高學(xué)俠 王斌 林欽賢 梁偉龍 康志英 郭長(zhǎng)達(dá) 吳振斌

摘要 ［目的］探究新疆枸杞子不同商品等級(jí)規(guī)格與質(zhì)量的內(nèi)在關(guān)系。［方法］首次應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，以多成分含量為指標(biāo)，測(cè)定不同等級(jí)規(guī)格的枸杞子中總灰分、浸出物、枸杞多糖、甜菜堿、總糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪、二氧化硫殘留量等指標(biāo)含量，綜合評(píng)價(jià)新疆枸杞子的不同等級(jí)間質(zhì)量差異。［結(jié)果］新疆枸杞子總灰分、二氧化硫殘留量均超出藥典標(biāo)準(zhǔn)，且與其等級(jí)高低無(wú)相關(guān)性，浸出物、總糖含量與等級(jí)呈正相關(guān)，枸杞多糖、甜菜堿、氨基酸、蛋白質(zhì)、脂肪含量與等級(jí)總體呈負(fù)相關(guān)。［結(jié)論］利用質(zhì)量指標(biāo)的方法評(píng)價(jià)枸杞子與傳統(tǒng)分級(jí)具有一定的相關(guān)性，以外觀形狀結(jié)合內(nèi)在質(zhì)量指標(biāo)來(lái)劃分枸杞子商品等級(jí)的方法更科學(xué)、可靠。

關(guān)鍵詞 新疆枸杞子；商品等級(jí)規(guī)格；含量測(cè)定；綜合評(píng)價(jià)；相關(guān)性

中圖分類號(hào) R284.1? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2023）10-0162-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.10.036

Abstract ［Objective］To explore the intrinsic relationship between different commodity grades and quality of Lycium barbarum fruit in Xinjiang.［Method］For the first time，combining modern science and technology，with multicomponent as the indicator，the contents of total ash，extract，Lycium barbarum polysaccharide （LBP），betaine，total sugar，amino acids，protein，fat and sulfur dioxide residue in Lycium barbarum fruit of different commodity grades were determined，and the quality differences between different grades of Lycium barbarum fruit in Xinjiang were comprehensively evaluated.［Result］The contents of total ash and sulfur dioxide of Lycium barbarum fruit in Xinjiang exceeded the pharmacopeia standard and were not correlated with the grades.The contents of extract and the total sugar and the grades were positively correlated，and overall，the contents of LBP，betaine，amino acids，protein and fat were negatively correlated with the grades.［Conclusion］There is a certain correlation between using quality index to evaluate Lycium barbarum fruit and traditional grading，and the method of dividing Lycium barbarum fruit commodity grades by combination of appearance and shape combined with intrinsic quality index is more scientific and reliable.

Key words Lycium barbarum fruit in Xinjiang;Commodity grades and specifications;Content determination;Comprehensive evaluation;Correlation

枸杞子為茄科枸杞屬植物寧夏枸杞（Lycium barbarum L.）的干燥成熟果實(shí)，具有益精明目、滋補(bǔ)肝腎的功用，用于腰膝酸軟、眩暈耳鳴、陽(yáng)痿遺精、虛勞精虧、內(nèi)熱消渴、目昏不明［1-3］，主產(chǎn)于寧夏、青海、新疆及甘肅等地［4-10］。枸杞子作為藥食兩用的藥材，有悠久的臨床應(yīng)用歷史，新疆作為枸杞子主產(chǎn)區(qū)之一，已具備一定種植規(guī)模，產(chǎn)量也逐年增長(zhǎng)，然而鮮有新疆枸杞子商品規(guī)格的研究報(bào)道。該研究通過(guò)對(duì)新疆枸杞子的枸杞多糖、甜菜堿、總糖、蛋白質(zhì)及氨基酸等有效成分進(jìn)行含量測(cè)定，并檢測(cè)其二氧化硫殘留量等安全性指標(biāo)，通過(guò)對(duì)不同等級(jí)規(guī)格的新疆枸杞子進(jìn)行質(zhì)量綜合研究，探索枸杞子不同等級(jí)規(guī)格與其質(zhì)量之間的內(nèi)在關(guān)系。

1 儀器與材料

1.1 儀器 戴安Ultimate 3000液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司）；安捷倫1200液相色譜儀（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；XS204型、MS603S型電子天平（瑞士梅特勒-托利多）；HWS28型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；DHG-9245A型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；SXL-1208馬弗爐（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；TU-1901雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 材料

D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)110833-202109，中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量以99.9%計(jì)）；甜菜堿對(duì)照品（批號(hào)110894-202105，中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量以98.5%計(jì)）；氨基酸對(duì)照品（批號(hào)14001，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）；異硫氰酸苯酯、三乙胺、正己烷、乙腈等均為色譜純；甲醇、乙醚等其余試劑均為分析純；超純水。根據(jù)枸杞子的采收期，于2020年8月份實(shí)地采收新疆產(chǎn)區(qū)枸杞子，經(jīng)亳州市滬譙藥業(yè)郭長(zhǎng)達(dá)高級(jí)工程師鑒定均為真品。根據(jù)《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》［11］，結(jié)合GB/T 18672—2014《枸杞》［12］對(duì)枸杞子進(jìn)行等級(jí)劃分，詳細(xì)信息及各等級(jí)性狀見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 總灰分、浸出物含量、二氧化硫殘留量的測(cè)定 參照《中國(guó)藥典》2020年版［1］，分別測(cè)定新疆不同等級(jí)枸杞子總灰分、浸出物含量、二氧化硫殘留量，結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，浸出物符合要求，總灰分、二氧化硫殘留量均超出藥典標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 枸杞多糖的含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備。取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品約25.0 mg，精密稱定，置于250 mL容量瓶中，加入超純水適量，稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL分別置于具塞試管中，分別加入超純水補(bǔ)至2.0 mL，再精密加入5%苯酚溶液1 mL，振蕩搖勻，迅速精密加入硫酸5 mL，振蕩搖勻，于試驗(yàn)臺(tái)上靜置10 min，置40 ℃恒溫水浴鍋中再保溫15 min，取出，迅速冷卻至室溫（25 ℃），以相應(yīng)的試劑為空白，按照UV-Vis法，在波長(zhǎng)為490 nm處測(cè)定其吸光度，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)（X）、吸光度為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程為Y=16.159 47X+0.145 04（R2=0.999 5），表明葡萄糖濃度在25～125 μg/mL呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3 含量測(cè)定。取樣品粗粉約0.5 g于錐形瓶中，精密稱定，加入乙醚約100 mL，于恒溫水浴鍋中加熱回流提取1 h，靜置冷卻至室溫，棄去乙醚液，殘?jiān)糜诤銣厮″伾蠐]干乙醚。再次加入80%乙醇溶液約100 mL，于恒溫水浴鍋中加熱回流提取l h，趁熱濾過(guò)，濾渣與濾器用溫?zé)岬?0%乙醇溶液多次洗滌，每次約30 mL，濾渣連同濾紙置于錐形瓶中，加入超純水約150 mL，于恒溫水浴鍋中加熱回流提取2 h。趁熱濾過(guò)，用少量的熱水沖洗過(guò)濾器，每次約30 mL，合并濾液與洗液，靜置放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻靜置，精密移取1 mL溶液，置于具塞試管中，精密加入超純水1.0 mL，根據(jù)“2.2.2”項(xiàng)下的方法，自“精密加入5%苯酚溶液1 mL”起測(cè)定其吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中葡萄糖的重量（mg），計(jì)算樣品中枸杞多糖的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，各等級(jí)枸杞子枸杞多糖含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，并以特優(yōu)級(jí)枸杞子枸杞多糖含量最低，乙級(jí)含量最高。

2.3 甜菜堿的含量測(cè)定

2.3.1 供試品溶液的制備。取樣品粗粉約2 g于錐形瓶中，精密稱定，加入80%甲醇溶液約50 mL，稱定重量，超聲（500 W，40 kHz）處理30 min，冷卻至室溫（25 ℃），再稱定重量，用80%甲醇溶液補(bǔ)足其減失的重量，搖勻，用0.22 μm濾膜濾過(guò)，即得。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備。取甜菜堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為1.0 mg/mL的對(duì)照品溶液，即得。

2.3.3 色譜條件。色譜柱為Venusil HILIC（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）-10 mmol/L甲酸銨（pH 3.0）（B）85∶15；流速1.0 mL/min；柱溫30? ℃；進(jìn)樣量10 μL；檢測(cè)器為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）。分別精密吸取對(duì)照品溶液5、10 μL 與供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，取3次平均值測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算含量，即得。

2.3.4 精密度試驗(yàn)。精密吸取甜菜堿對(duì)照品溶液10 μL，按“2.3.3”色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，分別記錄甜菜堿對(duì)照品的峰面積，以其峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甜菜堿峰面積的RSD為1.4%，表明該儀器的精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批枸杞子粉末，精密稱定6份，按“2.3.1”方法制備供試品溶液，按“2.3.3”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄甜菜堿的峰面積。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甜菜堿峰面積的RSD為1.3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一批枸杞子粉末按“2.3.1”方法制備供試品溶液，按“2.3.3”色譜條件分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，記錄甜菜堿峰面積并計(jì)算甜菜堿含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甜菜堿峰面積的RSD為1.0%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.7 耐用性試驗(yàn)。

2.3.7.1 柱溫的考察。取同一份樣品，分別按“2.3.3”色譜條件進(jìn)樣分析，柱溫分別設(shè)置為25、30、35? ℃，記錄相應(yīng)色譜圖，結(jié)果顯示不同柱溫條件下，甜菜堿的分離度和峰形無(wú)明顯變化，可見(jiàn)柱溫的波動(dòng)對(duì)該色譜條件下枸杞子甜菜堿的檢測(cè)無(wú)明顯影響。綜合考慮，選擇30? ℃作為最終的測(cè)定溫度。

2.3.7.2 流速的考察。取同一份樣品，分別按“2.3.3”色譜條件進(jìn)樣分析，流速分別設(shè)置為0.8、1.0、1.2 mL/min，記錄相應(yīng)色譜圖，結(jié)果顯示不同流速條件下，甜菜堿的分離度和峰形無(wú)明顯變化，可見(jiàn)流速的波動(dòng)對(duì)該色譜條件下枸杞子甜菜堿的檢測(cè)無(wú)明顯影響。綜合考慮，選擇1.0 mL/min作為流速。

2.3.8? 加樣回收率。精密稱取同一批已知含量的樣品粉末約1 g，分別精密加入等量的甜菜堿對(duì)照品，按“2.3.1”方法制備供試品溶液，按“2.3.3”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可以看出，平均回收率為102.4%，RSD為0.6%，表明該方法回收率良好、方法準(zhǔn)確。

2.3.9 含量測(cè)定。按“2.3.1”方法制備各樣品溶液，按“2.3.3”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定甜菜堿含量（表2），其中甜菜堿對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白對(duì)照溶液色譜圖見(jiàn)圖1。由表2可知，各等級(jí)枸杞子甜菜堿含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，并以特優(yōu)級(jí)枸杞子含量最低，乙級(jí)含量最高。

2.4 總糖的含量測(cè)定

2.4.1 供試品溶液的制備。取樣品粗粉約2.5 g，精密稱定，置于250 mL容量瓶中，加入超純水至容積約為200 mL，置（80±2）℃恒溫水浴鍋中保溫30 min，期間搖動(dòng)多次，取出，放冷至室溫，加入乙酸鋅及亞鐵氰化鉀溶液各5 mL，搖勻，用超純水定容至刻度，過(guò)濾，濾液備用。移取濾液50 mL于100 mL 容量瓶中，加入6 mol/L鹽酸溶液10 mL，在75～80 ℃恒溫水浴鍋中水解15 min，取出，放冷至室溫，加入甲基紅指示劑1滴，用200 g/L氫氧化鈉溶液中和，再用水定容至刻度，備用［12］。

2.4.2 標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液。精密移取費(fèi)林試劑甲液、乙液各2.0 mL，置于250 mL錐形瓶中，加入15.0 mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于小電爐加熱煮至沸騰，立即加入亞甲基藍(lán)指示劑5滴，并繼續(xù)以2～3滴/s的滴速滴定至二價(jià)銅離子完全被還原生成磚紅色氧化亞銅沉淀，溶液藍(lán)色褪盡為終點(diǎn)，記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液總體積。

2.4.3 含量測(cè)定。精密移取費(fèi)林試劑甲液、乙液各2.0 mL，置于250 mL錐形瓶中，加入待測(cè)液5.0 mL，混合液置于小電爐加熱煮沸至沸騰，立即加入亞甲基藍(lán)指示劑5滴，并繼續(xù)以2～3滴/s的速度滴定至二價(jià)銅離子完全被還原成磚紅色氧化亞銅沉淀，溶液的藍(lán)色褪盡即為終點(diǎn)，記錄消耗的葡萄糖溶液總體積，計(jì)算各樣品總糖含量，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，各等級(jí)枸杞子總糖含量均符合標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18672—2014《枸杞》，并以特優(yōu)級(jí)枸杞子總糖含量最高，乙級(jí)含量最低。

2.5 蛋白質(zhì)的含量測(cè)定

2.5.1 供試品溶液的制備。取樣品粗粉約2 g，精密稱定，置于干燥的定氮瓶中，分別加入0.2 g硫酸銅、6 g硫酸鉀、20 mL 硫酸溶液，輕輕振蕩搖勻后于瓶口放一小漏斗，將瓶以45°角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上。緩慢加熱，待里面的內(nèi)容物全部炭化，泡沫完全停止后，逐漸加強(qiáng)火力，保持瓶?jī)?nèi)的液體微沸狀態(tài)，直至液體變成藍(lán)綠色并澄清透明后，再繼續(xù)加熱0.5～1.0 h，取下，冷卻至室溫，加入20 mL超純水。冷卻，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，并用少量超純水沖洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加入超純水至刻度，搖勻后備用，同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。

2.5.2 含量測(cè)定。向定氮蒸餾裝置的水蒸氣發(fā)生器內(nèi)裝入超純水至2/3處，加入玻璃珠數(shù)粒，再加入甲基紅乙醇溶液幾滴及硫酸溶液幾毫升，目的是保持水呈酸性，加熱煮沸水蒸氣發(fā)生器內(nèi)的水并保持沸騰狀態(tài)。向接收瓶?jī)?nèi)準(zhǔn)確移取硼酸溶液10.0 mL及混合指示液1～2滴，并使冷凝管的下端插入至液面下方，根據(jù)試樣中氮的含量多少，精密移取試樣處理液2.0～10.0 mL由小玻杯注入反應(yīng)室中，以10 mL超純水沖洗小玻杯并使之流入到反應(yīng)室內(nèi)，接著塞緊棒狀玻塞。之后將氫氧化鈉溶液10.0 mL倒入小玻杯，提起玻塞使其緩緩流入反應(yīng)室中，馬上將玻塞蓋緊，并加入超純水于小玻杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開(kāi)始進(jìn)行蒸餾。蒸餾10 min后挪動(dòng)蒸餾液接收瓶，液面隨即離開(kāi)冷凝管的下端，再蒸餾1 min。接著再用少量的超純水洗滌冷凝管下端外部，取下蒸餾液接收瓶。用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至終點(diǎn)，同時(shí)作試劑空白。計(jì)算各枸杞子樣品蛋白質(zhì)含量，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，特優(yōu)級(jí)枸杞子蛋白質(zhì)含量最低，乙級(jí)含量最高，特級(jí)與甲級(jí)差別不大。

2.6 氨基酸的含量測(cè)定

2.6.1 色譜條件。色譜柱為月旭 Amino Acid（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相A為0.1 mol/L醋酸鈉溶液（pH 6.5）∶乙腈=93∶7，流動(dòng)相B為水∶乙腈=20∶80，梯度洗脫，洗脫程序見(jiàn)表4；流速1.0 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量1 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。

2.6.2 衍生試劑的制備。衍生試劑A（PITC）：精密移取0.3 mL PITC，置于25 mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，得到濃度為0.1 mol/L的溶液，搖勻即得，于4 ℃密封保存；衍生試劑B（三乙胺）：精密移取1.38 mL三乙胺溶液，置于10 mL棕色容量瓶中，用乙腈溶液稀釋至刻度，得到濃度為1 mol/L 的溶液，搖勻即得，于4 ℃密封保存。

2.6.3 對(duì)照品溶液的制備。精密移取1 mL對(duì)照品溶液，用超純水溶解于10 mL棕色容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻即得。精密移取對(duì)照品溶液1 mL，置于具塞試管中，分別加入“2.6.2”衍生試劑A、B溶液各0.5 mL，搖勻，于室溫下靜置放置60 min，取出，加入正己烷溶液2 mL振搖10 s，靜置60 s后，用孔徑為0.45 μm濾膜過(guò)濾，取澄清的下層液進(jìn)行分析試驗(yàn)。

2.6.4 供試品溶液的制備。取樣品粗粉0.5 g，精密稱定，在水解管內(nèi)加6 mol/L鹽酸溶液15 mL，之后將水解管轉(zhuǎn)移放入冷凍劑（食鹽∶冰=1∶3）中，冷凍5 min，然后接到真空泵的抽氣管上，抽取空氣成真空狀態(tài)，再充入高純氮?dú)猓辉俪檎婵仗畛錆M氮?dú)?，重?fù)操作3次，在充氮?dú)獾臓顟B(tài)下擰緊其螺絲蓋，將密封好的水解管放入在（110±1）℃的恒溫干燥箱內(nèi)，水解22 h后，取出放冷。打開(kāi)水解管，將水解液過(guò)濾后，用去離子水重復(fù)多次洗滌水解管，將水解液全部轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶?jī)?nèi)，再用去離子水定容至刻度。精密移取濾液2 mL于茄形瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)至干，殘留物用2 mL超純水溶解，再旋干，反復(fù)進(jìn)行2次至蒸干，用超純水2 mL使其溶解，并轉(zhuǎn)入至10 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度。供試品的衍生步驟與對(duì)照品一致。同“2.6.3”項(xiàng)下“精密移取供試品溶液1 mL，置于具塞試管中……取澄清的下層液進(jìn)行分析試驗(yàn)”。

2.6.5 線性關(guān)系的考察。分別精密移取對(duì)照品母液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μL注入液相色譜儀中，記錄各氨基酸的峰面積，再以各氨基酸的峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、氨基酸含量為橫坐標(biāo)（X），繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸。其中16種氨基酸的決定系數(shù)（R2）≥0.999 0，表明各成分在其線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。其中各個(gè)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍分別為：①門冬氨酸Y=9 399X + 0.32，R2=0.999 1，線性范圍為1.697 0～10.182 2 ng；②谷氨酸Y=9 097X + 0.44，R2=0.999 5，線性范圍為1.839 1～11.034 8 ng；③絲氨酸Y=14 259X-0.426，R2=0.999 4，線性范圍為1.313 6～7.881 8 ng；④甘氨酸Y=21 170X-0.886，R2=0.999 1，線性范圍為0.957 1～5.742 9 ng；⑤組氨酸Y=9 219X-0.353，R2=0.999 5，線性范圍為1.937 5～11.625 0 ng；⑥精氨酸Y=8 122X-0.086，R2=0.999 2，線性范圍為2.199 3 ～13.195 6 ng；⑦蘇氨酸Y=10 788X-0.053，R2=0.999 2，線性范圍為1.489 0～8.934 0 ng；⑧丙氨酸Y=16 259X-0.373，R2=0.999 0，線性范圍為1.135 9～6.815 4 ng；⑨脯氨酸Y=16 000X-0.640，R2=0.999 1，線性范圍為1.439 1～8.6348 ng；⑩酪氨酸Y=9 430X-1.326，R2=0.999 3，線性范圍為2.287 6～13.725 9 ng；B11纈氨酸Y=14 442X-0.513，R2=0.999 4，線性范圍為1.449 7～8.698 4 ng；B12蛋氨酸Y=11 210X-0.046，R2=0.999 1，線性范圍為1.865 1～11.190 8 ng；B13異亮氨酸Y=13 190X-1.060，R2=0.999 0，線性范圍為1.672 4～10.034 5 ng；B14亮氨酸Y=12 370X-0.153，R2=0.999 1，線性范圍為1.688 9～10.133 6 ng；B15苯丙氨酸Y=10 434X-0.593，R2=0.999 0，線性范圍為2.064 9～12.389 2 ng；B16賴氨酸Y=20 041X-2.013，R2=0.999 0，線性范圍為1.827 4～10.964 2 ng。

2.6.6 精密度試驗(yàn)。精密移取“2.6.3”對(duì)照品溶液1 μL，按“2.6.1”色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各氨基酸峰面積，以其峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果發(fā)現(xiàn)16種氨基酸的峰面積RSD均符合要求，表明該試驗(yàn)儀器精密度良好。

2.6.7 重復(fù)性試驗(yàn)。取樣品粉末，精密稱定6份，按“2.6.4”方法制備各樣品溶液，按“2.6.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄各氨基酸峰面積，以各氨基酸含量計(jì)算RSD，結(jié)果發(fā)現(xiàn)16種氨基酸的峰面積RSD均符合要求，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.6.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)。按“2.6.4”方法制備供試品溶液，按“2.6.1”色譜條件分別于0、2、4、8、12、24 h重復(fù)進(jìn)樣，測(cè)得各氨基酸峰面積，以其峰面積計(jì)算RSD，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蛋氨酸由于含量低誤差較大，其余各氨基酸峰面積的RSD均符合要求，表明該供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.9 含量測(cè)定。按“2.6.4”方法制備各樣品溶液，按“2.6.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定氨基酸含量（表2），其中氨基酸對(duì)照品溶液、供試品溶液色譜圖見(jiàn)圖2。由表2可知，特優(yōu)級(jí)枸杞子氨基酸含量最低，乙級(jí)含量最高，特級(jí)與甲級(jí)差別不大。

2.7 脂肪的測(cè)定

取樣品粗粉約4 g，精密稱定，置于尼龍紗布中，包扎好后，置于索氏提取器中，加入乙醚至瓶?jī)?nèi)容積的2/3處，于恒溫水浴鍋上加熱回流，使乙醚溶液不斷提取（6～8次/h），抽提6～8 h，回收溶劑至干，用乙醚溶液溶解，轉(zhuǎn)移至已恒重的蒸發(fā)皿中，于（100±5）℃干燥器中干燥2 h，放干燥器內(nèi)冷卻0.5 h后稱定重量。重復(fù)以上操作直至恒量，計(jì)算樣品中脂肪含量，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，特優(yōu)級(jí)枸杞子脂肪含量最低，乙級(jí)含量最高，不同等級(jí)脂肪含量差別較大。

2.8 統(tǒng)計(jì)分析 根據(jù)各指標(biāo)成分測(cè)定結(jié)果（表2），采用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)不同等級(jí)規(guī)格的新疆枸杞子進(jìn)行主成分分析，由特征值及方差貢獻(xiàn)率結(jié)果（表5）可知，前2個(gè)特征值＞1，其累計(jì)方差貢獻(xiàn)率可達(dá)95.727%，故提取2個(gè)主成分（F1、F2）以評(píng)價(jià)不同等級(jí)規(guī)格枸杞子綜合質(zhì)量情況，結(jié)果見(jiàn)表6。

3 討論與結(jié)論

該研究建立的HPLC-ELSD法測(cè)定枸杞子中甜菜堿的含量方法學(xué)考察均符合要求，其中，供試品制備方法采用超聲法，相對(duì)于2015、2020年版《中國(guó)藥典》枸杞子甜菜堿含量項(xiàng)下所規(guī)定的薄層色譜掃描法（TLCS法）、固相萃取法操作更加簡(jiǎn)單且快速高效、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。

從檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，枸杞子中浸出物、總糖含量與等級(jí)呈正相關(guān)，即規(guī)格等級(jí)越高，浸出物和總糖含量也越高。枸杞多糖、甜菜堿、氨基酸、蛋白質(zhì)和脂肪含量與等級(jí)總體呈負(fù)相關(guān)，即規(guī)格等級(jí)越高，含量反而低。主成分分析結(jié)果顯示，乙級(jí)枸杞子綜合得分最高，多項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果最優(yōu)，表明枸杞子質(zhì)量并非外觀越好（粒徑越大），質(zhì)量越佳，藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣除了外觀性狀，還需結(jié)合內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

另外，總灰分及二氧化硫殘留量均超出《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)且與等級(jí)高低無(wú)相關(guān)性，結(jié)合實(shí)地走訪調(diào)研，目前新疆枸杞子標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)不規(guī)范、深加工能力不足，總灰分、二氧化硫殘留量易超標(biāo)，對(duì)新疆枸杞子的市場(chǎng)影響力、競(jìng)爭(zhēng)力及國(guó)外市場(chǎng)開(kāi)拓都是不利的因素。只有充分發(fā)揮自身優(yōu)勢(shì)，走標(biāo)準(zhǔn)化道路，強(qiáng)化深加工能力，才能促進(jìn)新疆枸杞產(chǎn)業(yè)快速、健康發(fā)展。

該研究在傳統(tǒng)枸杞子等級(jí)規(guī)格劃分方法的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，首次增加現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵（如總糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪等含量）評(píng)價(jià)不同等級(jí)枸杞子的質(zhì)量，使飲片等級(jí)劃分更具科學(xué)性，而且給中藥飲片的研究、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)與管理等帶來(lái)了極大的方便，也為市場(chǎng)上飲片優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)管理提供理論支撐。中藥材商品規(guī)格等級(jí)是在商品交易過(guò)程中逐步形成的，而目前所使用的《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》制定至今已有30余年，許多藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)與現(xiàn)在市場(chǎng)常見(jiàn)藥材規(guī)格出現(xiàn)偏離，同時(shí)，中藥材等級(jí)規(guī)格的制定應(yīng)視具體品種而定，不同產(chǎn)地、品系、采收季節(jié)出現(xiàn)的性狀差異難以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確表征［13］，不應(yīng)只看外觀，更應(yīng)結(jié)合產(chǎn)地、品種、加工、質(zhì)量指標(biāo)等因素，才能使中藥飲片等級(jí)規(guī)格劃分更合理、科學(xué)、規(guī)范。

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