54.55%)、22例(53.66%)、4例(23.53%)。見表1。

表1 107例新生兒靜脈血溶血三項試驗結(jié)果分析[例(%)]

2.2 兩組受試者IgG抗體效價檢測結(jié)果比較 根據(jù)新生兒出生后3～5 d外周靜脈血溶血三項結(jié)果將其分為ABO-HDN組(50例)與無ABO-HDN組(57例)。兩組IgG抗體效價檢測結(jié)果比較有統(tǒng)計學(xué)差異,ABO-HDN組患兒IgG抗體效價≥1∶64的占比顯著高于無ABO-HDN組受試者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組受試者IgG抗體效價檢測結(jié)果比較[例(%)]

2.3 兩組血清CRP、Hb檢測結(jié)果比較 ABO-HDN組臍血血清CRP水平顯著高于無ABO-HDN組,Hb水平顯著低于無ABO-HDN組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組血清CRP、Hb檢測結(jié)果比較

2.4 相關(guān)指標診斷ABO-HDN的ROC曲線分析 對IgG抗體效價檢測、血清CRP、Hb水平做ROC曲線分析可知,IgG抗體效價檢測、血清CRP、Hb水平診斷ABO-HDN的AUC為0.861、0.868、0.910,截斷值為1.500、0.305 mg/L、127.955 g/L,見表4。

表4 相關(guān)指標診斷ABO-HDN的ROC曲線分析

3 討 論

ABO-HDN發(fā)生于胎兒時期,由于母親與胎兒血型不合,胎兒擁有母體不具備的父源性血型抗原,當這種抗原經(jīng)胎盤進入母體后,母體產(chǎn)生抵抗性血型IgG抗體,這種抗體與胎兒紅細胞表面抗原結(jié)合后會被溶酶體破壞從而導(dǎo)致溶血[10]。截至目前,人類已知的400多種血型抗原中,有60多種可發(fā)生溶血反應(yīng),其中以ABO血型不合導(dǎo)致的HDN最為常見。據(jù)統(tǒng)計,約有20%的新生兒有ABO血型不合的情況[11-12]。黃疸是ABO-HDN的典型病癥,與其他原因?qū)е碌狞S疸相比,ABO-HDN引發(fā)的黃疸出現(xiàn)時間早且進展快,極易發(fā)展為高膽紅素血癥,嚴重危害新生兒健康[13-14]。臨床治療ABO-HDN方式較多,妊娠期血液抗體干預(yù)、宮內(nèi)血管內(nèi)輸血等對降低溶血風險均有一定作用,但想要最大程度地改善ABO-HDN干預(yù)效果,還需要盡可能地實現(xiàn)對該病的早期診斷。

溶血三項實驗是臨床應(yīng)用頻率最高且最為精準的ABO-HDN診斷方案,但其多用于出生3～5 d胎兒,對部分病情進展較快患兒而言,由于其診斷較晚,在接受人工干預(yù)前患兒可能已經(jīng)產(chǎn)生了不可逆的神經(jīng)功能損害[15]。在本研究中,溶血三項實驗結(jié)果顯示,依據(jù)納入排除規(guī)則選取的107例新生兒中,共有50例確診為ABO-HDN,發(fā)生率為46.73%。母嬰血型為O-A型、O-B型、O-AB型分別有49、46、12例,通過溶血三項試驗結(jié)合臨床體征確診為ABO-HDN的分別有24例(54.55%)、22例(53.66%)、4例(23.53%)。本研究結(jié)果顯示,ABO-HDN組、無ABO-HDN組IgG抗體效價檢測結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)差異,ABO-HDN組患兒IgG抗體效價≥1∶64的占比為88.00%顯著高于無ABO-HDN組受試者的15.79%。這說明IgG抗體效價與ABO-HDN有緊密聯(lián)系,原因為母體受到胎兒紅細胞產(chǎn)生的外源性抗原刺激時可出現(xiàn)IgG升高,因此在多數(shù)情況下,IgG抗體效價升高意味著新生兒出現(xiàn)ABO-HDN的風險升高[16-17]。

此外,在本研究中,ABO-HDN組臍血血清CRP水平為(0.46±0.21)mg/L顯著高于無ABO-HDN組,Hb水平為(110.62±18.37)g/L顯著低于無ABO-HDN組,這說明臍血血清CRP水平與Hb水平同樣與ABO-HDN發(fā)病有一定聯(lián)系,這與劉娟等[8]研究所得結(jié)論一致。推測原因在于當胎兒出現(xiàn)ABO-HDN時,紅細胞大量、迅速被破壞,紅細胞破裂后Hb溢出至血液中,無法與合適珠蛋白結(jié)合從而變?yōu)橛坞x的Hb,此時游離的Hb無法被檢測到,因此在臍帶血中檢測的Hb水平會出現(xiàn)相應(yīng)降低[18-19]。CRP作為臨床常用炎癥指標,多在機體感染、創(chuàng)傷時出現(xiàn)異常表達。目前關(guān)于CRP與ABO-HDN發(fā)病的關(guān)系尚未研究透徹,但有學(xué)者認為,當母體IgG抗體經(jīng)胎盤進入胎兒血液循環(huán)時,單核-巨噬細胞系統(tǒng)開始工作,免疫與調(diào)節(jié)免疫功能被激發(fā),CRP可以出現(xiàn)快速升高[20]。

綜上所述,與無ABO-HDN新生兒相比,ABO-HDN患兒IgG抗體效價以及血清CRP、Hb存在異常表達,采用微柱凝膠技術(shù)檢測血型IgG抗體效價以及檢測臍血血清CRP、Hb對診斷早期ABO-HDN有一定臨床參考價值。本研究不足之處在于納入樣本較少,且來源單一,未來還需開展大樣本,多中心研究證實結(jié)論。