王 暉,沈文浩,王 正,黃翼然,2

(1.上海國際醫(yī)學(xué)中心泌尿外科,上海 200120;2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院泌尿科,上海 200127)

膀胱癌(bladder cancer,BC)是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計,世界范圍內(nèi)每年新增膀胱癌573 278例。男性發(fā)生膀胱癌的概率是女性的3.5倍,膀胱癌發(fā)病率在男性惡性腫瘤中位列第7位[1]。

膀胱癌臨床診斷和隨訪主要依靠有創(chuàng)的膀胱鏡檢查,無創(chuàng)的尿脫落細(xì)胞檢查也是重要的診斷方法,在臨床應(yīng)用已有半個多世紀(jì),主要對高級別尿路上皮癌有臨床診斷價值,對低級別尿路上皮癌則診斷率低。就膀胱癌來說,尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查的特異性很高,可達(dá)95%～100%,在膀胱結(jié)石、多瘤病毒感染、化療、放療情況下可能出現(xiàn)假陽性[2]。除了病理醫(yī)師的診斷水平外,尿液采集標(biāo)本的質(zhì)量也會嚴(yán)重影響該檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性[3]。為提升脫落細(xì)胞學(xué)檢查質(zhì)控水平,2021年12月-2022年3月,我們采用一種新型膀胱癌檢測試劑盒對尿液標(biāo)本進(jìn)行處理,并使用尿液細(xì)胞全顯染色技術(shù)進(jìn)行制片、染色、讀片,驗證該技術(shù)對于尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查的改善效果,臨床結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料本研究共入組患者56例,其中男性46例(82.1%),女性10例(17.9%),年齡范圍25～91歲,平均年齡(65.0±12.9)歲。其中42例患者臨床表現(xiàn)為肉眼無痛性全程血尿而接受膀胱鏡檢查,14例患者經(jīng)病理確診為非肌層浸潤性膀胱癌并已接受膀胱腫瘤電切術(shù)、術(shù)后定期接受膀胱鏡檢查隨訪。56例患者均留取了尿液進(jìn)行尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查,并接受膀胱鏡檢查,術(shù)中若發(fā)現(xiàn)膀胱新生物,均留取標(biāo)本進(jìn)行病理學(xué)檢查。

1.2 試劑與儀器尿液細(xì)胞檢測處理試劑盒(包括泰康特制細(xì)胞保存液、尿液收集瓶和申請單)購自湖北泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司(Hubei Taikang Medical Equipment CO.LTD),通過尿液細(xì)胞學(xué)全顯染色技術(shù)對尿液中細(xì)胞進(jìn)行固定、制片、染色、閱片。

1.3 研究方法所有患者均在膀胱鏡檢查前留取尿液標(biāo)本。具體留取標(biāo)本方法為:檢查當(dāng)天留取晨尿后第一次排尿尿液300 mL,其中150 mL加入泰康特制細(xì)胞保存液作為實驗組,另150 mL作為對照組不做任何處理。對照組及實驗組樣本均進(jìn)一步分為3個亞組、每亞組各50 mL,分別于留取樣本的當(dāng)天(Day 0)、留取樣本后第3天(Day 3)和留取樣本后第7天(Day 7)進(jìn)行固定、制片、染色后,由經(jīng)驗豐富的病理科專家在顯微鏡下鑒定細(xì)胞樣本(圖1)。所有樣本均在4 ℃恒溫、避光條件下保存。

1.4 觀察指標(biāo)尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果分為4類:良性、非典型尿路上皮細(xì)胞、疑似尿路上皮癌、高級別尿路上皮癌,將良性和非典型尿路上皮細(xì)胞歸為低危組,疑似尿路上皮癌和高級別尿路上皮癌歸為高危組。若膀胱鏡及病理活檢結(jié)果為惡性,尿液脫落細(xì)胞學(xué)分組為高危組,或膀胱鏡及病理活檢結(jié)果為良性、尿液脫落細(xì)胞學(xué)分組為低危組,則定義為新方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確,反之為不準(zhǔn)確。

本研究以膀胱鏡及病理活檢結(jié)果作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)尿液脫落細(xì)胞的檢查的結(jié)果,分別計算實驗組和對照組在Day 0、Day 3、Day 7時間點上診斷敏感性、特異性和準(zhǔn)確性,其中敏感性=真陽性/(真陽性+假陰性),特異性=真陰性/(真陰性+假陽性),準(zhǔn)確性=(真陽性+真陰性)/總病例數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 25.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理。通過χ2檢驗分析兩組間敏感性、特異性,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

入組56名患者均接受膀胱鏡檢查,其中14名患者檢查結(jié)果無異常,42名患者膀胱鏡檢查結(jié)果示膀胱壁新生物;將膀胱壁新生物取活檢并進(jìn)行病理檢查,結(jié)果示3名患者結(jié)果陰性,39名患者確診為尿路上皮癌。

對患者尿液標(biāo)本使用尿液細(xì)胞檢測處理試劑盒+全顯染色技術(shù)進(jìn)行尿液脫落細(xì)胞學(xué)檢查。由于存放過程中標(biāo)本被微生物污染或因細(xì)胞結(jié)構(gòu)、形態(tài)嚴(yán)重改變無法進(jìn)行讀片的樣本將被剔除出本研究。因此,Day 0 實驗組56例樣本,對照組56例樣本;Day 3 實驗組54例樣本,對照組50例樣本;Day 7 實驗組53例樣本,對照組43例樣本。

結(jié)果如表1所示,Day 3與Day 7實驗組敏感性顯著優(yōu)于對照組(P<0.05),Day 0對照組及實驗組的敏感性、特異性無顯著差異。

表1 尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查對兩組標(biāo)本在不同時間點檢出尿路上皮癌的敏感性、特異性

表2展示的是該研究中各時間點試驗組和對照組的診斷準(zhǔn)確性。Day 0實驗組、對照組診斷準(zhǔn)確率分別為83.9%和80.4%(P=0.622);Day 3實驗組、對照組診斷準(zhǔn)確率分別為77.8%和60.0%(P=0.049);Day 7實驗組和對照組診斷準(zhǔn)確率分別為71.7%和44.2%(P=0.006)。

表2 尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查對兩組標(biāo)本在不同時間點檢出尿路上皮癌的準(zhǔn)確性

3 討 論

目前膀胱鏡結(jié)合病理活檢是診斷初發(fā)、復(fù)發(fā)膀胱癌的金標(biāo)準(zhǔn)[4]。然而作為一種有創(chuàng)性檢查,膀胱鏡檢查有一定不適感,相當(dāng)一部分患者對于膀胱鏡較為排斥,從而可能錯過得到早期診斷的機(jī)會、增加病情的風(fēng)險。尿液細(xì)胞學(xué)檢查是一種高效的無創(chuàng)膀胱癌篩查手段,尤其是針對高級別尿路上皮癌具有良好的敏感性[5]。高特異性是細(xì)胞學(xué)檢查的特點,尿液細(xì)胞學(xué)檢查陽性則可有力提示尿路任何一處存在惡性腫瘤。

在實際應(yīng)用中,作為膀胱鏡的輔助檢查手段能夠有效彌補(bǔ)膀胱鏡檢查的不足[6]。對于T1G3高危淺表性膀胱癌,膀胱原位癌以及上尿路的尿路上皮癌,尿脫落細(xì)胞檢查陽性率高,可以為臨床診斷提供重要幫助[5,7]。對于膀胱腫瘤術(shù)后復(fù)查隨訪患者,可以將尿液細(xì)胞學(xué)檢查作為進(jìn)行膀胱鏡檢查前的預(yù)篩方法,或者作為補(bǔ)充檢查手段,更為頻繁地進(jìn)行隨訪。而對于體檢或偶發(fā)血尿患者,留取尿液進(jìn)行脫落細(xì)胞檢查,能夠低成本、簡單便捷地在大規(guī)模人群中進(jìn)行膀胱癌篩查。

目前較常見的膀胱癌無創(chuàng)檢驗方法如尿脫落細(xì)胞、尿核基質(zhì)蛋白等,大多需要患者現(xiàn)場留取新鮮樣本以保證檢測的準(zhǔn)確性,而且每例患者提供至少提供3份尿液標(biāo)本。而在實際應(yīng)用中,許多血尿患者或膀胱癌復(fù)診患者由于基礎(chǔ)情況所限以及體力狀況不佳,或是各種客觀原因,標(biāo)本的質(zhì)量難以完全達(dá)到要求。相應(yīng)的需求是延長尿液標(biāo)本保存期限、更好保存尿液中完整細(xì)胞、在短時間內(nèi)(留取標(biāo)本后24 h)提高膀胱癌檢出率,或是改善長時間(24～72 h)尿細(xì)胞學(xué)檢查的特異性和敏感性,并且實現(xiàn)尿液標(biāo)本的遠(yuǎn)程郵寄等進(jìn)而提高患者對檢查的依從性。

經(jīng)過對實際情況的考察,考慮到大多數(shù)患者標(biāo)本可在1～3 d內(nèi)通過郵寄到指定醫(yī)學(xué)中心后固定、制片后接受檢查,故本研究中著重研究留取標(biāo)本后當(dāng)天、第3天的保存情況,并考慮到極端情況,也進(jìn)行了留取標(biāo)本后第7天樣本細(xì)胞的檢測。結(jié)果顯示,第1天、第3天、第7天實驗組敏感性、特異性均優(yōu)于對照組,證實加入保存液后脫落細(xì)胞診斷準(zhǔn)確率有明顯提升。并且第3天、第7天兩組診斷準(zhǔn)確性有明顯差異、實驗組診斷敏感性優(yōu)勢明顯,但就診斷的特異性而言,兩組之間各時間點差異不大,原因考慮如下:①腫瘤細(xì)胞形態(tài)具有較明顯的特征性,如核質(zhì)比例大、染色深,核仁增大、增多且分裂象多見等,與正常尿路上皮細(xì)胞壞死或凋亡形態(tài)截然不同;②本研究中病理學(xué)讀片專家具有豐富經(jīng)驗,故本研究總體診斷特異性較高;③兩組中影響診斷的主要因素為細(xì)胞死亡、降解、細(xì)菌污染等因素,對最終診斷真陽性率有一定影響,但通常較少出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。

在目前膀胱癌發(fā)病率逐年增高、新冠疫情壓力不容忽視的情況下,本膀胱癌尿細(xì)胞學(xué)檢測系統(tǒng)具有明顯診斷優(yōu)勢,可作為于膀胱鏡檢查前的輔助檢查手段對血尿患者及膀胱癌復(fù)發(fā)高危人群進(jìn)行檢查,也可作為膀胱癌篩查手段對大樣本人群進(jìn)行預(yù)篩,以實現(xiàn)膀胱癌早診斷、早治療,以提高膀胱癌預(yù)后,改善該人群生活質(zhì)量,減輕社會負(fù)擔(dān)的最終目的。但本研究納入研究的患者數(shù)目仍較少,未來需要大規(guī)模多中心的臨床研究來進(jìn)一步確定該試劑盒在不同人群中應(yīng)用的可靠性。