臧婭磊，李 萌，吳緒金，張可松，鄭先福

(1.鄭州鄭氏化工產(chǎn)品有限公司/河南省作物化控工程技術(shù)研究中心，河南 鄭州 450002；2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，河南 鄭州 450002；3.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，河南 鄭州 450000)

螺螨酯，化學(xué)名稱為3-(2，4-二氯苯基)-2-氧代-1-氧雜螺[4.5]癸-3-烯-4-基-2，2-二甲基丁酸酯，英文通用名為spirodiclofen，分子式為C21H24Cl2O4。屬新型季酮酸殺螨劑，具有高效低毒的特點(diǎn)，主要防治螨蟲(chóng)，如全爪螨屬、銹螨屬、短須螨屬、刺繡螨屬和葉螨屬，可用于柑橘、梨果、核果、葡萄、草莓、啤酒花和堅(jiān)果等作物。通過(guò)抑制螨蟲(chóng)體內(nèi)的脂肪合成，破壞能量代謝活動(dòng)而殺死螨蟲(chóng)，作用機(jī)制獨(dú)特[1]。目前該農(nóng)藥僅在冬棗、柑橘樹(shù)、棉花、蘋(píng)果樹(shù)、薔薇科觀賞花卉和櫻桃等6種作物上登記，未在綠豆上登記。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)關(guān)于螺螨酯的應(yīng)用研究主要見(jiàn)于對(duì)紅蜘蛛、螨蟲(chóng)、二斑葉螨等的防效[2-3]，也見(jiàn)有山楂葉螨[4，5]和二斑葉螨[6-8]對(duì)該藥的抗性研究，對(duì)土壤微生物及土壤酶的毒性效應(yīng)[9]，在植株和動(dòng)物中的代謝[10]，柑橘類(lèi)水果[11-14]和蘋(píng)果[15]中的消解動(dòng)態(tài)和殘留量分析，茶葉中的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)[16]，加工方式對(duì)螺螨酯殘留量的影響[17]，生姜種植土壤中螺螨酯降解菌的篩選與鑒定[18]等等。對(duì)螺螨酯殘留檢測(cè)方法報(bào)道較少，已報(bào)道螺螨酯在煙草中的加速溶劑萃取，硅膠凈化，高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)法[19]；在土壤中乙腈-水(體積比4∶1)混合振蕩提取，高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)法[20]；在柑橘中乙腈提取，N-丙基乙二胺固相吸附劑(PSA)凈化，超高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法[21]；柑橘及土壤中混合提取劑(乙腈∶水=4∶1)提取、Florisil固相萃取小柱凈化，氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)[22]；蘋(píng)果及土壤中乙腈提取，F(xiàn)lorisil固相萃取小柱凈化，氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)[23]；柑橘和土壤中丙酮提取，二氯甲烷萃取，氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)[13]；柑橘中乙腈提取，高速離心后氮吹濃縮定容，氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)[24]；9種果品中的乙腈渦旋提取，混合使用PSA和ODS-C18兩種基質(zhì)分散萃取凈化，氣相色譜四極桿質(zhì)譜檢測(cè)[25]。國(guó)內(nèi)外關(guān)于綠豆和植株中螺螨酯的殘留檢測(cè)方法、殘留安全性評(píng)價(jià)及殘留膳食攝入評(píng)估未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)建立了超高效液相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)綠豆和植株中的螺螨酯；通過(guò)建立的方法對(duì)綠豆和植株中的螺螨酯進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)其殘留量進(jìn)行了膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。為評(píng)價(jià)螺螨酯在綠豆上的殘留安全性提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 供試農(nóng)藥制劑：24%螺螨酯懸浮劑；供試作物品種：冀綠10號(hào)(河南)、大名綠豆(內(nèi)蒙古)、中綠5號(hào)(湖南)、南綠1號(hào)(四川)、中綠2號(hào)(安徽)。

1.2 田間試驗(yàn) 時(shí)間：2018年；地點(diǎn)：河南省新鄉(xiāng)市平原新區(qū)王村，內(nèi)蒙古烏蘭察布市涼城縣麥胡圖鎮(zhèn)，湖南省長(zhǎng)沙縣黃花鎮(zhèn)崩坎村，四川省彭州市濛陽(yáng)鎮(zhèn)，安徽省宿州市孫圩子鄉(xiāng)。

施藥劑量：按有效成分(mg/kg)進(jìn)行計(jì)算。按劑量90和135 mg/kg施藥2次和3次；

施藥間隔：14 d；

采收時(shí)間：最后1次施藥后14、21和28 d隨機(jī)采集綠豆和植株樣品。同時(shí)采收空白對(duì)照樣品。

樣品處理：植株剪成1 cm以下的小段，綠豆脫粒。樣品加干冰粉碎后，-20 ℃保存待測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 試劑與儀器 試劑：螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(CAS號(hào)148477-71-8，99.0%)、甲酸(色譜純)、乙腈(色譜純)、甲醇(色譜純)、PSA吸附劑、GCB吸附劑、氯化鈉(分析純)。

儀器：高效液相色譜儀(LC-30AD)、質(zhì)譜儀(LCMS-8050)、電子天平(ME204E，最大量程220 g，d=0.0001 g)、電子天平(BS 2202 S，最大量程2200 g，d=0.01 g)、Milli-Q Synthesis 超純水系統(tǒng)、超聲波清洗儀(KQ-5200)、多管渦旋振蕩器(TARGIN?VX-Ⅲ)、臺(tái)式低速離心機(jī)(L-550)、食品切碎攪拌機(jī)(R10 V.V.)。

1.3.2 提取及凈化 稱取樣品10.00 g于100 mL離心管中，加入20 mL水浸泡2 h，再加入20 mL乙腈和5 g氯化鈉，置于多管渦旋振蕩器中振蕩提取10 min，4 000 r/min離心5 min后，取2.0 mL上清液至含有0.05 g PSA和0.02 g GCB的2 mL離心管中，渦旋1 min，4 000 r/min離心5 min，經(jīng)0.22 μm針孔濾膜過(guò)濾于進(jìn)樣小瓶中，待LC/MS/MS分析[26，27]。

1.3.3 儀器條件 液相色譜柱：Shim-pack GISS(2.1 mm ×50 mm，1.9 μm)；柱溫：40 ℃；流速：0.3 mL/min；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液-乙腈(體積比2∶8)；電離方式：ESI+；CID氣：270 kpa；霧化氣流量：3.0 L/min；加熱氣流量：10 L/min；接口溫度：300 ℃；DL溫度：250 ℃；加熱塊溫度：400 ℃。檢測(cè)方式為多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)，(表1)。

表1 MRM模式下螺螨酯的質(zhì)譜參數(shù)

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線 將螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈稀釋為0.002、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.3.3條件下進(jìn)行檢測(cè)，橫坐標(biāo)為濃度(mg/L)，縱坐標(biāo)為峰面積(A)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=28 995 778.524 5x+ 155 115.306 1，r2=0.998 7。(圖1)為標(biāo)準(zhǔn)曲線線性圖。

圖1 螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)曲線線形圖

1.3.5 添加回收率試驗(yàn) 將不同濃度的螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液分別加入到綠豆和植株空白對(duì)照樣品中，混合均勻，靜置2 h，按1.3.2進(jìn)行樣品的提取和凈化，按1.3.3項(xiàng)條件測(cè)定。

1.4 膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法 衛(wèi)生部2002年發(fā)布的《中國(guó)不同人群消費(fèi)膳食分組食譜》中的膳食結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)，我國(guó)城鄉(xiāng)居民的干豆類(lèi)及其制品每日食物攝入量為0.016 kg。本試驗(yàn)綠豆中螺螨酯殘留中值是0.01 mg/kg，螺螨酯的ADI值為0.01 mg/kg bw[28]，我國(guó)居民的平均體重為63 kg。螺螨酯的國(guó)家估算每日攝入量(NEDI)計(jì)算公式如下[29]：

NEDI=∑[STMRi(或STMR-Pi)×Fi]/bw

(1)

式中：

NEDI—國(guó)家估計(jì)每日攝入量，mg/kg bw；

STMRi—第i類(lèi)初級(jí)食用農(nóng)產(chǎn)品的規(guī)范試驗(yàn)殘留中值，mg/kg；

STMR-Pi—第i類(lèi)加工食用農(nóng)產(chǎn)品的規(guī)范試驗(yàn)殘留中值，mg/kg；

Fi—第i類(lèi)食用農(nóng)產(chǎn)品的消費(fèi)量，kg/d。

bw—人群平均體重，kg。

螺螨酯的慢性攝入風(fēng)險(xiǎn)用國(guó)家估計(jì)每日攝入量占ADI的百分率表示，計(jì)算公式如下：

ADI%=(NEDI/ADI)×100%

(2)

式中：

ADI—每日允許攝入量，mg/kg bw；

ADI%—國(guó)家估計(jì)每日攝入量占每日允許攝入量的百分率。

當(dāng)ADI%≤100%時(shí)，表示慢性風(fēng)險(xiǎn)可以接受，ADI%越小，風(fēng)險(xiǎn)越??；當(dāng)ADI%>100%時(shí)，表示有不可接受的慢性風(fēng)險(xiǎn)，ADI%越大，風(fēng)險(xiǎn)越大。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)方法回收率 當(dāng)添加水平是0.01、0.1和1 mg/kg時(shí)，螺螨酯在綠豆中的平均回收率在87%～105%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在6.8%～7.1%之間；當(dāng)添加水平是0.01、0.1和10 mg/kg時(shí)，螺螨酯在植株中的平均回收率在81%～86%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在6.4%～7.3%之間。螺螨酯在綠豆和植株中的最低檢測(cè)濃度均為0.01 mg/kg。綠豆植株樣品空白色譜圖(圖2)，綠豆添加回收色譜圖(圖3)。

本試驗(yàn)樣品提取及凈化前處理方法簡(jiǎn)便，檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度及檢出限均能滿足殘留分析要求。

表2 綠豆植株和綠豆中螺螨酯的添加回收率試驗(yàn)結(jié)果

圖2 綠豆植株樣品空白色譜圖

2.2 綠豆和植株中螺螨酯殘留量 2018年河南、內(nèi)蒙古、湖南、四川、安徽五地不同施藥劑量、施藥間隔和采收間隔期綠豆中螺螨酯殘留量(表3)。表4給出了不同基質(zhì)、不同施藥劑量、施藥次數(shù)和采樣間隔綠豆及其植株中螺螨酯殘留量對(duì)比結(jié)果。綠豆樣品檢測(cè)色譜圖(圖4)。

由表4可見(jiàn)，當(dāng)施藥劑量和施藥次數(shù)相同時(shí)，隨著采收間隔天數(shù)的增加殘留量減少，說(shuō)明殘留量與采收間隔期存在負(fù)相關(guān)，原因是隨著采收時(shí)間的延遲螺螨酯逐漸消解。當(dāng)施藥劑量、施藥次數(shù)和采收間隔期相同時(shí)，植株的殘留量高于綠豆，原因是施藥時(shí)主要著液部位是植株，而豆莢阻隔了藥液的滲透，因此綠豆殘留量較低。

圖4 綠豆樣品色譜圖(湖南，高劑量施藥2次，采收間隔28 d)

2.3 長(zhǎng)期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn) 根據(jù)1.4中公式計(jì)算，結(jié)果(表5)。螺螨酯普通人群的國(guó)家估計(jì)每日攝入量是0.003 1 mg，占日允許攝入量的0.5%左右，認(rèn)為螺螨酯在綠豆中的殘留對(duì)一般人群健康的影響是在一個(gè)可接受的風(fēng)險(xiǎn)水平。

3 結(jié)論

按施藥劑量90～135 g a.i./ha，施藥次數(shù)2～3次，安全間隔期21 d以上時(shí)，在綠豆上使用螺螨酯對(duì)一般人群健康不會(huì)產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。

表4 不同基質(zhì)、施藥劑量、施藥次數(shù)和采樣間隔螺螨酯殘留量對(duì)比

表5 螺螨酯風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估計(jì)算表