王 琳,嚴(yán)達(dá)偉,馬 黎,張 博,王莉興,張 浩,董新星

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,昆明 650201;2.云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)學(xué)院,昆明 650212;3.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,北京 100193;4.云南省畜牧總站,昆明 650224)

【研究意義】目前中國豬肉生產(chǎn)中存在的一個(gè)主要矛盾是地方豬種生長緩慢、體脂含量高、瘦肉率低,而改良型豬種雖然瘦肉率高、體脂含量低,但肌內(nèi)脂肪少,肉質(zhì)差。在不影響豬肉品質(zhì)的前提下,減少豬脂肪沉積已成為當(dāng)前畜牧業(yè)亟需解決的關(guān)鍵科學(xué)問題之一。豬的背膘厚與生長速度和胴體瘦肉率呈負(fù)相關(guān),與肌內(nèi)脂肪含量呈正相關(guān)[1-2],研究豬背膘厚的功能基因及其調(diào)控機(jī)制,對(duì)豬瘦肉產(chǎn)量和肉品質(zhì)的遺傳改良具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】Song等[3]發(fā)現(xiàn),瘦肉型豬脂肪沉積較少,可能與脂肪酸氧化能力強(qiáng)和能量代謝快有關(guān)。Albuquerque等[4]發(fā)現(xiàn),葡萄牙脂肪型豬較高的脂肪沉積可能與脂肪酸從頭合成、膽固醇合成及胰島素抵抗有關(guān)。Zhang等[5]發(fā)現(xiàn),嘉興黑豬較高的脂肪率可能與PI3K-Akt信號(hào)通路和MAPK/p38通路等與脂肪生成相關(guān)的通路有關(guān)。Yuan等[6]發(fā)現(xiàn),脂肪酸氧化相關(guān)基因CPT1A、ENNP1、APOBEC3F、PDK4在長白豬皮下脂肪高表達(dá),長白豬的脂肪分解代謝高于金華豬,pFAM134B基因通過上調(diào)PPARγ、FAS、ACC等脂肪合成相關(guān)基因表達(dá),下調(diào)ATGL、HSL脂肪分解相關(guān)基因表達(dá),促進(jìn)脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的積累。Chen等[7]發(fā)現(xiàn),脂肪代謝相關(guān)基因CES1通過參與脂酰和膽固醇代謝而促進(jìn)甘油三酯生成。Xing等[8]發(fā)現(xiàn),AMPD1基因通過抑制脂肪酸氧化分解相關(guān)基因AMPK的活性,減少脂肪酸氧化,促進(jìn)脂肪積累,CKMT2基因通過促進(jìn)線粒體呼吸,增加能量消耗,減少脂肪存儲(chǔ)。Liu等[9]、Zhao等[10]發(fā)現(xiàn),PPAR信號(hào)通路、類固醇激素生物合成、TNF信號(hào)通路和甘油酯代謝等通路協(xié)同調(diào)節(jié)豬皮下前脂肪細(xì)胞分化,在分化的不同時(shí)間點(diǎn),甘油三酯在脂肪細(xì)胞中不斷積累?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】不同豬種的不同組織調(diào)控脂肪沉積的功能基因及其通路并不完全相同,表現(xiàn)出豬種特異性和時(shí)空特異性。迪慶藏豬是中國特有的高原型豬種之一,沉脂能力強(qiáng)、肉質(zhì)好[11],目前關(guān)于藏豬的報(bào)道主要集中在血液生理[12]、低氧適應(yīng)[13]、生長[14]、肉質(zhì)[15],未見有迪慶藏豬背脂沉積功能基因及其調(diào)控機(jī)制的報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究采用RNA-Seq技術(shù)篩選大型迪慶藏豬背部皮下脂肪不同生長階段的差異表達(dá)基因并分析其調(diào)控網(wǎng)絡(luò),為迪慶藏豬的育種工作提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選擇胎次相同、日齡和體重相近的純種大型迪慶藏豬36頭隨機(jī)分3組(均已去勢,公母各半),每組12頭(表1),在云南省香格里拉市綠源生態(tài)種養(yǎng)專業(yè)合作社進(jìn)行育肥試驗(yàn),分別在體重達(dá)40、80和120 kg左右(S1:10～40 kg、S2:40～80 kg、S3:80～120 kg)時(shí)屠宰,每組選擇接近平均體重的3頭去勢公豬,采集背部皮下脂肪組織,分別為S1_背脂_1、S1_背脂_2、S1_背脂_3、S2_背脂_1、S2_背脂_2、S2_背脂_3、S3_背脂_1、S3_背脂_2、S3_背脂_3,液氮速凍運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,保存于-80 ℃冰箱,用于提取總RNA。

表1 試驗(yàn)豬只分組情況Table 1 Group of experimental pigs

1.2 試驗(yàn)方法

總RNA提取、mRNA文庫構(gòu)建參照文獻(xiàn)[16],用Illumina HiseqTM2000上機(jī)測序。用軟件Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)qPCR引物(表2),內(nèi)參基因選用豬GAPDH,qPCR定量驗(yàn)證重要DEGs。

表2 差異表達(dá)基因引物Table 2 The primers of differentially expressed genes

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

1.3.1 測序數(shù)據(jù)處理 原始數(shù)據(jù)(Raw data)質(zhì)控、過濾后(Clean reads)與豬參考基因組(Susscrofa11.1)比對(duì),使用軟件StringTie組裝、定量比對(duì)到基因組各染色體上的reads,得到reads對(duì)應(yīng)的每千個(gè)堿基轉(zhuǎn)錄每百萬映射讀取的片段(Fragments per kilobase of exon model per million mapped reads,FPKM)值。

1.3.2 差異基因篩選及功能富集分析 使用軟件DEGseq2對(duì)歸一化的FPKM值進(jìn)行差異基因分析,參考王志秀[16]方法,以|log2fold change|>1且P<0.05為標(biāo)準(zhǔn)篩選差異表達(dá)基因;參考陸秀紅等[17]方法,用在線軟件DAVID對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行GO和KEGG分析,顯著富集基因的閾值定為富集度Count≥2且矯正P<0.05。

1.3.3 差異基因STEM分析 參考Lu等[18]方法,以3個(gè)不同生長階段全部差異基因的表達(dá)量數(shù)據(jù)用短時(shí)間序列表達(dá)模式分析軟件(Short-time series expression miner,STEM)進(jìn)行表達(dá)模式聚類分析,以不同階段兩兩比較的組間差異倍數(shù)>2倍且P<0.05為數(shù)據(jù)過濾標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.4 差異基因互作網(wǎng)絡(luò)分析 選擇STEM分析中顯著富集的模塊,參考Chen等[19]方法,利用R語言計(jì)算模塊中差異基因間的共表達(dá)相關(guān)性,選擇Pearson相關(guān)系數(shù)大于0.98的轉(zhuǎn)錄本,用軟件Cytoscape 3.7.1繪制基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)。

2 結(jié)果與分析

2.1 迪慶藏豬背脂轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

RNA-seq數(shù)據(jù)(表3)顯示,每個(gè)樣品原始reads數(shù)均在46.06 M以上,有效reads比例高于90%,有效 Q30比例均高于94%,3組樣品的比對(duì)率均高于87%,符合生物信息學(xué)分析要求。

表3 RNA-Seq數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)Table 3 RNA-Seq data statistics

2.2 qPCR定量驗(yàn)證

對(duì)ACOX1、ANGPTL4等15個(gè)差異基因進(jìn)行qPCR驗(yàn)證(圖1)。驗(yàn)證結(jié)果表明,15個(gè)基因在背脂組織中的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果一致。

圖1 迪慶藏豬背脂差異表達(dá)基因qPCR定量驗(yàn)證結(jié)果Fig.1 qPCR results of differentially expressed genes in back fat of Diqing Tibetan pigs

2.3 迪慶藏豬背脂差異基因表達(dá)水平分析

利用全部DEGs的FPKM值繪制小提琴圖,由圖2可見,S1、S2和S3組lg(FPKM+1)值的中位數(shù)分別為0.81、0.85和0.86。

圖2 迪慶藏豬背脂差異基因表達(dá)水平的小提琴圖Fig.2 Violin diagram of differential gene expression levels of back fat of Diqing Tibetan pigs

2.4 迪慶藏豬背脂mRNA差異表達(dá)分析

10～40 kg(S1)、40～80 kg(S2)和80～120 kg(S3)階段共得到19 706個(gè)DEGs(圖3),僅在S1階段表達(dá)的基因有835個(gè),僅在S2階段表達(dá)的基因有666個(gè),僅在S3階段表達(dá)的基因有950個(gè)。

圖3 迪慶藏豬背脂三階段間基因表達(dá)Fig.3 Gene expression between back fat in 3 stages of Diqing Tibetan pigs

2.5 迪慶藏豬不同生長階段背脂顯著差異基因篩選

在S1與S2階段共篩選到顯著差異表達(dá)基因845個(gè),其中,263個(gè)上調(diào),582個(gè)下調(diào)(圖4-A);在S2與S3階段共篩選到558個(gè),其中,292個(gè)上調(diào),266個(gè)下調(diào)(圖4-B)。

A:S1與S2階段差異基因火山圖;B:S2與S3階段差異基因火山圖。A:Volcanic map of differential genes in S1 and S2; B:Volcanic map of differential genes in S2 and S3.圖4 迪慶藏豬背脂差異基因火山圖Fig.4 Volcano map of differential genes in back fat of Diqing Tibetan pigs

2.6 迪慶藏豬不同生長階段背脂顯著差異基因功能富集分析

S1與S2階段:GO分析顯示,顯著DEGs主要富集在鈣離子結(jié)合、碳水化合物結(jié)合、細(xì)胞增殖正調(diào)控等(圖5-A)。KEGG分析顯示,顯著DEGs主要富集在PPAR信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、胰島素抵抗等(圖5-B),其中,ACOX1、ANGPTL4和ADIPOQ基因富集于PPAR信號(hào)通路并顯著下調(diào)。

A:S1與S2階段差異基因GO分析氣泡圖;B:S1與S2階段差異基因KEGG分析氣泡圖;C:S2與S3階段差異基因GO分析氣泡圖;D:S2與S3階段差異基因KEGG分析氣泡圖。A:GO bubble diagram of differential genes in S1 and S2;B:KEGG bubble diagram of differential genes in S1 and S2;C:GO bubble diagram of differential genes in S2 and S3;D:KEGG bubble diagram of differential genes in S2 and S3.圖5 迪慶藏豬背脂差異基因GO和KEGG分析Fig.5 GO and KEGG of differential genes in back fat of Diqing Tibetan pigs

S2與S3階段:GO分析顯示,顯著DEGs主要富集在脂肪細(xì)胞分化、碳水化合物結(jié)合、脂質(zhì)代謝過程等(圖5-C)。KEGG分析顯示,顯著DEGs主要富集在胰島素信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、糖酵解/糖異生、PPAR信號(hào)通路等(圖5-D),其中,EGR2、ID4、FFAR4基因富集于脂肪細(xì)胞分化,PCK1、PPP1R3C基因富集于胰島素信號(hào)通路,5個(gè)基因均顯著上調(diào)。

2.7 迪慶藏豬不同生長階段背脂差異基因短時(shí)間序列分析

短時(shí)間序列分析(圖6)發(fā)現(xiàn)共有4個(gè)差異顯著模塊,分別為模塊4(P=6.4E-26)、模塊0(P=2.0E-9)、模塊3(P=7.3E-5)和模塊14(P=2.7E-6),其中模塊4、模塊0和模塊3的差異基因總體聚為一類,基因表達(dá)量隨著大型迪慶藏豬體重的增加逐漸下降;模塊14中基因的表達(dá)量先上調(diào)表達(dá)后輕微下調(diào)表達(dá);其余模塊差異不顯著(P>0.05)。

模塊以基因數(shù)量和模塊顯著性排序。Clusters are ordered based on number of genes and cluster significance.圖6 迪慶藏豬背脂STEM分析Fig.6 STEM analysis in back fat of Diqing Tibetan pigs

2.8 迪慶藏豬背脂差異表達(dá)基因互作網(wǎng)絡(luò)

2.8.1 模塊0/3/4差異基因互作網(wǎng)絡(luò) 將STEM分析中3個(gè)階段均顯著下調(diào)的差異基因合并,繪制基因互作網(wǎng)絡(luò)(圖7)。CPT1B、LPIN3、PTGER3基因位于網(wǎng)絡(luò)中心,與ND3、DEGS2、HHIP、CYTB、SMPD3、CALML5基因有互作關(guān)系,CPT1B基因調(diào)控ND3、DEGS2、HHIP、LPIN3、CYTB、SMPD3、PTGER3、CALML5基因;LPIN3基因調(diào)控ND3、DEGS2、HHIP、CYTB、SMPD3、CALML5基因;PTGER3基因調(diào)控ND3、DEGS2、HHIP、LPIN3、CYTB、SMPD3、CALML5基因。

紅色節(jié)點(diǎn)表示位于網(wǎng)絡(luò)核心的基因,藍(lán)色節(jié)點(diǎn)表示位于網(wǎng)絡(luò)外周的基因,箭頭起始端代表調(diào)控關(guān)系的上游,箭頭末端代表調(diào)控關(guān)系的下游,即箭頭連接兩個(gè)基因,代表箭頭起始端的基因?qū)δ┒说幕蚱鹫{(diào)控作用,下同。Red nodes represent genes located in the core of the network, and blue nodes represent genes located outside the network. The beginning and end of the arrows represent the upstream and downstream of the regulatory relationship. The arrow connects two genes, where the gene at the beginning regulates the gene at the end. The same as below.圖7 迪慶藏豬背脂模塊0/3/4差異基因互作網(wǎng)絡(luò)Fig.7 Interaction network diagram of differential genes at module 0/3/4 in back fat of Diqing Tibetan pigs

2.8.2 模塊14差異基因互作網(wǎng)絡(luò) 將STEM分析中先上調(diào)、后輕微下調(diào)的基因繪制基因互作網(wǎng)絡(luò)(圖8)。AACS、SOCS3、AQP3、RPS6KA1基因位于網(wǎng)絡(luò)中心,與STC2、CYP2C42、PCK2、ACP5和SPP1基因有互作關(guān)系,AACS基因調(diào)控CYP2C42、SOCS3、AQP3、PCK2、RPS6KA1、ACP5、SPP1基因;SOCS3基因調(diào)控STC2、SPP1基因;AQP3基因調(diào)控STC2、SOCS3、CYP2C42、PCK2、RPS6KA1、SPP1基因;RPS6KA1基因調(diào)控STC2、SOCS3、ACP5、SPP1基因。

圖8 迪慶藏豬背脂模塊14差異基因互作網(wǎng)絡(luò)圖Fig.8 Interaction network diagram of differential genes at module 14 in back fat of Diqing Tibetan pigs

3 討 論

3.1 迪慶藏豬S1與S2階段背脂沉積差異基因

ACOX1基因編碼脂肪酸β氧化的第一限速酶,ACOX1基因表達(dá)下調(diào),抑制脂肪酸氧化,體內(nèi)甘油三酯積累,導(dǎo)致大鼠肥胖[20]。ANGPTL4編碼的蛋白可調(diào)節(jié)血糖穩(wěn)態(tài)、脂質(zhì)代謝,促進(jìn)脂肪細(xì)胞中的甘油三酯釋放到血漿,在缺失ANGPTL4的小鼠血漿中幾乎檢測不到甘油三酯,過表達(dá)ANGPTL4的小鼠血漿甘油三酯含量升高[21],ANGPTL4編碼的蛋白可將血漿甘油三酯運(yùn)送到代謝需求量大的組織,促進(jìn)甘油三酯分解為脂肪酸,進(jìn)一步氧化分解,為組織代謝供能[22]。ADIPOQ編碼脂聯(lián)蛋白的C1Q和膠原結(jié)構(gòu)域,它的突變或異常表達(dá)都會(huì)引起胰島素抵抗相關(guān)的代謝綜合征,其僅在脂肪組織中表達(dá),在調(diào)節(jié)脂代謝和糖代謝中發(fā)揮作用[23],ADIPOQ編碼的脂聯(lián)素能在脂肪組織中誘導(dǎo)AMPK蘇氨酸殘基磷酸化,激活的AMPK促進(jìn)脂肪酸氧化分解,減少脂肪存儲(chǔ),ADIPOQ是脂肪生成的負(fù)調(diào)控因子[24]。在本研究中,ACOX1、ANGPTL4和ADIPOQ基因在S1與S2階段下調(diào),ACOX1基因下調(diào)可能抑制脂肪酸氧化、甘油三酯積累,ANGPTL4基因下調(diào)可能抑制脂肪細(xì)胞中甘油三酯分解,ADIPOQ基因下調(diào)可能減少脂肪酸分解、增加脂肪存儲(chǔ),背膘增厚,與S2階段背膘厚顯著高于S1階段的結(jié)果一致。

3.2 迪慶藏豬S2與S3階段背脂沉積差異基因

EGR2是脂肪形成誘導(dǎo)因子之一,EGR2基因位于C/EBPβ的上游,通過誘導(dǎo)C/EBPβ的表達(dá)而促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化[25],隨EGR2表達(dá)量減少,3T3-L1細(xì)胞分化能力降低[26]。ID4編碼蛋白是DNA結(jié)合抑制劑蛋白家族成員,可調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化,促進(jìn)脂肪生成,前脂肪細(xì)胞中C/EBPα、PPARγ、FABP4、LPL等脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志物表達(dá)水平隨ID4基因表達(dá)降低而降低,ID4基因缺失小鼠,脂肪組織減少、體重降低[27]。FFAR4編碼蛋白是G蛋白偶聯(lián)受體家族成員,作為長鏈脂肪酸的受體,可調(diào)節(jié)脂肪生成,FFAR4在ω-3脂肪酸的刺激下,作用于前脂肪細(xì)胞的纖毛上,誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞增殖,產(chǎn)生更多新的脂肪細(xì)胞來儲(chǔ)存飽和脂肪酸,進(jìn)而維持脂肪組織的脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)[28],此外,在游離脂肪酸誘導(dǎo)下,FFAR4與脂膜上的G蛋白偶聯(lián),抑制細(xì)胞內(nèi)cAMP的積累,cAMP是一種第二信使,可激活脂肪分解、葡萄糖攝取和產(chǎn)熱,FFAR4對(duì)cAMP抑制,減少脂肪分解和能量消耗,促進(jìn)脂肪沉積[29]。在本研究中,相比于S2階段,基因EGR2、ID4、FFAR4在S3階段上調(diào),可能對(duì)脂肪細(xì)胞存在誘導(dǎo)分化、促進(jìn)增殖,降低代謝,維持胞內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)等作用。

PCK1和PPP1R3C基因在糖代謝和脂代謝中發(fā)揮重要作用,PCK1編碼促進(jìn)甘油生成的調(diào)節(jié)酶,敲除PCK1基因的小鼠,脂肪組織中甘油三酯沉積減少[30],過表達(dá)PCK1的轉(zhuǎn)基因小鼠甘油生成增加,游離脂肪酸重新酯化,脂肪細(xì)胞大小和脂肪質(zhì)量增加[31],表明PCK1通過生成甘油三酯的前體—甘油,促進(jìn)脂肪沉積;PPP1R3C編碼碳水化合物結(jié)合蛋白,敲除PPP1R3C基因的小鼠,其脂肪組織中脂肪生成的關(guān)鍵基因mTORC1和SREBP1表達(dá)水平降低,脂質(zhì)合成減少[32],表明PPP1R3C基因可促進(jìn)脂肪合成。在本研究中,與S2階段相比,PCK1和PPP1R3C基因在S3階段中顯著上調(diào),可能促進(jìn)甘油三酯合成、脂質(zhì)生成增加,背膘增厚,符合S3階段背膘厚顯著高于S2階段的結(jié)果。

3.3 迪慶藏豬S1與S2與S3階段背脂沉積差異基因

PTGER3是G蛋白偶聯(lián)受體家族成員,能誘導(dǎo)異丙腎上腺素合成而促進(jìn)脂肪分解,缺失PTGER3基因的小鼠因不能合成異丙腎上腺素,脂肪分解被抑制、脂肪沉積增加;其與正常小鼠相比,有更大的脂肪細(xì)胞和更高的體脂含量[33]。CPT1B基因編碼長鏈脂肪酸β氧化的限速酶,脂肪組織CPT1B表達(dá)減少會(huì)導(dǎo)致脂肪組織中脂肪酸氧化能力降低,未氧化的脂肪酸新酯化為甘油三酯,引起機(jī)體肥胖[34]。LPIN3基因編碼蛋白是脂蛋白家族成員之一,參與甘油三酯運(yùn)輸,缺失LPIN3基因的脂肪細(xì)胞,脂肪生成關(guān)鍵基因PPARγ、FABP4表達(dá)降低、脂滴減小,LPIN3的表達(dá)水平與脂肪含量呈負(fù)相關(guān),肥胖小鼠通過負(fù)反饋機(jī)制抑制LPIN3基因的表達(dá)以維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)[35]。本研究中,基因PTGER3、CPT1B和LPIN3在迪慶藏豬3個(gè)階段背脂中均顯著下調(diào)表達(dá),PTGER3基因下調(diào)可能抑制脂肪分解、促進(jìn)脂肪細(xì)胞增大,CPT1B基因下調(diào)可能使脂肪酸氧化能力降低、導(dǎo)致甘油三酯增多,LPIN3基因下調(diào)可能防止脂滴的過度聚集以維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài),最終導(dǎo)致背膘增厚,與S3階段背膘顯著高于S2階段、S2階段顯著高于S1階段的結(jié)果一致。

AACS編碼位于脂滴周圍的酮體利用酶,將乙酰乙酸轉(zhuǎn)化為乙酰乙酰輔酶A,為脂肪合成提供乙?；鶈挝?缺失AACS基因?qū)е轮炯?xì)胞分化標(biāo)志物PPARγ和CEBP/α表達(dá)量降低,脂肪細(xì)胞分化受阻[36]。SOCS3編碼細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白,敲除SOCS3基因的肝細(xì)胞,與脂肪生成相關(guān)的SREBP1c、ACCα和IL-6等蛋白表達(dá)顯著降低、脂肪生成減少[37]。RPS6KA1基因是絲氨酸/蘇氨酸激酶RSK家族成員,RPS6KA1基因可誘導(dǎo)CREB基因磷酸化,激活后的CREB與CEBPB基因啟動(dòng)子結(jié)合,促進(jìn)脂肪生成[38]。AQP3編碼水通道蛋白,促進(jìn)水和甘油的運(yùn)輸,AQP3基因通過促進(jìn)成脂相關(guān)基因PPARγ、aP2等的表達(dá)而促進(jìn)脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯沉積[39]。在本研究中,從S1到S2階段,AACS基因上調(diào),可能促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化、細(xì)胞數(shù)量增多;SOCS3和RPS6KA1基因上調(diào),可能促進(jìn)脂肪生成;AQP3基因上調(diào),可能導(dǎo)致脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯增多、背膘增厚;但從S2階段到S3階段,這4個(gè)基因均稍下調(diào),可能導(dǎo)致脂肪生成速率降低、脂肪細(xì)胞分化減緩,脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯速率減慢,背膘增速變慢,與S2階段平均背膘厚、6～7肋間膘厚比S1階段分別增加83.26%、75.79%,而S3階段平均背膘厚、6～7肋間膘厚比S2階段分別增加38.83%、25.15%,增幅下降的結(jié)果一致。

4 結(jié) 論

大型迪慶藏豬從40 kg長至80 kg,AACS基因上調(diào)促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化、細(xì)胞數(shù)量增多,SOCS3、RPS6KA1基因上調(diào)促進(jìn)脂肪生成,AQP3基因上調(diào)促進(jìn)脂肪細(xì)胞內(nèi)甘油三酯增多;ACOX1基因下調(diào)抑制脂肪酸氧化,ADIPOQ基因下調(diào)減少脂肪酸分解、增加脂肪存儲(chǔ),PTGER3基因下調(diào)抑制脂肪分解,CPT1B基因下調(diào)促進(jìn)甘油三酯合成,ANGPTL4基因下調(diào)抑制脂肪細(xì)胞中甘油三酯分解,LPIN3基因下調(diào)表達(dá)調(diào)控脂滴的過度聚集以維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài),AACS、SOCS3和LPIN3等10個(gè)基因協(xié)同作用,導(dǎo)致其背膘厚顯著增加。從80 kg長至120 kg,EGR2基因上調(diào)誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化、促進(jìn)脂肪細(xì)胞增殖,PPP1R3C基因上調(diào)促進(jìn)脂肪合成,ID4基因上調(diào)促進(jìn)脂肪生成,PCK1基因上調(diào)促進(jìn)甘油三酯合成,FFAR4基因上調(diào)減少脂肪分解、維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài);PTGER3基因下調(diào)抑制脂肪分解、脂肪細(xì)胞增大,CPT1B基因下調(diào)使脂肪酸氧化能力降低、甘油三酯增多,LPIN3基因下調(diào)調(diào)控脂滴的過度聚集以維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài),EGR2、PPP1R3C和LPIN3等8個(gè)基因協(xié)同作用,導(dǎo)致其背膘厚顯著增加。