勾陽(yáng)陽(yáng) 楊嬌嬌 向琴 喻嶸 陳聰

〔摘要〕 目的 探討左歸降糖清脂方對(duì)2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病MKR鼠內(nèi)脂素（Visfatin）信號(hào)分子的影響。方法 8周齡MKR小鼠，按性別、空腹血糖、體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、模型組、中藥組、陽(yáng)性藥物組；同齡C57/BL/6小鼠作為正常組；每組16只。除正常組、空白組外，其余小鼠高脂飼養(yǎng)8周。中藥組予左歸降糖清脂方溶液29.6 g/kg，陽(yáng)性藥物組（二甲雙胍和辛伐他汀組成，比例為50∶1，給藥67.6 mg/kg），其余組予等體積蒸餾水（體積同中藥組），灌胃治療8周。心臟采血處死各組小鼠，采用電化學(xué)法檢測(cè)空腹血糖；常規(guī)生化法檢測(cè)肝功能、血脂；電鏡及HE染色觀察肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)及病理變化；實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)肝臟脂肪組織分泌激素類(lèi)代謝調(diào)節(jié)因子Visfatin、視黃醇結(jié)合蛋白4（retinol binding protein4， RBP4）的mRNA表達(dá)水平；酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清炎癥因子血清可溶性白細(xì)胞介素-2受體（soluble interleukin-2 receptor， SIL-2R）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（fibroblast growth factor2， FGF2）含量的變化。結(jié)果 與正常組比較，模型組肝細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)明顯損傷以及大量脂肪堆積；空腹血糖，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase， ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase， AST）、血脂含量，RBP4和Visfatin的mRNA表達(dá)水平，炎癥因子SIL-2R、FGF-2含量均升高（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，中藥組與陽(yáng)性藥物組細(xì)胞損傷明顯改善，空腹血糖濃度降低（P<0.01），ALT、AST、血脂含量明顯下降（P<0.01），RBP4和Visfatin的mRNA表達(dá)水平降低（P<0.01），炎癥因子SIL-2R、FGF-2含量明顯下降（P<0.01）。與中藥組比較，陽(yáng)性藥物組空腹血糖濃度降低（P<0.05），其余指標(biāo)無(wú)差異。結(jié)論 左歸降糖清脂方可能通過(guò)改善肝功能、降低血脂、降低肝組織Visfatin及RBP4的mRNA表達(dá)水平、降低血清炎癥因子SIL-2R及FGF-2的含量，從而改善2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病肝臟的病理?yè)p傷。

〔關(guān)鍵詞〕 左歸降糖清脂方；2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝??；內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素；視黃醇結(jié)合蛋白4

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R285.5 ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A ? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０23.04.002

Effects of Zuogui Jiangtang Qingzhi Formula on the signaling molecules of visfatin of MKR mice with type 2 diabetes complicated with non-alcoholic fatty liver disease

GOU Yangyang1， YANG Jiaojiao1， XIANG Qin2， YU Rong2*， CHEN Cong1*

1. Guizhou University of Chinese Medicine， Guiyang， Guizhou 550025， China; 2. Hunan University of

Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To investigate the effects of Zuogui Jiangtang Qingzhi Formula （ZGJTQZF） on the signaling molecules of Visfatin in MKR mice with type 2 diabetes complicated with non-alcoholic fatty liver disease. Methods Eight-week-old MKR mice were randomly divided into blank group， model group， Chinese medicine （ZGJTQZF） group and positive drug group according to gender， fasting blood glucose and body weight. C57/BL/6 mice of the same age were set as normal group. Sixteen rats were included in each group. Except for normal group and blank group， the other mice were fed with high fat diets for 8 weeks. The Chinese medicine group was given ZGJTQZF （29.6 g/kg）， the positive drug group was given metformin and simvastatin （50∶1， 67.6 mg/kg）， and the other groups were given equal volume of distilled water （the same volume of the Chinese medicine group） for 8 weeks. The mice in each group were sacrificed by cardiac blood collection， and fasting blood glucose was measured by electrochemical method. Liver function and blood lipid were determined by routine biochemical method. The morphological structure and pathological changes of liver tissue were observed by electron microscope and HE staining. The mRNA expression levels of Visfatin and retinol binding protein 4 （RBP4） in liver adipose tissue were examined by real-time fluorescence quantitative detection. The levels of serum soluble interleukin-2 receptor （SIL-2R） and fibroblast growth factor 2 （FGF2） were checked by enzyme-linked immunosorbent assay. Results Compared with the normal group， the liver cells in model group showed obvious damage and a large amount of accumulated fat. Fasting blood glucose， alanine transaminase （ALT）、 aspartate aminotransferase （AST）， blood lipids， RBP4 and Visfatin mRNA expression levels， inflammatory factors SIL-2R， FGF-2 content all increased （P<0.05 or P<0.01）; compared with model group， the cell damage in the positive drug group and Chinese medicine group was significantly improved， fasting blood glucose concentration decreased （P<0.01）; ALT， AST and blood lipids decreased significantly （P<0.01）， RBP4 and Visfatin mRNA expression levels decreased （P<0.01）， and the content of inflammatory factors SIL-2R， FGF-2 decreased significantly （P<0.01）. Compared with the Chinese medicine group， the fasting blood glucose concentration in the positive drug group decreased （P<0.05）， and there was no statistical difference in other indicators. Conclusion ZGJTQZF may alleviate the pathological damage of liver in MKR mice with type 2 diabetes complicated with non-alcoholic fatty liver disease by improving liver function， reducing blood lipids， reducing the mRNA expression levels of visfatin and RBP4 in liver tissue， and down-regulating the content of serum inflammatory factors SIL-2R and FGF-2.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 Zuogui Jiangtang Qingzhi Formula; type 2 diabetes complicated with non-alcoholic fatty liver disease; Visfatin; retinol binding protein 4

非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease， NAFLD）是2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus， T2DM）的一種較為常見(jiàn)的肝臟并發(fā)癥，其發(fā)病率高達(dá)70%或以上[1-3]。高糖環(huán)境和胰島素抵抗（insulin

resistance， IR）是糖尿病及其并發(fā)癥的主因，而這兩種因素引起的一系列改變也是導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的重要因素[4-5]。血糖升高及IR可以激活多種機(jī)制，這些機(jī)制在肝細(xì)胞損傷、纖維化過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其中以脂代謝障礙[6]、炎癥反應(yīng)[7]、氧化應(yīng)激[8]等為主。近年研究發(fā)現(xiàn)，在NAFLD肥胖患者中，脂肪組織分泌激素類(lèi)代謝調(diào)節(jié)因子內(nèi)脂素（Visfatin）、視黃醇結(jié)合蛋白4（retinol binding protein4， RBP4），通過(guò)旁分泌作用參與胰島素抵抗的形成[9-10]。本課題組前期相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，滋陰益氣、活血解毒的左歸降糖清脂方能顯著降低MKR鼠血糖、改善糖耐量、改善胰島素抵抗，從而改善高脂MKR鼠肝功能損害，降低其血脂水平，調(diào)控胰島外周組織（脂肪、骨骼肌、肝臟等）中核因子過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α等的表達(dá)[11]。本文繼續(xù)探討左歸降糖清脂方對(duì)高脂飲食MKR鼠肝臟Visfatin、RBP4的mRNA表達(dá)水平及血清可溶性白細(xì)胞介素-2受體（soluble interleukin-2 receptor， SIL-2R）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（fibroblast growth factor， FGF2）含量的影響，以期為中醫(yī)藥對(duì)T2DM合并NAFLD的治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 ?材料

1.1.1 ?動(dòng)物 ?骨骼肌特異性胰島素樣生長(zhǎng)因子-1受體功能缺失鼠（MKR鼠），由美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院糖尿病研究中心提供的純合子MKR小鼠，由本課題組配種后繁殖的后代用于實(shí)驗(yàn)研究。同齡健康SPF級(jí)C57/BL/6小鼠，購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2014-0011，MKR鼠許可證號(hào)：SYXK（湘）2015-0003，飼養(yǎng)場(chǎng)地均為貴州中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)籠具、飼料、飲水均符合SPF級(jí)要求，倫理審核編號(hào)：20200003。

1.1.2 ?高脂飼料 ?普通飼料加15%豬油、1%膽固醇組成。

1.1.3 ?主要試劑 ?熒光定量PCR試劑盒（翌圣生物科技股份有限公司，批號(hào)：H1021780）；小鼠SIL-2R、IL-1β酶聯(lián)免疫試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：12/2020、01/2020）。

1.1.4 ?主要儀器 ?PCR儀、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)Bio-Rad公司，型號(hào)：T100 thermal cycler、TL988-l）；石蠟切片機(jī)（金華惠友儀器有限公司，型號(hào)：HY1508）；酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo Fisher儀器有限公司，型號(hào)：1510-01061C）。

1.1.5 ?藥物及制備 ?辛伐他汀片（山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)賽特有限責(zé)任公司，批號(hào)：190202）；鹽酸二甲雙胍緩釋片（山東司邦德制藥有限公司，批號(hào)：190705）。左歸降糖清脂方由熟地黃12 g、黃芪18 g、山藥12 g、山茱萸12 g、黃連6 g、丹參9 g、茵陳15 g、虎杖12 g、郁金9 g、陳皮9 g組成。湯劑制備：經(jīng)水煎煮2次，混合過(guò)濾后，濃縮制備成含生藥濃度為2.96 g/mL的藥液，經(jīng)滅菌后置于4 ℃冰箱中備用。中藥均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供，經(jīng)王宇紅主任藥師鑒定均為正品。

1.2 ?方法

1.2.1 ?分組 ?選取8周齡的經(jīng)遺傳鑒定的MKR小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（22±3） g，按性別、空腹血糖、體質(zhì)量隨機(jī)分為空白組、模型組、中藥組、陽(yáng)性藥物組；同齡C57/BL/6小鼠為正常組，雌雄各半，體質(zhì)量（22±3） g。每組16只?？瞻捉M和正常組喂養(yǎng)普通飼料，造模組喂養(yǎng)高脂飼料。

1.2.2 ?造模 ?T2DM合并NAFLD模型用8周齡MKR鼠高脂喂養(yǎng)8周后可自發(fā)形成。本課題組采用MKR鼠高脂喂養(yǎng)形成T2DM合并NAFLD的模型，具有可行性和可重復(fù)性[11]。造模成功的標(biāo)準(zhǔn)：MKR鼠高脂飼養(yǎng)后，空腹血糖濃度升高、肝功能異常及血脂異常情況加?。挥^察肝臟病理?yè)p傷結(jié)構(gòu)，MKR鼠肝組織炎癥細(xì)胞增多，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，符合T2DM合并NAFLD的病變特點(diǎn)。

1.2.3 ?給藥 ?用高脂飼料喂養(yǎng)達(dá)8周后，進(jìn)行相應(yīng)藥物灌胃。中藥組給藥為29.6 g/kg，濃度為2.96 g/mL，灌胃體積為0.1 mL/10 g。陽(yáng)性藥物組：藥物由二甲雙胍和辛伐他汀組成，比例為50∶1，給藥67.6 mg/kg，濃度為6.76 mg/mL，灌胃體積為0.1 mL/10 g?？瞻捉M、模型組及正常組采用等體積蒸餾水進(jìn)行灌胃，每24 h給藥1次，共給藥8周。

1.2.4 ?觀察項(xiàng)目與指標(biāo)檢測(cè) ?對(duì)小鼠行心臟采血，然后處死。對(duì)空腹血糖濃度進(jìn)行測(cè)定，取血清，用常規(guī)生化法對(duì)肝功能中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase， ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase， AST）含量以及血脂中總膽固醇（total cholesterol， TC）、甘油三酯（triglyceride， TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol， HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoprotein cholesterol， LDL-C）指標(biāo)的含量進(jìn)行檢測(cè)。分別取30～50 mg的肝組織，采用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)Visfatin、RBP4；酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清炎癥因子（按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作）；HE染色觀察各組小鼠肝組織的病理改變；取3 mm×3 mm×3 mm肝組織放于電鏡固定液中，電鏡觀察肝臟病理學(xué)改變。

1.2.5 ?實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè) ?mRNA基因序列從NCBI網(wǎng)站搜索得到，由生工生物工程（上海）股份有限公司設(shè)計(jì)引物。詳見(jiàn)表1。采用Trizol法提取總RNA，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，將cDNA稀釋成3倍以備用。實(shí)時(shí)熒光定量反應(yīng)中，設(shè)置4個(gè)Tm值的退火溫度梯度，分別為60、62、64、66 ℃，對(duì)于退火溫度先用梯度PCR反應(yīng)測(cè)量，擴(kuò)增用Real-time PCR。20 μL為反應(yīng)體系，Real-time PCR反應(yīng)程序：95 ℃，2 min，1×。95 ℃，15 s；58～62 ℃，1 min；40×。熔解的曲線：95 ℃，15 s；60 ℃，15 s；溫度上升（20 min），95 ℃，15 s。

1.2.6 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 ?數(shù)據(jù)采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，結(jié)果以“ｘ±s”表示。多個(gè)總體均值比較，數(shù)據(jù)滿足正態(tài)性，采用單因素方差分析；多個(gè)樣本均數(shù)的兩兩比較，滿足方差齊性檢驗(yàn)者采用LSD檢驗(yàn)，若不滿足則采用Dunnett T3檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ?各組小鼠肝組織病理結(jié)構(gòu)變化

正常組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列整齊，炎性細(xì)胞較少甚至沒(méi)有；空白組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)不整齊，存在變性；模型組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)不整齊，變性增多，有壞死細(xì)胞，炎性細(xì)胞增多，細(xì)胞核減少，組織結(jié)構(gòu)改變，肝組織纖維化；中藥組及陽(yáng)性藥物組炎性細(xì)胞明顯減少，腫脹及纖維化不同程度減輕。詳見(jiàn)圖1。

2.2 ?各組小鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)的變化

電鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)正常組肝細(xì)胞內(nèi)少量的脂肪堆積，溶酶體周?chē)倭炕蛘邿o(wú)脂肪顆粒；空白組脂肪顆粒增加，溶酶體周?chē)猩倭恐绢w粒；模型組內(nèi)大量脂肪堆積，溶酶體周?chē)罅恐绢w粒；中藥組和陽(yáng)性藥物組脂肪堆積明顯減少，溶酶體周?chē)倭炕蛘邿o(wú)脂肪顆粒。詳見(jiàn)圖2。

2.3 ?各組小鼠空腹血糖濃度比較

與正常組比較，其余各組空腹血糖濃度升高（P<0.01）；與空白組比較，模型組空腹血糖濃度升高（P<0.01），中藥組、陽(yáng)性藥物組空腹血糖濃度均降低（P<0.01）；與模型組比較，中藥組、陽(yáng)性藥物組空腹血糖濃度均降低（P<0.01）；與中藥組比較，陽(yáng)性藥物組空腹血糖濃度降低（P<0.05）。詳見(jiàn)表2。

2.4 ?各組小鼠血清ALT、AST含量比較

與正常組比較，其余各組ALT、AST含量均升高（P<0.05或P<0.01）；與空白組比較，模型組ALT、AST均升高（P<0.01），中藥組、陽(yáng)性藥物組AST均降低（P<0.01）；與模型組比較，中藥組、陽(yáng)性藥物組ALT、AST均降低（P<0.01）。中藥組與陽(yáng)性藥物組ALT、AST比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見(jiàn)表3。

2.5 ?各組小鼠血脂水平比較

與正常組比較，空白組和模型組TG、TC、LDL-C、HDL-C含量均升高（P<0.01），中藥組和陽(yáng)性藥物組TC、LDL-C、HDL-C含量均升高（P<0.01）；與空白組比較，模型組、中藥組和陽(yáng)性藥物組TG降低，TC、LDL-C、HDL-C含量均升高（P<0.01）；與模型組比較，中藥組和陽(yáng)性藥物組TG、TC、LDL-C下降，HDL-C升高（P<0.01）。中藥組與陽(yáng)性藥物組TG、TC、LDL-C、HDL-C比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見(jiàn)表4。2.6 ?各組小鼠肝組織RBP4、Visfatin的mRNA表達(dá)水平比較

與正常組比較，其余各組RBP4、Visfatin的mRNA表達(dá)水平均升高（P<0.01）；與空白組比較，模型組RBP4、Visfatin的mRNA表達(dá)水平均升高（P<0.01）；與模型組比較，中藥組、陽(yáng)性藥物組RBP4、Visfatin的mRNA表達(dá)水平均降低（P<0.01）。中藥組與陽(yáng)性藥物組RBP4、Visfatin的mRNA比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見(jiàn)表5。

2.7 ?各組小鼠血清SIL-2R、FGF-2含量比較

與正常組比較，其余各組SIL-2R、FGF-2的含量均升高（P<0.01）；與空白組比較，模型組SIL-2R、FGF-2的含量均升高（P<0.01）；與模型組比較，中藥組、陽(yáng)性藥物組SIL-2R、FGF-2的含量均降低（P<0.01）。中藥組與陽(yáng)性藥物組SIL-2R、FGF-2含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見(jiàn)表6。

3 討論

Visfatin作用廣泛，與肥胖、糖脂代謝紊亂、肝臟疾病的發(fā)展相關(guān)[12-13]。RBP4已被證實(shí)在T2DM中誘導(dǎo)胰島素抵抗[14]。Visfatin、RBP4含量升高與胰島素抵抗及脂代謝紊亂等情況關(guān)聯(lián)密切，研究發(fā)現(xiàn)，血清中Visfatin、RBP4與TG、LDL-C均呈正相關(guān)[15]。脂肪細(xì)胞釋放的脂肪因子，不僅參與細(xì)胞胰島素信號(hào)的傳導(dǎo)，也促進(jìn)炎癥因子的合成與分泌，研究發(fā)現(xiàn)，Visfatin與RBP4呈正相關(guān)[16]。Visfatin可促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子FGF2的基因表達(dá)，Visfatin的升高與幾種促炎介質(zhì)的上調(diào)有關(guān)，如白細(xì)胞介素-1（interleukin-1， IL-1）、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6， IL-6）、白細(xì)胞介素-8（interleukin-8， IL-8）等[17]。研究發(fā)現(xiàn)，T2DM合并骨關(guān)節(jié)炎患者血清FGF2高表達(dá)，參與糖尿病骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展，有望通過(guò)阻斷或抑制FGF2的生成，預(yù)防或治療糖尿病骨關(guān)節(jié)炎[18]。在糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清中，SIL-2R、IL-6、IL-8等炎癥因子升高[19]。SIL-2R在重型肝炎合并肝腎綜合征患者血清中明顯升高[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，MKR小鼠肝組織中Visfatin、RBP4的mRNA表達(dá)升高，伴隨炎癥因子（FGF2、SIL-2R）含量的增高，從而誘發(fā)慢性炎癥，造成嚴(yán)重的肝損傷，左歸降糖清脂方干預(yù)后，細(xì)胞損傷明顯改善，空腹血糖濃度，血清中AST、ALT含量和血脂含量，RBP4和Visfatin的mRNA表達(dá)水平，炎癥因子SIL-2R、FGF-2含量均下降，故左歸降糖清脂方能改善T2DM合并NAFLD的肝損傷，緩解肝臟脂肪性病變。

T2DM合并NAFLD屬中醫(yī)學(xué)“消渴”“肝癖”“脅痛”“積聚”“痞滿”等范疇。相關(guān)學(xué)者研究認(rèn)為痰、濕、濁、瘀、熱等內(nèi)生之毒，涵蓋脂毒、糖毒等物質(zhì)基礎(chǔ)，膠結(jié)壅滯，阻于肝絡(luò)，最終“因毒致?lián)p”“毒損肝絡(luò)”[11，21-23]。本課題組前期文獻(xiàn)、臨床、實(shí)驗(yàn)等研究認(rèn)為，T2DM合并NAFLD的主要中醫(yī)病機(jī)為肝腎陰虛、脾氣虧虛（虛），濕熱內(nèi)蘊(yùn)、痰瘀互結(jié)（毒、瘀），與“因毒致?lián)p”“毒損肝絡(luò)”的病機(jī)認(rèn)識(shí)具有一致性[11，22-23]。課題組以扶正祛邪為治則，以滋陰益氣、活血解毒立法，選用左歸降糖清脂方治療。滋陰益氣、活血解毒的左歸降糖清脂方化裁于明代醫(yī)家張景岳的左歸丸，方含熟地黃、黃芪、山藥、山茱萸、黃連、丹參、茵陳、虎杖、郁金、陳皮。重用黃芪為君藥，益氣健脾、利水去濁；陳皮理氣健脾、燥濕化痰；熟地黃補(bǔ)血滋陰、補(bǔ)精益髓以填腎之真陰；山藥和山茱萸能補(bǔ)肝腎；黃連清熱燥濕、瀉火解毒；丹參活血化瘀；茵陳清濕熱；虎杖清熱解毒、祛風(fēng)利濕、散瘀定痛；郁金行氣活血。諸藥合用，共奏滋陰益氣、清熱利濕、化痰消瘀之功效?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃芪與山藥配伍[24]、黃芪單味[25]、黃芪有效成分黃芪甲苷[26]等均有改善糖尿病及其并發(fā)癥病理?yè)p害的作用。左歸降糖清脂方具有滋陰益氣、活血解毒之效，從根本上降低炎癥反應(yīng)及肝組織炎癥因子Visfatin、RBP4的mRNA表達(dá)水平及血清FGF2和SIL-2R含量，從而改善肝損傷，緩解肝臟脂肪性病變。但T2DM合并NAFLD的分子機(jī)制復(fù)雜，目前未完全闡明。左歸降糖清脂方對(duì)其他分子機(jī)制的影響，可在今后的研究中進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)

[1] NANDITHA A， MA R C， RAMACHANDRAN A， et al. Diabetes in Asia and the Pacific： Implications for the global epidemic[J]. Diabetes Care， 2016， 39（3）： 472-485.

[2] DU H Z， ZHAO Y R， YIN Z W， et al. The role of miR-320 in glucose and lipid metabolism disorder-associated diseases[J]. International Journal of Biological Sciences， 2021， 17（2）： 402-416.

[3] 廖 ?涌.中國(guó)糖尿病的流行病學(xué)現(xiàn)狀及展望[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，40（7）：1042-1045.

[4] 楊依霏.Mt功能變化和焦亡相關(guān)蛋白表達(dá)在HEV致肝臟損傷中的作用[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2015.

[5] MIKOLASEVIC I， MILIC S， TURK WENSVEEN T， et al. Nonalcoholic fatty liver disease： A multisystem disease[J]. World Journal of Gastroenterology， 2016， 22（43）： 9488-9505.

[6] 余紅軍，張福生.龍膽瀉肝湯聯(lián)合水飛薊賓膠囊治療非酒精性脂肪肝療效觀察[J].新中醫(yī)，2017，49（2）：45-47.

[7] CHRISTENSEN C U， GLAVIND E， THOMSEN K L， et al. Niemann-Pick type C2 protein supplementation in experimental non-alcoholic fatty liver disease[J]. PLoS One， 2018， 13（3）： e0192728.

[8] DALLIO M， SANGINETO M， ROMEO M， et al. Immunity as cornerstone of non-alcoholic fatty liver disease： The contribution of oxidative stress in the disease progression[J]. International Journal of Molecular Sciences， 2021， 22（1）： 436.

[9] 潘 ?炟，穆 ?標(biāo).中藥治療非酒精性脂肪性肝病研究進(jìn)展[J].中國(guó)處方藥，2020，18（12）：18-20.

[10] 駱秀婷，林克宣.2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病患者的代謝情況分析[J].中國(guó)冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2020，37（6）：621-622.

[11] 魏冠德.左歸降糖清脂方調(diào)控PPAR-α、CYP2E1表達(dá)改善MKR轉(zhuǎn)基因鼠2型糖尿病合并脂肪肝的作用研究[D].長(zhǎng)沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2012.

[12] 欒青春，楊玉俠，邢運(yùn)貞，等.妊娠期高血壓疾病糖脂代謝及其與血清Visfatin、RBP4濃度的相關(guān)性分析[J].中國(guó)婦幼健康研究，2021，32（7）：991-994.

[13] LIN T C. The role of visfatin in cancer proliferation， angiogenesis， metastasis， drug resistance and clinical prognosis[J]. Cancer Management and Research， 2019， 11： 3481-3491.

[14] LIU C， ZHOU X R， YE M Y， et al. RBP4 is associated with insulin resistance in hyperuricemia-induced rats and patients with hyperuricemia[J]. Frontiers in Endocrinology， 2021， 12： 653819.

[15] 黃 ?蓉.血清中胰島素抵抗、脂代謝紊亂、Visfatin、RBP4含量與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性研究[D].昆明：昆明醫(yī)科大學(xué)，2019.

[16] MIHAI G， GASPARIK A I， PASCANU I M， et al. The influence of Visfatin， RBP-4 and insulin resistance on bone mineral density in women with treated primary osteoporosis[J]. Aging Clinical and Experimental Research， 2019， 31（6）： 889-895.

[17] DAKROUB A， NASSER S A， KOBEISSY F， et al. Visfatin： An emerging adipocytokine bridging the gap in the evolution of cardiovascular diseases[J]. Journal of Cellular Physiology， 2021， 236（9）： 6282-6296.

[18] 施偉麗.2型糖尿病伴骨關(guān)節(jié)炎患者血清VEGF、FGF2、CTGF、TGF-β水平變化意義及臨床實(shí)用價(jià)值[D].昆明：昆明醫(yī)科大學(xué)，2017：1-70.

[19] DOGANAY S， EVEREKLIOGLU C， ER H， et al. Comparison of serum NO， TNF-alpha， IL-1beta， sIL-2R， IL-6 and IL-8 levels with grades of retinopathy in patients with diabetes mellitus[J]. Eye， 2002， 16（2）： 163-170.

[20] 陳曉春，李 ?寧，朱堅(jiān)勝.前列地爾注射液輔助治療對(duì)重型肝炎合并肝腎綜合征患者血清TNF-α、β2-MG及sIL-2R的影響[J].中國(guó)生化藥物雜志，2016，36（6）：73-75.

[21] 于 ?淼，樸春麗，南 ?征，等.2型糖尿病胰島素抵抗的肝內(nèi)炎癥發(fā)病機(jī)制與毒損肝絡(luò)病機(jī)理論的相關(guān)性探討[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，26（11）：1032-1034.

[22] 陳 ?聰，陳家旭，喻 ?嶸，等.左歸降糖清脂方對(duì)2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病MKR鼠肝組織PI3K信號(hào)通路的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2021，36（1）：106-111.

[23] 程莉娟，成細(xì)華，喻 ?嶸，等.滋陰益氣活血解毒法治療32例2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝的臨床觀察[J].中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（9）：2807-2810.

[24] 李 ?輝.黃芪、山藥聯(lián)合應(yīng)用的中醫(yī)飲食療法對(duì)2型糖尿病患者治療作用觀察[D].濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)，2019.

[25] 馬艷春，段 ?瑩，胡建輝，等.黃芪治療糖尿病及其并發(fā)癥研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2022，50（6）：103-107.

[26] 李 ?楊，王 ?凡，賈 ?寧.黃芪甲苷治療糖尿病及其并發(fā)癥藥理作用研究[J].黑龍江醫(yī)學(xué)，2019，43（1）：96-97.

〔收稿日期〕2022-08-28

〔基金項(xiàng)目〕國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81860818，82004185）；貴州省科學(xué)技術(shù)廳科技基金（黔科合基礎(chǔ)-ZK〔2021〕一般501）；貴州省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究專(zhuān)項(xiàng)課題（QZYY-2022-010）；2021年貴州省衛(wèi)生健康委科學(xué)技術(shù)基金；貴州中醫(yī)藥大學(xué)糖脂代謝病研究中心資助。

〔第一作者〕勾陽(yáng)陽(yáng)，女，碩士研究生，研究方向：內(nèi)分泌疾病的中醫(yī)辨證規(guī)律及其防治研究。

〔通信作者〕*陳 ?聰，女，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：781972863@qq.com；喻 ?嶸，女，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：yurong8072@qq.com。