張 強(qiáng)，王瑩瑩，吳 培

(山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東 濟(jì)南 250100)

1 前言

腈吡螨酯(Cyenopyrafen，CAS號：560121-52-0，分子式：C24H31N3O2)[1-2]是日產(chǎn)化學(xué)研發(fā)的吡唑類殺螨劑，2008年首次獲得登記。腈吡螨酯通過代謝轉(zhuǎn)化成羥基化合物，其可進(jìn)而作用于呼吸系統(tǒng)的電子傳遞鏈，通過擾亂琥珀酸脫氫酶的作用，從而抑制線粒體正常的功效，達(dá)到防治的效果。腈吡螨酯具有低毒、高效、殺螨譜廣的優(yōu)點(diǎn)，可用于防治果樹、茶樹、蔬菜上的各種害螨。

聯(lián)苯肼酯(Bifenazate，CAS號：149877-41-8，分子式：C17H20N2O3)，其屬于非內(nèi)吸性殺螨劑，作用于螨類中樞神經(jīng)傳導(dǎo)系統(tǒng)γ-氨基丁酸受體，主要是觸殺作用。防治植食性螨類，主要用于果樹、觀賞植物及棉花和玉米田[3]。

科學(xué)合理混用農(nóng)藥具有延緩病蟲抗藥性產(chǎn)生、擴(kuò)大防治范圍、降低成本、提升防治效果、減少勞動(dòng)成本等優(yōu)點(diǎn)，農(nóng)藥混配劑的研究實(shí)際上是農(nóng)藥應(yīng)用技術(shù)的延伸[4]。實(shí)際生產(chǎn)中經(jīng)常把不同作用機(jī)制的農(nóng)藥混配在一起使用來提高防治效果。

目前國內(nèi)有關(guān)聯(lián)苯肼酯[5-8]及腈吡螨酯[9]的分析方法已有報(bào)道，但有關(guān)腈吡螨酯·聯(lián)苯肼酯復(fù)配制劑的分析方法未見報(bào)道。本文采用高效液相色譜法，對50%腈吡螨酯·聯(lián)苯肼酯懸浮劑中有效成分同時(shí)進(jìn)行定量分析。該方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 乙腈(色譜純)；超純水(電阻率18.2 MΩ·cm，25℃，現(xiàn)配現(xiàn)制)；腈吡螨酯標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.3%)，聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.3%)；50%腈吡螨酯·聯(lián)苯肼酯懸浮劑。

2.2 主要儀器 高效液相色譜儀：島津LC-20AT型，具有二極管陣列檢測器和自動(dòng)進(jìn)樣器，島津色譜工作站；超純水制備系統(tǒng)：青島富勒姆超純水機(jī)；色譜柱：250 mm×4.6 mm(id)不銹鋼柱，內(nèi)裝Eclipse XDB-C185μm填充物；電子天平：奧豪斯DV215CD型，精確至0.000 01 g。

2.3 液相色譜操作條件 流動(dòng)相：ψ(乙腈∶水)=68∶32；流量：1.0 mL/min；柱溫：40℃；檢測波長：280 nm；進(jìn)樣體積：5 μL；保留時(shí)間：腈吡螨酯約25.2 min、聯(lián)苯肼酯約6.6 min。

腈吡螨酯及聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣和50%腈吡螨酯·聯(lián)苯肼酯懸浮劑的高效液相色譜圖(圖1、2)。

2.4 測定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱取腈吡螨酯標(biāo)樣0.02 g(精確至0.000 01 g)，聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣0.03 g(精確至0.000 01 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取含腈吡螨酯0.02 g的試樣(精確至0.000 01 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

圖1 腈吡螨酯·聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 50%腈吡螨酯·聯(lián)苯肼酯懸浮劑高效液相色譜圖

2.4.3 測定 在上述操作條件下，待色譜儀基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

2.4.4 計(jì)算 試樣中腈吡螨酯(聯(lián)苯肼酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

A1──標(biāo)樣溶液中腈吡螨酯(聯(lián)苯肼酯)峰面積的平均值；

A2──試樣溶液中腈吡螨酯(聯(lián)苯肼酯)峰面積的平均值；

m1──腈吡螨酯(聯(lián)苯肼酯)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2──試樣的質(zhì)量，g；

P──標(biāo)樣中腈吡螨酯(聯(lián)苯肼酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的選擇 通過高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得腈吡螨酯、聯(lián)苯肼酯的紫外波長掃描圖(圖3、4)。綜合考慮助劑、溶劑的波長干擾及腈吡螨酯、聯(lián)苯肼酯的響應(yīng)值，經(jīng)過對照實(shí)驗(yàn)，選擇280 nm波長時(shí)，兩者均有較理想的吸收，且吸收比例恰當(dāng)，溶劑干擾弱，各種雜質(zhì)不影響主成分的測定。因此，綜合考慮各種因素，將檢測波長定為280 nm。

色譜柱選擇常規(guī)的Eclipse XDB- C18反相柱。依據(jù)腈吡螨酯、聯(lián)苯肼酯物化性質(zhì)，用乙腈作為溶劑溶解樣品，并選擇乙腈和水作為流動(dòng)相。將流動(dòng)相按不同比例在色譜柱上進(jìn)行試驗(yàn)，最終確定流動(dòng)相為ψ(乙腈∶水)=68∶32，在流速1.0 mL/min時(shí)，有效成分與雜質(zhì)能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，能在短時(shí)間能得到滿意的分析結(jié)果，提高了工作效率。

圖3 腈吡螨酯紫外吸收圖譜

圖4 聯(lián)苯肼酯紫外吸收圖譜

3.2 分析方法的特異性鑒定 按照2.4.1和2.4.2中的方法分別配制標(biāo)樣溶液和試樣溶液，按照方法對腈吡螨酯和聯(lián)苯肼酯進(jìn)行峰純度分析。結(jié)果表明結(jié)果顯示腈吡螨酯特異性-標(biāo)樣溶液中未檢測到不純物，標(biāo)樣溶液中最小峰純度相似度為1.000 000；聯(lián)苯肼酯特異性-標(biāo)樣溶液中未檢測到不純物，標(biāo)樣溶液中最小峰純度相似度為1.000 000；腈吡螨酯特異性-試樣溶液中未檢測到不純物，試樣溶液中最小峰純度相似度為1.000 000，聯(lián)苯肼酯特異性-試樣溶液中未檢測到不純物，試樣溶液中最小峰純度相似度為1.000 000，表明特異性符合要求。

圖5 標(biāo)樣溶液峰純度圖譜

3.3 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 稱取0.020 45 g腈吡螨酯、0.031 91 g聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣置于25 mL容量瓶中，使用乙腈溶解至刻度，為標(biāo)樣母液。分別移取1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL標(biāo)樣母液分別至10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度作為線性相關(guān)前4個(gè)點(diǎn)，標(biāo)樣母液作為線性相關(guān)第5個(gè)點(diǎn)。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線。試驗(yàn)測得腈吡螨酯線性方程為Y=1 054 039X-23 313，相關(guān)系數(shù)為1.000 0；聯(lián)苯肼酯線性方程為Y=854 030X+62 567，相關(guān)系數(shù)為0.999 8。結(jié)果表明腈吡螨酯、聯(lián)苯肼酯在測試的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖6 試樣溶液峰純度圖譜

3.4 分析方法的精密度試驗(yàn) 從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測得腈吡螨酯和聯(lián)苯肼酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.10和0.14，變異系數(shù)分別為0.50%和0.48%(表1)?？梢娫摲椒ǖ木芏饶軡M足定量分析要求。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.5 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 從50%腈吡螨酯·聯(lián)苯肼酯懸浮劑中制劑空白稱取5個(gè)試樣，分別加入一定量的腈吡螨酯(97.3%)和聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣(99.3%)，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測得腈吡螨酯和聯(lián)苯肼酯的平均回收率分別為100.98%和100.67%(表2)。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

試驗(yàn)建立了高效液相色譜法檢測50%腈吡螨酯·聯(lián)苯肼酯懸浮劑中有效成分的分析方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，腈吡螨酯、聯(lián)苯肼酯在測試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有操作簡便、快速的特點(diǎn)，適用于產(chǎn)品質(zhì)量控制。