李小讓 葉世蕓 鑒志剛 羅文艷 李向東

【摘 要】

目的：研究新加香薷飲的抗炎、解熱作用。方法：用角叉菜膠致SD大鼠炎癥模型、干酵母致SD大鼠發(fā)熱模型。觀察新加香薷飲對大鼠足腫脹度、解熱作用及其對血清中TNF-α、IL-6及下丘腦組織5-HT、NE含量。結(jié)果：抗炎作用，與空白組相比，模型組大鼠右后足跖腫脹明顯增加；與模型組比較，新加香薷飲8.05 g/kg組對大鼠足跖腫脹程度有明顯的減輕（P＜0.05）。解熱作用，與空白組相比，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-6及下丘腦組織中5-HT含量均明顯升高（P＜0.05），下丘腦組織中NE含量明顯降低（P＜0.05）；與模型組相比，陽性組、新加香薷飲8.05 g/kg組、新加香薷飲4.05 g/kg組大鼠血清中TNF-α含量均明顯降低（P＜0.05），陽性組及新加香薷飲8.05 g/kg組血清中IL-6含量均明顯降低（P＜0.05），新加香薷飲8.05 g/kg組大鼠下丘腦中5-HT含量及陽性組大鼠下丘腦中NE含量明顯降低（P＜0.05），其余各組無明顯變化。結(jié)論：新加香薷飲有良好的抗炎、解熱作用，其機制可能是通過抑制炎癥因子TNF-α、IL-6的合成與釋放，下調(diào)下丘腦組織中5-HT含量和上調(diào)下丘腦組織中NE含量，進而使單胺類神經(jīng)遞質(zhì)保持平衡，降低體溫及產(chǎn)熱量，起到解熱效果。

【關(guān)鍵詞】 新加香薷飲；抗炎作用；解熱作用

【中圖分類號】R285.5?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）07-0024-05

Study on the Anti-Inflammatory and Antipyretic Effects of Xinjia Elsholtzia Drink

LI Xiaorang1 YE Shiyun1* JIAN Zhigang1 LUO Wenyan1 LI Xiangdong2

1.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002，China;2.Guizhou Dexuantang Hukang Pharmaceutical Co.， Ltd.， Guiyang 550008，China

Abstract：

Objective To study the anti-inflammatory and antipyretic effects of Xinjia Elsholtzia drink.Methods A model of inflammation in SD rats caused by carrageenan gum and a model of fever in SD rats caused by dried yeast were used.The effects of Xinjia Elsholtzia drink on the degree of foot swelling，antipyretic effect and its effect on TNF-α and IL-6 in serum and 5-HT and NE content in hypothalamus tissue of rats were observed.Results The anti-inflammatory effect， compared with the blank group， the swelling of right hind foot and plantar of rats in the model group increased significantly；compared with the model group， the swelling of foot and plantar of rats in the Xinjia Elsholtzia 8.05 g/kg group was significantly reduced （P<0.05）;the antipyretic effect， compared with the blank group， the TNF-α and IL-6 in serum and 5-HT content in hypothalamus tissue of rats in the model group were significantly increased （P<0.05）. The content of NE in hypothalamic tissue was significantly lower （P<0.05）；Compared with the model group， the TNF-α content in the serum of rats in the positive group， Xinjia Elsholtzia 8.05 g/kg group and Xinjia Elsholtzia 4.05 g/kg group was significantly lower （P<0.05）. In the group of rats with 8.05 g/kg of Xinjia Elsholtzia， the content of 5-HT in the hypothalamus and the content of NE in the hypothalamus of rats in the positive group were significantly reduced （P<0.05）.Conclusion Xinjia Elsholtzia has good anti-inflammatory and antipyretic effects. The mechanism may be through inhibiting the synthesis and release of inflammatory factors TNF-α and IL-6，down-regulating 5-HT content in hypothalamic tissues and up-regulating NE content in hypothalamic tissues，thus keeping monoamine neurotransmitters in balance，lowering body temperature and heat production，and providing antipyretic effects.

Keywords：Xinjia Elsholtzia Drink; Anti-inflammatory Effect; Antipyretic Effect

新加香薷飲最早收錄于清代醫(yī)家吳鞠通所著《溫病條辯》［1］，由香薷、鮮扁豆花、金銀花、連翹、厚樸五味藥組成。其中香薷為君藥，金銀花、扁豆花、連翹共為臣藥，厚樸為使藥，該方具有祛濕解表，清熱化濕之功效?，F(xiàn)代藥理作用闡明香薷所含的揮發(fā)油具有消炎、解熱作用［2］；金銀花、連翹能解熱抗炎［3-4］；厚樸能抗菌消炎［5］；扁豆花能滋養(yǎng)，解毒。故新加香薷飲具有清熱的功效，但其解熱作用機制尚不清楚。因此本實驗主要通過角叉菜膠致大鼠炎癥模型的建立，觀察新加香薷飲抗炎作用；在干酵母致大鼠發(fā)熱模型基礎(chǔ)上，觀察新加香薷飲對酵母致熱大鼠的解熱作用，對血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）及腦組織中5-羥色胺（5-HT）和去甲腎上腺素（NE）等介質(zhì)的含量變化影響，以驗證新加香薷飲解熱作用并進一步探討其作用機制，為豐富臨床治療發(fā)熱癥的方法提供更多的選擇依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

1.1.1 儀器 HX-YS0301液體加熱器（中山市龍瑞電器有限公司）；SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；臺式高速冷凍離心機（ThermoST16R）；HRQ-A2獸用電子體溫計（鄭州豪潤奇電子科技有限公司）；DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進醫(yī)療器械廠）；HB-RO/60超純水儀（美國Millipore公司）；HLD-3003電子天平（d=0.001g；杭州友恒稱重設(shè)備有限公司）；NanoDrop One/One C微量紫外-可見光分光光度計（美國Thermo公司）；BPH-9042精密恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；111-101游標卡尺（東莞三量量具有限公司）。

1.1.2 試驗藥物 角叉菜膠（批號：NO705M021，Solarbio）；干酵母（安琪酵母股份有限公司）；醋酸地塞米松片（批號：210316，浙江仙琚制藥股份有限公司）；阿司匹林腸溶片（批號：BJ58754，拜耳醫(yī)藥保健有限公司）；醫(yī)用酒精（江西百醫(yī)衛(wèi)仕醫(yī)藥科技有限公司）；生理鹽水（貴州科倫藥業(yè)有限公司）；Rat TNF-α Elisa KIT（批號：RX302058R，睿信生物）；Rat IL-6 Elisa KIT（批號：RX302856R，睿信生物）；Rat 5-HT Elisa KIT（批號：RXJ303050R，睿信生物）；Rat NE Elisa KIT（批號：RXJ302393R，睿信生物）。

1.1.3 實驗動物 SPF級SD大鼠100只，雄性，體質(zhì)量為180～200 g，合格證號：SCXK（湘）2019-0014，購買于長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，飼養(yǎng)于貴州中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心SPF級動物房。關(guān)于實驗動物倫理學(xué)問題，已經(jīng)由貴州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會討論批準，批準號：20210075。

1.2 方法

1.2.1 供試品的制備 精密稱定香薷、連翹、厚樸各7.46 g，金銀花、扁豆花各11.19 g，于陶瓷爐中加1000 mL水浸泡60 min，共煎煮三次，每次72 min，合并煎煮液100目濾布過濾后，精密量取水煎液15 mL、甲醇35 mL，混合后超聲30 min，放涼后過濾，取續(xù)濾液過0.22 μm微孔濾膜，減壓濃縮至濃度分別為0.40 g/mL、0.81 g/mL、1.61 g/mL的低、中、高濃度的濃縮液，即得新加香薷飲供試品溶液。

1.2.2 分組及角叉菜膠致大鼠炎癥模型的建立 選取42只雄性大鼠隨機分為6組：新加香薷飲8.05 g/kg組、新加香薷飲4.05 g/kg組、新加香薷飲2.00 g/kg組，模型組，空白組，陽性（醋酸地塞米松1.2 mg/kg）組，每組7只。

炎癥模型建立的具體方法如下：實驗前分別測量每只大鼠右足跖厚度3次，后計算其平均值作為正常足跖厚度。根據(jù)等效劑量系數(shù)折算法計算給藥量，新加香薷飲各組給予相應(yīng)的劑量灌胃，陽性組給予相應(yīng)劑量的醋酸地塞灌胃，模型組及空白組給予生理鹽水灌胃，每天1次，連續(xù)7 d，末次給藥半小時后分別于大鼠右后足皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL。在給藥后0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h用游標卡尺測量各組大鼠的右后足跖厚度（mm），計算各組大鼠致炎前后右后足跖厚度變化值，以足腫脹率表示藥物的抗炎效果。

足腫脹率=造模后足趾厚度-正常足趾厚度正常足趾厚度×100%

1.2.3 酵母致大鼠發(fā)熱模型的建立 動物處理用數(shù)顯體溫計測量大鼠直腸溫度，每天兩次，取其均值作為初始體溫，連續(xù)3 d。排除溫度變化>0.5℃的大鼠。

分組及模型建立：選取合適的大鼠36只，隨機分為6組：新加香薷飲8.05 g/kg組、新加香薷飲4.05 g/kg組、新加香薷飲2.00 g/kg組，模型組，空白組，陽性（阿司匹林腸溶片）組，每組6只。

發(fā)熱模型建立的方法如下：新加香薷飲各組給予相應(yīng)的劑量灌胃，陽性組給予相應(yīng)劑量的阿司匹林腸溶片灌胃，模型組及空白組給予生理鹽水灌胃，給藥后各組均在背部皮下均注射20%酵母注射液（10 mL/kg），空白組給予生理鹽水注射，分別于造模后4 h和6 h測量大鼠體溫。

1.2.4 樣本采集 大鼠最后一次測量體溫后，使用3%戊巴比妥（1 mL/kg）腹腔注射麻醉，腹主動脈取血低溫離心10 min（3000 r/min），取上層血清，取血后，快速剝?nèi)〈笫笙虑鹉X，均保存于-80 ℃冰箱備用。

1.2.5 指標檢測 取大鼠腦組織及血清，加適量生理鹽水混勻備用（腦組織與生理鹽水比例為1∶20），以酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測腦組織中5-HT、NE含量及血清中TNF-α、IL-6含量。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS26.0軟件分析，每組數(shù)據(jù)以表示，數(shù)據(jù)先進行正態(tài)性和方差齊性檢驗，符合正態(tài)分布且方差齊性較好，多組樣本量比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間的兩兩比較采用LSD-t檢驗；不符合正態(tài)分布且方差不齊時，采用非參數(shù)檢驗進行比較。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 新加香薷飲對角叉菜膠致大鼠足腫脹模型的作用 由圖1可知，各組大鼠足趾腫脹率在1 h、2 h大致呈上升趨勢，3 h、4 h、5h、6 h大致呈下降趨勢。與空白組相比，模型組大鼠右后足跖腫脹明顯，造模2 h左右腫脹度達到頂點；與模型組比較，在1 h時新加香薷飲8.05 g/kg、2.00 g/kg組對大鼠足跖腫脹程度有明顯的減輕（P＜0.05），在2 h時新加香薷飲各組均對大鼠足跖腫脹程度有明顯的減輕（P＜0.05），在3 h時新加香薷飲8.05 g/kg組對大鼠足跖腫脹程度有明顯的減輕（P＜0.05），隨著時間的流逝，其藥效也隨著減弱，在4 h時新加香薷飲8.05 g/kg、2.00 g/kg組對大鼠足跖腫脹程度有明顯的減輕（P＜0.05），在5 h、6 h時，與模型組相比，新加香薷飲各劑量均無顯著差異。結(jié)果如表1所示。

2.2 新加香薷飲對酵母致熱大鼠體溫的影響 與空白組相比，模型組大鼠在造模后4 h、6 h時體溫明顯升高；與模型組相比，在造模后4 h、6 h時新加香薷飲8.05 g/kg組大鼠體溫均明顯下降（P＜0.05），其他劑量組無明顯差異。結(jié)果如表2所示。

2.3 新加香薷飲對發(fā)熱模型大鼠炎癥因子及神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響 與空白組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-6及下丘腦組織中5-HT含量均明顯升高（P＜0.05），下丘腦組織中NE含量明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，新加香薷飲8.05 g/kg組、新加香薷飲4.05 g/kg組大鼠血清中TNF-α含量均明顯降低（P＜0.05），新加香薷飲8.05 g/kg組血清中IL-6含量明顯降低（P＜0.05），下丘腦中5-HT含量明顯降低（P＜0.05）。其余各組無明顯變化。結(jié)果見表3所示。

3 討論

新加香薷飲可祛暑解表，清熱化濕，臨床常用于夏季發(fā)熱、中暑等癥狀［6-7］，方中香薷、金銀花及連翹［8-10］均有解熱效果，5味中藥多具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等作用，并且有研究［11］表明新加香薷飲具有治療新型冠狀病毒肺炎的潛力。

目前，實驗室中常采用的動物發(fā)熱模型是酵母菌致熱手段，由于酵母菌全菌體及菌體內(nèi)存在莢膜多糖和蛋白質(zhì)等致熱物質(zhì)，在皮下注射后可導(dǎo)致注射部位局部的潰爛，而機體內(nèi)發(fā)生較嚴重的炎癥反應(yīng)后產(chǎn)生高熱癥狀［12］。研究［13］表明，酵母菌致熱后動物癥狀表現(xiàn)與里熱證相似，因此清熱類中藥的動物解熱效果常選擇用這種模型開展研究。抗炎試驗中，新加香薷飲8.05 g/kg能明顯降低足跖厚度，具有一定的抗炎效果，在解熱試驗中，新加香薷飲8.05 g/kg在造模后4 h、6 h時均可明顯降低模型組大鼠體溫，因此證明新加香薷飲可以緩解由酵母菌致熱引起的發(fā)熱癥狀。

機體炎癥常伴隨著發(fā)熱現(xiàn)象的產(chǎn)生，因為當機體遭受外源性致熱原刺激會產(chǎn)生大量內(nèi)源性致熱源，如TNF-α、IL-6、IL-1等炎癥因子，其中TNF-α可直接影響下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞，還可以刺激巨噬細胞生成IL-1，繼而IL-1促進單核-巨噬細胞釋放PGE2（發(fā)熱的正調(diào)節(jié)介質(zhì)），從而影響下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞。因此，內(nèi)源性致熱源因子可直接或間接作用于體溫調(diào)節(jié)的神經(jīng)遞質(zhì)［14-16］，從而使體溫升高，出現(xiàn)發(fā)熱癥狀?，F(xiàn)有的體溫調(diào)節(jié)的單胺學(xué)說［17］則指出，中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)可以介入體溫的調(diào)節(jié)過程，其中5-HT可導(dǎo)致體溫升高，NE可導(dǎo)致體溫下降，5-HT、NE、DA的動態(tài)平衡是保持體溫恒定的關(guān)鍵因素。有學(xué)者［18］發(fā)現(xiàn)，5-HT參與了調(diào)控酵母致大鼠發(fā)熱過程中。本研究考察造模后大鼠下丘腦中神經(jīng)遞質(zhì)5-HT及NE含量的變化，觀察新加香薷飲對酵母致大鼠發(fā)熱模型的解熱效果。結(jié)果顯示，模型組大鼠與空白組大鼠相比，下丘腦中5-HT含量明顯升高，NE含量明顯降低，新加香薷飲干預(yù)后，新加香薷飲8.05 g/kg組大鼠與模型組大鼠相比，下丘腦組織中5-HT含量明顯降低，NE含量升高，提示新加香薷飲可能是通過對腦中樞中5-HT、NE等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的調(diào)節(jié)達到相對平衡而發(fā)揮解熱效果。

綜上所述，新加香薷飲具有一定的抗炎作用，其機制可能是抑制炎癥因子TNF-α、IL-6的合成與釋放，并可能通過下調(diào)下丘腦中神經(jīng)遞質(zhì)5-HT含量，上調(diào)NE含量，保持5-HT及NE含量的相對平衡，從而降低體溫，發(fā)揮解熱作用。

參考文獻

［1］太平惠民和劑局.太平惠民和劑局方［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2018.

［2］李敏，苗明三.香薷的化學(xué)、藥理與臨床應(yīng)用特點分析［J］.中醫(yī)學(xué)報，2015，30（4）：578-579.

［3］吳嬌，王聰，于海川.金銀花中的化學(xué)成分及其藥理作用研究進展［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2019，25（4）：225-234.

［4］田丁，史夢琪，王赟.連翹揮發(fā)油化學(xué)成分及其藥理作用研究進展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2018，30（10）：1834-1842.

［5］劉盈萍.厚樸的主要成分及其藥理作用研究概況［J］.當代化工研究，2017（5）：141-142.

［6］袁慧，孫玉香.新加香薷飲加味治療暑濕型感冒200例［J］.中醫(yī)臨床研究，2018，10（26）：122-123.

［7］劉根芳，邱根祥，毛志遠，等.新加香薷飲加味治療小兒暑濕發(fā)熱200例［J］.浙江中醫(yī)雜志，2014，49（4）：271.

［8］孫冬月，高慧，王曉婷，等.產(chǎn)地加工炮制一體化香薷的解熱抗炎作用研究［J］.中草藥，2018，49（20）：4737-4742.

［9］袁靜燁.金銀花抗內(nèi)毒素、解熱、抗炎作用分析［J］.世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2016，16（42）：232-233.

［10］黨玨，袁岸，羅林，等.連翹提取物和連翹揮發(fā)油對酵母致熱大鼠的解熱機制研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2017，29（9）：1542-1545.

［11］楊秀娟，張東旭，董世奇，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)初探新加香薷飲治療新型冠狀病毒肺炎潛力的研究［J］.藥物評價研究，2020，43（9）：1663-1672.

［12］唐曉峰，薛漫清，王暉.大鼠發(fā)熱模型及發(fā)熱機制的研究進展［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報，2009，16（3）：327-331.

［13］劉微艷，陳創(chuàng)，張滌，等.發(fā)熱動物模型的研究進展［J］.湖南中醫(yī)雜志，2017，33（8）：214-216.

［14］洪倩，陳昌秀，劉艷俠，等.金振口服液退熱作用機制動物實驗研究［J］.兒科藥學(xué)雜志，2021，27（2）：1-4.

［15］KONG X， WAN H， SU X， et al. Rheum palmatum L. and Coptis chinensis Franch.， exert antipyretic effect on yeast-induced pyrexia rats involving regulation of TRPV1 and TRPM8 expression［J］.journal of Ethnopharmacology，2014，153（1）：160-168.

［16］陳光瑋，田彥芳，萬海同，等.麻黃湯有效組分對發(fā)熱大鼠的解熱作用及與藥動學(xué)相關(guān)性研究［J］.中國中藥雜志，2020，45（3）：655-663.

［17］薜啟蓂.神經(jīng)系統(tǒng)的病理生理和病理化學(xué)［M］.2版.北京：科學(xué)出版社，1992：180-201.

［18］MUHAMMAD N，KNAN S Z，ZEESHAN S，et al. A new cationic palladium（II） dithiocarbamate exhibits anti-inflammatory， analgesic， and antipyretic activities through inhibition of inflammatory mediators in in vivo models［J］. Naunyn-Schmiedebergs archives of pharmacology，2019，392（8）：961-977.

（收稿日期：2022-08-06 編輯：劉 斌）