周健飛 陳泰起 龍尚麗 劉曉英

糖尿病腎病是糖尿病常見(jiàn)并發(fā)癥，患者腎小球高濾過(guò)和高灌注，引發(fā)腎小球?yàn)V過(guò)率降低、蛋白尿和血壓升高，可進(jìn)一步發(fā)展為終末期腎病或增加心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重影響患者病情和預(yù)后［1?2］。早期確定2 型糖尿病腎病病情加重和不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)對(duì)其有效治療干預(yù)具有重要指導(dǎo)意義。白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）?17A 為炎癥密切相關(guān)因子，已有研究表明其參與糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展［3］。而微小核糖核酸（Micro Ribonucleic Acid，miR）?342?3p 在糖尿病腎病中的表達(dá)水平下調(diào)，且參與腎小管上皮細(xì)胞凋亡、腎間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)累及以及纖維化過(guò)程［4］。因此，IL?17A、miR?342?3p均可能與2 型糖尿病腎病密切相關(guān)。本研究通過(guò)對(duì)119例2 型糖尿病患者進(jìn)行研究，進(jìn)一步確定2 型糖尿病患者血清IL?17A、miR?342?3p與其腎病嚴(yán)重程度及預(yù)后指標(biāo)的關(guān)系，并首次分析血清IL?17A 和miR?342?3p水平聯(lián)合檢測(cè)的預(yù)測(cè)早期預(yù)測(cè)效能，可優(yōu)化2 型糖尿病腎病病情和不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方案，指導(dǎo)臨床有效治療和預(yù)后改善，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至2021 年12 月東方市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科收治的119 例2 型糖尿病患者為研究對(duì)象。根據(jù)糖尿病腎病發(fā)生情況將患者分為對(duì)照組（單純2 型糖尿病，n=49）和糖尿病腎病組（發(fā)生糖尿病腎病，n=70），并根據(jù)白蛋白尿分期和CKD 分期并將糖尿病腎病組患者分為G1A2 組（n=12）、G2A2 組（n=14）、G3A3 組（n=17）、G4A3組（n=16）和G5A3 組（n=11）等5 個(gè)亞組。對(duì)照組中男性33 例（67.35%），女性16 例（32.65%）；平均年齡（52.87±11.73）歲，平均身體質(zhì)量指數(shù)（24.86±3.27）kg/m2；平均糖尿病病程（107.58±9.46）個(gè)月。糖尿病腎病組中男性45 例（%），女性25 例（%）；平均年齡（52.87±11.46）歲，平均身體質(zhì)量指數(shù)（24.78±3.26）kg/m2；平均糖尿病病程（107.85±11.46）個(gè)月。兩組性別、平均年齡、平均身體質(zhì)量指數(shù)均糖尿病病程等基線資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩組具可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)制定的《中國(guó)2 型糖尿病防治指南（2017 年版）》診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②成年患者，性別不限；③所有患者均知情同意，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并原發(fā)性腎臟疾病患者；②合并先天性腎臟畸形者；③合并惡性腫瘤者；④合并自身免疫性疾病者；⑤合并急慢性感染者；⑥合并肺、肝臟或縱隔等纖維化疾病者；⑦同時(shí)參與其他研究者。

1.2 方法

三組患者入組24 h內(nèi)后均取空腹肘靜脈血3 mL，以5 000 rpm、3 cm 半徑、4℃進(jìn)行離心10 min 取上層血清常規(guī)冷藏待測(cè)。采用東芝40 型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血肌酐和血清IL?17A 水平，試劑盒、質(zhì)控品及標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自武漢菲恩生物科技有限公司，由同一檢驗(yàn)人員完成相關(guān)檢測(cè)操作。并采用RT?PCR 法檢測(cè)血清miR?342?3p水平，常規(guī)采用Trizol 法提取總RNA，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT?PCR）法合成cDNA，以U6為內(nèi)參，引物序列如下：miR?342?3p上游引物：5′?ACACTCCAGCT?GGGAGGGGGTGCTATCTGTGAT?3′，miR?342?3p下游引物：5′?CTCAACTGGTGTCGTGGA?3′；U6上游引物：5′?CTCGCTTCGGCAGCACA?3′，U6下游引物：5′?AACGCTTCACGAATTTGCGT?3′。采用10 μL 反應(yīng)體系（包括5 μL 的2×SYBR Premix，1 μL 的cDNA 模板，0.5 μL 上游引物，0.5 μL 下游引物，3 μL 的ddH2O）反應(yīng)條件如下：95℃30 s，95℃30 s，65℃20 s，72℃30 s，共40 個(gè)循環(huán)。根據(jù)RT?PCR 循環(huán)閾值（Ct），將目的miR?342?3p與U6基因相比，以2?ΔΔCt法對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

三組患者入組24 h 內(nèi)均取尿液標(biāo)本，由同一檢驗(yàn)人員通過(guò)特種蛋白檢測(cè)儀采用散射比濁法檢測(cè)尿白蛋白水平，并結(jié)合血肌酐水平，計(jì)算尿白蛋白/肌酐比率（UACR），同時(shí)根據(jù)患者血肌酐水平結(jié)合年齡、性別、身高、體重等計(jì)算腎小球?yàn)V過(guò)率。糖尿病腎病患者均隨訪至2022 年11 月30 日，每3 個(gè)月隨訪一次，通過(guò)到院門診隨訪，統(tǒng)計(jì)患者隨訪期間終末期腎?。⊿cr≥6 mg/dL、GFR <10 mL/min 或需要進(jìn)行持續(xù)3 個(gè)月以上的維持性腎臟替代治療）發(fā)生狀況，從而確定腎存活（無(wú)終末期腎病發(fā)生）情況，并根據(jù)隨訪期間腎存活情況將患者分為腎存活組（n=49）和腎非存活組（n=21）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用IBM Statistics SPSS 21 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料均符合正態(tài)分布，以（）表示，兩獨(dú)立樣本均數(shù)t檢驗(yàn)的，多組間比較采用F分析并通過(guò)SNK?q檢驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步兩兩比較。采用Pearson 相關(guān)法分析血清IL?17A、miR?342?3p水平與UACR和腎小球?yàn)V過(guò)率的關(guān)系。采用Logistics 回歸模型分析血清IL?17A、miR?342?3p水平對(duì)2 型糖尿病腎病預(yù)后的影響。繪制ROC 曲線分析血清IL?17A、miR?342?3p水平對(duì)2 型糖尿病腎病預(yù)后的預(yù)測(cè)效能。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同糖尿病腎病病情患者血清IL?17A、miR?342?3p 水平比較

不同糖尿病腎病病情患者血清IL?17A、miR?342?3p水平比較：G5A3 組

表1 不同糖尿病腎病病情患者血清IL?17A、miR?342?3p水平比較（）Table 1 Comparison of serum IL?17A and miR?342?3p levels in patients with different diabetes nephropathy severity（）

表1 不同糖尿病腎病病情患者血清IL?17A、miR?342?3p水平比較（）Table 1 Comparison of serum IL?17A and miR?342?3p levels in patients with different diabetes nephropathy severity（）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與G1A2 組比較，bP<0.05；與G2A2 組比較，cP<0.05；與G3A4 組比較，dP<0.05；與G4A3 組比較，eP<0.05。

2.2 血清IL?17A、miR?342?3p 水平與UACR 和腎小球?yàn)V過(guò)率的關(guān)系分析

Pearson 相關(guān)分析結(jié)果顯示，患者血清IL?17A、miR?342?3p水平與UACR 均呈負(fù)相關(guān)（r=-0.879，-0.883，均P<0.001），但與其腎小球?yàn)V過(guò)率相關(guān)關(guān)系不明顯（r=0.338，0.286，P=0.592，0.704）。

2.3 腎存活組和腎非存活組基本資料、血清IL?17A、miR?342?3p 水平比較

腎存活組和腎非存活組性別、年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、糖尿病病程等比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）。腎非存活組的血清IL?17A、miR?342?3p水平均低于腎存活組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。見(jiàn)表2。

表2 腎存活組和腎非存活組基本資料、血清IL?17A、miR?342?3p 水平比較［n（%），（）］Table 2 Comparison of basic data，serum IL?17A，miR?342?3p levels between survival group and non survival group［n（%），（）］

表2 腎存活組和腎非存活組基本資料、血清IL?17A、miR?342?3p 水平比較［n（%），（）］Table 2 Comparison of basic data，serum IL?17A，miR?342?3p levels between survival group and non survival group［n（%），（）］

2.4 血清IL?17A、miR?342?3p 水平對(duì)2 型糖尿病腎病預(yù)后的影響分析

Logistics 回歸模型分析結(jié)果顯示，血清IL?17A和miR?342?3p水平均可影響患者預(yù)后（均P<0.001）。見(jiàn)表3。

表3 血清IL?17A、miR?342?3p 水平對(duì)2 型糖尿病腎病預(yù)后的影響分析Table 3 Impact of serum IL?17A and miR?342?3p levels on the prognosis of type 2 diabetes nephropathy

2.5 血清IL?17A、miR?342?3p 水平對(duì)2 型糖尿病腎病預(yù)后的預(yù)測(cè)效能分析

ROC 曲線分析結(jié)果顯示，2 型糖尿病腎病患者血清IL?17A 和miR?342?3p水平的預(yù)后預(yù)測(cè)效能較好，其中以兩者聯(lián)合預(yù)測(cè)2 型糖尿病腎病患者預(yù)后效能最佳。見(jiàn)表4、圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

表4 血清IL?17A、miR?342?3p 水平對(duì)2 型糖尿病腎病預(yù)后的預(yù)測(cè)效能Table 4 Predictive efficacy of serum IL?17A and miR?342?3p levels on the prognosis of type 2 diabetes nephropathy

3 討論

由于糖尿病腎病早期的癥狀隱匿，常無(wú)法及時(shí)發(fā)現(xiàn)而延誤治療時(shí)機(jī)，患者療效和預(yù)后情況均不理想［6?8］。本研究中，2 型糖尿病患者的UACR存在不同程度的升高，其中糖尿病腎病患者超過(guò)一半，提示2 型糖尿病患者腎損傷明顯，病情較為嚴(yán)重，而在隨訪1～4 年期間，有30%的患者發(fā)展為終末期腎病，提示2 型糖尿病腎病患者病情和預(yù)后均不太理想，急需改善。對(duì)2 型糖尿病腎病患者病情和預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估在其治療干預(yù)中具有重要指導(dǎo)意義。

糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展涉及多種病理機(jī)制，其中糖脂代謝紊亂引發(fā)的炎癥反應(yīng)是糖尿病腎病的重要機(jī)制［9］。IL?17A 是IL?17 細(xì)胞因子家族成員，主要由Th17 細(xì)胞產(chǎn)生，是炎癥密切相關(guān)因子，可通過(guò)上調(diào)粘附分子、趨化因子和細(xì)胞因子表達(dá)、募集白細(xì)胞、調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞、抗感染等，多數(shù)研究認(rèn)為其通過(guò)促炎作用參與疾病發(fā)生發(fā)展，但也有研究認(rèn)為其水平降低在糖尿病腎病中具有保護(hù)作用［10?11］。本研究結(jié)果顯示，出現(xiàn)腎損傷患者具有更低水平的血清IL?17A，且腎損傷嚴(yán)重患者的血清IL?17A 水平明顯更低，且出現(xiàn)終末期腎病的2 型糖尿病腎病患者具有更低的血清IL?17A水平，提示IL?17A 參與了2 型糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，與2 型糖尿病腎病病情和預(yù)后均密切相關(guān)，其預(yù)測(cè)2 型糖尿病腎病患者腎臟預(yù)后的曲線下面積高達(dá)0.880，敏感度和特異度均較高，可作為其預(yù)后評(píng)估參考指標(biāo)。

微小RNA（miRNA）穩(wěn)定性強(qiáng)且目前其檢測(cè)技術(shù)成熟，其相關(guān)檢測(cè)已成為疾病生物標(biāo)志物研究的前沿?zé)狳c(diǎn)［12］。miR?342?3p屬于miR?342 家族，其定位于14 號(hào)染色體14q32 上，其既往研究多數(shù)集中于腫瘤疾病中［13］。龔化等［14］的研究中，LncRNANEAT1 通過(guò)互補(bǔ)結(jié)合miR?342?3p上調(diào)CADM1基因從而抑制細(xì)胞的增殖和侵襲。Jiang等［15］的研究發(fā)現(xiàn)miR?342?3p可靶向SOX6 抑制糖尿病腎病的腎間質(zhì)纖維化進(jìn)程。韓敬等［4］認(rèn)為miR?342?3p可能作為糖尿病腎病輔助診斷標(biāo)志物。本研究檢測(cè)了2 型糖尿病不同腎損傷患者的血清miR?342?3p相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示，隨著病情嚴(yán)重程度的加重，患者的血清miR?342?3p相對(duì)表達(dá)量有不同程度的降低，Pearson 相關(guān)分析證實(shí)了患者血清miR?342?3p相對(duì)表達(dá)量與2 型糖尿病腎病嚴(yán)重程度為負(fù)相關(guān)關(guān)系。本研究中，出現(xiàn)終末期腎病的2 型糖尿病腎病患者的血清miR?342?3p相對(duì)表達(dá)量更低，血清miR?342?3p可明顯影響其腎臟預(yù)后，用于其腎臟預(yù)后判斷的ROC 曲線下面積高達(dá)0.845，可作為其預(yù)后評(píng)估參考指標(biāo)。且本研究中，血清IL?17A、miR?342?3p水平兩者聯(lián)合檢測(cè)具有更高的2 型糖尿病腎病預(yù)后效能，對(duì)于血清IL?17A、miR?342?3p水平明顯降低的2 型糖尿病患者需進(jìn)一步確定其腎損傷情況，對(duì)于IL?17A水平低于333.005 pg/mL、血清miR?342?3p水平低于2.100 的2 型糖尿病腎病患者，需警惕其腎臟不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)，加強(qiáng)病情監(jiān)測(cè)和及時(shí)調(diào)整有效治療方案，以期改善疾病療效和預(yù)后。

綜上所述，血清IL?17A、miR?342?3p水平均可用于2 型糖尿病腎病病情和預(yù)后評(píng)估，從而指導(dǎo)其臨床有效干預(yù)以改善療效和患者預(yù)后。