梅芊?盧玉鳳?張婷婷?李倚天?楊海燕?郭姣梅?李潔?劉英

摘要：目的 對(duì)國(guó)產(chǎn)硫酸慶大霉素滴眼液的質(zhì)量現(xiàn)狀進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法 采用法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)與探索性研究相結(jié)合，對(duì)國(guó)家藥品計(jì)劃抽驗(yàn)的23批次樣品與調(diào)研企業(yè)收集的樣品進(jìn)行檢驗(yàn)與統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果顯示，23批次硫酸慶大霉素滴眼液合格率為100%。探索性研究揭示，硫酸慶大霉素滴眼液的處方仍有進(jìn)一步優(yōu)化的空間，優(yōu)化硫酸慶大霉素滴眼液的黏度和表面張力可改善其治療效果，選擇合理的抑菌劑可減少其刺激性。同時(shí)，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中缺失有關(guān)物質(zhì)、慶大霉素C組分、抑菌劑含量測(cè)定及不溶性微粒等檢查項(xiàng)；對(duì)貯藏條件的要求也不十分合理。結(jié)論 目前國(guó)產(chǎn)硫酸慶大霉素滴眼液整體質(zhì)量一般，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待提高，建議企業(yè)關(guān)注處方合理性。

關(guān)鍵詞：硫酸慶大霉素滴眼液；質(zhì)量分析；包材；抑菌劑；有關(guān)物質(zhì)；慶大霉素C組分；貯藏條件

中圖分類(lèi)號(hào)：R917，R978.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Abstract Objective To evaluate the quality status of domestic gentamicin sulfate eye drops. Methods? According to the general requirements of national assessment program， the statutory standard methods combined with exploratory researches were used to evaluate the quality of the 23 batches of samples from the national drug market and from pharmaceutical manufacturers were analyzed. Results The legal test results showed that the qualified rate was 100%. But exploratory research showed that the prescription of gentamicin sulfate eye drops could be further optimization. The therapeutic effect can be improved by optimizing the viscosity and surface tension， and the selection of reasonable bacteriostatic agents can reduce its irritation. Additionally， the quality of samples could not be better controlled because of the lack of some examination items， i.e. related substances， C components， the preservative content， and particulate matter. The requirement for storage condition was also not very reasonable. Conclusion The quality of domestic gentamicin sulfate eye drops at present is generally good. The current statutory standard needs to be improved and companies need to focus on the rationality of preparation prescription.

Key words Gentamicin sulfate eye drops; Quality analysis; Packaging material; Preservatives; Related substances; C components; Storage condition

硫酸慶大霉素為氨基糖苷類(lèi)抗生素，臨床主要用于治療由需氧革蘭陰性菌引起的各種感染[1]。1963年，由美國(guó)先靈公司在降紅小單孢菌屬和棘孢小單孢菌屬的發(fā)酵液中獲得[2]。1965年我國(guó)中科院福建微生物研究所分離得到產(chǎn)生菌，1969年投產(chǎn)并用于臨床[3]。國(guó)內(nèi)現(xiàn)有劑型包括：片劑、膠囊劑、注射劑、顆粒劑和滴眼劑等。

1970年6月，先靈葆雅公司研發(fā)的0.3%硫酸慶大霉素滴眼液首先在美國(guó)上市；1983年7月和1984年10月，日本點(diǎn)眼藥研究所（Nitten）株式會(huì)社和美國(guó)Allergan公司的仿制藥分別在日本和美國(guó)上市；1984年，陜西榆林制藥廠在中國(guó)首仿成功。已上市的國(guó)內(nèi)外產(chǎn)品均為多劑量包裝，規(guī)格分別為3mg/mL（即 0.3%）與5mg/mL。目前，國(guó)內(nèi)共有硫酸慶大霉素滴眼液生產(chǎn)企業(yè)16家，批準(zhǔn)文號(hào)17個(gè)。

2021年，國(guó)家藥品抽檢從11個(gè)?。ㄖ陛犑?、自治區(qū)）抽取到23批次硫酸慶大霉素滴眼液，涉及2家生產(chǎn)企業(yè)，2個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)。本文按《中國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱(chēng)ChP）2015年版[4]或2020年版[5]二部硫酸慶大霉素滴眼液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，并從藥品質(zhì)量控制、安全有效的角度，基于質(zhì)量源于設(shè)計(jì)（QbD）理念，圍繞處方、包材、生產(chǎn)工藝、貯藏的合理性及質(zhì)量可控等方面，對(duì)其質(zhì)量現(xiàn)狀進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)，為進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量與完善標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

Waters2695高效液相色譜儀（2998 PDA檢測(cè)器、2489紫外檢測(cè)器）；Thermo Scientific Vanquish高效液相色譜儀（Dionex Corona Veo RS電噴霧檢測(cè)器）；Thermo QE plus 離子軌道阱高分辨質(zhì)譜儀；Dionex Ultimate 3000雙三元液相色譜儀；Mettler Toledo Excellence Titrator T5 自動(dòng)電位滴定儀；Anton Parr Lovis 2000 M/ME全自動(dòng)微量落球黏度計(jì)；DP-AW精密數(shù)字壓力計(jì)；美國(guó)BIO-RAD 680XR酶標(biāo)儀；英國(guó)Grant GD BD-115電熱恒溫培養(yǎng)箱；長(zhǎng)沙維爾康湘鷹TDZ5-WS臺(tái)式低速離心機(jī)；BD Phoenix Spec Nephelometer比濁儀；維科生物ZW-200A型智能集菌儀；PE Frontier傅里葉變換紅外分光光度計(jì)；Agilent 7010B GC/MS Triple Quad氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀；Agilent 7900型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，Thermo XSERIES 2型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，CEM MARS 6 型微波消解儀；Mettler XPE205電子天平；Mettler Toledo Seven Excellence多參數(shù)測(cè)定儀；天津天河SMC30C-1滲透壓摩爾濃度測(cè)定儀。

三氟醋酸、三乙胺、甲醇、乙腈、正己烷、硝酸、甲酸均為色譜純；水為MilliQ去離子水；其余試劑均為分析純。

1.2 試藥

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：慶大霉素（批號(hào)130326-201716）、小諾米星（批號(hào)130342-202105）、西索米星（批號(hào)130635-202102）、羥苯甲酯（批號(hào)100278-201906）、羥苯乙酯（批號(hào)100847-201604）、羥苯丙酯（批號(hào)100444-202005）、硫柳汞鈉（批號(hào)135050-201401）、苯扎氯銨（批號(hào)100549-201805）、苯扎溴銨（批號(hào)135051-202002）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；對(duì)羥基苯甲酸（批號(hào)LRAC5151）、四硼酸鈉十水合物（批號(hào)WXBC5916V）、硼酸（批號(hào)SLCG7351）、抗氧劑BHT（批號(hào)BCCC0032）購(gòu)自Sigma-Aldrich；17種鄰苯二甲酸酯類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)D0010004）購(gòu)自北京曼哈格生物科技有限公司；8種抗氧劑均購(gòu)自河北百靈威超精細(xì)材料有限公司；元素標(biāo)準(zhǔn)溶液均購(gòu)自國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心；NDMA（批號(hào)510166-202003）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，NDEA（批號(hào)J1909183）購(gòu)自上海阿拉丁生化科技有限公司，NMBA（批號(hào)C11549831）、EIPNA（批號(hào)C12428445）、DIPNA（批號(hào)C12617511）、NDPA（批號(hào)C11773242）、NDBA（批號(hào)C12232327）均購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司。

試驗(yàn)菌種：銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、大腸埃希菌[CMCC（B）44102]、金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

動(dòng)物：家兔，雌雄各半，體重1.8～2.2 kg，購(gòu)自北京富龍騰飛實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究院有限公司。

樣品：2021年硫酸慶大霉素滴眼液國(guó)家藥品抽檢樣品23批次，涉及A與B共2個(gè)企業(yè)。調(diào)研收集A與B企業(yè)的輔料，2批次低密度聚乙烯藥用滴眼劑瓶，2批次硫酸慶大霉素原料與3批次硫酸慶大霉素滴眼液。2批次國(guó)外對(duì)照樣品：美國(guó)Allergan公司，規(guī)格0.3%，批號(hào)T0274；日本Nitten公司，規(guī)格0.3%，批號(hào)L20A9G。

2 試驗(yàn)方法

2.1 法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)

按ChP2015/2020二部硫酸慶大霉素滴眼液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，主要項(xiàng)目包括性狀、鑒別、pH值、顏色、滲透壓摩爾濃度、可見(jiàn)異物、裝量差異、無(wú)菌和含量測(cè)定等。

2.2 探索性研究

2.2.1 處方合理性

通過(guò)對(duì)硫酸慶大霉素滴眼液中主藥、輔料成分的檢測(cè)，結(jié)合原輔料相容性研究及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，從4個(gè)方面對(duì)處方的合理性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

（1）? 活性藥物成分分析

①有關(guān)物質(zhì)? 建立高效液相色譜-電霧式檢測(cè)器（HPLC-CAD）法測(cè)定硫酸慶大霉素滴眼液中的有關(guān)物質(zhì)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（pH值適應(yīng)范圍0.8～8.0）；以0.2 mol/L三氟醋酸溶液-甲醇（96： 4）為流動(dòng)相；流速為0.6 mL/min；電霧式檢測(cè)器（噴霧器溫度50℃，數(shù)據(jù)采集頻率10 Hz，濾波10.0 s，冪函數(shù)1.00）測(cè)定；進(jìn)樣體積20 μL。

②慶大霉素C組分? 建立HPLC-CAD法測(cè)定硫酸慶大霉素滴眼液中各組分的含量，色譜條件同有關(guān)物質(zhì)。

（2）? ?輔料測(cè)定

①抑菌劑? 建立HPLC-UV法同時(shí)測(cè)定苯扎溴銨、苯扎氯銨、硫柳汞、羥苯甲酯、羥苯乙酯和羥苯丙酯等6種常用抑菌劑含量。采用Waters XBridge C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）色譜柱，流動(dòng)相A為1%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)pH值至3.05±0.05），流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫，見(jiàn)表1；流速1.0 mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm。

模擬臨床用法用量，取國(guó)內(nèi)外代表性樣品共7批次，室溫放置，于每天早、中、晚從每瓶各擠出1滴棄去，分別在0、7、14、21和28 d采用上述方法測(cè)定抑菌劑含量，以考查多劑量包裝滴眼劑在臨床使用過(guò)程中抑菌劑含量穩(wěn)定性。

采用影響因素試驗(yàn)考察影響抑菌劑穩(wěn)定性的因素，并建立LC-MS法對(duì)樣品中可能產(chǎn)生的降解產(chǎn)物進(jìn)行確定并定量分析。

②pH調(diào)節(jié)劑/滲透壓調(diào)節(jié)劑? 硼砂的含量以0.01 mol/L鹽酸為滴定液，建立電位滴定法測(cè)定。硼酸的含量是在樣品中加入姜黃素，使之與硼形成有色絡(luò)合物，采用HPLC-UV法間接測(cè)定總硼含量，色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相A為0.012 mol/L四丁基溴化銨，流動(dòng)相B為甲醇，梯度洗脫；流速1.0 mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)540 nm，測(cè)定樣品中總硼的含量，再減去電位滴定法測(cè)得硼砂含量，間接計(jì)算樣品中硼酸的含量。

（3） 原輔料相容性

模擬兩個(gè)企業(yè)處方工藝自制小樣，分別置于玻璃具塞試管中以排除包材的干擾，在高溫、高濕及強(qiáng)光照射條件下放置，于0、5、10和30 d（僅高溫）取樣，另取硫酸慶大霉素原料適量分別置于玻璃具塞試管中，在高溫條件下放置30 d，按建立的有關(guān)物質(zhì)和慶大霉素C組分測(cè)定方法對(duì)上述樣品中有關(guān)物質(zhì)和組分進(jìn)行測(cè)定。

（4） 制劑有效性評(píng)價(jià)

①黏度? 采用Anton Parr Lovis 2000 M/ME全自動(dòng)微量落球黏度計(jì)，試驗(yàn)溫度20℃，毛細(xì)管傾角45°，測(cè)定樣品的動(dòng)力黏度。

②表面張力? 使用DP-AW精密數(shù)字壓力計(jì)，采用最大泡壓法測(cè)定硫酸慶大霉素滴眼液表面張力，試驗(yàn)溫度22℃。

③溶血刺激試驗(yàn)? 取家兔心臟血離心沉淀的紅細(xì)胞混懸液，采用紅細(xì)胞溶血（RBC）試驗(yàn)對(duì)硫酸慶大霉素滴眼液的溶血性進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)該品種的體外刺激性。

④對(duì)急性細(xì)菌性結(jié)膜炎模型治療作用研究? 取健康家兔，上眼瞼結(jié)膜下注射金黃色葡萄球菌的菌懸液建立急性細(xì)菌性結(jié)膜炎模型，將成功建模家兔隨機(jī)分組后立即給予藥物治療，模擬考察國(guó)內(nèi)外硫酸慶大霉素滴眼液的臨床療效差異。

2.2.2 包材合理性

（1）包材透明度

取國(guó)內(nèi)外4家企業(yè)的硫酸慶大霉素滴眼液各1支，去除標(biāo)簽，傾出內(nèi)容物，目視觀察各滴眼液瓶身透明度情況，并參照國(guó)家藥包材標(biāo)準(zhǔn)（2015）YBB00012002-2015低密度聚乙烯輸液瓶[6]檢查瓶身的透光率。

（2）包材材質(zhì)

取國(guó)內(nèi)外4家企業(yè)滴眼液瓶的瓶身，在 4000～600 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜測(cè)定，與包材對(duì)照紅外圖譜比較，確定材質(zhì)。

（3）水蒸氣透過(guò)量

取國(guó)內(nèi)外4家企業(yè)樣品，分別在40℃相對(duì)濕度95%、40℃相對(duì)濕度25%、4℃相對(duì)濕度95%和4℃相對(duì)濕度25%條件下放置14 d，計(jì)算包材的水蒸氣透過(guò)量。

（4）滴出量

參照國(guó)家藥包材標(biāo)準(zhǔn)（2015）YBB00062002-2015低密度聚乙烯藥用滴眼劑瓶[7]中滴出量檢查方法，取國(guó)內(nèi)外4家企業(yè)樣品，擦干瓶口，先棄去前10滴，然后均勻收集（10滴/min）50滴，測(cè)定體積，計(jì)算平均滴出量。

（5）包材相容性

包材的遷移試驗(yàn)包括建立GC-MS法測(cè)定17種鄰苯二甲酸酯類(lèi)增塑劑、HPLC-UV法測(cè)定8種抗氧劑，以及ICP-MS法測(cè)定16種金屬元素；通過(guò)影響因素試驗(yàn)對(duì)樣品中有關(guān)物質(zhì)、慶大霉素C組分與抑菌劑含量的測(cè)定來(lái)評(píng)估包材的吸附性。

2.2.3 生產(chǎn)工藝合理性

（1）羥苯乙酯穩(wěn)定性

羥苯乙酯常溫下難溶于水，國(guó)內(nèi)2家企業(yè)制劑生產(chǎn)工藝中均采用加熱至微沸使其溶解。模擬工藝中羥苯乙酯溶解方法設(shè)計(jì)試驗(yàn)，考察加熱工藝對(duì)羥苯乙酯穩(wěn)定性的影響。

（2）有關(guān)物質(zhì)

通過(guò)測(cè)定硫酸慶大霉素原料和對(duì)應(yīng)批次的滴眼液有關(guān)物質(zhì)含量，考察制劑的生產(chǎn)工藝對(duì)有關(guān)物質(zhì)的影響。

（3）不溶性微粒

采用光阻法對(duì)國(guó)內(nèi)兩家企業(yè)樣品進(jìn)行不溶性微粒檢查，考察該品種的生產(chǎn)工藝是否能夠控制微粒的污染。

（4）基因毒性雜質(zhì)

硫酸慶大霉素屬于發(fā)酵產(chǎn)生的多組分氨基糖苷類(lèi)抗生素，發(fā)酵過(guò)程是一個(gè)復(fù)雜的生物化學(xué)反應(yīng)，原材料如各種培養(yǎng)基來(lái)源于自然界，含有亞硝酸鹽，且慶大霉素結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)伯胺基和仲胺基，這些類(lèi)型的胺尤其是仲胺，在一定條件下存在與水中或其他污染途徑中的亞硝酸鹽反應(yīng)產(chǎn)生N-亞硝胺類(lèi)基因毒性雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)。參考USP-NF通則<1469>[8]方法，建立UPLC-MS/MS法測(cè)定硫酸慶大霉素滴眼液中7種N-亞硝胺雜質(zhì)。

（5）影響因素試驗(yàn)

以有關(guān)物質(zhì)、顏色、pH值、可見(jiàn)異物、滲透壓摩爾濃度、抑菌劑、基因毒性雜質(zhì)、抗氧劑遷移、塑化劑遷移、金屬元素遷移和慶大霉素C組分含量等為指標(biāo)，考察高溫（60℃）、高濕（相對(duì)濕度92.5%、25℃）與光照（4500 Lx）[9]對(duì)國(guó)內(nèi)外硫酸慶大霉素滴眼液質(zhì)量的影響。

3 結(jié)果與討論

3.1 法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)

按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，23批次樣品均符合規(guī)定，合格率100%。對(duì)與產(chǎn)品質(zhì)量密切相關(guān)的主要檢驗(yàn)項(xiàng)目如pH值、滲透壓摩爾濃度和含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3.1.1 pH值

23批次樣品pH值測(cè)定結(jié)果在6.6～6.8之間，A企業(yè)樣品pH值均為6.8，B企業(yè)樣品pH值均為6.6，表明兩企業(yè)生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性均較好。

3.1.2 滲透壓摩爾濃度

23批次樣品滲透壓摩爾濃度測(cè)定結(jié)果在285～296 mOsmol/kg之間，同一企業(yè)不同批次樣品的滲透壓摩爾濃度值接近，RSD≤1.5%。

3.1.3 含量測(cè)定

23批次樣品含量測(cè)定結(jié)果為96.2%～103.0%范圍內(nèi)，平均值為100.5%，A企業(yè)不同批次樣品的含量接近，B企業(yè)2021年新生產(chǎn)的3批次樣品由于更換原料批次導(dǎo)致含量與同企業(yè)其他批次樣品含量相比偏低，提示該企業(yè)應(yīng)關(guān)注投料穩(wěn)定性，見(jiàn)圖1。

3.2 探索性研究

3.2.1 處方合理性

（1）活性藥物成分分析

①有關(guān)物質(zhì) 采用擬定方法對(duì)23批次抽檢樣品、3批次調(diào)研收集樣品、2批次調(diào)研收集原料及2批次國(guó)外對(duì)照樣品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)制劑與原料雜質(zhì)譜、國(guó)內(nèi)外制劑雜質(zhì)譜對(duì)比分析。

2家企業(yè)制劑的雜質(zhì)譜不同，但均與各自使用的原料一致，見(jiàn)圖2～4；制劑的生產(chǎn)工藝對(duì)有關(guān)物質(zhì)無(wú)貢獻(xiàn)；國(guó)內(nèi)外制劑雜質(zhì)譜差異不大，與原料來(lái)源相關(guān)，見(jiàn)圖5。

②組分 國(guó)內(nèi)2家企業(yè)制劑的C2和C2a組分含量差異較大，為原料來(lái)源不同導(dǎo)致；A企業(yè)產(chǎn)品批次間各組分含量差異較小，B企業(yè)2021年新生產(chǎn)產(chǎn)品由于更換原料批次導(dǎo)致與其余批次產(chǎn)品的C1、C1a和C2組分含量差異較大；國(guó)內(nèi)外制劑由于原料的來(lái)源不同，導(dǎo)致產(chǎn)品中4個(gè)組分的含量不一致。

（2）輔料

①抑菌劑 國(guó)內(nèi)2家企業(yè)的樣品中均檢出羥苯乙酯，且產(chǎn)品的效期與羥苯乙酯含量存在顯著正相關(guān)；國(guó)外2批次樣品均檢出苯扎氯銨，但類(lèi)別不同，日本Nitten使用為n-C14H29單取代，美國(guó)Allergan使用為n-C12H25、n-C14H29混合取代。

模擬28 d臨床使用期，期間國(guó)內(nèi)外樣品的抑菌劑含量均無(wú)明顯變化，表明使用中抑菌劑含量穩(wěn)定。

國(guó)外制劑中的苯扎氯銨在高溫、高濕和強(qiáng)光照射條件下含量無(wú)明顯變化；國(guó)內(nèi)制劑中的羥苯乙酯在高濕和強(qiáng)光照射條件下，含量無(wú)明顯變化，但在高溫條件下，隨放置時(shí)間延長(zhǎng)，羥苯乙酯含量不斷降低。經(jīng)LC-MS法和包材提取試驗(yàn)確認(rèn)，一部分降解成對(duì)羥基苯甲酸，大部分被包材吸附。

國(guó)內(nèi)外制劑的抑菌效力均可達(dá)ChP2020中的A級(jí)標(biāo)準(zhǔn)；國(guó)外制劑的抑菌效力高于國(guó)內(nèi)制劑；國(guó)內(nèi)2家企業(yè)的處方不添加抑菌劑也可達(dá)ChP2020中的A級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。2017年中檢院承擔(dān)的硫酸慶大霉素滴眼液抑菌效力專(zhuān)項(xiàng)抽檢中，對(duì)抑菌劑使用情況進(jìn)行過(guò)探索性研究。認(rèn)為使用羥苯乙酯可以滿(mǎn)足《中國(guó)藥典》對(duì)抑菌效力的要求，但處方量0.3 mg/mL高于國(guó)際公認(rèn)的眼用制劑羥苯乙酯安全劑量0.26 mg/mL[10]。提示國(guó)內(nèi)產(chǎn)品可能存在抑菌劑添加過(guò)量問(wèn)題。建議企業(yè)對(duì)處方中抑菌劑使用的合理性進(jìn)行充分的評(píng)估。

②pH調(diào)節(jié)劑/滲透壓調(diào)節(jié)劑 本次抽檢的2家企業(yè)制劑處方中均以硼酸/硼砂體系作為緩沖劑來(lái)調(diào)節(jié)樣品的pH值和滲透壓。在美國(guó)FDA 批準(zhǔn)的非活性成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)（2021年）[11]中，滴眼液的硼酸最大用量為1.55%（W/V），硼砂的最大用量為1.1%（W/V）。23批次抽檢樣品中硼砂和硼酸含量與處方量基本一致，無(wú)違規(guī)投料現(xiàn)象。但國(guó)內(nèi)2家企業(yè)制劑中的硼酸用量均高于FDA規(guī)定的滴眼液中硼酸的最大用量，其合理性值得進(jìn)一步的評(píng)估。

（3）原輔料相容性

模擬兩企業(yè)處方的溶液在高濕及強(qiáng)光照射條件下，有關(guān)物質(zhì)（西索米星、小諾米星、單雜）和C組分含量均無(wú)明顯變化；高溫條件下有關(guān)物質(zhì)和C組分含量無(wú)明顯變化，但總雜在30 d時(shí)增大，與對(duì)應(yīng)的原料高溫放置30 d有關(guān)物質(zhì)的變化結(jié)果一致，說(shuō)明雜質(zhì)譜變化源于原料自身，與輔料無(wú)關(guān)；提示該品種滴眼液處方較穩(wěn)定，原輔料相容性良好。

（4）制劑有效性評(píng)價(jià)

①黏度 黏度控制是滴眼液的一個(gè)重要功能性指標(biāo)，適當(dāng)增加黏度可延長(zhǎng)藥物在眼內(nèi)滯留時(shí)間，從而增加生物利用度，提高療效，也可減少對(duì)眼部的刺激性。眼用溶液適宜的黏度在4.0～5.0 mPa·s[12]，本次抽檢的國(guó)內(nèi)2家企業(yè)及日本Nitten的滴眼液處方中未添加黏度調(diào)節(jié)劑，測(cè)得黏度值與純水相當(dāng)，遠(yuǎn)低于滴眼液黏度推薦值，滴眼時(shí)藥液易快速流出，可能影響其藥效。美國(guó)Allergan滴眼液處方中添加有黏度調(diào)節(jié)劑聚乙烯醇，黏度較適宜。

②表面張力 藥物溶液的表面張力直接影響其表面吸附及黏膜上的吸附，表面張力愈小，越有利于與淚液混合，也有利于藥物與角膜的接觸，使藥物更易滲入角膜。滴眼液表面張力在40～46 mN/m范圍內(nèi)可與淚液膜保持較好的相容性[13]，本次抽檢的國(guó)內(nèi)2家企業(yè)和日本Nitten樣品的平均表面張力與水接近，美國(guó)Allergan滴眼液的表面張力雖較小，但也大于滴眼液表面張力推薦值40～46 mN/m，提示它們與淚液膜的相容性均較差，不利于滴眼液與淚液混合，也不利于藥物與角膜的接觸，因而可能導(dǎo)致療效降低。

③溶血刺激試驗(yàn) 日本Nitten制劑有中度刺激性，國(guó)內(nèi)2家企業(yè)和美國(guó)Allergan制劑均為輕度刺激性。日本Nitten產(chǎn)品刺激性較大的原因可能與其使用的抑菌劑苯扎氯銨為n-C14H29單取代組分有關(guān)，C14取代的苯扎氯銨的刺激性較C12取代的苯扎氯銨的刺激性大[6]。

④對(duì)急性細(xì)菌性結(jié)膜炎模型治療作用研究 國(guó)內(nèi)外樣品中，美國(guó)Allergan制劑對(duì)家兔急性細(xì)菌性結(jié)膜炎的治療作用最好，表明其處方組成較合理，其添加的黏度調(diào)節(jié)劑，能很好地提高活性成分的生物利用度，保證本品的有效性；國(guó)內(nèi)2家企業(yè)樣品次之；日本Nitten制劑較弱，其原因可能與對(duì)眼部的刺激性較大有關(guān)。

上述結(jié)果提示，硫酸慶大霉素滴眼液的處方仍有進(jìn)一步優(yōu)化的空間。調(diào)節(jié)處方改變其黏度和表面張力改善其治療效果，選擇合理的抑菌劑減少其刺激性，將使得處方更為合理。

3.2.2 包材合理性

（1）包材透明度

目視與透光率測(cè)定結(jié)果一致，4家企業(yè)中，B企業(yè)包材透光率最大，A企業(yè)次之，日本Nitten較小，美國(guó)Allergan基本不透光。滴眼劑瓶的透光率與粒料來(lái)源、添加劑與瓶體厚度有關(guān)。由于硫酸慶大霉素滴眼液中原、輔料對(duì)光均不敏感，且滴眼液的瓶身粘貼標(biāo)簽已具有一定的遮光作用，因而，在保證滴眼劑瓶保護(hù)功能和使用性能的前提下，選用透光率適宜的包材，以利于制劑的可見(jiàn)異物檢查及患者使用時(shí)觀察藥液顏色變化和異物情況。

（2）包材材質(zhì)

國(guó)內(nèi)外4家企業(yè)滴眼液瓶的材質(zhì)均為聚乙烯材料，但A企業(yè)說(shuō)明書(shū)中未明確包材材質(zhì)，其余3家企業(yè)說(shuō)明書(shū)中標(biāo)示的包材材質(zhì)與實(shí)際檢測(cè)一致。建議企業(yè)說(shuō)明書(shū)應(yīng)對(duì)包材的材質(zhì)進(jìn)行規(guī)范的描述。

（3）水蒸氣透過(guò)量

在40℃相對(duì)濕度95%、4℃相對(duì)濕度95%和4℃相對(duì)濕度25%條件下，國(guó)內(nèi)外樣品的包材幾乎均無(wú)水蒸氣交換。40℃相對(duì)濕度25%條件下均有不同程度的重量損失，且國(guó)內(nèi)2家企業(yè)包材的減失重量均小于國(guó)外2家企業(yè)包材，提示國(guó)內(nèi)企業(yè)包材阻隔性能優(yōu)于國(guó)外企業(yè)。

（4）滴出量

日本Nitten、A企業(yè)與B企業(yè)樣品的滴出量接近，為0.041～0.044 mL/滴，美國(guó)Allergan樣品的滴出量為0.054 mL/滴。滴出量的差異與滴眼液的黏度、表面張力、聚乙烯瓶瓶身的軟硬度及瓶嘴的孔徑尺寸等因素相關(guān)，美國(guó)Allergan產(chǎn)品的滴出量高于國(guó)內(nèi)，這可能是其對(duì)急性細(xì)菌性結(jié)膜炎的治療作用優(yōu)于國(guó)內(nèi)樣品的原因之一。

（5）包材相容性

國(guó)內(nèi)外樣品中均未發(fā)現(xiàn)抗氧劑遷移，金屬離子和增塑劑的遷移量均遠(yuǎn)低于參考限值，表明該品種由包材遷移帶來(lái)的安全風(fēng)險(xiǎn)較低。吸附試驗(yàn)結(jié)果表明，聚乙烯瓶對(duì)硫酸慶大霉素原料無(wú)吸附作用；高溫條件下，包材聚乙烯瓶對(duì)樣品中的抑菌劑羥苯乙酯具有一定的吸附作用。

上述結(jié)果提示，國(guó)產(chǎn)制劑使用的包材基本可以滿(mǎn)足硫酸慶大霉素滴眼液的需要；建議企業(yè)應(yīng)在說(shuō)明書(shū)對(duì)包材材質(zhì)進(jìn)行規(guī)范的描述。

3.2.3 生產(chǎn)工藝合理性

（1）羥苯乙酯穩(wěn)定性

羥苯乙酯經(jīng)加熱至微沸保持5和10 min，或水浴放置1 h后，其降解產(chǎn)物對(duì)羥基苯甲酸含量很小，均不大于0.1%，表明生產(chǎn)中羥苯乙酯幾乎不會(huì)降解。

（2）有關(guān)物質(zhì)

原料和對(duì)應(yīng)批次的制劑有關(guān)物質(zhì)結(jié)果一致，表明生產(chǎn)工藝對(duì)有關(guān)物質(zhì)無(wú)影響。

（3）不溶性微粒

國(guó)內(nèi)兩家企業(yè)代表性樣品中25及50 μm的微粒均未檢出，10 μm的微粒均不超過(guò)2粒/mL。雖然《中國(guó)藥典》對(duì)眼用制劑中的不溶性微粒未做出具體的限度要求，但USP-NF通則<789>[14]，JP18通則6.0[15]均規(guī)定了眼科溶液中不溶性微粒檢查法及限度。本次檢驗(yàn)中，國(guó)產(chǎn)樣品中的不溶性微粒符合USP通則<789>的限度規(guī)定，且滿(mǎn)足ChP2020通則0903[16]中注射劑的要求。表明企業(yè)的過(guò)濾工藝、直接接觸藥液的包材質(zhì)量及處理工藝均較理想。

（4）基因毒性雜質(zhì)

國(guó)內(nèi)外樣品以及調(diào)研收集的國(guó)內(nèi)硫酸慶大霉素原料均未檢出7種N-亞硝胺雜質(zhì)，表明上述雜質(zhì)在原料、制劑的生產(chǎn)過(guò)程中和儲(chǔ)存過(guò)程中均未產(chǎn)生，可以保證藥物的安全性。

（5）影響因素試驗(yàn)

①有關(guān)物質(zhì) 高溫、高濕及光照條件下，國(guó)內(nèi)外樣品的西索米星、小諾米星和最大單雜含量基本無(wú)變化；高濕及光照條件下，各樣品的總雜基本無(wú)變化，但高溫條件下，除美國(guó)Allergan外，其余3家企業(yè)樣品的總雜均略有增大趨勢(shì)。

②慶大霉素C組分 影響因素試驗(yàn)3種條件下，國(guó)內(nèi)外樣品中各組分和總組分含量均無(wú)明顯變化。

③顏色 高溫5與10 d、高濕及光照時(shí)，各樣品顏色無(wú)變化，日本Nitten為微黃色，其余均為無(wú)色，高溫30 d時(shí)，國(guó)內(nèi)2家企業(yè)與日本Nitten樣品的顏色均加深，但美國(guó)Allergan樣品的顏色在影響因素試驗(yàn)3種條件下均為無(wú)色，無(wú)變化。通過(guò)原、輔、包交叉相容性試驗(yàn)結(jié)果，判斷制劑經(jīng)高溫放置后顏色變化源于原料本身，與輔料和包材無(wú)關(guān)。

④pH值 影響因素試驗(yàn)3種條件下，國(guó)內(nèi)2家企業(yè)與日本Nitten樣品的pH值均無(wú)明顯變化，僅高溫條件下美國(guó)Allergan樣品的pH值由6.8（0 d）降至6.3（30 d）。其可能原因與其處方無(wú)緩沖鹽體系有關(guān)。

⑤滲透壓摩爾濃度 高濕和光照下，各樣品滲透壓摩爾濃度值均無(wú)明顯變化，但在高溫條件下，諸樣品的滲透壓摩爾濃度均呈不斷增大趨勢(shì)，其中美國(guó)Allergan樣品的滲透壓摩爾濃度由306 mOsmol/kg（0 d）升至340 mOsmol/kg（30 d），遠(yuǎn)大于規(guī)定的上限（320 mOsmol/kg）；而國(guó)內(nèi)2家企業(yè)樣品滲透壓摩爾濃度僅由290/296 smol/kg（0 d）升至298/302 smol/kg（30 d），日本Nitten的滲透壓摩爾濃度由288 mOsmol/kg（0 d）升至301 mOsmol/kg（30 d）。結(jié)合前述包材水蒸氣透過(guò)量結(jié)果，其可能原因?yàn)楦邷馗稍飾l件下水分丟失所致。

（6）抑菌劑 高濕及光照下，國(guó)內(nèi)2家企業(yè)樣品中抑菌劑羥苯乙酯含量基本無(wú)變化，但高溫時(shí)由于包材對(duì)其的吸附作用，其含量不斷降低。高溫、高濕及強(qiáng)光照射條件下，國(guó)外2家企業(yè)樣品中抑菌劑苯扎氯銨含量基本無(wú)變化。

（7）可見(jiàn)異物、基因毒性雜質(zhì)、抗氧劑遷移、塑化劑遷移、有害金屬元素釋放，均無(wú)明顯變化。

3.2.4 貯藏

ChP2020二部[5]規(guī)定硫酸慶大霉素滴眼液貯藏條件為“密閉，在涼暗處保存”，USP-NF[17]和JP18[18]中貯藏條件分別為“密閉，不超過(guò)40℃保存”和“密閉保存”。硫酸慶大霉素制劑歷年國(guó)家藥品抽檢（2011與2012的注射液、2017年的片/顆粒）結(jié)果顯示，硫酸慶大霉素性質(zhì)穩(wěn)定，極難降解。上述影響因素試驗(yàn)結(jié)果也表明，光照對(duì)硫酸慶大霉素滴眼液的質(zhì)量無(wú)影響，高溫條件下僅部分考察指標(biāo)略有變化，提示該品種在陰涼處保存，無(wú)須刻意避光即可保證產(chǎn)品質(zhì)量，合理的貯藏條件可降低本品的貯藏和運(yùn)輸成本。

4 總結(jié)

采取法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)合探索性研究對(duì)硫酸慶大霉素滴眼液的質(zhì)量現(xiàn)狀進(jìn)行了評(píng)價(jià)。按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，23批次硫酸慶大霉素滴眼液均符合規(guī)定。探索性研究顯示，優(yōu)化硫酸慶大霉素滴眼液的黏度和表面張力可改善其治療效果，選擇合理的抑菌劑可減少其刺激性，提示硫酸慶大霉素滴眼液的處方仍有進(jìn)一步優(yōu)化的空間。此外，《中國(guó)藥典》在有關(guān)物質(zhì)、慶大霉素C組分、抑菌劑含量、不溶性微粒等方面仍有提升的空間，且其貯藏條件也可進(jìn)一步合理化。

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