潘越 曲婷婷 李宏 單正宜 趙鵬 周璇

［摘要］ 目的 探討Anosmin－1（ANOS－1）在進(jìn)展期胃腺癌組織中的表達(dá)變化及其與胃腺癌病人臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測118例胃腺癌及相應(yīng)癌旁組織中ANOS－1的表達(dá)水平，分析ANOS－1在99例進(jìn)展期胃腺癌組織中的表達(dá)與病人臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系；另從中隨機(jī)選取40例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的進(jìn)展期胃腺癌病人，檢測相應(yīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中ANOS－1的表達(dá)水平。

結(jié)果 與相應(yīng)癌旁組織相比，ANOS－1在118例胃腺癌組織中的表達(dá)水平顯著升高（Z=－8.278，P<0.001）。ANOS－1的表達(dá)水平與進(jìn)展期胃腺癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯、TNM分期相關(guān)（χ2=6.558～26.455，P<0.05）。與進(jìn)展期胃腺癌原發(fā)灶相比，相應(yīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中ANOS－1的表達(dá)水平顯著升高（Z=－5.786，P<0.001）。ANOS－1高表達(dá)的進(jìn)展期胃腺癌病人的總生存期和無病生存期均較低表達(dá)病人明顯縮短（P=0.004、0.002）；在浸潤深度為T3～T4、脈管侵犯陰性以及TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的病人中，ANOS－1表達(dá)水平越高，總生存期越短。Cox多因素分析顯示，ANOS－1表達(dá)水平是影響進(jìn)展期胃腺癌病人總生存期和無病生存期的獨(dú)立預(yù)后因素。

結(jié)論 ANOS－1在進(jìn)展期胃腺癌組織中表達(dá)增強(qiáng)可能與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后不良有關(guān)，是進(jìn)展期胃腺癌病人的獨(dú)立預(yù)后因素。

［關(guān)鍵詞］ 胃腫瘤；腺癌；Anosmin－1；疾病特征；預(yù)后

［中圖分類號(hào)］ R735.2;R365

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］ A

［文章編號(hào)］ 2096－5532（2023）02－0168－06

doi：10.11712/jms.2096－5532.2023.59.058

［開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）］

［ABSTRACT］ Objective To investigate the change in anosmin－1 （ANOS－1） expression in advanced gastric adenocarcinoma， and its relationship with clinicopathological features and prognosis of patients.

Methods Immunohistochemistry was used to determine the expression of ANOS－1 in 118 cases of gastric adenocarcinoma and corresponding paracancerous tissues. The relationship of ANOS－1 expression with the clinicopathological features and prognosis of patients was analyzed in 99 cases of advanced gastric adenocarcinoma. In addition， 40 patients with advanced gastric adenocarcinoma and lymph node metastasis were randomly selected from these patients， and the expression of ANOS－1 in the corresponding lymph node metastasis was measured.

Results Compared with corresponding paracancerous tissues， gastric adenocarcinoma tissues had a significantly higher expression level of ANOS－1 （Z=-8.278，P<0.001）. The expression level of ANOS－1 was associated with the depth of invasion， lymph node metastasis， vascular invasion， and TNM stage of advanced gastric adenocarcinoma （χ2=6.558-26.455，P<0.05）. Compared with the primary lesions of advanced gastric adenocarcinoma， the corresponding lymph node metastases had a significantly higher expression level of ANOS－1 （Z=-5.786，P<0.001）. Compared with those with low ANOS－1 expression， patients with high ANOS－1 expression had significantly shorter overall survival and disease－free survival （P=0.004，0.002）. In addition， in patients with T3-T4 invasion depth， negative vascular invasion， and TNM stage Ⅲ-Ⅳ， the higher the expression level of ANOS－1， the shorter the overall survival time. The Cox multivariate analysis showed that the expression level of ANOS－1 was an independent prognostic factor affecting the overall survival and disease－free survival of patients with advanced gastric adenocarcinoma.

Conclusion The increased expression of ANOS－1 in advanced gastric adenocarcinoma may be associated with tumor invasion， metastasis， and poor prognosis. ANOS－1 is an independent prognostic factor for advanced gastric adenocarcinoma.

［KEY WORDS］ stomach neoplasms; adenocarcinoma; Anosmin－1; disease attributes; prognosis

胃腺癌是一種威脅人類健康的常見的惡性腫瘤。在我國，胃腺癌是癌癥相關(guān)性死亡的第二大原因。不同地區(qū)的胃腺癌發(fā)病率有較大差異，其中發(fā)病率最高的是東北亞（如日本、韓國和中國）的男性，每10萬人中有69例罹患胃腺癌。由于胃腺癌早期癥狀不明顯而且侵襲轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)，因此預(yù)后較差。胃腺癌的發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移過程涉及一系列分子機(jī)制的改變，但其具體機(jī)制目前尚不十分明確。因此，探討胃腺癌發(fā)生發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制，以及尋找預(yù)后評(píng)估的有效標(biāo)志物具有重要的臨床意義。

Anosmin－1（ANOS－1）是一種由KAL1基因編碼的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）相關(guān)分泌糖蛋白，在早期腦發(fā)育過程中促進(jìn)促性腺激素釋放激素（GnRH）神經(jīng)元從嗅覺基板向下丘腦遷移，影響初級(jí)和次級(jí)嗅覺處理區(qū)域的發(fā)育。有研究結(jié)果表明，ANOS－1與多種惡性腫瘤，如結(jié)腸癌、肺癌和卵巢癌等密切相關(guān)，其異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的生長、轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良有關(guān)。有研究表明，進(jìn)展期胃腺癌病人癌組織中ANOS－1 mRNA和血清中ANOS－1的表達(dá)水平明顯高于正常人群。但該蛋白在進(jìn)展期胃腺癌組織中的表達(dá)情況及與病人預(yù)后的關(guān)系尚未見報(bào)道。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，檢測ANOS－1蛋白在進(jìn)展期胃腺癌及相應(yīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織中的表達(dá)水平，分析其表達(dá)與病人臨床病理特征的關(guān)系及對生存預(yù)后的影響，旨在探討ANOS－1在胃腺癌發(fā)生發(fā)展過程及預(yù)后評(píng)估中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本及其來源

于青島大學(xué)附屬醫(yī)院病理科選取2014—2015年的胃腺癌及相應(yīng)癌旁組織（距腫瘤邊緣≥5 cm，其中慢性淺表性胃炎74例，慢性萎縮性胃炎44例）標(biāo)本118例，其中進(jìn)展期胃腺癌標(biāo)本99例；另從中隨機(jī)選取40例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的進(jìn)展期胃腺癌病人相應(yīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶組織。所有入選病例臨床病理資料均完整，術(shù)前均未接受過放化療及其他相關(guān)治療。臨床分期按AJCC第八版分期標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤分化程度按世界衛(wèi)生組織（WHO）分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)判。對所有99例進(jìn)展期胃腺癌病人定期進(jìn)行生存隨訪，隨訪時(shí)間截至2020年12月31日。本研究經(jīng)青島大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)且所有病人及家屬均知情同意。

1.2 組織芯片制作

所有胃腺癌及相應(yīng)癌旁組織的切片經(jīng)兩名病理醫(yī)師復(fù)診確認(rèn)后，在對應(yīng)的蠟塊上選擇明確的癌組織及相應(yīng)癌旁組織的部位；用孔徑為2 mm細(xì)針對受體蠟塊進(jìn)行打孔，在供體蠟塊標(biāo)記的相應(yīng)部位采集組織芯，將其移至受體蠟塊的孔中，構(gòu)建含有118例胃腺癌及相應(yīng)癌旁組織的組織陣列蠟塊，按4 μm厚度對組織陣列蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片。組織芯片經(jīng)蘇木精－伊紅（HE）染色后，再由病理醫(yī)師確認(rèn)。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

采用PV－6000法對組織芯片切片進(jìn)行染色。蠟塊切片、脫蠟、水化后，滅活內(nèi)源性過氧化物酶，高壓熱抗原修復(fù)（EDTA，pH值＝8.0），滴加ANOS－1抗體（ABN486，Millipore，Darmstadt，Germany， 1∶100），37 ℃孵育2 h，滴加二抗（PV－6000購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），37 ℃孵育30 min，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，封片。以ANOS－1陽性的腦組織作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖溶液（PBS）代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷

ANOS－1的陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，判讀方法和標(biāo)準(zhǔn)參考相關(guān)文獻(xiàn)。按胞質(zhì)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行計(jì)分，兩者分值的乘積為總評(píng)分。總評(píng)分≤2分為低表達(dá)，＞2分為高表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 23.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。胃腺癌組織與相應(yīng)癌旁組織之間以及原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶之間ANOS－1的表達(dá)比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)；采用χ2檢驗(yàn)分析ANOS－1表達(dá)與病人臨床病理特征的關(guān)系；采用Kaplan－Meier生存分析法（Log－rank檢驗(yàn)）進(jìn)行生存分析；進(jìn)展期胃腺癌病人獨(dú)立預(yù)后因素分析應(yīng)用Cox回歸模型，變量篩選方法采用向前步進(jìn)法（LR）。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ANOS－1在胃腺癌組織及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)比較

胃腺癌及相應(yīng)癌旁組織中ANOS－1主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)（圖1）。在118例胃腺癌組織中，ANOS－1高表達(dá)者75例，低表達(dá)者43例；而在相應(yīng)癌旁組織中，3例呈高表達(dá)，115例呈低表達(dá)。與相應(yīng)癌旁組織相比，ANOS－1在胃腺癌組織中的表達(dá)水平升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=－8.278，P<0.001）。在74例慢性淺表性胃炎癌旁組織中，ANOS－1高表達(dá)者1例，低表達(dá)者73例；在44例慢性萎縮性胃炎癌旁組織中，2例ANOS－1呈高表達(dá)，42例ANOS－1呈低表達(dá)。ANOS－1在不同類型癌旁組織中的表達(dá)差異無顯著性（P＞0.05）。

2.2 ANOS－1在進(jìn)展期胃腺癌原發(fā)灶與相應(yīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)比較

選取40例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的進(jìn)展期胃腺癌標(biāo)本，其中24例ANOS－1在原發(fā)灶中呈高表達(dá)，31例在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中呈高表達(dá)，二者表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=－5.786，P<0.001）。見圖1。

2.3 進(jìn)展期胃腺癌組織中ANOS－1表達(dá)與病人臨床病理特征的關(guān)系

浸潤深度為T3～T4、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有脈管侵犯、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的進(jìn)展期胃腺癌病人癌組織中ANOS－1高表達(dá)率分別顯著高于浸潤深度為T2、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無脈管侵犯、TNM分期為Ⅱ期的病人（χ2=6.558～26.455，P<0.05），ANOS－1表達(dá)水平與病人的性別、年齡、腫瘤大小和分化程度無關(guān)（P＞0.05）。見表1。

2.4 ANOS－1表達(dá)與進(jìn)展期胃腺癌病人術(shù)后生存時(shí)間的關(guān)系

對99例進(jìn)展期胃腺癌病人進(jìn)行生存分析，結(jié)果顯示，ANOS－1高表達(dá)病人的總生存期、無病生存期中位數(shù)分別為35、20個(gè)月，低表達(dá)病人分別為43、35個(gè)月，ANOS－1高表達(dá)病人總生存期和無病生存期較低表達(dá)者更短（P=0.004、0.002）（圖2A～B）。在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的病人中，ANOS－1高表達(dá)病人的總生存期中位數(shù)為32個(gè)月，低表達(dá)病人為43個(gè)月，ANOS－1表達(dá)水平越高總生存期越短（P=0.003）（圖2C）；而在浸潤深度為T3～T4的病人中，ANOS－1高表達(dá)病人的總生存期中位數(shù)為35個(gè)月，低表達(dá)病人的總生存期中位數(shù)為46個(gè)月，ANOS－1表達(dá)水平越高總生

存期越短（P=0.030）（圖2D）；在脈管侵犯陰性的病人中，ANOS－1高表達(dá)病人的總生存期中位數(shù)為40個(gè)月，低表達(dá)病人的總生存期中位數(shù)為44個(gè)月，ANOS－1表達(dá)水平越高總生存期越短（P=0.020）（圖2E）。

2.5 進(jìn)展期胃腺癌病人獨(dú)立預(yù)后影響因素的Cox回歸分析

將進(jìn)展期胃腺癌病人的性別（女=參照）、年齡（<60歲=參照）、分化程度（中分化=參照）、腫瘤大?。ㄖ睆?5 cm=參照）、浸潤深度（T2=參照）、TNM分期（Ⅱ期=參照）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（陰性=參照）、脈管侵犯（陰性=參照）以及ANOS－1表達(dá)（低表達(dá)=參照）等臨床病理特征納入Cox回歸模型，進(jìn)行獨(dú)立預(yù)后影響因素分析。單因素回歸分析結(jié)果表明，ANOS－1表達(dá)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、脈管侵犯和分化程度對進(jìn)展期胃腺癌病人總生存期的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ANOS－1表達(dá)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、脈管侵犯對進(jìn)展期胃腺癌病人無病生存期的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多因素回歸分析結(jié)果表明，ANOS－1表達(dá)水平和TNM分期是影響進(jìn)展期胃腺癌病人總生存期和無病生存期的獨(dú)立預(yù)后因素，ANOS－1高表達(dá)病人的死亡風(fēng)險(xiǎn)和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)為低表達(dá)病人的3.658倍和4.769倍，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期病人的死亡風(fēng)險(xiǎn)和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是TNM分期為Ⅱ期病人的6.749倍和7.294倍。見表2、3。

A：ANOS－1表達(dá)與進(jìn)展期胃腺癌病人總生存期的關(guān)系；B：ANOS－1表達(dá)與進(jìn)展期胃腺癌病人無病生存期的關(guān)系；C：ANOS－1表達(dá)與Ⅲ～Ⅳ期進(jìn)展期胃腺癌病人總生存期的關(guān)系；D：ANOS－1表達(dá)與浸潤深度T3～T4進(jìn)展期胃腺癌病人總生存期的關(guān)系；E：ANOS－1表達(dá)與脈管侵犯陰性進(jìn)展期胃腺癌病人總生存期的關(guān)系。

3 討論

ANOS－1的編碼基因KAL1定位于人染色體Xp22.3上，全長67 kbp，最早由LEGOUIS等于1991年在Kallmann綜合征病人體細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，其編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物為ANOS－1，主要定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，分子量為76 000。在分子結(jié)構(gòu)上，ANOS－1由1個(gè)包含N端信號(hào)肽、富半胱氨酸區(qū)、乳清酸性蛋白樣四－二硫核心的結(jié)構(gòu)域，4個(gè)相鄰的纖連蛋白樣Ⅲ型結(jié)構(gòu)域以及1個(gè)富含組氨酸的C端組成。ANOS－1高表達(dá)于大腦嗅球表面的嗅神經(jīng)層，在視網(wǎng)膜、脊髓和腎臟中也有一定程度表達(dá)。在早期腦發(fā)育過程中ANOS－1促進(jìn)了GnRH神經(jīng)元及嗅球表面嗅鞘細(xì)胞的分化成熟，調(diào)控GnRH神經(jīng)元及嗅鞘細(xì)胞從嗅覺基板向下丘腦的遷移，從而影響初級(jí)和次級(jí)嗅覺處理區(qū)域的發(fā)育。

ANOS－1與腫瘤關(guān)系的相關(guān)研究較少。2009年有研究顯示，ANOS－1在結(jié)腸癌、肺癌和卵巢癌組織中的表達(dá)明顯上調(diào)；2015年KANDA等研究表明，進(jìn)展期胃腺癌組織ANOS－1 mRNA的表達(dá)水平明顯高于相應(yīng)癌旁組織，但該蛋白在進(jìn)展期胃腺癌組織中的表達(dá)情況及其與病人預(yù)后的關(guān)系尚未見報(bào)道。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測結(jié)果顯示，ANOS－1蛋白在胃腺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于相應(yīng)癌旁組織，與上述研究結(jié)果相一致，提示ANOS－1過表達(dá)可能是胃腺癌進(jìn)展過程中發(fā)生的一個(gè)特定分子事件。

有研究結(jié)果顯示，ANOS－1在進(jìn)展期結(jié)腸癌中的表達(dá)隨著臨床分期的提高而逐步增加，在低氧條件下結(jié)腸癌細(xì)胞的ANOS－1表達(dá)水平也明顯提高，并且隨著其表達(dá)水平的提高，腫瘤細(xì)胞的遷移數(shù)量增加。有研究結(jié)果表明，ANOS－1的相關(guān)基因與ITGAV、FOXC2以及NODAL等基因存在著共表達(dá)，而上述基因的蛋白產(chǎn)物是介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞失黏附過程的重要轉(zhuǎn)錄因子。QI等的研究也發(fā)現(xiàn)，ANOS－1蛋白的高表達(dá)會(huì)刺激結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。上述結(jié)果表明，ANOS－1可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲與遷移能力。本研究結(jié)果顯示，ANOS－1在進(jìn)展期胃腺癌組織中的表達(dá)與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯及TNM分期等臨床病理特征存在顯著相關(guān)性，在腫瘤浸潤深度為T3～T4、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有脈管侵犯以及TNM分期晚的病人中ANOS－1的表達(dá)水平更高。本研究還分析了ANOS－1在進(jìn)展期胃腺癌原發(fā)灶與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，與進(jìn)展期胃腺癌原發(fā)灶相比，相應(yīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中ANOS－1的表達(dá)水平顯著升高。這些結(jié)果提示，ANOS－1在胃腺癌侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用，參與了胃腺癌的進(jìn)展過程。但是ANOS－1影響胃腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的可能分子機(jī)制仍需在今后的研究中進(jìn)一步探討。

本研究結(jié)果顯示，進(jìn)展期胃腺癌病人中ANOS－1蛋白高表達(dá)者的總生存期及無病生存期較低表達(dá)者更短。KANDA等的研究結(jié)果也顯示，胃腺癌病人血清ANOS－1表達(dá)水平明顯高于正常人群，且表達(dá)水平越高的病人總生存期及無病生存期越短。本研究結(jié)果還顯示，在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、浸潤深度為T3～T4以及脈管侵犯陰性的進(jìn)展期胃腺癌病人中，ANOS－1表達(dá)水平越高，總生存期越短。提示在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、浸潤深度為T3～T4以及脈管侵犯陰性的進(jìn)展期胃腺癌病人中，ANOS－1高表達(dá)者可能較低表達(dá)者有著更差的預(yù)后，ANOS－1的表達(dá)水平可能有助于臨床工作中對有不同臨床病理特征的胃腺癌病人的預(yù)后情況做出較準(zhǔn)確的判斷。Cox回歸模型分析結(jié)果顯示，ANOS－1表達(dá)水平和腫瘤的TNM分期是影響進(jìn)展期胃腺癌病人術(shù)后總生存期和無病生存期的獨(dú)立預(yù)后因素。以上結(jié)果提示，癌組織中ANOS－1的高表達(dá)與進(jìn)展期胃腺癌預(yù)后差密切相關(guān)。因此，ANOS－1可能成為一種用于評(píng)估進(jìn)展期胃腺癌病人術(shù)后生存期的潛在分子標(biāo)志物。

綜上所述，ANOS－1在進(jìn)展期胃腺癌的發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用，其高表達(dá)與病人術(shù)后預(yù)后不良相關(guān)，ANOS－1在判斷胃腺癌病人的預(yù)后方面有潛在應(yīng)用價(jià)值。但是由于本實(shí)驗(yàn)僅在蛋白層面上對ANOS－1的表達(dá)情況與進(jìn)展期胃腺癌病人臨床病理特征以及預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行探討，并不能對ANOS－1在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中所發(fā)揮的具體生物學(xué)作用及其分子機(jī)制作出更深層次的說明，因此仍需要通過分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法在分子病理層面進(jìn)行進(jìn)一步研究，以便提供新的理論依據(jù)更好地指導(dǎo)胃腺癌的診斷和靶向治療。

［參考文獻(xiàn)］

CHEN W Q， ZHENG R S， BAADE P D， et al. Cancer statis－tics in China， 2015.? CA： A Cancer Journal for Clinicians，2016，66（2）：115－132.

FERLAY J， COLOMBET M， SOERJOMATARAM I， et al. Estimating the global cancer incidence and mortality in 2018： GLOBOCAN sources and methods.? International Journal of Cancer， 2019，144（8）：1941－1953.

SIEGEL R L， MILLER K D， JEMAL A. Cancer statistics， 2016.? CA： A Cancer Journal for Clinicians， 2016，66（1）：7－30.

FERNNDEZ－FERNNDEZ F J， SESMA P. Gastric cancer.? Lancet （London， England）， 2009，374（9701）：1594－1595.

GONZLEZ－MARTNEZ D， KIM S H， HU Y L， et al. Anosmin－1 modulates fibroblast growth factor receptor 1 signaling in human gonadotropin－releasing hormone olfactory neuroblasts through a heparan sulfate－dependent mechanism.? The Journal of Neuroscience： the Official Journal of the Society for Neuroscience， 2004，24（46）：10384－10392.

JIAN B X， NAGINENI C N， MELETH S， et al. Anosmin－1 involved in neuronal cell migration is hypoxia inducible and cancer regulated.? Cell Cycle， 2009，8（22）：3770－3776.

KIM H C， KIM Y S， OH H W， et al. Collagen triple helix repeat containing 1 （CTHRC1） acts via ERK－dependent induction of MMP9 to promote invasion of colorectal cancer cells.? Oncotarget， 2014，5（2）：519－529.

QI L， ZHANG W J， CHENG Z Q， et al. Study on molecular mechanism of ANOS1 promoting development of colorectal cancer.? PLoS One， 2017，12（8）：e0182964.

KANDA M， SUH Y S， PARK D J， et al. Serum levels of ANOS1 serve as a diagnostic biomarker of gastric cancer： a prospective multicenter observational study.? Gastric Can－cer， 2020，23（2）：203－211.

KANDA M， SHIMIZU D， FUJII T， et al. Function and diagnostic value of Anosmin－1 in gastric cancer progression.? International Journal of Cancer， 2016，138（3）：721－730.

KANDA M， SUGIMOTO H， NOMOTO S， et al. Clinical utility of PDSS2 expression to stratify patients at risk for recurrence of hepatocellular carcinoma.? International Journal of Oncology， 2014，45（5）：2005－2012.

KANDA M， SUGIMOTO H， NOMOTO S， et al. B－cell translocation gene 1 serves as a novel prognostic indicator of hepatocellular carcinoma.? International Journal of Oncology， 2015，46（2）：641－648.

LEGOUIS R， HARDELIN J P， LEVILLIERS J， et al. The candidate gene for the X－linked Kallmann syndrome encodes a protein related to adhesion molecules.? Cell， 1991，67（2）：423－435.

MACCOLL G， BOULOUX P， QUINTON R. Kallmann syndrome： adhesion， afferents， and anosmia.? Neuron， 2002，34（5）：675－678.

CHOY C， KIM S H. Biological actions and interactions of anosmin－1.? Frontiers of Hormone Research， 2010，39：78－93.

CHOY C T， KIM H， LEE J Y， et al. Anosmin－1 contributes to brain tumor malignancy through integrin signal pathways.? Endocrine－Related Cancer， 2014，21（1）：85－99.

MATSUSHIMA S， SHIMIZU A， KONDO M， et al. Anosmin－1 activates vascular endothelial growth factor receptor and its related signaling pathway for olfactory bulb angiogenesis.? Scientific Reports， 2020，10（1）：188.

HU Y L， BUTTS T， POOPALASUNDARAM S， et al. Extracellular matrix protein anosmin－1 modulates olfactory ensheathing cell maturation in chick olfactory bulb development.? European Journal of Neuroscience， 2019，50（9）：3472－3486.

GOLDEN D， CANTLEY L G. Casein kinase 2 prevents me－

senchymal transformation by maintaining Foxc2 in the cytoplasm.? Oncogene， 2015，34（36）：4702－4712.

HOLLIER B G， TINNIRELLO A A， WERDEN S J， et al. FOXC2 expression links epithelial－mesenchymal transition and stem cell properties in breast cancer.? Cancer Research， 2013，73（6）：1981－1992.

KONG B， WANG W B， ESPOSITO I， et al. Increased expression of Nodal correlates with reduced patient survival in pancreatic cancer.? Pancreatology： Official Journal of the International Association of Pancreatology （IAP）， 2015，15（2）：156－161.

DE SOUZA VIANA L， AFFONSO R J Jr， SILVA S R M， et al. Relationship between the expression of the extracellular matrix genes SPARC， SPP1， FN1， ITGA5 and ITGAV and clinicopathological parameters of tumor progression and colo－

rectal cancer dissemination.? Oncology， 2013，84（2）：81－91.

YANG X M， YOU H Y， LI Q， et al. CTHRC1 promotes human colorectal cancer cell proliferation and invasiveness by activating Wnt/PCP signaling.? International Journal of Clinical and Experimental Pathology， 2015，8（10）：12793－12801.

TAN F， LIU F， LIU H， et al. CTHRC1 is associated with peritoneal carcinomatosis in colorectal cancer： a new predictor for prognosis.? Medical Oncology （Northwood， London， England）， 2013，30（1）：473.

（本文編輯 馬偉平）